Isolamento dos hepatócitos primários de rato para análise de síntese de proteína nascente pelo método de rotulagem não-radioativo L-azidohomoalanine

Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave em vários campos de pesquisa de doenças metabólicas sobre alterações moleculares de energia hepática e biossíntese de proteínas na obesidade, fígado gorduroso não alcoólico e diabetes tipo dois. As principais vantagens dessa técnica são que facilita o isolamento de hepatócitos funcionais do camundongo primário e a detecção de proteínas nascentes hepáticas através de um substrato de rotulagem nãoradioativa. A demonstração visual deste método é fundamental, pois o passo de perfusão é difícil de aprender por causa dos pequenos e finos vasos sanguíneos do rato.

Para perfusão hepática, insira cuidadosamente um cateter de calibre 24 na Veia Cava inferior ou IVC apenas na bifurcação com a veia renal direita. Remova a agulha do cateter mantendo a posição da cânula dentro do IVC e conecte uma cânula de 24 bitola com tubo de perfusão usando o conector. Comece a perfundar o fígado com HBSS quente menos a uma taxa de fluxo permanente de quatro mililitros cortando rapidamente a veia esplênica para drenar o sangue interno.