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DOI: 10.3791/58244-v
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Aqui, apresentamos os protocolos para identificar imunomoduladores 1) vírus-codificado que promovem a replicação de arbovírus e fatores do hospedeiro 2) eucariota que restringem a replicação de arbovírus. Esses métodos baseados em fluorescência e luminescência permitem aos investigadores para rapidamente obter leituras quantitativas de replicação de arbovírus em simplistas ensaios com baixa relação sinal-ruído.
Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da imunologia viral, tais como, quais fatores do hospedeiro restringem a replicação do arbovírus e, por sua vez, quais proteínas de evasão imunológica codificadas por vírus superam esses mecanismos de restrição do hospedeiro. A principal vantagem dessa técnica é que ela permite usar ensaios simplistas de luminescência e espaço fluorescente para definir as condições celulares que permitem que os arbovírus se repliquem em uma infecção abortiva em células de insetos lepidópteros. Como há uma replicação mínima de arbovírus em células de lepidópteros, torna-se relativamente simples detectar condições que permitam a replicação do arbovírus.
Para começar, mantenha as células LD652 em placas tratadas com cultura de tecidos de 10 centímetros e passe as células quando atingirem 80% de confluência. Pipetar repetidamente o meio sobre a monocamada celular para desalojar as células e, em seguida, diluir a amostra em meio de crescimento até uma densidade aproximada de 100 mil células por mililitro. Depois disso, transfira um mililitro da cultura diluída para cada poço de uma placa de 24 poços.
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