Name: Crescimento anaeróbico e manutenção de linhas de células de mamíferos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Aprenda a cultivar células de mamíferos em condições anaeróbicas por até 17 dias. Este método inovador permite estudar fisiologia celular em baixo oxigênio, com aplicações em pesquisa de câncer e biologia celular.

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Os autores agradecer o centro-oeste Universidade escritório de pesquisa e programas patrocinados pelo seu apoio.

1. preparar a mídia para cultura anaeróbia de várias linhas de células de mamíferos
<ol><li>
Fazer o meio de PS-74656 completo para uma cultura de célula anóxica25.
	<ol>
<li>Faça a solução estoque de nitrito estéril (5m; x 100) dissolvendo 17,25 g de nitrito em 50 mL de água destilada deionizada e, em seguida, filtrar para esterilizá-lo.</li>
		<li>Adicionar 0,5 mL da solução estoque de nitrito por 50 mL de glicose baixa DMEM (1 g/L de glicose) com 110 mg/L de L-glutamina, 584 mg/L de piruvato de sódio e 10% de soro fetal bovino (FBS; inactivadas pelo calor). Nota: O uso de concentrações de FBS maiores do que 10% são tóxicos. Digno de nota, uma linhagem de células de câncer testada tinha uma baixa tolerância à mídia com nitrito (MDA-MB-231, linha de células de câncer de mama) e, assim, foi cultivada na ausência de nitrito. Além disso, embora o PS-74656 médio suportado o crescimento de todas as linhas de células que foram testadas (n = 9), certas linhas de células (por exemplo, células Vero) exibiram concentrações mais elevadas de célula e uma maior viabilidade no PS-74656 com glicose alta (4,5 g/L) DMEM 25.</li>
		<li>Coloca 20 mL do meio em um tubo de centrifuga conico estéril 50 mL. Não aperte a tampa; deve ser solto.</li>
		<li>De gás do meio, colocando o tubo em uma redoma de vidro a vácuo em um ângulo de 45 ° aproximadamente, para maximizar a área de superfície média.</li>
		<li>Aplica um vácuo usando uma bomba de vácuo, ou seu equivalente, à temperatura ambiente. Manter o vácuo até que as bolhas já não são observadas (24-48 h).</li>
		<li>Retire o tubo do frasco e fechar imediatamente a tampa, vedação do tubo para minimizar a introdução de ar no meio de.</li>
		<li>Coloca o tubo na câmara anaeróbica comercial.</li>
		<li>Solte a tampa do tubo e permitir que a atmosfera no tubo para equilibrar com o da mistura de gás anaeróbio na câmara pelo menos 24 h. Nota: O meio deve permanecer na câmara até é usado. Para acelerar o processo de descarga, tubo de pelo menos 3 x com a mistura de gás anóxica usando uma pipeta de transferência estéril cheia de gás anóxico, que consiste de H2, CO2e N2.
</li>
		<li>Desgaseifica todos os tubos (10-15 min) colocados na câmara anaeróbica, como descrito acima, antes da selagem do tubo e colocar na câmara. Antes da utilização, nivelá-lo com a mistura de gás anaeróbio usando pipetas de transferência de 1,5-2 mL ou pontas de pipetas que tem sido lavadas com anóxica gás pelo menos 3x.</li>
		<li>Enquanto na câmara anaeróbica, remover 100 µ l do meio de um tubo estéril de microcentrífuga desgaseificado e testá-lo para o oxigênio dissolvido usando uma sonda de oxigênio dentro da câmara. Nota: O eletrodo de oxigênio é calibrado por prévia de protocolo do fabricante para usar. Leituras da mídia mistura gás anaeróbio corretamente desgaseificado e equilibrada são 0. Atenção: Se as leituras estiverem acima de 0,3 ppm de oxigênio, continue a incubar os meios de comunicação na câmara anaeróbica, já que mais uma vez para equilibrar o meio é necessária.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. anóxico cultivo de várias linhas de células de mamíferos
<ol><li>
Designado dia -1
	<ol>
<li>Desenvolvem-se células (37 ° C, 5% CO2) num balão T150 a confluência de 90% para o controle de cultura anóxica e normoxic fornecer um número suficiente de células para três placas de 24 poços (80% confluência). Nota: Para este estudo, foram utilizadas células HeLa 229 e Vero. Este protocolo também foi testado e provou ser bem sucedido para o crescimento e a manutenção de sete outras células linhas25.</li>
		<li>Remover o meio do balão por aspiração e lavá-lo com 10 mL de HBSS.</li>
		<li>Substitua o meio com 5 mL de tripsina. Agite o frasco até que as células visualmente desanexar do plástico. Aspire a maior parte da tripsina, em seguida, toque o balão para desalojar as células aderentes. Adicionar 10 a 15 mL de glicose alta DMEM (4,5 g/L de glicose, 110 mg/L de L-glutamina, 10% FBS, 50 µ g/mL de gentamicina) para inactivar a tripsina.</li>
		<li>Triture as células usando uma pipeta de 25 mL, até que todos os grupos de célula são rompidos.</li>
		<li>Contar as células e determinar a viabilidade usando o padrão hemocytometer e o método de exclusão do corante azul de Tripan ou o equivalente automatizado.</li>
		<li>Suspenda as células a glicose alta DMEM como mencionado acima, a densidade celular de 2,24 x 105 células/mL.</li>
		<li>Adicione 1 mL da suspensão celular aos poços de uma placa de cultura de tecido de 24 poços (2,24 x 105 células/poço; 80% confluência). Placa de semente 1 para a cultura anóxica e outro para uma cultura de normoxic de controle.</li>
		<li>Incube as células a 37 ° C em condições de normoxic (5% CO2) por 24 h. Nota: As células podem ser chapeadas em várias placas bem dimensionadas. No entanto, semear as células de crescimento anóxica em balões corre o risco de introdução de oxigênio no sistema, a menos que cuidado para limpar completamente o gás atmosférico.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Designado dia 0
	<ol>
<li>Após 24h de incubação a normoxic, colocar as placas para o crescimento anóxica na câmara anaeróbia (uma câmara anaeróbica comercial; A Figura 1).</li>
		<li>Imediatamente altere o meio para sem antibióticos de intoxicar médio PS-74656 que tem sido aclimatado para 24h à câmara anaeróbica. Colocar a placa em um recipiente com uma toalha úmida e vagamente fechá-lo para manter a umidade. Nota: As placas de crescimento normoxic são manipuladas com a exceção de que todos os tratamentos são feitos sob condições atmosféricas de maneira idêntica.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Designado dia 1
	<ol>
<li>1 dia de incubação anaeróbica inicia após 24h de incubação na câmara anaeróbica comercial que contém a mistura de gás anaeróbio padrão de 10% H2, 10% CO2e 80% N2.</li>
		<li>Incube as celulas por vários períodos de tempo.</li>
		<li>Monitore o meio anaeróbio para a mudança de cor ao longo do tempo. Nota: Uma mudança de cor do vermelho-alaranjado para magenta sinaliza o tempo para mudar o meio. Isto pode demorar até 2 semanas para ocorrer. Uma mudança de cor no meio de vermelho-laranja para amarelo indica a presença de uma contaminação bacteriana.</li>
		<li>Quando o meio muda de vermelho para magenta, remova as células runagate por aspiração.</li>
		<li>Lugar aspirada mídia gastava com as células runagate desgaseificado e anaeróbia gás incubado tubos de microcentrífuga, feche os tubos ao mesmo tempo certificando-se que o selo é seguro e em seguida centrifugá-los (326 x g; à temperatura ambiente durante 10 minutos). Substitua imediatamente os meios de comunicação aspirados no poço com 1 mL de meio de PS-74656 desgaseificado novo.</li>
		<li>Coloca o tubo de microcentrífuga com células peletizadas na câmara anaeróbia antes de abri-lo. Aspirar o gasto médio e substituí-lo por meio de PS-74656 desgaseificado fresco para um volume total de 1 ml no tubo de microcentrífuga.</li>
		<li>Retorno as células do tubo para um poço na placa de cultura de tecidos de 24-bem.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. avaliação da diferenciação fenotípica celular pela microscopia de pilhas cultivadas anaerobicamente
<ol><li>
Enquanto na câmara anaeróbica, colocar a placa numa caixa resealable liberada com a mistura de gás anaeróbio e fechar a caixa. Nota: A caixa deve conter uma toalha de papel úmida para fornecer a umidade e impedir que a placa de secagem. Para a microscopia, sacos do sanduíche o melhor trabalham desde que eles são finos.<ol>
<li>Para observar as células sob o microscópio, completamente selar o saco e removê-lo da câmara.</li>
		<li>Cuidadosamente esticar o saco de plástico sobre a placa, examinar células usando um microscópio de contraste de fase invertido com o acessório de câmera e levar fotomicrografias em várias ampliações.</li>
		<li>Devolve a chapa no saco selado para a câmara e continuar a incubação, conforme descrito na etapa 2.3.3.</li>
		<li>Para analisar separadamente as células runagate que estão em suspensão, siga as etapas descritas na etapa 2.3.5. Nota: Estas células podem ser usadas para o teste aeróbio ou podem ser devolvidas à câmara anaeróbia para o teste desta população específica.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Este método representa pela primeira vez células mamíferas que foram cultivadas por longos períodos de tempo na ausência de oxigênio. Baseado nas observações atuais, o crescimento anóxica capacidade através de um caminho não-fermentativa parecem ser universal entre linhas de células de mamíferos28, onde o crescimento anaeróbico resultou em divergência de fenótipo. Isto foi observado para todas as linhas celulares testadas. Com o cultivo de anaeróbio, aumentar as proporções das células tor...

Existem células de tumores sólidos, nichos de células-tronco e aqueles que revestem as superfícies mucosas em ambientes que experimentam níveis reduzidos de oxigênio, incluindo anóxia1,2,3,4. Em Estados fisiológicos normais, oxigenação varia além da hipóxia, anóxia (completa ausência de oxigênio)5,6. A realização que oxigênio atmosférico afeta negativamente a replicação de células de mamíferos e o crescimento de células em vitro pode ser otimizado sob condições de oxigênio empobrecido foi relatada na década de 1970. Richter et al . 7 mostrou que 1-3% dos níveis de oxigênio (hipóxia) reforçada chapeamento eficiência em comparação com o oxigênio atmosférico (20%). A expectativa de vida de célula diploide humana também é estendida na cultura hipóxica condições8.
In vivo, hipóxicos condições ocorrem quando oxigênio lojas estão esgotados (por exemplo, durante o exercício intenso), no qual a produção de ATP é alternada no músculo esquelético da respiração aeróbia de fermentação (respiração anaeróbia) com o produto final de ácido láctico9. Patologicamente, em tumores cancerosos, o interior do tumor, massa é hipóxica para anóxica devido à pobre vascularização10. O efeito da perfusão limitada no interior do tumor independente é validado pelos interiores de tumor colonizadas por anaeróbios obrigatórios1. Mecanicamente, a sobrevivência de células de tumor em hipóxia é pensada para ser unicamente dependente da expressão do gene hypoxia-inducible factor 1-alfa (HIF1-alfa), que é a resposta inicial espontânea de hipóxia4,11 , 12. HIF1-alfa é induzida em condições de hipóxicos por proteínas de choque do calor que ligam o HIF1-alfa promotor e upregulate de transcrição do gene12. Estas proteínas de choque do calor são acreditadas para ajudar na indução dos vários fenótipos visto no microambiente hipóxico do tumor. Estes fenótipos apresentam um aumento da expressão dos transportadores de glicose a membrana celular e a taxa de glicólise (o efeito Warburg)13. O resultado é um interruptor da fosforilação oxidativa mitocondrial para fermentação de lactato.
Anóxica sobrevivência também pode utilizar alternativas para glicose para apoiar o fenômeno de sobrevivência14,15. O melhor exemplo de mamíferos estudado é a toupeira, que podem sobreviver por quase 20 min sem oxigênio através de uma fermentação glicolítico orientado a frutose via14. Uma alternativa adaptação ocorre em certos peixes (por exemplo, carpa [SP.Carassius ], que pode sobreviver por significativamente mais períodos de tempo usando a glicólise com etanol como subproduto o terminal)15. Em ambos os casos, a fermentação impulsiona o metabolismo, permitindo a sobrevivência na ausência de oxigênio. A hipótese atual para sobrevivência anóxica é que tanto tempo como HIF1-alfa é ativado durante a hipóxia, respiração mitocondrial, sem a necessidade de oxigênio, ocorre sob condições anaeróbicas16. Além disso, postula-se que o uso de uma via fermentativa para sobrevivência hipóxica/anóxica aumenta sobrevivência do tumor, desde que as células evitar stress oxidativo que poderia para ser prejudicial para a célula de sobrevivência17. Este postulado é suportado por um estudo recente que mostra que em cardiomyocytes, hipóxia reduz o estresse oxidativo, colocado sobre o tumor de célula17.
Até à data, a natureza essencial de uma via fermentativa para a sobrevivência da pilha mamíferas anóxica tem sido entranhada na literatura, devido, em grande parte, a uma incapacidade de células de mamíferos de cultura na ausência completa de oxigênio por mais de 3 dias. No entanto, uma alternativa à glicólise para a sobrevivência anaeróbica ocorre em bactérias. Em certas bactérias, nitrogênio ou sulfato (entre outros compostos) pode servir como aceitadores de electrões terminal para o sistema do citocromo oxidase na ausência de oxigênio18. Embora a evolução bacteriana e eucariótica ocorreu em paralelo desde divergindo o último ancestral comum universal, estima-se que as mitocôndrias foram fornecendo energia para as células para 1,542 milhões de anos antes da oxigenação dos oceanos19 . Desde que os pesquisadores têm mostrado que as mitocôndrias isoladas podem produzir ATP na ausência de oxigênio, com nitrito como o aceitador terminal do elétron, é razoável supor que as células poderiam funcionar por períodos de tempo mais de 3 dias na ausência de oxigênio 20 , 21 , 22 , 23. a metodologia descrita neste estudo tem uma utilidade para o crescimento da pilha mamífera anaeróbico de numerosas linhas de célula.

<table><tbody><tr><td>Câmara anaeróbica Whitney A35</td><td>Don Whitley Scientific&nbsp;</td><td>Microbiologia Internacional</td><td>A capacidade de remover a frente da câmara facilita a colocação de instrumentos no interior sem a preocupação de fazê-los passar pelos portais.</td></tr><tr><td>Incubadora CO2</td> Capuz de cultura de tecidos <td>Fisher Scientific</td><td>3531</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Labconco</td><td>DO55735</td><td></td></tr><tr><td>pipeta auxiliar Pipetas</td> de transferência estéreis <td>Drummond</td><td>4-000-100</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Santa Cruz</td><td>sc-358867</td><td></td></tr><tr><td>tubos de centrífuga cônicos estéreis de 50 cc</td><td>DOT</td><td>451-PG</td><td></td></tr><tr><td>frasco</td> <td>de vácuoNalgene 111410862889</td><td>BTA-Mall 5311-0250</td><td></td></tr><tr><td>DMEM glicose alta (4,5 g/L)</td><td>CellGro</td><td>10-017-CM</td><td></td></tr><tr><td>DMEM glicose baixa (1 g/L)</td><td>CellGro</td><td>10-014-CV</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>VWR</td><td>1500-500</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>VWR</td><td>20-021-CV</td><td></td></tr><tr><td>tripsina</td><td>VWR</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr><tr><td>gentamicina</td><td>Gibco</td><td>15750-060</td><td></td></tr><tr><td>pipetas estéreis</td><td>CellTreat</td><td>229210B, 229205B</td><td></td></tr><tr><td>Balão de cultura de tecidos (T75 ou T150)</td> <td>Santa Cruz</td><td>sc-200263, sc-200264</td><td></td></tr><tr><td>24 pratos tratados com cultura de tecidos de 24 poços</td><td>Sacos</td><td></td> de sanduíche ziplock DOT 667124 <td></td></tr><tr><td>glad</td><td>Microscópio</td> de fase invertida Ziploc <td>Costco</td><td></td></tr><tr><td>(10, 20 objetivas de 40x com montagem de câmera)</td><td>Nikon Eclipse</td><td>TS100</td><td></td></tr><tr><td>tripano azul</td><td>Invitrogen</td><td>T10282</td><td></td></tr><tr><td>hemocitômetro</td><td>Invitrogen</td><td>C10283</td><td></td></tr><tr><td>Countess Automated Cell Counter</td><td>Life Technologies</td><td>AMQAF1000</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas de microtitulação</td><td>Rainin Mettler Toledo</td><td>Pipeta Rainin Classic PR-100</td><td></td></tr><tr><td>pontas de microtitulação</td><td>Santa Cruz Biotecnologia</td><td>sc-213233 & sc-201717&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>rack de tubo de ensaio (tubos de 50cc)</td> <td>O Lab Depot</td><td>HS29050A</td><td></td></tr><tr><td>nitrito de sódio</td><td>Sigma</td><td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigald/237213?lang=en&region=US</td><td></td></tr><tr><td>caixas transparentes com tampas</td><td>Rosti Mepal</td><td>toalhas de papel de empregada</td><td></td></tr><tr><td></td><td>doméstica em casa</td><td></td><td></td></tr><tr><td>raspador de células</td><td>CellTreat</td><td>229310</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Etanol</td> 70% preparado <td></td><td></td>internamente</tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>tubos de microcentrífuga esterilizados</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-200273</td><td></td></tr><tr><td>sacos de risco biológico com suporte (desktop)</td> <td>Heathrow Scientific</td><td>HS10320</td><td></td></tr><tr><td>Luvas de Nitrilo</td><td>VWR</td><td>89428</td><td></td></tr><tr><td>eletrodo de oxigênio</td><td>Medidor de pH eDAQ</td><td>EPO354</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Jenway</td><td>3510</td><td></td></tr><tr><td>pH paper/pHydrion</td><td>Sigma Aldich</td><td>Z111813</td><td></td></tr></tbody></table>

crescimento anaeróbico e manutenção de linhas de células de mamíferos

Anaerobic Growth and Maintenance of Mammalian Cell Lines

Mais superfícies mucosas, juntamente com os pontos médios em tumores e nichos de células-tronco são áreas geográficas do corpo que são anóxica. Estudos anteriores mostram que a incubação em normoxic (5% CO2 no ar) ou hipóxia condições (baixos níveis de oxigênio) seguiram por um resultados de incubação anóxica (ausência de oxigênio livre) na viabilidade limitada (2 – 3 dias). Uma nova metodologia foi desenvolvida que permite a um cultivo celular anóxica (pelo menos 17 dias, o tempo máximo testado). O aspecto mais importante desta metodologia é garantir que não há oxigênio é introduzido no sistema. Isso é obtido, a desgaseificação de mídia e por tubos de irrigação, pratos, balões e pipetas com uma mistura de gás anaeróbio (H2, CO2, N2) seguido por permitir que os materiais para equilibrar ao ambiente anóxico (não-oxigênio) antes do uso. Cuidados adicionais devem ser exercido quando adquirir fotomicrografias para garantir que as micrografias obtidas não contêm artefatos. Na ausência de oxigênio, a morfologia celular é significativamente alterada. Dois morfotipos distintos são anotados para todas as células cultivadas anaerobicamente. A capacidade de crescer e manter pilhas mamíferas na ausência de oxigênio pode ser aplicada à análise da fisiologia celular, interações polymicrobial e a caracterização das vias biossintéticas para desenvolvimento de drogas câncer romance.

A força deste protocolo encontra-se em seu apoio a longevidade e o crescimento de várias linhagens celulares e o reconhecimento de que há uma alteração profunda e divergência na morfologia celular25. O elemento mais crítico deste estudo é a transferência e a manutenção das células sob anaerobiose estrita. Isto requer uma câmara anaeróbica organizada para maximizar o protocolo (Figura 1) e a garantia de que as células removidas para mic...

Aqui, descrevemos um novo método que permite o cultivo de longo prazo anaeróbico de linhagens celulares estabelecidas. O tempo máximo de sobrevivência que foi testado é 17 dias. Este método é adequado para o teste de agentes citotóxicos e explorando a fisiologia da anoxically replicação de células.

Crescimento anaeróbico e manutenção de linhas de células de mamíferos

Most mucosal surfaces along with the midpoints in tumors and stem cell niches are geographic areas of the body that are anoxic. Previous studies show that ...

Este método pode ser usado para caracterizar a fisiologia das células anóxicas e ajudar a responder a questões-chave nas interações patógeno do hospedeiro, diferenciação de células-tronco e metástases de células cancerígenas e suscetibilidade terapêutica. Este é o primeiro protocolo descrito que permite o cultivo anóxico a longo prazo de células de mamíferos. As implicações dessa técnica se estendem à terapia direcionada e personalizada ao câncer e à terapia rejuvenescedora porque, devido à toxicidade do oxigênio, vários tipos de células preferem ambientes com baixo teor de oxigênio para o crescimento.Embora esse método possa fornecer informações sobre a respiração anaeróbica e o metabolismo celular, ele também pode ser aplicado a outros sistemas, como o cultivo de células-tronco. Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldades porque é necessário ter extremo cuidado para evitar a contaminação por oxigênio. A demonstração física desse método é crítica, pois os cuidados necessários para excluir a contaminação por oxigênio não são intuitivos.Para começar, adicione 0,5 mililitros de solução estoque de nitrito ao DMEM com baixo teor de glicose contendo L-glutamina, piru

anaerobic-growth-and-maintenance-of-mammalian-cell-lines

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

A modificação em 3-D in vitro sistema é apresentado em que características de crescimento de várias linhagens de células tumorais na membrana basal reconstituída se correlacionam com o comportamento dormentes ou proliferativa das células tumorais em um local metastático...

Um In Vitro Sistema para Estudo de dormência Tumor ea Mude para o crescimento metastático

Uma descrição de como calibrar transferência Förster Resonance Energy sensores biológicos integrados (FIBS) no perfil metabólico situ é apresentado. Os FIBS pode ser utilizado para medir os níveis intracelulares de metabolitos de forma não invasiva, contribuindo para o desenvolvimento de modelos metabólicas e elevado rendimento de rastreio de condições de bioprocessamento.

FIBS habilitado Noninvasive Metabolic Profiling

Aqui apresentamos um protocolo para propagar células Homalodisca vitripennis e HoCV-1 in vitro. Médio foi removido do HoCV-1 culturas positivas e RNA extraído a cada 24 horas para 168 horas. A capacidade de sobrevivência das células foi quantificada por coloração com azul de tripano. Partículas de vírus inteiros foram extraídos após a infecção. RNA extraído foi quantificada por qRT-PCR.

Propagação de<em&gt; 01-vírus Homalodisca coagulata</em&gt; Via<em&gt; Homalodisca vitripennis</em&gt; Cultura de Células

Usando um biorreator pneumático, demonstramos a montagem, operação e desempenho deste sistema de biorreator de uso único para o crescimento de células de mamíferos.

O cultivo de células de mamíferos utilizando um uso único sistema pneumático Bioreactor

A regulação de nutrientes usando alimentação ajustada ao crescimento contínuo melhora as taxas de crescimento de esferoides de células de mamíferos em comparação com a alimentação em lote intermitente para culturas em biorreatores de suspensão agitada.  Este estudo demonstra os métodos necessários para estabelecer culturas alimentadas com taxa ajustada simples.

Nutrient regulamento, a alimentação contínua de Expansão em grande escala de células de mamíferos em Spheroids

Linhas celulares primárias ou estabelecidas cultivadas são comumente usadas para abordar questões biológicas e mecanísticas fundamentais como uma abordagem inicial antes de usar modelos animais. Este protocolo descreve como preparar extratos de células inteiras e frações subcelulares para estudos de zinco (Zn) e outros oligoelementos com espectroscopia de absorvância atômica.

Espectroscopia de absorvância atômica para medir piscinas de zinco intracelular em células de mamíferos

Aqui, descrevemos a implementação e interpretação dos resultados de um ensaio quantitativo de auto-renovação in vitro mammosphere.

Quantificação da auto-renovação em Culturas Murine Mammosphere

O músculo esquelético compreende vários tipos celulares, incluindo células-tronco residentes, cada uma com uma contribuição especial para a homeostase e regeneração muscular. Aqui, a cultura 2D de células-tronco musculares e o nicho de células musculares em um ambiente ex vivo que preserva muitas das características fisiológicas, in vivo e ambientais são descritas.

Cultura não fracionada em massa de músculo esquelético de camundongo para recapitular nicho e quiescência de células-tronco

Este protocolo apresenta um método para fabricar um chip microfluídico de camada dupla e analisar o crescimento microbiano sob oscilações rápidas de oxigênio. O desempenho do dispositivo foi validado por meio de sensoriamento de oxigênio em canais de fluidos e cultivo microbiano.

Criando oscilações rápidas de oxigênio na análise de crescimento microbiano de célula única usando um dispositivo microfluídico de camada dupla

Apresentamos um protocolo para o dispositivo de cultura contínua milifluida (MCCD), que permite o cultivo de populações bacterianas sob condições constantes de baixo teor de nutrientes (até centenas de concentrações nanomolares) ou flutuações temporais de nutrientes em uma escala de tempo minuciosa.

Um dispositivo milifluido contínuo para cultura para o estudo de Escherichia coli sob condições nutritivas baixas e flutuantes

Aprenda a cultivar células de mamíferos em condições anaeróbicas por até 17 dias. Este método inovador permite estudar fisiologia celular em baixo oxigênio, com aplicações em pesquisa de câncer e biologia celular.

Crescimento anaeróbico e manutenção de linhas de células de mamíferos

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