Medição da concentração de íons na camada limite Unstirred com pipeta aberto Patch-Clamp: implicações no controle de canais iônicos por fluido fluem

Este subal pode ajudar a responder a perguntas-chave na esfera eletrofisi fisiológica, como o fluxo de fluidos apenas nas regulamentações dos canais de íons. A principal vantagem desta técnica é que ela pode estimar a concentração real de íons na camada de limite não írparada da superfície da membrana para interpretação de dados relacionada à regulação do fluxo de fluidos dos canais de íons. Para iniciar este procedimento, dobre o tubo capilar de vidro disparado para formar uma forma de U.

O diâmetro interno do capilar deve ser grande o suficiente para reduzir a resistência da série ao registrar grandes correntes de íons. Em seguida, dissolva três gramas de agarose em 100 mililitros de cloreto de potássio de três molares, e coloque-o em uma placa quente entre 90 e 100 graus Celsius. Em seguida, carregue a ponte com o cloreto de potássio, imergindo a ponte de vidro na solução.

Mantenha-o durante a noite em temperatura ambiente para que a agarose afinada e endureça. No dia seguinte, desenterre cuidadosamente a ponte de vidro carregada de cloreto de potássio agarose do sal agarose endurecido. Guarde a ponte em uma garrafa de pescoço largo de cloreto de potássio de três molares na geladeira.

Neste procedimento, coloque um recipiente carregado com solução de banho, acima da câmara de remendo. Em seguida, encha a câmara de remendo com a solução de banho aspirando o tubo. Para parar o fluxo de fluido, corte o tubo ao lado do recipiente, para bloquear o fluxo de fluido.

Em seguida, corte o tubo no lado da sucção para parar a sucção ao mesmo tempo. Esta é a condição de controle estacionário. Para aplicar a força da cisalhamento do fluxo de fluidos, abra os dois tubos no recipiente e os lados da sucção ao mesmo tempo.

Antes ou depois de aplicar a força de cisalhamento do fluxo de fluidos na célula, calcule a taxa de fluxo em mililitro por minuto, medindo a diminuição do volume de fluidos ao longo de um determinado tempo. Para medir as mudanças no potencial de junção líquido-metal, prepare um soro fisiológico normal para a câmara de banho e compare-os na ausência e presença de ponte de cloreto de potássio de ágar. Em seguida, coloque uma pipeta de remendo contendo solução de cloreto de potássio de três molares na câmara, para minimizar o possível deslocamento de junção entre a pipeta e as soluções de banho.

Em seguida, ajuste o amplificador do grampo de tensão no modo de fixação atual. Depois de anular o potencial inicial de deslocamento, meça as mudanças na tensão induzidas pela variação das taxas de fluxo. Para verificar se as alterações na tensão são potenciais de junção líquido-metal, reexamine o efeito do fluxo de fluidos sobre o potencial de junção, utilizando a ponte de sal agarose entre a solução de banho e o eletrodo de referência.

Com os resultados das mudanças no potencial de junção líquido-metal, desenhe as relações potenciais de fluxo da função e estime o valor saturado da possível mudança de junção pela taxa de fluxo supra-fluido. Em seguida, mude a concentração de cloreto no fluido de banho, e desenhe a relação potencial de concentração de cloreto de junção. Observe que a taxa de fluido deve ser constante e suficientemente alta para evitar a diminuição da concentração de cloreto ao do eletrodo de referência de cloreto prata-prata adjacente.

A partir das duas curvas de relacionamento, estime as mudanças na concentração de cloreto a partir da mudança potencial de junção medida. As correntes VDCC-L foram registradas nos miócitos arterials mesentéricas enzimáticas dispersas, com gravação perfurada por grampo de remendo de nystatina. Com a ponte de cloreto de potássio agarose, o potencial de junção entre o eletrodo de referência e as soluções de banho poderia ser minimizado, e o fluxo de fluidos aumentou a tensão da corrente VDCC-L de forma independente.

No entanto, quando o eletrodo de referência de cloreto de prata-prata estava diretamente ligado ao fluido de banho, sem uma ponte de cloreto de potássio agarose, a relação IV na presença de fluxo de fluidos mudou para a direita, em comparação com a das correntes VDCC-L sob uma condição estática. O aumento induzido pelo fluxo de líquido das correntes kerr 2.1, que foram registradas em células de leucemia basofílica de ratos com a ponte agarose, pode ser explicado pelo efeito de camada não-lada. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores da sobre eletrofisiologia.

Então é para a regulação do fluxo de fluidos nas correntes do canal de íons. Em termos de fenômenos eletroquímicos, na camada de limite não írpara na superfície da membrana celular.