Name: Uma medida de cromatografia líquida de alta performance da Quinurenina e ácido cinurênico: matéria bioquímica de cognição e sono em ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Aprenda a medir quinurenina e ácido cinurênico em cérebro e plasma de ratos por cromatografia líquida de alta performance. Este método bioquímico auxilia pesquisas em neurociência sobre transtornos psiquiátricos.

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O presente estudo foi financiado em parte pelo National Institutes of Health (R01 NS102209) e uma doação do Clare E. Forbes Trust.

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<li>Pocivavsek, A., Rowland, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+Neuroscience+Illuminates+Causal+Relationship+Between+Sleep+and+Memory%3A+Translating+to+Schizophrenia%5BTitle%5D)+AND+%22Schizophrenia+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Basic Neuroscience Illuminates Causal Relationship Between Sleep and Memory: Translating to Schizophrenia.</a> Schizophrenia Bulletin. 44 (1), 7-14 (2018).</li>
<li>Shibata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorimetric+micro-determination+of+kynurenic+acid%2C+an+endogenous+blocker+of+neurotoxicity%2C+by+high-performance+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography%22%5BJournal%5D)">Fluorimetric micro-determination of kynurenic acid, an endogenous blocker of neurotoxicity, by high-performance liquid chromatography.</a> Journal of Chromatography. 430 (2), 376-380 (1988).</li>
<li>Buzsaki, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+consolidation+during+sleep%3A+a+neurophysiological+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Sleep+Research%22%5BJournal%5D)">Memory consolidation during sleep: a neurophysiological perspective.</a> Journal of Sleep Research. 7, 17-23 (1998).</li>
<li>Graves, L. A., Heller, E. A., Pack, A. I., Abel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+deprivation+selectively+impairs+memory+consolidation+for+contextual+fear+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Sleep deprivation selectively impairs memory consolidation for contextual fear conditioning.</a> Learning & Memory. 10 (3), 168-176 (2003).</li>
<li>Yamashita, M., Yamamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tryptophan+circuit+in+fatigue%3A+From+blood+to+brain+and+cognition%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Tryptophan circuit in fatigue: From blood to brain and cognition.</a> Brain Research. 1675, 116-126 (2017).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Para uma avaliação fiável da CLAYDSON no cérebro após uma administração Quinurenina periférica, é fundamental para combinar e interpretar experimentos bioquímicos e funcionais. Aqui, apresentamos um protocolo detalhado que permite que novos usuários para estabelecer métodos eficazes para medir o plasma Quinurenina e cérebro CLAYDSON de ratos. A medição da Quinurenina no plasma confirmou a injeção exata e a medição de um metabólito CLAYDSON confirma a síntese de novo no cérebro. Existem várias vantagens do método...

A KP é responsável pela degradação de quase 95% do aminoácido essencial triptofano1. O cérebro de mamíferos, Quinurenina tidas em astrócitos é metabolizada na molécula pequena neuroativos CLAYDSON principalmente pela enzima Quinurenina aminotransferase (KAT) II2. CLAYDSON age como um antagonista nos receptores NMDA e α7nACh no cérebro2,3,4, e também alvos receptores, incluindo receptor aril hidrocarboneto (AHR) e a G-proteína de sinalização acoplado receptor 35 (GPR35)5 ,6. Em animais experimentais, elevações no cérebro CLAYDSON foram mostradas para prejudicar seu desempenho cognitivo em uma matriz de ensaios comportamentais2,7,8,9,10 . Uma hipótese emergente sugere que CLAYDSON desempenha um papel central na modulação de funções cognitivas pelo impacto de vigília-sono comportamento11, assim apoiam o papel das moléculas de derivados astrocyte em modulando a neurobiologia do sono e cognição,12.
Clinicamente, elevações em CLAYDSON foram encontradas no líquido cefalorraquidiano e tecido cerebral de post-mortem de pacientes com esquizofrenia13,14,15,16, um transtorno psiquiátrico debilitante caracterizada por deficiências cognitivas. Pacientes com esquizofrenia são também muitas vezes atormentados por distúrbios de sono que podem agravar a doença17. Compreender o papel do metabolismo de KP e CLAYDSON na modulação de uma relação entre o sono e cognição, particularmente entre a aprendizagem e memória, pode levar ao desenvolvimento de novas terapias para o tratamento destes resultados pobres em esquizofrenia e outros doenças psiquiátricas.
Um método confiável e consistente para a medição de metabólitos de KP é importante assegurar que as pesquisas emergentes de diferentes instituições podem ser integradas a compreensão científica da biologia de KP. Neste momento, descrevemos a metodologia para medir Quinurenina no plasma de ratos e CLAYDSON em cérebro de ratos por cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC). O presente protocolo, que faz uso de uma detecção fluorimétrica na presença de Zn2 +, foi desenvolvido por Shibata18 e mais recentemente adaptado e otimizado para derivatize com acetato de zinco de 500 mM como o reagente pós-coluna, permitindo a a detecção de endógena, quantidades nanomolar de CLAYDSON no cérebro11.
Para estimular a produção de CLAYDSON endógena de novo como descrito no presente protocolo, a Quinurenina bioprecursor direto é injectada intraperitonealmente (i.p.) em ratos. Em combinação com avaliações bioquímicas para determinar o grau de produção CLAYDSON, os impactos de uma Quinurenina desafiam a memória hipocampo-dependente (paradigma de vacância passiva) e a arquitetura de sono-vigília (sinais de EEG e EMG) é também investigadas,11. Uma combinação destas técnicas permite o estudo do impacto bioquímico e funcional de um Quinurenina desafio na vivo em ratos.

<table><tbody><tr><td>Ratos Wistar</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td>macho adulto, 250-350 g</td></tr><tr><td>sulfato de L-quinurenina</td><td>Sai Advantium</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ReproSil-Pur coluna C18 (4 mm x 150 mm)</td><td>Dr. Maisch GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EZ Clips</td><td>Stoelting Co.</td><td>59022</td><td></td></tr><tr><td>Parafusos de materiais de montagem</td><td>PlasticsOne</td><td>00-96 X 1/16</td><td></td></tr><tr><td>Suturas não absorvíveis</td><td>MedRep Express</td><td>699B</td><td>CP Medical Monomid Black Nylon Sutures, 4-0, P-3, 18", CAIXA de 12</td></tr><tr><td>Suturas Absorvíveis</td><td>Ethicon</td><td>J310H</td><td>4-0 Revestido Vicryl Violet 1X27'' SH-1</td></tr><tr><td>Dental Cement</td><td>Stoelting Co.</td><td>51458</td><td></td></tr><tr><td>Broca</td><td>Stoelting Co.</td><td>514551</td><td>0,45 mm</td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários<</td></tr><tr><td>strong>Alliance HPLC system</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>E2695 módulo de separação</td><td>Waters</td><td>176269503</td><td></td></tr><tr><td>2475 detector de fluorescência</td><td>Waters</td><td></td><td></td>186247500</tr><tr><td>gerenciador de reagentes pós-coluna</td><td>Waters</td><td>725000556</td><td></td></tr><tr><td>computador Lenovo</td><td>Software Waters</td><td>668000249</td><td></td></tr><tr><td>Empower</td><td>Waters</td><td>176706100</td><td></td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>Caixa de prevenção passiva para ratos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cubículo de atenuação de som MDF extra alto</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-018MD</td><td>Interior: 22" (L) x 22" (A) x 16" (P)</td></tr><tr><td>Câmara da caixa de transporte do modulador de canal central</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-010MC</td><td></td></tr><tr><td>Piso de grade de aço inoxidável para rato</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-010MB-GF</td><td></td></tr><tr><td>Porta de guilhotina automática</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-010B-S</td><td></td></tr><tr><td>Chicote de fios de piso de grade de transporte de desconexão rápida para rato</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-010MB-QD</td><td></td></tr><tr><td>Luz de estímulo, lente branca de 1", montada em painel modular</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-221M</td><td></td></tr><tr><td>Módulo Sonalert com controle de volume para câmara de rato</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-223AM</td><td></td></tr><tr><td>Pacote SmartCtrl de 8 entradas/16 saídas</td><td>MedAssociates</td><td>DIG-716P2</td><td></td></tr><tr><td>Controle IR de 8 canais para caixas de transporte</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-253C</td><td></td></tr><tr><td>Tiras de matriz de fonte e detector infravermelho</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-256</td><td></td></tr><tr><td>Gabinete de interface de mesa, 120 V 60 Hz</td><td>MedAssociates</td><td>SG-6080C</td><td></td></tr><tr><td>Módulo de estimulação aversiva de corrente constante de faixa dupla</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-410B</td><td></td></tr><tr><td>Módulo scrambler de piso de grade de estado sólido</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-412</td><td></td></tr><tr><td>Módulo de controle de choque duplo A/B</td><td>MedAssociates</td><td>ENV-415</td><td></td></tr><tr><td>2' Extensão mini-molex de 3 pinos</td><td>MedAssociates</td><td>SG-216A-2</td><td></td></tr><tr><td>10' Cabo de saída de choque, DB-9 M/F</td><td>MedAssociates</td><td>SG-219G-10</td><td></td></tr><tr><td>Cabo de controle de choque de transporte 15', 6</td><td>MedAssociates</td><td>SG-219SA</td><td></td></tr><tr><td>Pequeno gabinete de mesa e fonte de alimentação, 120 V 60 Hz</td> Pacote de interface PCI <td>MedAssociates</td><td>SG-6080D</td><td></td></tr> Pacote de utilitários para <tr><td>evitar caixa de transporte</td><td>MedAssociates</td><td>SOF-700RA-7</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>Equipamento de monitoramento de sono-vigília</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>software Ponehmah</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>PNP-P3P-610</td><td></td></tr><tr><td>MX2 8 Interface de aquisição de fonte</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>PNM-P3P-MX204</td><td></td></tr><tr><td>Computador Dell, Optiplex 7020, Windows 7, 64 bits</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>271-0112-013</td><td></td></tr><tr><td>Monitor de computador Dell de 19"</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>271-0113-001</td><td></td></tr><tr><td>Receptores para gaiolas de plástico, 8x</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>272-6001-001</td><td></td></tr><tr><td>Cisco RV130 Roteador VPN</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>RV130</td><td></td></tr><tr><td>Matrix 2.0</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>271-0119-001</td><td></td></tr><tr><td>Comutador de rede</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>SG200-08P</td><td></td></tr><tr><td>Software Neuroscore</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>271-0171-CFG</td><td></td></tr><tr><td>Transmissor de dois canais biopotenciais, modelo TL11M2-F40-EET</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>270-0134-001</td><td></td></tr></tbody></table>

uma medida de cromatografia líquida de alta performance da quinurenina e ácido cinurênico: matéria bioquímica de cognição e sono em ratos

A High-performance Liquid Chromatography Measurement of Kynurenine and Kynurenic Acid: Relating Biochemistry to Cognition and Sleep in Rats

O caminho da Quinurenina (KP) de degradação do triptofano tem sido implicado em transtornos psiquiátricos. Especificamente, o metabólito derivado astrocyte cinurênico ácido (KYNA), um antagonista em ambos N-metil-d-aspartato (NMDA) e α7 os receptores nicotínicos de acetilcolina (α7nACh), tem sido implicado em processos cognitivos na saúde e na doença. Como CLAYDSON níveis são elevados no cérebro de pacientes com esquizofrenia, uma avaria no glutamatérgico e receptores colinérgicos é acreditada para ser causalmente relacionadas com disfunção cognitiva, um domínio principal da psicopatologia da doença. CLAYDSON pode desempenhar um papel significativo pathophysiologically em indivíduos com esquizofrenia. É possível elevar CLAYDSON endógena do cérebro de roedor, tratar os animais com o Quinurenina bioprecursor direto, e estudos pré-clínicos em ratos demonstraram que elevações agudas na CLAYDSON podem impactar seus processos de aprendizagem e memória. O atual protocolo descreve esta abordagem experimental em detalhe e combina a) uma análise bioquímica da Quinurenina níveis no sangue e cérebro formação de CLAYDSON (usando cromatografia líquida de alta eficiência), teste b) comportamental para sondar o dependentes do hipocampo memória contextual (paradigma de vacância passiva) e c) uma avaliação do comportamento de sono-vigília [gravações telemetria combinando o eletroencefalograma (EEG) e eletromiografia (EMG) sinais] em ratos. Tomados em conjunto, uma relação entre elevados CLAYDSON, sono e cognição é estudada, e este protocolo descreve detalhadamente uma abordagem experimental para compreender os resultados da função de elevação Quinurenina e CLAYDSON formação na vivo em ratos. Resultados obtidos através de variações deste protocolo irão testar a hipótese de que o KP e CLAYDSON servem papéis pivotal em modulação sono e cognição nos Estados de saúde e na doença.

Para validar o uso de uma injeção intraperitoneal Quinurenina como um método para elevar o cérebro CLAYDSON, foi realizada uma análise HPLC de tecido. Curvas padrão (Figura 1) foram construídas usando o software associado e permitido para a quantificação das amostras de tecido. Cromatogramas representativas para Quinurenina e CLAYDSON são apresentadas na Figura 2. Quinurenina foi observada em um tempo de retenção de 6 min, e CLAY...

Alterações em metabólitos neuroativos Quinurenina caminho (KP) estão implicadas em doenças psiquiátricas. Investigar os resultados funcionais de um Quinurenina alterado via metabolismo na vivo em roedores pode ajudar a elucidar as novas abordagens terapêuticas. O protocolo atual combina abordagens bioquímicas e comportamentais para investigar o impacto de um desafio de Quinurenina aguda em ratos.

Uma medida de cromatografia líquida de alta performance da Quinurenina e ácido cinurênico: matéria bioquímica de cognição e sono em ratos

The kynurenine pathway (KP) of tryptophan degradation has been implicated in psychiatric disorders. Specifically, the astrocyte-derived metabolite ...

Este método combina abordagens bioquímicas e comportamentais para ajudar a responder a questões-chave no campo da neurociência sobre o impacto de um desafio agudo de quinurenina em ratos. A principal vantagem da técnica é que ela fornece um método confiável e consistente para a medição de metabólitos da via da quinurenina no cérebro e plasma de ratos. Demonstrando o procedimento estará Carly Fabian, uma estudante assistente de pesquisa do meu laboratório.No ponto final experimental apropriado após a administração intraperitoneal de quinurenina, descongele o plasma colhido congelado em gelo úmido e dilua as amostras descongeladas com água ultrapura. Transfira 100 microlitros de amostra diluída para recipientes individuais de 25 microlitros de ácido perclórico 6% e votice em centrifugue as amostras. Em seguida, transfira 100 microlitros de sobrenadantes de cada tubo para tubos individuais de microcentrífuga de 250 microlitros para determinação de quinurenina e ácido quinurênico.Para medição de ácido quinurênico a partir de amostras cerebrais, descongele as amostras cerebrais colhidas congeladas em gelo seco e pese individualmente cada amostra em uma balança analítica precisa. Quando todas as amostras tiverem sido pesadas, mova os tubos para o gelo úmido e dilua cada amostra de tecido na proporção de um para 10 peso por volume com água ultrapura, seguida de homogeneização com um sonicador. Alíquota de 100 microlitros de cada pasta de amostra para um novo tubo, em seguida, adicione 25 microlitros de ácido perclórico a 25% para vórtice e centrifugação.Em seguida, transfira 100 microlitros de sobrenadante para tubos de microcentrífuga individuais de 250 microlitros para determinação de ácido quinurênico. Para preparar a máquina de cromatografia líquida de alto desempenho, ou HPLC, para análise de quinurenina, primeiro coloque os tubos de admissão de HPLC individuais na fase móvel, água ultrapura e recipientes de acetonitrila 100%. Em seguida, programe o instrumento para funcionar com 5% de acetonitrila e 95% de água ultrapura a 0,5 mililitros por minuto e deixe a máquina de HPLC funcionar por 20 a 30 minutos.Quando uma pressão e uma linha de base estáveis forem alcançadas, altere a composição da solução para uma fase móvel de acetonitrila a 5% e acetato de sódio a 95% e equilibre o instrumento por mais 30 minutos. Enquanto o instrumento estiver se equilibrando, ligue a lâmpada no detector de fluorescência. Antes da derivitização, bombeie a solução de acetato de zinco separadamente através de uma bomba peristáltica que se combina com a coluna de pós-fase móvel e ligue a bomba de coluna de poste a uma vazão de 0,1 mililitros por minuto por cerca de 20 minutos, até atingir uma pressão estável de cerca de 500 psi.Quando o instrumento estiver pronto para a análise, configure o software do sistema para controlar os parâmetros da sequência de amostras e permitir a injeção automática de várias amostras. Na tela Executar amostra, clique em Arquivoe arraste para baixo para Criar novo conjunto de amostrasselecionando Vaziona nova janela. Liste individualmente todos os padrões e amostras na ordem em que devem ser executados, com os padrões testados no início e no final da sequência.Na coluna de função, designe os padrões e amostras e defina o programa para injetar água entre cada cinco amostras. Defina o tempo de execução de cada amostra para 15 minutos e injete 20 microlitros das amostras dos padrões, seguidos por 20 microlitros das amostras de plasma e 30 microlitros das amostras homogeneizadas do cérebro, conforme apropriado experimentalmente. Em seguida, defina os comprimentos de onda de excitação e emissão de acordo com o composto que está sendo medido e execute a sequência.Para quantificar os dados, abra a tela Procurar Projeto e, na guia Conjuntos de Amostras, clique duas vezes no conjunto de amostras a ser quantificado. Na lista de injeções, destaque todos os padrões e clique com o botão direito do mouse para selecionar Processar'na nova janela. Em seguida, use o menu suspenso para selecionar Calibrar e quantificar'Destaque todos os padrões novamente, clique com o botão direito e selecione Revisar'Quando os cromatogramas abrirem, integre e calibre cada padrão para gerar a curva padrão.Em seguida, retorne à guia Conjuntos de amostras e clique duas vezes no conjunto de amostras para quantificar e revisar conforme demonstrado, integrando e quantificando cada amostra para gerar a concentração de cada amostra com base na curva padrão criada anteriormente. A análise por HPLC de amostras de tecido colhidas de animais administrados com quinurenina revela um tempo de retenção de quinurenina de cerca de seis minutos e um tempo de retenção de ácido quinurênico de cerca de 11 minutos. A quantificação da quinurenina plasmática e do ácido quinurênico hipocampal revela que a injeção aguda de quinurenina aumenta os níveis de ácido quinurênico cerebral com um pico alcançado duas horas após a injeção que retorna à linha de base quatro horas após a injeção.Embora não sejam observadas diferenças de grupo durante os ensaios de treinamento do paradigma de evitação passiva, os animais de controle apresentam um aumento significativo na latência para entrar no lado escuro durante os testes, indicando aprendizado contextual, enquanto os animais injetados com quinurenina 24 horas antes não apresentam o mesmo aumento na latência, demonstrando um déficit no aprendizado. Além disso, a avaliação do impacto de uma elevação aguda da quinurenina durante a fase de luz na arquitetura sono-vigília indica uma redução na duração total do sono de movimento rápido dos olhos durante as primeiras duas horas após a injeção de quinurenina. Esses dados são espelhados por um aumento na duração da vigília durante esses períodos de tempo e uma ligeira redução no sono sem movimento rápido dos olhos, demonstrando que uma elevação aguda da quinurenina também causa distúrbios na dinâmica sono-vigília.Após este procedimento, outros métodos, como análise comportamental, podem ser realizados para responder a perguntas adicionais sobre o papel da formação elevada de ácido quinurênico na modulação da cognição e do sono.

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JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Um procedimento é descrito para manipular a actividade de neurónios piramidais corticais cerebrais optogenetically enquanto o electroencefalograma, electromiograma, e concentração do lactato cerebral são monitorados. Gravações experimentais são realizados em ratinhos de cabo-cativos, enquanto eles sofrem espontâneas do sono / vigília ciclos. Optogenética equipamento é montado no nosso laboratório, o equipamento de gravação encontra-se comercialmente disponível.

Eletroencefalografia simultânea, em tempo real de medição da concentração de lactato e Manipulação optogenética da atividade neuronal do córtex cerebral de roedores

Este vídeo demonstra um protocolo para implantar um eletrodo de eletroencefalograma (EEG) e eletromiograma (EMG) em um camundongo anestesiado. O processo envolve prender o mouse em uma estrutura estereotáxica, fazer uma incisão na linha média do crânio, fazer furos para os eletrodos e fixar a unidade de eletrodo para gravação de sinal. Após a recuperação, o comportamento sono-vigília do mouse é analisado usando os sinais registrados.

Analisando o comportamento do sono em camundongos por meio de eletroencefalograma e gravações de eletromiograma

O registro de eletroencefalograma (EEG) e eletromiograma (EMG) em camundongos com comportamento livre é um passo crítico para correlacionar o comportamento e a fisiologia com o sono e a vigília. O protocolo experimental aqui descrito fornece um sistema baseado em cabo para aquisição de gravações de EEG e EMG em camundongos.

Procedimento de gravação Polygraphic para medição Sleep in Mice

Absorção de dopamina synaptosomal e ferramentas experimentais de cromatografia líquida de alto desempenho análise representam para investigar a homeostase de dopamina em camundongos avaliando-se a função do transportador de dopamina e níveis de dopamina no tecido striatal, respectivamente. Aqui nós apresentamos protocolos para medir o teor de tecido de dopamina e avaliar a funcionalidade do transportador de dopamina.

Avaliação da homeostase Dopaminergic em camundongos pelo uso de análise de cromatografia líquida de alta performance e captação da dopamina Synaptosomal

Apresentamos uma conveniente extração de fase sólida acoplada a cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) com deteção eletroquímica (ECD) para a determinação simultânea de três neurotransmissores monoamina e dois dos seus metabolitos na urina dos bebês. Também identificamos o metabólito MHPG como um potencial biomarcador para o diagnóstico precoce de lesões cerebrais para infantes.

Um método conveniente para extração e análise com a cromatografia líquida de alta pressão de neurotransmissores catecolaminas e seus metabólitos

Nós descrevemos um método de alta produtividade de medição sono por meio de monitoramento de casa-gaiola baseado em atividade. Este método oferece vantagens sobre métodos tradicionais baseados em EEG. Ele é bem validado para a determinação da duração total de sono e pode ser uma ferramenta poderosa para monitorar o sono em roedores modelos de doenças humanas.

Determinação não-invasiva, elevado-throughput da duração do sono em roedores

Aqui, descrevemos um método na vivo microdialysis analisar a liberação de aspartato e glutamato no hipocampo ventral de ratos epilépticos e não-epiléptica, em combinação com gravações de EEG. Concentrações extracelulares de aspartato e glutamato podem ser correlacionadas com as diferentes fases da doença.

Microdialysis de aminoácidos excitatórios durante as gravações de EEG em ratos movimentando-se livremente

A perda de sono e o desalinhamento circadiano contribuem para inúmeros acidentes e incidentes operacionais. A efetividade das contramedidas e dos projetos de agendamento de trabalho visando mitigar a fadiga pode ser um desafio para avaliar em ambientes operacionais. Este manuscrito resume uma abordagem para coleta de dados de sono, circadiano, fadiga e desempenho em ambientes operacionais complexos.

Coletando dados de sono, circadiano, fadiga e desempenho em ambientes operacionais complexos

Aqui, apresentamos um método para investigar ritmos diurnos em desempenho após categorização precisa dos participantes em grupos fenótipos circadianos com base no Questionário cronotipo de Munique, biomarcadores de fase circadiana padrão ouro e medidas actigráficas.

Fenotipagem circadiana humana e testes de desempenho diurno no mundo real

Descrito aqui é um protocolo para a determinação de quatro metabólitos triptofanos diferentes gerados na via kynurenine (kynurenine, 3-hidroxikynurenine, ácido xanthurenic, ácido 3-hidroxyanthranilic) no meio coletado de culturas de células cancerosas analisadas por cromatografia líquida acoplada com uma única espectrometria de massa quadrupole.

Quantificação simultânea de kynureninas selecionadas analisadas por espectrometria de cromatografia líquida-massa em média coletada de culturas celulares cancerosas

Aprenda a medir quinurenina e ácido cinurênico em cérebro e plasma de ratos por cromatografia líquida de alta performance. Este método bioquímico auxilia pesquisas em neurociência sobre transtornos psiquiátricos.

Uma medida de cromatografia líquida de alta performance da Quinurenina e ácido cinurênico: matéria bioquímica de cognição e sono em ratos (Vídeo) | JoVE Journal

Uma medida de cromatografia líquida de alta performance da Quinurenina e ácido cinurênico: matéria bioquímica de cognição e sono em ratos

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