O corte e o método flutuante para tecido parafina para seccionamento

Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo morfológico, como o seccionamento em parafina. A principal vantagem desta técnica é que culmina o corte e o procedimento de dobra e evita o processo de transferência exigido pelo método convencional. Para começar, reúna todas as peças pré-fabricadas em uma hotte.

Use clorofórmio para combinar as sete placas de acrílico, como mostrado aqui. O produto final será um tanque equipado com um canal de seção e um banho-maria. Instale o elemento de aquecimento elétrico tubular através do orifício na placa de acrílico número dois.

Usando uma furadeira elétrica, faça um pequeno furo na placa de acrílico número sete e instale um termostato digital no tanque, certificando-se de que esteja pelo menos um centímetro abaixo do nível da superfície da água pretendida, que é indicado pelo ponto preto no tanque. Ajuste a tensão para que fique abaixo de 24 volts antes de ligar o equipamento. Remova a bandeja de resíduos do micrótomo.

Em seguida, use selante de silicone neutro para ligar o canal das seções ao suporte da lâmina do micrótomo, certificando-se de não colocar nenhum selante acima do topo da lâmina. Deixe a configuração secar durante a noite para dar tempo ao clorofórmio e ao selante de silicone neutro para solidificar. No dia seguinte, instale a lâmina no porta-lâmina.

Adicione água ao banho-maria, certificando-se de que a superfície da água toque apenas a parte superior da lâmina. Depois de realizar o corte de parafina convencional, ligue o equipamento para iniciar o corte de parafina aprimorado. Use o interruptor de detecção de temperatura para abrir o aquecedor.

Defina a temperatura alvo entre 38 graus Celsius e 40 graus Celsius por uma hora para aquecer a água. Use uma faca para modificar o bloco de parafina adquirido pela incorporação de parafina. Em seguida, coloque o bloco no grampo do do micrótomo e trave-o.

Corte as seções mais grossas para se aproximar rapidamente da amostra. Ajuste para uma espessura de seção adequada para as amostras. Girar o volante carregará automaticamente as seções em seções, canal e banho.

Em seguida, corte a amostra em um curso de corte lento e uniforme. Guie as seções para dentro da câmara de banho para que flutuem em linha. Se a seção da cabeça aderir à parede da câmara, use uma guia de escova para mantê-la flutuando.

Depois que as seções se desdobrarem totalmente no banho-maria, use uma pinça para separar várias e, em seguida, pegue-as em uma lâmina de microscópio. Transfira as lâminas para um forno ajustado a 42 graus Celsius para secar durante a noite. As lâminas podem então ser armazenadas em temperatura ambiente indefinidamente até que estejam prontas para análise.

Quando estiver pronto para analisar, use a coloração de hematoxilina-eosina para avaliar os cortes usando o método aprimorado. Neste estudo, um método aprimorado é usado para preparar seções de parafina para tecido hipocampal de camundongo adulto, rins de camundongos adultos, cérebros embrionários de camundongos e olhos de peixe-zebra. Como mostrado aqui, o novo método evita a perda de seção e aumenta a proporção de cortes intactos em cada tipo de tecido examinado.

Ao realizar o corte de séries inteiras, este método acelera a velocidade de corte de parafina em todas as amostras testadas. Em outras palavras, este método fornece seccionamento de parafina de maior qualidade em menos tempo do que o método convencional. Seções em série da retina óptica do peixe-zebra são então observadas pela coloração de hematoxilina-eosina.

As seções colhidas do método aprimorado apresentam melhor integridade do que as colhidas do método convencional de seccionamento de parafina. Embora não haja diferenças significativas na qualidade da maioria das seções colhidas ao comparar esses dois métodos, algumas seções colhidas do método convencional são vistas como tendo qualidade relativamente baixa. Não se esqueça de que trabalhar com clorofórmio pode ser extremamente perigoso, e precauções como capela de exaustão devem sempre ser tomadas durante a execução deste procedimento.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar, adicione água com cuidado e evite encher demais.