Name: Avaliação global da eficácia e segurança de entrega de droga Placenta-alvo usando três métodos complementares (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-10T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Aprenda a avaliar a segurança e eficácia da entrega de drogas direcionada à placenta usando nanopartículas, imagem in vivo e ultrassom de alta frequência em camundongos grávidos.

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Este trabalho foi financiado por doações da Fundação Nacional de ciências naturais (81771617) e a ciência Natural Fundação da província de Guangdong (2016A030313178) concedido a X.F.; uma concessão da Shenzhen básica fundo de investigação (JCYJ20170413165233512) atribuído a X.F; e a Eunice Kennedy Shriver National Institute de saúde infantil & desenvolvimento humano do institutos nacionais da saúde sob prêmio número R01HD088549 (o conteúdo é exclusivamente da responsabilidade dos autores e não representam, necessariamente, o funcionário vista para o National Institutes of Health) de N.N.

Todos os experimentos de rato rigorosamente os protocolos (SIAT-IRB-160520-YYS-FXJ-A0232), aprovados pelo cuidado Animal e uso Comissão de Shenzhen institutos de tecnologia avançada, da Academia Chinesa de Ciências.
1. síntese de nanopartículas de lipídios-polímero direcionados A placentária sulfato de condroitina
<ol><li>Sintetizar a nanopartículas de lipídios-polímero MTX e ICG-carregado (MNPs e INPs respectivamente) e plCSA-BP-conjugados de nanopartículas (plCSA-MNPs e plCSA-INPs) conforme descrito em detalham em outro lugar18.</li>
</ol>2. in vivo da fluorescência Imaging
<ol><li>
Preparação de ratos grávidas
	<ol>
<li>Coloque a fêmeas ratos CD-1 (8-12 semanas) com um macho fértil da mesma estirpe em uma gaiola (masculino: feminino = 1:2) na tarde e verifique o vaginal conecta o seguinte manhã. Se for observado um plug vaginal, defina o mouse como embrionário dia 0,5 (E0.5).</li>
		<li>Ciclo de ratos grávidas casa sozinhos em um quarto livre de patógeno animal com luz/10 h 14 h escuro e fornecem o acesso livre à comida e água até E14.5.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Injeção intravenosa de nanopartículas
	<ol>
<li>Antes do procedimento, esterilize as nanopartículas por filtração através de um filtro de seringa 0,22 μm. Pese o mouse grávido no E11.5 para determinar a quantidade e volume de injeção de nanopartículas. Nota: O volume de injeção de nanopartículas deve ser inferior a 1% (volume/peso) do peso do corpo do mouse grávido. Por exemplo, o volume de injeção de nanopartículas deve ser menos de 0,25 mL em um rato de 25 g.</li>
		<li>Para dilatar a veia da cauda, aquecer a cauda por 5-10 min com uma almofada de aquecimento.</li>
		<li>Antes da injeção, Aspire o INPs ou plCSA-INPs em uma seringa de insulina de 28 g.</li>
		<li>Transferi o mouse grávido para um dispositivo de exploração que restringe o mouse ao permitir o acesso para a veia da cauda. Limpe o rabo com um algodão embebido em álcool. Em seguida, insira a seringa na veia da cauda. Lentamente injete o INPs ou plCSA-INPs (equivalente a 5 mg/kg ICG) com pressão durante 5 a 10 s. Nota: Pare de injetar se uma bolha aparece na cauda, porque este resultado indica que a agulha não está na veia. As seringas não devem ser compartilhadas entre ratos para minimizar a transmissão da doença e a contaminação cruzada.</li>
		<li>Registrar o tempo de injeção. Enquanto isso, exerça uma ligeira pressão para o local da injeção até o sangramento parar, que normalmente demora 30-60 s.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Imagem latente na vivo 
	<ol>
<li>30 min após a injeção, os ratos grávidas usando a fluorescência na vivo , sistema de imagem da imagem.</li>
		<li>Anestesiar os ratos grávidas com uma taxa de fluxo de oxigênio de 1,0 L/min e isoflurano em 2-4% em uma câmara de associado da unidade de anestesia e verificar completa anestesia pelo lento e respiração regular. Em seguida, movê-los para a câmara de imagem. Coloque os ratos anestesiados grávidos dentro da câmara de imagem, mantendo os animais em posição supina.</li>
		<li>Coloque um cone de nariz sobre a boca e o nariz para permitir que a inalação de 1-2% de isoflurano com uma taxa de fluxo de oxigênio de 1,0 L/min para manter a anestesia.</li>
		<li>Selecione parâmetros 2D-fluorescência e fotográficos para os sinais de fluorescência ICG da imagem. Definir a exposição a auto e os comprimentos de onda de excitação/emissão de 710/820 nm.</li>
		<li>No final do processo de imagem, desligue o influxo de isoflurano para parar a anestesia e voltar os ratos grávidas cuidadosamente suas gaiolas.</li>
		<li>48 h após a injeção de nanopartículas, anestesiar os ratos grávidos com isofluorano e então sacrificar a represa por deslocamento cervical. Recolha os fetos e placentas usando pinça Graefe, Graefe fórceps do tecido e tesouras de dissecação.</li>
		<li>Coloque as placentas e fetos na câmara de imagem e imagem usando o método descrito na etapa 2.3.4.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. HFUS avaliação do desenvolvimento embrionário
<ol><li>
Modelos animais
	<ol>
<li>Obter e preparar os ratos grávidas, conforme descrito no passo 2.1.</li>
		<li>Use HFUS para ratos grávidas imagem no E 6.5 (protocolos 3.2 e 3.3.3). Primeiro, confirmar a gravidez através da visualização de embriões no dia E6.5 e em seguida, alocar aleatoriamente os ratos grávidas em três grupos: o grupo MNP, grupo plCSA-MNP e grupo fosfato-salino (PBS).</li>
		<li>Injete PBS, MNPs ou plCSA-MNPs (1 mg/kg MTX equivalente) as veias de cauda dos ratos grávidas todos os dias, começando em E6.5, conforme descrito no passo 2.2.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Preparação para a imagem latente
	<ol>
<li>24 h após a injeção de nanopartículas, os ratos grávidas usando o HFUS sistema de imagem da imagem.</li>
		<li>Anestesia os ratos grávidas conforme descrito na etapa 2.3.2. Ativar os controles de temperatura integrado da plataforma de geração de imagens e pré-aqueça a plataforma-37-42 ° C. Fixe os ratos grávidas em posição supina na plataforma utilizando a fita.</li>
		<li>Lugar do cone de nariz ligado à unidade de anestesia sobre o focinho. Aplica 2% de isoflurano com uma taxa de fluxo de oxigênio de 1,0 L/min para manter constante anestesia.</li>
		<li>Quimicamente, remova pelos do abdômen usando um creme depilatório. Acabar com o creme residual cuidadosamente com gaze embebida em água e depois revestir o abdômen com acústico acoplamento gel.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Procedimento de imagem
	<ol>
<li>Coloque o transdutor de 40 MHz no braço mecânico.</li>
		<li>Ajuste a posição do transdutor para obter imagens longitudinais do feto e placenta com a região de interesse localizado na zona focal.</li>
		<li>
Análise e imagem modo-B Nota: Ver filme 1.<ol>
<li>Clique no botão Modo-B e abaixe o transdutor sobre o abdômen até o feto e a placenta entram em vista. Pressione Scan/Freeze para iniciar/parar de imagem, pressione Cine armazenar para armazenar o laço da cinematografia e pressione Frame armazenar para armazenar imagens do quadro.</li>
			<li>Clique no botão de medida para analisar o comprimento do saco gestacional (GS), comprimento de garupa fetal coroa (CRL), diâmetro biparietal (DBP), circunferência abdominal (AC), diâmetro da placenta (PD) e espessura placentária (PT).</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Análise e imagens Doppler PW Nota: Ver filme 1.<ol>
<li>Usando o mesmo digitalizar projeção, clique no botão PW , coloque a caixa de volume de amostragem no centro da artéria umbilical e pressione Scan/Freeze para iniciar a geração de imagens. Clique em armazenar Cine para coletar imagens de artéria umbilical.</li>
			<li>Clique no botão de medida para calcular a velocidade de pico de artéria umbilical (UA).</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Análise e imagem latente de modo Doppler cor
		<ol>
<li>Usando a mesma projeção de digitalizar, clique no botão cor e ajustar a posição do transdutor para obter imagens do coração fetal. Pressione Scan/congelamento para iniciar a imagem latente e Cine armazenar para coletar imagens.</li>
			<li>Clique no botão de medida para calcular a frequência cardíaca fetal (HR).</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. HPLC análise
<ol><li>
Preparação do tecido
	<ol>
<li>Injetar os ratos grávidas com uma única dose de MNPs ou plCSA-MNPs (equivalente MTX de 1 mg/kg) no final da gravidez (ex., E14.5) conforme descrito na etapa 3.1.3.</li>
		<li>Após 24h, anestesia os ratos por uma injeção intraperitoneal de avertin em 240 μg/peso (g). Não certifique-se de nenhuma resposta para uma pitada de pé para verificar que os ratos são totalmente anestesiados.</li>
		<li>Pulverize a área do peito com 75% de etanol. Executar a perfusão cardíaca (cortar os átrios direito e perfundir através do ventrículo esquerdo) conforme descrito em detalhe19,20 com 50 mL de soro fisiológico 0,9% gelada por 10 min remover nanopartículas desacopladas.</li>
		<li>Eutanásia em barragem. Realizar uma cesariana para recolher os fetos e placentas usando pinça Graefe, dissecando a tesoura e pinça de tecido Graefe e armazenar os tecidos a-80 ° C, antes da análise.</li>
		<li>Preparar a solução de homogeneização (ácido perclórico a 10%) e manter-se no gelo. Coletar aproximadamente 200 mg de tecido e adicionar 500 μL de solução de homogeneização para cada amostra. Homogeneizar as amostras usando um homogeneizador a toda a velocidade para 30 s e repita este procedimento duas vezes.</li>
		<li>Centrifugar as amostras a 14.000 × g por 20 min a 4 ° C. Filtrar o sobrenadante (aproximadamente 300 μL) através de um filtro de seringa 0,45 μm e transferir o líquido resultante para um frasco HPLC. Coloque os frascos de amostra em uma bandeja de mostruário para injeção.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Elaboração de normas
	<ol>
<li>Prepare a seguinte solução para a fase móvel: 40mm potássio Fosfato dibásico (pH 4.5) e acetonitrila (88:12, v/v). Filtrar a solução através de um filtro de seringa de tamanho de poros de 0,45 μm e transferir o líquido resultante para uma garrafa de reservatório limpa HPLC. Nota: Ajuste o pH com ácido fosfórico a 0,1 M. Use vibração ultra-sônica por 15 min para desgaseificar a fase móvel cada vez antes de usar.</li>
		<li>Pese 10 mg de MTX em um tubo de centrífuga de 1,5 mL. Adicione 1 mL de hidróxido de sódio 1 M.</li>
		<li>Vórtice em alta velocidade até o MTX se dissolva completamente. Nota: Este é o estoque principal e pode ser armazenado a-20 º C durante vários meses.</li>
		<li>Para criar o estoque MTX secundário (500 μg/mL), dilua 50 μL do regulador primário em 950 μL da fase móvel. Nota: Guarde no gelo até o uso e preparar fresca diariamente. É importante usar a fase móvel para a elaboração de normas para evitar picos resultantes da mistura de diferentes soluções após a injeção da amostra.</li>
		<li>Fazer mais diluições para criar as normas (tabela 1). Armazenar as normas no gelo e preparar fresca diariamente. Execute as normas em série com as amostras experimentais.</li>
	</ol>
</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Número</td>
			<td>Concentração final (μg/mL)</td>
			<td>Padrão, μL 500 μg/mL</td>
			<td>Phase(μL) móvel</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>0,5</td>
			<td>1</td>
			<td>999</td>
		</tr>
<tr>
<td>2</td>
			<td>1</td>
			<td>2</td>
			<td>998</td>
		</tr>
<tr>
<td>3</td>
			<td>2.5</td>
			<td>5</td>
			<td>995</td>
		</tr>
<tr>
<td>4</td>
			<td>10</td>
			<td>20</td>
			<td>980</td>
		</tr>
<tr>
<td>5</td>
			<td>25</td>
			<td>50</td>
			<td>950</td>
		</tr>
<tr>
<td>6</td>
			<td>50</td>
			<td>100</td>
			<td>900</td>
		</tr>
<tr>
<td>7</td>
			<td>100</td>
			<td>200</td>
			<td>800</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabela 1. Preparação da curva de calibração para MTX. A concentração final da solução padrão de MTX é de 0,5-100 μg/mL.
<ol start="3"><li>
Instrumentação de HPLC e parâmetros de operação Nota: As amostras foram analisadas em um sistema HPLC equipado com uma bomba de solvente, um detector espectrofotométrico UV (313 nm) e uma coluna C18 (250 × 4. 6mm, tamanho de partícula 5 μm).<ol>
<li>Ligue o desgaseificador HPLC para retirar o ar do sistema. Ative o fluxo, desenroscada a coluna com a fase móvel por 30 min reduzir o ruído da linha de base.</li>
		<li>Regule a temperatura da coluna, a 25 ° C, injetar 20 volumes de amostra μL em uma taxa de fluxo de 1 mL/min e clique no Método execute para iniciar a análise.</li>
		<li>Quando as pistas estiverem completas, altere manualmente a fase móvel para acetonitrila grau HPLC. Executado por aproximadamente 15 min proteger o sistema. Nota: Execute esta etapa após o tempo de execução recomendado pode resultar em danos à coluna.</li>
		<li>Para análise quantitativa, calcule as áreas sob os picos MTX padrão de interesse usando o software de sistema HPLC.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Rodger, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Association+of+Factor+V+Leiden+and+Prothrombin+Gene+Mutation+and+Placenta-Mediated+Pregnancy+Complications%3A+A+Systematic+Review+and+Meta-analysis+of+Prospective+Cohort+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Medicine%22%5BJournal%5D)">The Association of Factor V Leiden and Prothrombin Gene Mutation and Placenta-Mediated Pregnancy Complications: A Systematic Review and Meta-analysis of Prospective Cohort Studies.</a> PLOS Medicine. 7 (6), e1000292(2010).</li>
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<li>Parvani, J. G., Gujrati, M. D., Mack, M. A., Schiemann, W. P., Lu, Z. -R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silencing+%CE%B23+integrin+by+targeted+ECO%2FsiRNA+nanoparticles+inhibits+EMT+and+metastasis+of+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Silencing β3 integrin by targeted ECO/siRNA nanoparticles inhibits EMT and metastasis of triple-negative breast cancer.</a> Cancer Research. 75 (11), 2316-2325 (2015).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+doxorubicin+by+CSA-binding+nanoparticles+for+choriocarcinoma+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment.</a> Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).</li>
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</ol>

X.F. e B.Z. são inventores no pedido de patente PCT/CN2017/108646 enviado por SIAT que abrange um método de entrega de drogas específicas de placenta e sua aplicação. Todos os outros autores declaram que eles têm não tem interesses concorrente.

Neste manuscrito, descrevem um sistema de três-método para determinar se plCSA BP-guiada por nanopartículas são uma ferramenta eficiente para o direcionamento a entrega de drogas para a placenta. O uso do na vivo de imagem para monitorar o sinal infravermelho de ICG fluorescente confirmou a especificidade de direcionamento da placenta de plCSA-BP usando HFUS e HPLC, demonstrámos que nanopartículas plCSA-BP-conjugados com eficiência podem entregar MTX apenas para o células da placenta, não para o feto.
<p cla...

Complicações da gravidez placenta-mediada, incluindo pré-eclâmpsia, perda de gravidez, descolamento prematuro da placenta e pequena idade gestacional (SGA), são comuns e levam a substancial morbidade fetal e materna e mortalidade1,2, 3e muito poucas drogas têm provado ser eficaz para tratar a gravidez distúrbios4,5. O desenvolvimento de estratégias para a entrega da droga placenta-alvo mais seletivo e segura durante a gravidez permanece desafiador em terapia com drogas modernas.
Nos últimos anos, vários relatos têm focado a alvo entrega de drogas aos tecidos uteroplacentária por nanopartículas de revestimento com peptídeos ou anticorpos como ferramentas de placenta-alvo. Estes incluem um anticorpo de6 do fator de crescimento epidérmico anti receptor (EGFR), tumor-homing peptídeos (CGKRK e iRGD)7, peptídeos de placenta-alvo8, peptídeos placentários vasculatura-alvo9 e anticorpos contra a receptor de ocitocina10.
Aqui, demonstramos que um peptídeo sintético placentária sulfato de condroitina A ligação (plCSA-BP) pode ser usado para a entrega de alvo de nanopartículas e suas cargas de drogas para a placenta11. As nanopartículas plCSA-BP-guiadas são complementares a uteroplacentária relatada visando métodos porque alvo o trofoblasto da placenta.
Como um método não-invasivo, na vivo a imagem tem sido usada para monitorar a expressão gênica de placenta específicas em ratos12e indocianina verde (ICG) tem sido amplamente utilizada para rastrear nanopartículas usando fluorescência de imagem sistemas13, 14,15. Assim, por via intravenosa injetamos nanopartículas plCSA-BP-conjugados, carregadas com o ICG (plCSA-INPs) para visualizar a distribuição de plCSA-INP em ratos grávidas com um gerador de imagens de fluorescência. Nós, em seguida, por via intravenosa injetado metotrexato (MTX)-carregado plCSA-NPs em ratos grávidos. Ultra-som de alta frequência (HFUS), outro não-invasiva, em tempo real de imagens ferramenta16,17 foi usado para monitorar o desenvolvimento fetal e placentário nos ratos. Finalmente, usamos a cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) para quantificar a distribuição de MTX na placenta e fetos.
Neste protocolo, descrevemos em detalhe o sistema de três-método usado para avaliar a eficiência da entrega da droga placenta-alvo por nanocarriers plCSA-BP-guiada.

<table><tbody><tr><td>Camundongos CD-1</td><td>Beijing Vital River</td><td>201</td><td>Fêmea (8-12 semanas)</td></tr><tr><td>Seringa de insulina</td><td>BD</td><td>328421</td><td>para injeção intravenosa</td></tr><tr><td>Etanol absoluto</td><td>Sinopharm 10009218 químico</td><td></td><td>para síntese de nanopartículas</td></tr><tr><td>Lecitina de soja</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>441601</td><td>para síntese de nanopartículas</td></tr><tr><td>DSPE-PEG-COOH</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>880125</td><td>para síntese de nanopartículas</td></tr><tr><td>PLGA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>719897</td><td>para síntese de nanopartículas</td></tr><tr><td>Processador ultrassônico</td><td>Sonics</td><td>VCX130</td><td>para síntese de nanopartículas</td></tr><tr><td>Metotrexato (MTX)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900324</td><td>para síntese de nanopartículas</td></tr><tr><td>Verde de indocianina (ICG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1340009</td><td>para in vivo imagem de imagem</td></tr><tr><td>com solução salina tamponada com fosfato (PBS)</td><td>Hyclone</td><td>SH30028.01</td><td></td></tr><tr><td>Instrumento de espectro IVIS</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>para imagens in vivo</td></tr><tr><td>Gel de transmissão de ultrassom</td><td>Guanggong</td><td>ZC4252418</td><td>para imagens de ultrassom</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Lunan Pharmaceutical</td><td>I0040</td><td>para manter a anestesia</td></tr><tr><td>Creme depilatório</td><td>Nair</td><td>TMG001</td><td>para remoção</td></tr> de <tr><td>pele transdutor de 40 MHz</td><td>VisualSonics</td><td>MS550S</td><td>para imagem de ultrassom</td></tr><tr><td>Sistema de imagem de ultrassom de alta frequência</td><td>VisualSonics</td><td>Vevo2100</td><td>para imagem de ultrassom</td></tr><tr><td>Avertin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td><td>para anestesia</td></tr><tr><td>Bomba de seringa</td><td>Mindray</td><td>SK-500III</td><td>para perfusão cardíaca</td></tr><tr><td>Solução salina a 0,9%</td><td>Meilunbio</td><td>MA0083</td><td>para perfusão cardíaca</td></tr><tr><td>1,5 mL Tubos de polipropileno</td><td>AXYGEN</td><td>MCT-150-C-80</td><td></td></tr> <tr><td>&deg; C freezer</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>88600V</td><td></td></tr><tr><td>Centriguge</td><td>Cence</td><td>H1650R</td><td></td></tr><tr><td>Ácido perclórico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>311421</td><td>para precipitação de proteína</td></tr><tr><td>Homogeneizador</td><td>SCIENTZ</td><td>SCIENTZ-48</td><td>para homogeneização de tecido</td></tr><tr><td>Filtro de seringa (0,45 &mu; m)</td> <td>Millipore</td><td>SLHV033RS01</td><td></td></tr><tr><td>hidróxido de sódio</td><td>Sinopharm</td><td>10019763</td><td>química para resolver</td></tr><tr><td>frascos de HPLC</td> MTX <td>Águas</td><td>670650620</td><td>para HPLC</td></tr><tr><td>fosfato de potássio dibásico</td><td>Sinopharm</td><td>20032117</td><td>químico para HPLC</td></tr><tr><td>Acetonitrila</td><td>JK 932537</td><td></td><td>química para HPLC</td></tr><tr><td>C18 coluna</td><td>Águas</td><td>186003966</td><td>para HPLC</td></tr><tr><td>Sistema de HPLC</td><td>Shimadzu</td><td></td><td>para HPLC</td></tr></tbody></table>

avaliação global da eficácia e segurança de entrega de droga placenta-alvo usando três métodos complementares

Comprehensive Evaluation of the Effectiveness and Safety of Placenta-Targeted Drug Delivery Using Three Complementary Methods

Não há tratamentos eficazes existem, atualmente, por complicações de gravidez associada a placenta, e desenvolver estratégias para a entrega de alvo de drogas para a placenta, minimizando efeitos colaterais fetais e maternos continua a ser um desafio. Transportadoras de nanopartículas alvo proporcionam novas oportunidades para tratar anormalidades da placenta. Recentemente demonstramos que um peptídeo sintético placentária sulfato de condroitina A ligação (plCSA-BP) poderia ser usado para guiar as nanopartículas para entregar drogas para a placenta. Neste protocolo, descrevemos detalhadamente um sistema para avaliar a eficiência da entrega da droga para a placenta pela plCSA-BP que emprega três métodos distintos, usados em combinação: na vivo de imagem, ultra-som de alta frequência (HFUS) e alto desempenho cromatografia líquida (HPLC). Usando na vivo da imagem latente, plCSA BP-guiada por nanopartículas foram visualizadas nas placentas de animais vivos, enquanto HFUS e HPLC demonstraram que nanopartículas plCSA-BP-conjugados com eficiência e especificamente entregues metotrexato da placenta. Assim, uma combinação desses métodos pode ser usada como uma ferramenta eficaz para a entrega de alvo de drogas para a placenta e desenvolvimento de novas estratégias de tratamento para várias complicações na gravidez.

Neste manuscrito, carregado com MTX (plCSA-MNPs) ou ICG (plCSA-INPs) plCSA-BP-conjugados de nanopartículas foram injetadas por via intravenosa ratos grávidas. Imagem latente na vivo revelou sinais ICG fortes na região do útero 30 min após a injeção de plCSA-INP. O INPs foram localizado principalmente na região do fígado e baço (figura 1A). A 48 h após a injeção de plCSA-INP, ratos grávidas foram sacrificados, revelando sinais ICG somente na placenta,...

Descrevemos um sistema que utiliza três métodos para avaliar a segurança e a eficácia da entrega da droga placenta-alvo: no vivo de imagem para monitorar o acúmulo de nanopartículas, ultra-som de alta frequência para monitorar o desenvolvimento placentário e fetal e HPLC para quantificar a entrega da droga ao tecido.

Avaliação global da eficácia e segurança de entrega de droga Placenta-alvo usando três métodos complementares

No effective treatments currently exist for placenta-associated pregnancy complications, and developing strategies for the targeted delivery of drugs to ...

Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da nanomedicina sobre a eficácia e a segurança do medicamento carregado em nanopartículas entregues à mãe e ao feto. A principal vantagem dessa técnica é que ela facilita uma medição bioquímica precisa da quantidade de medicamento entregue à placenta. As implicações dessa técnica se estendem à terapia de complicações da gravidez mediadas pela placenta, porque é importante garantir o direcionamento preciso da administração do medicamento à placenta.A demonstração visual desse método é crítica, pois a avaliação por ultrassom de alta frequência do desenvolvimento embrionário requer paciência e experiência para dominar. Para injeção intravenosa de nanopartículas, transfira um camundongo prenhe do Dia Embrionário 14.5 com veias da cauda dilatadas pelo calor para um limitador e limpe a cauda com um cotonete embebido em álcool. Em seguida, insira a ponta da agulha de uma seringa de insulina de calibre 28 em uma veia da cauda dilatada e pressione lentamente o êmbolo por cinco a 10 segundos com pressão uniforme para entregar as nanopartículas na veia da cauda.30 minutos após a injeção, coloque a rata grávida anestesiada na câmara

comprehensive-evaluation-effectiveness-safety-placenta-targeted-drug

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Twin-to-twin síndrome de transfusão e seqüência policitemia twin anemia são dois problemas potencialmente devastadores na medicina perinatal. Ambos os distúrbios ocorrem apenas em gêmeos monocoriônicos e resultam de fluxo sanguíneo através da placenta desequilibrada anastomoses vascular. Nós fornecemos um protocolo simples para avaliar com precisão a presença de anastomoses vascular usando injeção de tinta colorida dos vasos da placenta após o nascimento.

Avaliação precisas e simples de anastomoses vasculares em Placenta monocoriônicas usando Dye Colorido

Determinação da taxa de transporte de xenobióticos e nanomateriais através da placenta usando o<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modelo de perfusão da placenta humana

Apresentamos um método detalhado para estudar a fisiologia placentária humana in vivo a termo. O método combina a amostragem de sangue dos vasos entrantes e de saída nos lados materno e fetal da placenta com medidas de ultra-som do fluxo sangüíneo do volume e amostragem do tecido placentário.

A abordagem de amostragem de 4 embarcações para estudos integrativos de fisiologia placentária humana<em&gt; In Vivo</em

Este estudo apresenta um protocolo para o tecido reversível compensação, imunocoloração, renderização 3D e análise de redes vasculares em amostras de vilosidades da placenta humana na ordem de 1-2 mm3.

Renderização tridimensional e análise de Immunolabeled, esclareceu humana da placenta vilosa redes vasculares

Aqui, apresentamos um protocolo para a síntese de sulfato de condroitina placentária A peptídeo de vinculação (plCSA-BP)-conjugados lipid-polímero nanopartículas através de etapa única sonication e bioconjugate técnicas. Estas partículas constituem uma nova ferramenta para a entrega de alvo da terapêutica de tumores mais humanos e trophoblasts da placenta para tratar cancros e anormalidades da placenta.

Síntese e caracterização de placentária Condroitina sulfato de uma (plCSA) - Targeting Lipid - nanopartículas de polímero

Aqui, nós fornecemos uma metodologia detalhada para isolar e avaliar a função citotóxica de pilhas naturais do assassino das placentas por um ensaio colorimétrico da placa. O modelo reduzido de rato de pressão de perfusão uterina de isquemia placentária foi escolhido para demonstrar o isolamento e a avaliação mediada por anticorpos da função citotóxica de células assassinas naturais.

Um ensaio de citotoxicidade à base de placas para a avaliação da função citolítica de células assassinas naturais do rato

Aqui é apresentado um protocolo de perfusão vascular materno-fetal ex vivo para possibilitar a administração de um artigo de teste na vasculatura materna e avaliar a transferência placentária de partículas xenobióticas ou agentes farmacológicos, além de alterações na Fisiologia placentária.

Perfusão ex vivo da placenta de roedores

Aqui descrevemos um método tempo-específico para manipular efetivamente vias críticas de desenvolvimento na placenta de camundongos in vivo. Isto é realizado através da injeção e eletroporação de plasmídeos CRISPR nas placentas de fêmeas grávidas no dia embrionário 12.5.

Mouse In Vivo Placental Alvo CRISPR Manipulação

Um protocolo é apresentado para avaliar se pequenos EVs (sEVs) isolados de explantes placentários cultivados sob condições hipóxicas (modelando um aspecto da pré-eclâmpsia) rompem a barreira hematoencefálica em camundongos fêmeas adultas não grávidas.

Ruptura da Barreira Hematoencefálica de Camundongos por Pequenas Vesículas Extracelulares de Placentas Humanas Hipóxicas

Biocompatíveis pH responsivos nanosensors sol-gel pode ser incorporado em poli (ácido láctico-co-glicólico) (PLGA) andaimes electrospun. Os andaimes de auto-relato produzidos podem ser utilizados para a monitorização in situ de condições micro-ambientais, enquanto a cultura de células sobre o andaime. Isto é benéfico porque a construção celular 3D pode ser monitorado em tempo real, sem perturbar o experimento.

Andaimes auto-relato para cultura de células 3-Dimensional

Aprenda a avaliar a segurança e eficácia da entrega de drogas direcionada à placenta usando nanopartículas, imagem in vivo e ultrassom de alta frequência em camundongos grávidos.

Avaliação global da eficácia e segurança de entrega de droga Placenta-alvo usando três métodos complementares

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