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DOI: 10.3791/58149-v
Kyle Taruc1, Charles Yin1, Daniel G. Wootton2,3, Bryan Heit1
1Department of Microbiology and Immunology and the Center for Human Immunology,University of Western Ontario, 2Institute of Infection and Global Health,University of Liverpool, 3Department of Respiratory Research,Aintree University Hospital NHS Foundation Trust
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Efferocytosis, a remoção fagocitária das células apoptóticas, é necessário para manter a homeostase e é facilitado por receptores e vias de sinalização que permitem o reconhecimento, a duração e internalização de pilhas apoptotic. Neste documento, apresentamos um protocolo de microscopia de fluorescência para a quantificação dos efferocytosis e a atividade das vias de sinalização de efferocytic.
Este método pode ser usado para responder a questões-chave no campo da eferocitose, como o papel das moléculas sinalizadoras na mediação da captação de células apoptóticas. A principal vantagem dessa técnica é que ela fornece uma quantificação clara da captação de células apoptóticas, incluindo captação parcial ou fragmentada de células apoptóticas, que nem sempre é aparente com outros métodos. Embora esse método possa fornecer informações sobre a eferocitose por células imunes, ele também pode ser aplicado a outros tipos de células, como células epiteliais ou cancerígenas.
Geralmente, indivíduos novos neste método terão dificuldades devido à dificuldade em otimizar as configurações de aquisição do microscópio. Depois de preparar macrófagos humanos e células Jurkat apoptóticas, use um hemocitômetro para contar as células apoptóticas. Em seguida, transfira uma quantidade suficiente de células apoptóticas para um tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitro.
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