Name: Um tronco pulmonar bandagem modelo de sobrecarga de pressão induzida por falha e Hipertrofia Ventricular direita (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-29T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: Aprenda a técnica de bandagem do tronco pulmonar em ratos Wistar para induzir hipertrofia e insuficiência ventricular direita de forma precisa e reprodutível. Este método permite estudar mecanismos de falha cardíaca sem efeitos de vasodilatação pulmonar.

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Este trabalho foi apoiado pelo Conselho dinamarquês de investigação independente [11e108410], o dinamarquês Heart Foundation [12e04-R90-A3852 e 12e04-R90-A3907] e a Novo Nordisk Foundation [NNF16OC0023244].

Todos os ratos foram tratados de acordo com diretrizes nacionais dinamarquês, descritas na lei dinamarquesa em experiências com animais e Portaria Ministerial em experiências com animais. Todos os experimentos foram aprovados pelo Conselho de revisão institucional ética e conduzidos de acordo com a legislação dinamarquesa para pesquisas com animais (número de autorização de 2012-15-2934-00384, Ministério da justiça dinamarquês).
1. ajuste de Ligating aplicador de clips
Nota: A bandagem do tronco pulmonar é realizada com um modificado aberto ligating aplicador de clips com uma mandíbula em ângulo. O aplicador é modificado com um mecanismo ajustável parar para parar a compressão, quando as mandíbulas alcançar uma distância exata do outro. Quando um pequeno titânio ligando clip é compactado com o aplicador modificado, um lúmen persiste entre as pernas do clipe com um diâmetro específico de acordo com o ajuste do mecanismo de paragem (Figura 1).
<ol><li>Escolher o diâmetro da borda desejada, por exemplo,, 0,6 mm.</li>
	<li>Ajuste o aplicador de clips ligating 1,0 mm quando totalmente comprimida até que a distância entre as garras. Isto deixa um lúmen de 0,6 mm, como as pernas de dois clip tem uma espessura de 0,2 mm cada.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58050/58050fig1.jpg"> Figura 1: procedimento do PTB o. (A) o cirúrgico instrumentos utilizados para o procedimento PTB, incluindo ligating aplicador de clips (seta azul). Aplicador de clip-mecanismo (B) o batente ajustável do ligar. Girando a roda dentada (seta azul) irá ajustar a posição do pino (seta amarela), que impede o fechamento do aplicador quando as mandíbulas chegar a uma certa distância um do outro. A distância corresponde a duas vezes a espessura das pernas do clipe, além disso, o diâmetro interno do clipe, quando o clipe é comprimido e pode ser calibrado, usando por exemplo uma agulha com um diâmetro exterior conhecido. (C) o aplicador comprime um clip de titânio para um diâmetro interno exato previamente especificado pelo ajuste do aplicador. Diâmetro (D), o interior do clipe compactado pode ser ajustado para induzir diferentes severidades de hipertrofia de RV e falha. Para os dados apresentados, um diâmetro interno de 1,0 mm foi usado para induzir a hipertrofia suave de RV, um diâmetro interno de 0,6 mm foi usado para induzir moderada insuficiência de RV e um diâmetro interno de 0,5 mm foi usado para induzir insuficiência severa do RV. (E) o clipe após aplicação em torno do tronco pulmonar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58050/58050fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
2. preparação do rato
Nota: Outros regimes de analgésicos podem ser aplicadas.
<ol><li>Use weanlings de rato Wistar pesando cerca de 100 a 120 g. A fim de manter a temperatura corporal durante a cirurgia, use uma almofada de aquecimento coberto.</li>
	<li>Para a cirurgia, use um ventilador mecânico, definido como um tidal volume de aproximadamente 1,75 mL e frequência respiratória de 75 por min.</li>
	<li>Anestesiar o rato com sevoflurano (mistura de 7% em 1,5 L de O2) em uma câmara de indução por 5 minutos. Entube o rato usando uma cânula de 17 G IV, onde a 2mm distal da agulha foram cortados para que o cateter macio cobrir a ponta. Retire a agulha e conecte a cânula ao ventilador.</li>
	<li>Coloque o rato sobre as costas da almofada de aquecimento. Certifique-se de que a intubação é correta observando os movimentos do tórax. Estes devem ser, sem diferenças de lado e em ritmo com o ventilador. Nota: Ausência de movimentos do tórax, contrações abdominais e inflação do estômago no abdômen superior esquerdo são sinais de um tubo de equivocada. Remover a cânula, ponha o rato na câmara de indução e re-intubar.</li>
	<li>Após a intubação correta, reduzir o sevoflurano a concentração de manutenção (mistura de 3,5% em2, O 1,5 L/min) e corrigir as patas do rato para a almofada de aquecimento.</li>
	<li>Confirme anesthetization prober, verificando os reflexos de retirada das extremidades usando uma pinça para apertar as patas do rato.</li>
	<li>Injetar os ratos com buprenorfina (0,1 mg/kg por via subcutânea (s.c.)) e carprofene (5 mg/kg s.c.) para aliviar a dor pós-operatória.</li>
	<li>Depilar o peito e desinfectar com clorexidina.</li>
</ol>3. isolamento do tronco pulmonar
<ol><li>Com uma tesoura, faça uma incisão de 2 cm na pele ao longo da parte média do esterno. Identificar o músculo peitoral maior e cortar sua fixação esternal. Identifica o 2nd, 3rde 4th costa abaixo.</li>
	<li>Opcionalmente, pegue o 2nd costa com uma pinça de fixação, coloque uma sutura (4-0, multifilamento, absorvível) próximo a costa de 2nd dost 1 espaço intercostal para parte inferior medial do espaço intercostal 2nd . Dar um nó firme para ligate artéria torácica anterior. Nota: Isso pode ser útil se sangramento da artéria torácica anterior é um problema recorrente.</li>
	<li>Corte a 4th, 3rde 2nd costa perto do esterno com um par de tesouras e dissecar cuidadosamente os músculos intercostais, até que seja executada uma toracotomia esquerda completa. Se qualquer sangramento da artéria torácica anterior ocorre, comprimir com um mento e ligate a artéria.</li>
	<li>Inserir um retractor entre o esterno e as costelas e abri-lo para obter um bom campo operatório. Na parte superior do campo é o Timo cobrindo a aorta e o tronco pulmonar. Cuidadosamente, levantar o Timo usando um mento e lançá-lo para cima a fim de expor a aorta e o tronco pulmonar abaixo.</li>
	<li>
Introduza a ponta de um pequeno hooklet cirúrgico com um ângulo de 85° através do seio pericárdico transversal localizado atrás do apêndice atrial esquerdo. Puxe-a meio caminho através do seio e introduza a ponta do gancho da orelha para cima até que ele aparece entre a aorta ascendente e o tronco pulmonar.
	<ol>
<li>Remova qualquer tecido conjuntivo cobrindo a ponta com uma tesoura de íris a fim de separar o tronco pulmonar da aorta ascendente.</li>
		<li>Repita a etapa com um gancho maior (opcional).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Guie uma pinça músculo angular em torno do tronco pulmonar através da passagem feita com o hook(s). Pegue a ponta de uma cerca de 10 cm ligadura (4-0, multifilamento) e puxar metade da ligadura de volta através da passagem. Agora, o tronco pulmonar é separado da aorta ascendente e pode ser controlado pela ligadura em torno dele.</li>
</ol>4. aplicação do clipe
<ol><li>Carrega o aplicador de clips ligating ajustado com um clipe. Guie cuidadosamente dentre as garras e uma perna do clipe mas a passagem em torno do tronco pulmonar. Use a ligadura para puxar delicadamente o tronco pulmonar para cima e para dentro do garfo do clipe.</li>
	<li>Quando o tronco pulmonar está no garfo do clipe e as duas pontas das pernas clip são livres de qualquer tecido conjuntivo, comprima o clip com o aplicador para aplicar a borda.</li>
	<li>Observar como a RV dilata imediatamente em resposta para a borda e remover a ligadura.</li>
</ol>5. fechamento do tórax
<ol><li>Remover o mento do Timo e reposicionar o timo para sua posição natural. Remova o afastador.</li>
	<li>Fechar o tórax em três camadas: a camada intercostal, o músculo peitoral maior e a pele com sutura (4-0, multifilamento, absorvível). Injete 2 mL de solução salina s.c. para substituir o líquido perdido durante a cirurgia.</li>
	<li>Desligue o sevoflurano e e mantenha o rato sobre o ventilador (1,5 L de O2), até que ele começa a respirar espontaneamente. Em seguida, os tubos com o rato.</li>
	<li>Tratar os ratos com buprenorfina na água potável para os três dias seguintes14 ou aplicar um protocolo analgésico semelhante. Depois de três dias, os ratos se recuperaram e estão sem desconforto.</li>
	<li>Nas semanas seguintes, o bem-estar dos ratos e possíveis efeitos adversos deve ser avaliado em uma base diária. A cicatrização da ferida da toracotomia deve receber atenção especial durante a primeira semana a fim de detectar sinais de infecção ou insuficiência dos cicatrices. Se os ratos mostram sinais de falha prosperar incluindo pele hirsuta, mobilidade prejudicada, problemas respiratórios e perda de peso, deve ser acompanhadas de perto e sacrificados, se perder mais de 20% do seu peso corporal ou desenvolver fulminante respiratória insuficiência.</li>
</ol>6. sham cirurgia
<ol><li>Fazer uma cirurgia de Souza, seguindo todos os passos acima, exceto para a aplicação do clip (passo 4).</li>
</ol>

<ol><li>Kaufman, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+profiling+of+left+and+right+ventricular+hypertrophy+in+congenital+heart+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiac+Failure%22%5BJournal%5D)">Genomic profiling of left and right ventricular hypertrophy in congenital heart disease.</a> Journal of Cardiac Failure. 14 (9), 760-767 (2008).</li>
<li>Zungu-Edmondson, M., Suzuki, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+stress+response+mechanisms+in+right+and+left+ventricles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Rare+Diseases+Research+%26+Treatment%22%5BJournal%5D)">Differential stress response mechanisms in right and left ventricles.</a> Journal of Rare Diseases Research & Treatment. 1 (2), 39-45 (2016).</li>
<li>Zaffran, S., Kelly, R. G., Meilhac, S. M., Buckingham, M. E., Brown, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Right+ventricular+myocardium+derives+from+the+anterior+heart+field%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Right ventricular myocardium derives from the anterior heart field.</a> Circulation Research. 95 (3), 261-268 (2004).</li>
<li>de Raaf, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SuHx+rat+model%3A+partly+reversible+pulmonary+hypertension+and+progressive+intima+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">SuHx rat model: partly reversible pulmonary hypertension and progressive intima obstruction.</a> The European Respiratory Journal. 44 (1), 160-168 (2014).</li>
<li>Gomez-Arroyo, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+monocrotaline+model+of+pulmonary+hypertension+in+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">The monocrotaline model of pulmonary hypertension in perspective.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 302 (4), L363-L369 (2012).</li>
<li>Bogaard, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+pulmonary+artery+pressure+elevation+is+insufficient+to+explain+right+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Chronic pulmonary artery pressure elevation is insufficient to explain right heart failure.</a> Circulation. 120 (20), 1951-1960 (2009).</li>
<li>Borgdorff, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sildenafil+enhances+systolic+adaptation%2C+but+does+not+prevent+diastolic+dysfunction%2C+in+the+pressure-loaded+right+ventricle%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Heart+Failure%22%5BJournal%5D)">Sildenafil enhances systolic adaptation, but does not prevent diastolic dysfunction, in the pressure-loaded right ventricle.</a> European Journal of Heart Failure. 14 (9), 1067-1074 (2012).</li>
<li>Mendes-Ferreira, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+right+ventricle+remodeling+in+response+to+pressure+overload+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Distinct right ventricle remodeling in response to pressure overload in the rat.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 311 (1), H85-H95 (2016).</li>
<li>Piao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inhibition+of+pyruvate+dehydrogenase+kinase+improves+impaired+cardiac+function+and+electrical+remodeling+in+two+models+of+right+ventricular+hypertrophy%3A+resuscitating+the+hibernating+right+ventricle%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">The inhibition of pyruvate dehydrogenase kinase improves impaired cardiac function and electrical remodeling in two models of right ventricular hypertrophy: resuscitating the hibernating right ventricle.</a> Journal of Molecular Medicine. 88 (1), 47-60 (2010).</li>
<li>Hirata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Model+of+Pulmonary+Artery+Banding+Leading+to+Right+Heart+Failure+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Novel Model of Pulmonary Artery Banding Leading to Right Heart Failure in Rats.</a> BioMed Research International. 2015, 753210(2015).</li>
<li>Schou, U. K., Peters, C. D., Kim, S. W., Frøkiær, J., Nielsen, S. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0939860006000186">Characterization of a rat model of right-sided heart failure induced by pulmonary trunk banding.</a> Journal of Experimental Animal Science. 43 (4), 237(2007).</li>
<li>Andersen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+bisoprolol+and+losartan+treatment+in+the+hypertrophic+and+failing+right+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiac+Failure%22%5BJournal%5D)">Effects of bisoprolol and losartan treatment in the hypertrophic and failing right heart.</a> Journal of Cardiac Failure. 20 (11), 864-873 (2014).</li>
<li>Holmboe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inotropic+Effects+of+Prostacyclins+on+the+Right+Ventricle+Are+Abolished+in+Isolated+Rat+Hearts+With+Right-Ventricular+Hypertrophy+and+Failure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Inotropic Effects of Prostacyclins on the Right Ventricle Are Abolished in Isolated Rat Hearts With Right-Ventricular Hypertrophy and Failure.</a> Journal of Cardiovascular Pharmacology. 69 (1), 1-12 (2017).</li>
<li>Jessen, L., Christensen, S., Bjerrum, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antinociceptive+efficacy+of+buprenorphine+administered+through+the+drinking+water+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">The antinociceptive efficacy of buprenorphine administered through the drinking water of rats.</a> Lab Anim. 41 (2), 185-196 (2007).</li>
<li>Andersen, A., Povlsen, J. A., Botker, H. E., Nielsen-Kudsk, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Right+ventricular+hypertrophy+and+failure+abolish+cardioprotection+by+ischaemic+pre-conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Heart+Failure%22%5BJournal%5D)">Right ventricular hypertrophy and failure abolish cardioprotection by ischaemic pre-conditioning.</a> European Journal of Heart Failure. 15 (11), 1208-1214 (2013).</li>
<li>Fujimoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+Cardiac+Output+Leads+Hepatic+Fibrosis+in+Right+Heart+Failure+Model+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Low Cardiac Output Leads Hepatic Fibrosis in Right Heart Failure Model Rats.</a> PloS one. 11 (2), e0148666(2016).</li>
<li>Marques, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-fat+diet-induced+obesity+Rat+model%3A+a+comparison+between+Wistar+and+Sprague-Dawley+Rat%5BTitle%5D)+AND+%22Adipocyte%22%5BJournal%5D)">High-fat diet-induced obesity Rat model: a comparison between Wistar and Sprague-Dawley Rat.</a> Adipocyte. 5 (1), 11-21 (2016).</li>
<li>Osadchii, O., Norton, G., Deftereos, D., Woodiwiss, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+strain-related+differences+in+myocardial+adrenergic+tone+and+the+impact+on+cardiac+fibrosis%2C+adrenergic+responsiveness+and+myocardial+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">Rat strain-related differences in myocardial adrenergic tone and the impact on cardiac fibrosis, adrenergic responsiveness and myocardial structure and function.</a> Pharmacological Research. 55 (4), 287-294 (2007).</li>
<li>Brower, M., Grace, M., Kotz, C. M., Koya, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+growth+characteristics+of+Sprague+Dawley+rats+obtained+from+different+sources%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Research%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of growth characteristics of Sprague Dawley rats obtained from different sources.</a> Laboratory Animal Research. 31 (4), 166-173 (2015).</li>
<li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+neonatal+rat+model+of+increased+right+ventricular+afterload+by+pulmonary+artery+banding%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">A neonatal rat model of increased right ventricular afterload by pulmonary artery banding.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 154 (5), 1734-1739 (2017).</li>
<li>Borgdorff, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+loading+conditions+reveal+various+patterns+of+right+ventricular+adaptation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Distinct loading conditions reveal various patterns of right ventricular adaptation.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 305 (3), H354-H364 (2013).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar

Nós descrevemos um método acessível e altamente reprodutível do tronco pulmonar de borda usando um aplicador de clip ligating modificados para comprimir um clipe de titânio em torno do tronco pulmonar. Ajustando o aplicador para comprimir a mola para diferentes diâmetros internos, fenótipos distintos de hipertrofia de RV e falha podem ser induzidos incluindo insuficiência severa da RV com manifestação extra-cardíaca de descompensação.
Apesar de simples, o protocolo contém alguns passos crítico...

Ventrículo direito (RV) pode se adaptar a uma sobrecarga de pressão persistente. Em tempo, no entanto, mecanismos adaptativos falharem sustentar o débito cardíaco, dilata o RV e eventualmente falha o RV. Função de RV é o principal fator prognóstico de vários distúrbios cardiopulmonares, incluindo hipertensão arterial pulmonar (HAP), hipertensão pulmonar tromboembólica (CP) e várias formas de cardiopatia congênita com uma sobrecarga de pressão (ou volume) da caravana. Apesar do intenso tratamento, falha de RV continua a ser uma causa predominante de morte nestas condições.
Como consequência as propriedades únicas de1,2 e desenvolvimento embriológico3 do VD, conhecimento derivado da falha de coração esquerda simplesmente não pode ser extrapolado para certa insuficiência cardíaca. Modelos animais de certa insuficiência cardíaca, portanto, são necessários a fim de investigar os mecanismos de falha de RV e potenciais estratégias de tratamento farmacológico.
Existem experimental modelos de hipertensão pulmonar induzida pela SU5416 combinado com hipóxia (SuHx)4 ou monocrotaline (MCT)5, que induzem a RV falha devido à doença na vasculatura pulmonar. Estes modelos são usados para avaliar os efeitos terapêuticos de drogas que visam a vasculatura pulmonar. Tanto o SuHx e o modelo do MCT são modelos de pós-carga não fixa de falha de RV. Por conseguinte, não é possível concluir se uma melhoria na função de RV, após uma intervenção é secundária a pós-carga, reduzindo efeitos vasculares pulmonares ou se é causada por efeitos directos sobre a caravana. Além disso, o modelo MCT tem vários efeitos extra-cardíaca.
Em modelos de faixas de tronco pulmonar experimental, a pós-carga do VD é fixo devido a uma obstrução mecânica do tronco pulmonar. Isto permite a investigação de efeitos cardíacos directos de uma intervenção do trailer independente de quaisquer efeitos vascular pulmonar6,7,8,9. Geralmente, a borda é realizada colocando uma agulha ao longo do tronco pulmonar. Em seguida, uma ligadura é colocada ao redor da agulha e o tronco pulmonar e amarrada com um nó, e a agulha é removida, deixando a sutura em torno do tronco pulmonar. Dependendo do calibre da agulha, diferentes graus de constrições podem ser aplicadas, mas apesar dessa abordagem ser amplamente utilizada, tem algumas desvantagens. Primeiro, o diâmetro da borda não é exatamente o mesmo como o diâmetro exterior da agulha como a ligadura é amarrada ao redor tanto a agulha e o tronco pulmonar. Em segundo lugar, pode haver variação significativa como firmemente o nó é amarrada, tornando-se difícil de reproduzir um certo grau de bandas. Isto levará a uma variação no diâmetro de bandas e, assim, uma maior dispersão. Enfim, o nó pode vir solta ao longo do tempo.
Um estudo aplica-se um clipe de tântalo entreabertos em torno do tronco pulmonar10. Eles comprimido o clipe em torno do tronco pulmonar para uma área interna de 1,10 mm2 e comparou-a com ratos submetidos a borda com uma sutura usando uma agulha de 18 G. Em geral, faixas com o clipe foi associado com menos complicações peri-cirúrgicas e a variância de dados.
Baseada nos princípios descritos por Schou et al.11, estamos ainda mais desenvolvido e caracterizado o tronco pulmonar (PTB) modelo de hipertrofia de RV e falha de borda. Aqui, apresentamos nossa experiência usando este modelo, com base nos resultados de anteriores estudos12,13. Para este modelo, um clipe de titânio é compactado em torno do tronco pulmonar com um diâmetro interno exato predefinido, que pode ser regulado para induzir diferentes fenótipos de falha de RV.

<table><tbody><tr><td>17 G IV Cânula Venflon</td><td>Becton Dickinson, US</td><td>393228</td><td>Distal 2 mm da agulha foram cortados</td></tr><tr><td>1 seringa de 1 mL + agulha 26 G</td><td>Becton Dickinson, US</td><td>303172 & 303800</td><td></td></tr><tr><td>4-0 sutura multifilamentar absorvível</td><td>Covidien, US</td><td>GL-46-MG</td><td>Polysorb, violeta, 5x18 "</td></tr><tr><td>4-0 ligadura multifilamentar</td><td>Covidien, US</td><td>LL-221</td><td>Polysorb, violeta, 98 "</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Indivior UK Limited</td><td></td><td>Aquisição local, Temgesic 0,3 mg / mL</td></tr><tr><td>Carprofeno</td><td>ScanVet, DK</td><td>27693</td><td>Norodyl 50 mg / mL</td></tr><tr><td>Cloraxidina</td><td>Faaborg Pharma, DK</td><td></td><td>Aquisição local</td></tr><tr><td>Empreiteiro</td><td>Aesculap, Alemanha</td><td>BV010R</td><td>Blunt, auto-retenção, 70 mm</td></tr><tr><td>Gancho de orelha</td><td>Lawton, Alemanha</td><td>66-0261</td><td>Pequeno, 14 cm, ponta modificada para um ângulo de 85&deg;</td></tr><tr><td>Gel para os olhos</td><td>Decra, UK</td><td></td><td>Lubrithal, Pinça de aquisição local</td></tr><tr><td>, Tecido delicado</td><td>Lawton, Alemanha</td><td>09-0020</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps, Dissecando</td><td>Lawton, Alemanha</td><td>09-0013</td><td>1 regular, 1 com ponta modificada para um ângulo de 100&deg;</td></tr><tr><td>Sistema de Anestesia a Gás</td><td>Penlon Limited, Reino Unido</td><td>SD0217SL</td><td>Vaporizador Delta Sigma</td></tr><tr><td>Aparador de cabelo</td><td>Oster</td><td>76998-320-051</td><td></td></tr><tr><td>Aplicador de clipe de ligação aberto Horizon</td><td>Teleflex, US</td><td>137085</td><td>Modificado com mecanismo de parada ajustável</td></tr><tr><td>Horizon Titanium Clips</td><td>Teleflex, US</td><td>001200</td><td>Câmara de</td></tr><tr><td>indução</td> pequena <td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de íris</td><td>Lawton, Alemanha</td><td>05-1450</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de íris</td><td>Aesculap, Alemanha</td><td>BC060R</td><td></td></tr><tr><td>Ventilador mecânico</td><td>Ugo Basile, Itália</td><td>7025</td><td></td></tr><tr><td>Microscissor</td><td>Lawton, Alemanha</td><td>63-1406</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio</td><td>Carl Zeiss, Alemanha</td><td>303294-9903</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulha</td><td>Lawton, Alemanha</td><td>08-0011</td><td>TITEGRIP</td></tr><tr><td>Pean</td><td>Lawton, Alemanha</td><td>06-0100</td><td>Halsted-Mosquito, direto</td></tr><tr><td>Pro-Optha</td><td>Lohmann & Rauscher, Alemanha</td><td>16515</td><td>Tampão</td></tr><tr><td>Salina 9 mg/mL</td><td>Fresenius Kabi, DK</td><td>209319</td><td></td></tr><tr><td>Sevoflurane</td><td>AbbVie, US</td><td></td><td>Sevorane, Aquisição local</td></tr><tr><td>Gancho cirúrgico</td><td>Lawton, Alemanha</td><td>51-0665</td><td>Cushing, 19 cm, ponta modificada para um ângulo de 90&graus;</td></tr><tr><td>Fita Cirúrgica</td><td>3M, Controlador</td> de Temperatura <td>Micropore</td>US <td>1530-0</td></tr><tr><td></td><td>Microdiálise CMA; Suécia</td><td>8003760</td><td>CMA 450</td></tr><tr><td>Máquina de pesagem</td><td>VWR, EUA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Desmamados de ratos Wistar</td><td>Janvier Labs, França</td><td></td><td>RjHan:WI, 100-120 g</td></tr></tbody></table>

um tronco pulmonar bandagem modelo de sobrecarga de pressão induzida por falha e hipertrofia ventricular direita

A Pulmonary Trunk Banding Model of Pressure Overload Induced Right Ventricular Hypertrophy and Failure

Ventrículo direito (RV) falha, que induzido pela sobrecarga de pressão sustentada é dos principais contribuintes para a morbidade e mortalidade em várias doenças cardiopulmonares. Confiáveis e reprodutíveis de modelos animais de falha de RV são garantidos, portanto, a fim de investigar os mecanismos da doença e os efeitos dos potenciais estratégias terapêuticas. Bandagem do tronco pulmonar é um método comum para induzir hipertrofia isolada de RV, mas em geral, modelos descritos anteriormente não conseguiram criar um modelo estável de hipertrofia de RV e falha.
Apresentamos um modelo do rato de pressão sobrecarga induzida RV hipertrofia causada pelo tronco pulmonar bandagem (PTB) que permite que diferentes fenótipos de hipertrofia RV com e sem falha de RV. Nós usamos um modificado ligating aplicador de clips para comprimir um clipe de titânio em torno do tronco pulmonar com um diâmetro interno pré-estabelecidos. Utilizamos diâmetros diferentes clip para induzir diferentes estágios de progressão da doença de leve hipertrofia RV descompensada de RV.
Hipertrofia de RV consistentemente desenvolve em ratos submetidos ao procedimento PTB e dependendo do diâmetro do clipe de bandas aplicado, pode com precisão reproduzimos gravidades diferentes da doença variando de hipertrofia compensada a RV descompensada grave falha com manifestações extra-cardíaca.
O modelo PTB apresentado é um modelo válido e robusto de sobrecarga de pressão induzida por hipertrofia de RV e falha que tem várias vantagens para outros modelos de bandas incluindo alta reprodutibilidade e a possibilidade de induzir a falha de RV grave e descompensada.

Usando o procedimento descrito do PTB em estudos anteriores de nosso grupo12,13, induzimos hipertrofia RV (PTB suave) por bandas com um clipe de 1,0 mm, um grau moderado de falha de RV (PTB moderado) por bandas com um clipe de 0,6 mm e um grau severo de falha de RV (PTB grave) por bandas com um clipe de 0,5 mm. Os ratos submetidos a severas manifestações bandas desenvolvidas extra-cardíaca da falha de RV, incluindo insuficiência h...

Apresentamos um método cirúrgico para induzir hipertrofia ventricular direita e falha em ratos.

Um tronco pulmonar bandagem modelo de sobrecarga de pressão induzida por falha e Hipertrofia Ventricular direita

Right ventricular (RV) failure induced by sustained pressure overload is a major contributor to morbidity and mortality in several cardiopulmonary ...

Este método pode ajudar a responder perguntas-chave sobre mecanismos subjacentes e tratamento da falha ventricular direita. A principal vantagem desta técnica é que ela permite um aumento preciso e reprodutível de pós-carga que induz hipertrofia ventricular direita e falha. As implicações dessa técnica se estendem para a terapia da falha ventricular direita, pois elimina efeitos secundários à vasodilatação pulmonar.Antes de iniciar o procedimento de isolamento do tronco selecione um diâmetro apropriado para a banda e ajuste o aplicador de clipe ligante até que a distância entre as mandíbulas seja de um milímetro quando o clipe estiver totalmente comprimido deixando um lúmen de 6 milímetros. Em seguida, confirme a falta de resposta no dedo do dedo do dedo em um anesthetizado 100 a 120 gramas wistar desmamamar e fazer uma incisão de pele de dois centímetros ao longo da linha média do esterno. Sob um microscópio dissecando cortou o músculo peitoral principal em seu apego severo e identificou a segunda, terceira e quarta costae.Use um par de tesouras para cortar a quarta, terceira e segunda costae perto do esterno e dissecar cuidadosamente os músculos intercostais até que uma toracotomia esquerda completa tenha sido realizada. Ao realizar a toracotomia lateral esquerda, deve-se ter muito cuidado, pois a artéria mammorial interna esquerda é apenas abaixo da caixa torácica, por isso tenha muito cuidado. Insira um retrátil entre o esterno e a costae e abra as mandíbulas até que o timo esteja visível na parte superior do campo de visão.Use as fórceps de peen para virar cuidadosamente o timo para expor a aorta e o tronco pulmonar e guiar a ponta de um pequeno gancho cirúrgico, dobrado a um ângulo de 85 graus, através do seio paracárdico reverso atrás do apêndice atrial esquerdo. Puxe o gancho no meio do seio e guie a ponta do gancho de ouvido para cima até que apareça entre a aorta ascendente e o tronco pulmonar. Ao colocar o gancho de ouvido certifique-se de ter o ângulo reto.você não deve usar qualquer força pode ser um pouco difícil inicialmente, mas você pode dominá-la com a prática. Use a tesoura de íris para remover qualquer tecido conjuntivo que cubra a ponta para separar o tronco pulmonar da aorta ascendente. Use foreceps angulares para guiar uma peça de 10 centímetros de ligadura multifilimante 4/0 ao redor do tronco pulmonar através da passagem feita pelo gancho.Aproveite a extremidade da ligadura com outro fórceps. O tronco pulmonar deve agora ser separado da aorta ascendente e pode ser controlado pela ligadura ao seu redor. Quando o tronco pulmonar estiver preso, use um clipe para carregar o aplicador de clipe de ligadura de ajuste.Guie cuidadosamente uma mandíbula e uma perna do clipe através da passagem ao redor do tronco pulmonar usando a ligadura para puxar suavemente o tronco pulmonar para cima e para dentro do garfo do clipe. Quando o tronco pulmonar estiver no garfo, e as duas pontas do clipe estiverem livres de qualquer tecido conjuntivo, comprima o clipe para aplicar a banda removendo a ligadura assim que o ventrículo direito se dilata em resposta à banda. Quando o tronco for agrupado, remova as fórceps de púprica do timo e devolva o tecido para sua posição natural.Remova o retrátil e use suturas multifiliment absorvíveis 4/0 para fechar o tórax em três camadas. Em seguida, injete subcutâneamente 2 mililitros de soro fisiológico para substituir qualquer fluido perdido durante a cirurgia e monitorar o animal até a recumbência total. Selecionando diferentes diâmetros do clipe é possível induzir diferentes estágios de gravidade da doença, como evidente aqui por um grau crescente de hipertrofia ventricular direita.Só a banda grave causa manifestações cardíacas extras, incluindo insuficiência hepática. As diferenças na banda de tronco pneuína moderada versus grave são evidentes pelo aumento da pressão ventricular direita e causam falha ventricular direita moderada versus grave, conforme revelado por uma diminuição stepwise na saída cardíaca e excursão sistólica do plano anular tricúspido à medida que a gravidade da banda aumenta. O procedimento de banda do tronco pulmonar induzido pela dilatação do ventrículo direito é evidente por um aumento tanto no volume diastólico final ventricular direito quanto no volume sistólico nos ratos moderados de banda do tronco pulmonar em comparação com animais operados por vergonha, e nos ratos de banda de tronco pulmonar severo em comparação com os animais moderados e falsos.Também é observada uma diminuição escalonada na fração de ejeção ventricular direita. A hipertrofia ventricular direita é ainda indicada por um aumento na área transversal do cardiomiócito em ratos com banda de tronco pulmonar, em comparação com animais operados por vergonha, bem como outras alterações morfológicas no ventrículo direito associadas à falha do ventrículo direito, incluindo fibrose ventrículo direita. Uma vez dominada esta técnica pode ser realizada em 30 minutos se for realizada corretamente.Ao tentar este procedimento é importante obter resultados consistentes com o modelo antes de iniciar a pesquisa experimental. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores no campo da insuficiência cardíaca direita explorarem intervenções farmacológicas e mecanismos básicos. Depois de assistir a este vídeo você deve ter um bom entendimento sobre como executar banda de tronco pulmonar.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

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Bandas Aórticas O-Ring versus Constrição Aórtica Transversa Tradicional para Modelagem da Hipertrofia Cardíaca Induzida por Sobrecarga de Pressão

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Modelo Ovino Crônico de Insuficiência Ventricular Direita e Regurgitação Tricúspide Funcional

Descrevemos um modelo murino de sobrecarga de pressão do ventrículo direito induzida por bandagem do tronco pulmonar. Protocolos detalhados para intubação, cirurgia e fenotipagem por ecocardiografia estão incluídos no artigo. Instrumentos feitos sob medida são usados para intubação e cirurgia, permitindo uma reprodução rápida e barata do modelo.

Um modelo murino de hipertrofia ventricular direita induzida por sobrecarga de pressão e falha por bandagem do tronco pulmonar

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Modelo de rato de remodelamento cardíaco do lado direito e arritmia usando bandagem da artéria pulmonar

A apresentação de métodos detalhados para a avaliação da função do ventrículo direito aumentará a qualidade e a confiabilidade da pesquisa sobre hipertensão pulmonar, oferecendo uma estrutura robusta para estudos futuros e aumentando a reprodutibilidade em diferentes laboratórios.

Avaliação da Função Ventricular Direita em Modelos Experimentais de Hipertensão Arterial Pulmonar

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Aorta ascendente constrição em ratos para a criação de sobrecarga de pressão Cardíaca Hipertrofia Modelo

Ventrículo direito (VD) disfunção é fundamental para a patogênese da doença cardiovascular, ainda metodologias limitados estão disponíveis para a sua avaliação. Recentes avanços em ultra-sonografia fornecer uma opção não invasiva e precisas para o estudo RV longitudinal. Aqui, temos um método ecocardiográfico passo-a-passo através de um modelo murino de sobrecarga de pressão RV detalhes.

Avaliação da Estrutura e Função do Ventrículo Direito em modelo de camundongo Pulmonary Artery constrição por Ecocardiografia transtorácica

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Tromboembólica crônica Hipertensão Pulmonar e Avaliação da Função Ventricular Direita no Piglet

Aprenda a técnica de bandagem do tronco pulmonar em ratos Wistar para induzir hipertrofia e insuficiência ventricular direita de forma precisa e reprodutível. Este método permite estudar mecanismos de falha cardíaca sem efeitos de vasodilatação pulmonar.

Um tronco pulmonar bandagem modelo de sobrecarga de pressão induzida por falha e Hipertrofia Ventricular direita

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