Name: Um protocolo de preferência condicionada lugar para medir a incubação do desejo em ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 11 s
Description: Aprenda um protocolo de preferência condicionada lugar com morfina para medir a incubação do desejo em ratos. Este método permite estudar os mecanismos subjacentes aos desejos por drogas e à dependência.

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Este trabalho foi financiado pela nacional ciências naturais Fundação de China (NSFC) 31741058 (Y.Z.), subvenções governamentais Shenzhen (JCYJ20170818162613877 e JCYJ20170818163217196) e China Postdoctoral Science Foundation Grant 2017 M 622826 (K.Z.).

Os procedimentos experimentais foram realizados em conformidade com as orientações para a conta nacional e uso de animais e os experimentos foram aprovados pelo Comitê de uso em Shenzhen institutos de tecnologia avançada, chinês e institucional Cuidado Animal Academia de Ciências.
1. animal habituação
<ol><li>Obter ratos adultos machos de animais de laboratório e mantê-las sob um ciclo claro/escuro de 12 h (luz acesa de 07:00 a 19:00), com livre acesso à comida e água.</li>
	<li>Lidar com os animais ao jogar com eles ou afagando-os duas vezes por dia durante duas semanas antes dos experimentos.</li>
	<li>Atribua aleatoriamente os animais em grupos de solução salina ou morfina.</li>
</ol>2. drogas preparação
<ol><li>Cloridrato de morfina como 10 mg/mL de preparar e injetar ratos intraperitonealmente (i.p.) em um volume de 1 mL/kg.</li>
	<li>Como um controle, Injecte ratos com solução salina em um volume de 1 mL/kg.</li>
</ol>3. CPP aparelhos
<ol><li>Construir um aparelho CPP de três-câmara com sugestões diferentes tátil (chão) e testar a preferência inicial dos ratos duas câmaras de lado. O aparelho consiste de duas câmaras de lado preto grande (30 cm × 25 cm × 30 cm, L × W × H) e um média branca câmara (11 cm × 25 cm × 30 cm, L × W × H) com piso de PVC branco liso. As câmaras do dois lado têm piso diferentes texturas como pistas somatossensorial: um com um piso de plexiglass de grade, o outro com um áspero piso de PVC.</li>
	<li>Varia a combinação de pistas táteis para certificar-se de que o aparelho é imparcial, já que um aparelho tendencioso é suscetível a produzindo resultados falso-positivos4. Nota: Uma questão metodológica importante no design do aparelho CPP é se o aparelho é "tendenciosa" ou "imparcial"4. Se um grupo de ratos destreinados mostra sem preferência inicial para a câmara de um lado sobre o outro, o aparelho é considerado "imparcial". Caso contrário, considerá-la como "tendenciosa"13.</li>
</ol>4. procedimento CPP
<ol><li>Estabelecer o paradigma CPP induzida pela morfina principalmente de acordo com anteriores estudos21,22 com modificação de condicionamento pontos de tempo, número de sessões de condicionamento, condicionamento período experimental e teste pontos de tempo20 . Uma breve descrição é dada abaixo, dos quais a programação experimental é descrita na Figura 1.</li>
	<li>Fase de pré-condicionamento<ol>
<li>Durante esta fase (dia 1 a 3), remova portas de guilhotina para permitir o livre acesso a todo o aparelho e colocar o animal na câmara de média.</li>
		<li>Registre a atividade dos animais por 15 min.</li>
		<li>Calcular o tempo gasto nas câmaras bilaterais no dia 3, como a linha de base e se referem a isto como T0.</li>
		<li>Remover ratos que entram com menos do que - quatro vezes a qualquer das câmaras do lado do experimento23 como esses ratos são propensos a ter problemas no bem-estar geral (por exemplo, peles sujas e tendo tumores). Verificar o estado de saúde dos animais durante o período experimental toda.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fase de condicionamento Nota: A fase de condicionamento inclui 6 dias (dia 4 a 9).<ol>
<li>Morfina-condicionado súditos, injete ratos i.p. com morfina (10 mg/kg) ou salina (1 mL/kg) alternadamente pela manhã (09:00) e noite (19:00) as sessões (10 h separado).</li>
		<li>Confine ratos imediatamente após cada injeção a sua droga-emparelhada (não-preferenciais) ou solução salina-emparelhado câmara (preferencial) para 45 min (figura 1B).</li>
		<li>Manter o sistema de gravação de vídeo. Nota: De acordo com nossa experiência, cerca 5% dos ratos têm a depressão respiratória após a primeira injeção de morfina (10 mg/kg). Nesse caso, para aumentar a taxa de sobrevivência de ratos de depressão respiratórias, pegar o rato fora da câmara de condicionamento, puxe sua língua para fora e colocá-lo em um papel branco de tecido em sua jaula para casa.</li>
		<li>Para controles de solução salina-condicionados, dar ratos injeções de solução Salinas (1 mL/kg) antes da exposição a uma câmara lateral do aparato CPP durante a sessão da manhã e para o outro lado durante a sessão da noite para 45 min/sessão em consonância com o grupo morfina (Figura 1 C).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fase de testes<ol>
<li>Durante esta fase, remova portas de guilhotina para permitir o livre acesso a todo o aparelho e colocar o animal na câmara de médio para deixá-los a explorar livremente o aparelho inteiro por 15 min.</li>
		<li>Grave sua atividade durante este 15 min.</li>
		<li>Realização de três testes pós-condicionado, ou seja, teste 1 (T1), teste 2 (T2) e teste 3 (T3), 2 dias, 10 dias e 18 dias após a última sessão de condicionamento em um estado livre de morfina, respectivamente (figura 1A).</li>
		<li>Varia os pontos de tempo de teste para diferentes objetivos experimentais. Nota: Para minimizar o número de ratos necessária, um projeto dentro-sujeito é empregado. No entanto, para excluir o efeito de extinção, um entre o assunto design é necessário.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58384/58384fig1.jpg"> Figura 1: procedimentos experimentais. (A) procedimentos experimentais de todo o processo do CPP. (B) experimental cronograma da fase de condicionamento do grupo morfina. (C) Experimental cronograma da fase de condicionamento do grupo salina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58384/58384fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
5. análise de dados
<ol><li>Calcular a pontuação de CPP no grupo de morphine(saline): Pontuação do CPP = o tempo gasto na câmara de (não-preferenciais) drogas-emparelhado / o tempo total gasto em ambas as câmaras do condicionamento.</li>
	<li>Realizar análise de dados de contagens CPP e entradas para os aposentos de lado com métodos estatísticos adequados usando SPSS.</li>
	<li>Apresente todos os dados comportamentais como média ± SEM, onde SEM é o erro padrão da média. Considerar valores de p &lt; 0,05 como estatisticamente significativo e indicar por asteriscos (*) e octothorpesin (#) nas figuras.</li>
</ol>

<ol><li>Leshner, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addiction+is+a+brain+disease%2C+and+it+matters%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Addiction is a brain disease, and it matters.</a> Science. 278 (5335), 45-47 (1997).</li>
<li>Koob, G. F., Volkow, N. D. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/articles/npp2009110">Neurocircuitry of Addiction.</a> Neuropsychopharmacology. 35 (1), 217-238 (2010).</li>
<li>Zhu, Y., Wienecke, C. F., Nachtrab, G., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+thalamic+input+to+the+nucleus+accumbens+mediates+opiate+dependence%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A thalamic input to the nucleus accumbens mediates opiate dependence.</a> Nature. 530 (7589), 219-222 (2016).</li>
<li>Tzschentke, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+reward+with+the+conditioned+place+preference+paradigm%3A+a+comprehensive+review+of+drug+effects%2C+recent+progress+and+new+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Measuring reward with the conditioned place preference paradigm: a comprehensive review of drug effects, recent progress and new issues.</a> Progress in Neurobiology. 56 (6), 613-672 (1998).</li>
<li>Tzschentke, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+reward+with+the+conditioned+place+preference+%28CPP%29+paradigm%3A+update+of+the+last+decade%5BTitle%5D)+AND+%22Addiction+Biology%22%5BJournal%5D)">Measuring reward with the conditioned place preference (CPP) paradigm: update of the last decade.</a> Addiction Biology. 12 (3-4), 227-462 (2007).</li>
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<li>Bardo, M. T., Miller, J. S., Neisewander, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+place+preference+with+morphine%3A+the+effect+of+extinction+training+on+the+reinforcing+CR%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Biochemistry+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Conditioned place preference with morphine: the effect of extinction training on the reinforcing CR.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 21 (4), 545-549 (1984).</li>
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<li>Lin, X., Wang, Q., Cheng, Y., Ji, J., Yu, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+of+protein+expression+profiles+in+the+amygdala+during+the+process+of+morphine-induced+conditioned+place+preference+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Changes of protein expression profiles in the amygdala during the process of morphine-induced conditioned place preference in rats.</a> Behavioural Brain Research. 221 (1), 197-206 (2011).</li>
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</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Aqui, um método usando um paradigma CPP de morfina é descrito para estabelecer memória de recompensa a longo prazo em ratos com sugestões somatossensorial como contexto condicionado. Para construir uma memória recompensa a longo prazo, um protocolo anterior21 com um aparelho equilibrado do CPP é modificado e as sessões de solução salina e morfina são conjunto de pelo menos 10 h separados. Além disso, mais sessões de condicionamento são adicionadas durante a fase de condicionamento para melhorar a aprendizagem associativa. Aparte o golo de CPP, medem-se as entradas de duas câmaras de lado e o padrão de aumento entradas para os aposentos do lado é semelhante com a das aumentada respostas ativas no paradigma da auto-administração.
Diversos fatores influenciam o estabelecimento do paradigma CPP mencionado acima. Um fator chave é o design do aparelho: ratos em geral devem ter preferência semelhante para ambas as câmaras do lado para garantir que o aparelho está equilibrado. Um aparato desequilibrado pode mascarar a aquisição do CPP, devido à preferência de alta inicial de um lado câmara13. Portanto, preferência extrema para uma câmara lateral (mais de 90% do tempo total em qualquer das câmaras do dois lado) deve ser evitada quando escolher a textura do chão ou outras pistas contextuais. Para diferentes fins experimentais, experimentadores podem equilibrar o aparato CPP, modificando o estímulo contextual. Para aparelho equilibrado, duas formas de delineamento experimental são comumente usados4. Uma forma tendenciosa é drogas de par com a câmara não-preferenciais com todas as disciplinas; uma maneira imparcial é emparelhar metade dos animais com drogas na câmara não-preferenciais, a outra metade com a câmara de preferencial. Os dois lados podem estabelecer CPP13 mas estudos17,25 , com o último design sempre excluir muitos assuntos devido a sua forte preferência para a câmara de um lado. Como existe uma vulnerabilidade individual para28 27,26,do vício em drogas, um projeto tendencioso foi escolhido neste estudo para evitar a exclusão de indivíduos saudáveis. Uma limitação de design tendencioso é o efeito de preferência inconsistente para câmaras de lado. Como mostrado na Figura 2, ratos no grupo salino tem consistente baixos escores CPP para a câmara inicial de não-preferenciais. Assim, a possibilidade que inconsistente preferência aos aposentos do lado poderia afetar as pontuações CPP no grupo morfina é excluída definindo os controles salinos. Para evitar o efeito de teto da câmara preferencial, usamos a câmara inicial não-preferenciais como câmara emparelhados de morfina. Para evitar o efeito de novidade e estresse sobre a preferência de linha de base para os aposentos de lado, são realizadas três sessões de pré-condicionamento, e a terceira sessão é usada como linha de base. O quarto fator é o intervalo entre sessões Salinas e morfina. No nossa paradigma, nós escolhemos a intervalos de pelo menos 10 horas para evitar o efeito de abstinência no período condicionado salina. A dosagem de morfina é também um factor importante. Extremamente baixas doses de morfina, tais como 0,01 mg/kg6, não induzir a preferência de lugar. Uma dose de 10 mg/kg induzida maior pontuação CPP17 em ratos e é comumente usada no rato morfina CPP estudos17,21,23. No entanto, morfina 10 mg/kg (i.p.) pode induzir depressão respiratória em cerca de 5% dos ratos. Doses mais baixas de morfina, tais como 5 mg/kg, podem ser usados em estudos futuros. Para outras espécies, como árvore musaranho, tolerância às drogas deve ser considerada ao criar o paradigma do CPP. Desde que a árvore musaranho desenvolve rápida tolerância à morfina, aumento de doses de morfina devem ser usados durante o condicionamento fase29,30.
Com o protocolo modificado, uma memória de recompensa a longo prazo é estabelecida pelo menos 18 dias após 6 dias de condicionamento11 (Figura 2). Estudos futuros devem medir se CPP poderia ser mantida por mais tempo. Repetidas de recaída é a maior barreira no tratamento da toxicodependência. Estresse, Dicas ambientais e drogas podem induzir a recaída. Após a extinção da memória CPP, este modelo pode ser usado para modelar a recaída induzida por estresse ou drogas.
As entradas para as câmaras de droga-emparelhado no grupo morfina aumentaram na abstinência período11 (Figura 3), que é semelhante com as mais ativas respostas no paradigma da auto-administração. Entradas para a câmara de solução salina-emparelhado também aumentaram com o paradigma CPP em ambos os ratos e musaranhos árvore11, que é diferente de respostas inativas do paradigma da auto-administração. Esta diferença talvez devido aos diferentes princípios básicos dos dois paradigmas: um é o condicionamento clássico, o outro é o condicionamento operante. Além disso, árvore shrews com comida que cpp experiências não mostrou tal padrão de aumento de entradas de30. Portanto, as entradas aumentada de ambas as câmaras do lado em morfina-experiente animais são pensadas para representar incubada ânsia de drogas. Embora a limitação do uso de medidas repetidas em um assunto não pode ser excluída, o padrão de aumento entradas foi conservado em ratos11, árvore shrews11,30 e macacos31. No entanto, um período entre projeto do assunto durante a abstinência é altamente recomendado para estudos futuros excluir o efeito de extinção de medições repetidas.
Além das entradas de aumentada, golo de CPP com baixas doses de morfina (1 mg/kg e 3 mg/kg) aumentou progressivamente durante o período de abstinência17. Estes resultados sugerem que o paradigma do CPP também poderia modelar a incubação do fenômeno o desejo. No entanto, uma maior pontuação do CPP também pode representar uma aumento de memória para o estímulo condicionado. Neste aspecto, as entradas para as câmaras de lado em um aparelho de três-câmara, que são semelhantes às respostas ativas no paradigma da auto-administração, mais se assemelham a busca de drogas ou o gratificante efeito de drogas. Seria interessante verificar as tendências das entradas para os aposentos de lado durante o período de abstinência em paradigmas CPP de rato de menores doses de morfina. Futuros estudos com outras drogas e ratos devem ser feitos para verificar se este fenómeno é conservado através de drogas de abuso e as espécies.

Da toxicodependência é uma doença crônica1 com vários estágios diferentes2: compulsão/intoxicação, retirada/negativo afetam e preocupação/antecipação. Na fase inicial de compulsão/intoxicação do ciclo de dependência de drogas, temas tomar drogas devido ao efeito reforço2. Na fase de afeto negativo/retirada, temas experimentam somáticos e emocionais Estados negativos de abstinência de drogas, que promovem os mecanismos de reforço negativo associados ao desenvolvimento de dependência3. Na fase de preocupação/antecipação, assuntos reintegrá-drogas-buscando após a extinção, que pode ser desencadeada por drogas associadas sugestões ou estressores. Em estudos com animais da toxicodependência, lugar condicionado paradigmas de preferência (CPP) são usadas para imitar o efeito de reforço positivo de drogas4,5,6 , e, assim, é usado para modelar a fase inicial da droga ciclo de dependência. Morfina, um membro da família de opioide, produz um efeito de reforço positivo, ativando os receptores opioides no cérebro7,8.
O paradigma do CPP é baseado no princípio da clássica (pavloviano) condicionado e comumente usado para medir o efeito gratificante de drogas de abuso, tais como morfina4,5,9,10, devido a sua fácil disponibilidade em laboratórios. Um paradigma CPP típico consiste de três fases: pré-condicionamento, condicionamento e teste de fases. Durante a fase de condicionamento, as propriedades gratificantes de uma droga (estímulo unconditioned) são combinadas com um ou mais neutros contextuais estímulos, que ganham Propriedades gratificantes após vários pares de condicionamento e servem como estímulos condicionados. Durante a fase de teste, preferência dos animais para drogas-emparelhado compartimentos são medidos e refletidas como sua memória de recompensa. Por esta razão, o paradigma do CPP também é usado para investigar os mecanismos de aprendizagem e memória. Para estabelecer uma memória de recompensa a longo prazo de morfina, variáveis que afetam o estabelecimento do CPP foram ajustadas e otimizadas com o abaixo descrito protocolo11. Estímulos contextuais são uma combinação de visual, tátil e pistas de odor. Variações de estímulos contextuais e pontos de tempo de testes são feitas de acordo com fins de investigação diferentes. Por exemplo em nosso estudo anterior12, as pistas somatossensorial (texturas de piso diferente) foram usadas principalmente como estímulos contextuais para investigar o papel da parte caudal do córtex insular, uma região do cérebro com função somatossensorial, na aquisição e manutenção da memória de recompensa a longo prazo. O design do aparelho e a atribuição de ratos para os lados preferido/não-preferenciais afetam o estabelecimento do CPP. Um aparelho de três-câmara em vez de um aparelho de duas câmaras é usado na abaixo protocolo para evitar escolhas forçadas. O saldo de duas câmaras de lado e a atribuição inicial de animais neles afetam a aquisição da CPP4,13. Assim, um design equilibrado das câmaras de lado e atribuição tendenciosa dos animais são aplicados neste protocolo para adquirir uma local com forte preferência. Manutenção da memória de recompensa a longo prazo requer mais condicionado testes durante a fase de condicionamento. Para reduzir o custo de tempo durante a fase de condicionamento, são realizados dois ensaios condicionado por dia e injeções de morfina/solução salina são contrabalançadas para evitar o efeito de abstinência aguda de morfina na salina ensaios emparelhados4.
Reintegração de modelos animais14 foram estabelecidos para modelar a fase de preocupação/antecipação do ciclo de dependência de drogas. CPP é também utilizada para estudar o restabelecimento que modela a recaída de comportamento viciante5. Recaída é uma das barreiras no tratamento da dependência de drogas. Desejo é uma causa de recaída repetida. O desejo por drogas aumenta constantemente durante o período de abstinência, um fenômeno denominado incubação da ânsia de15,16. Incubação de desejo é amplamente estudada no paradigma de auto-administração de drogas, mas não o paradigma do CPP. O uso do paradigma CPP para refletir a incubação do desejo foi primeira proposto por Li et al 17. seus resultados17 mostraram que as pontuações CPP de baixas doses de morfina (1 mg/kg e 3 mg/kg), mas não uma dose elevada (10 mg/kg) aumentadas progressivamente durante os primeiros 14 dias de abstinência. Da mesma forma, ratos injetaram com uma dose baixa de cocaína mostrou aumentada partituras CPP ao longo do tempo18. O golo de CPP aumento das baixas doses de morfina foram usados para refletir o desejo incubadas17. Duração passou em tanto número de entradas no ambiente associada a drogas é sugerido para refletir as respostas condicionados reforçadas o paradigma CPP19. A maioria dos estudos recentes usa escores CPP directa ou indirectamente refletir o tempo gasto nas câmaras de droga-emparelhado, enquanto o número de entradas para os aposentos de lado como um parâmetro é muitas vezes negligenciado. Por estas razões, utilizou-se uma dose de morfina 10 mg/kg e o número de entradas foi medido em nosso estudo11. Os resultados mostram que as entradas de ratos para as câmaras de lado aumentaram significativamente durante o período de abstinência11. Isso indica que ambos os escores do CPP e número de entradas são parâmetros úteis na avaliação maior desejo por drogas e o paradigma do CPP é aplicável para modelar a incubação do fenômeno o desejo. No entanto, para reduzir o número de animais necessários, um grupo de animais experientes morfina é testado repetidamente; assim, não se pode excluir o efeito de extinção com a corrente dentro do projeto assunto. A entre projeto do assunto com o mesmo protocolo pode superar essa limitação.
A seguir descreve o protocolo do CPP que estabeleceu a longo prazo memória de recompensa e modelado desejo aumentado. Brevemente, após três dias de pré-condicionamento, ratos passam seis dias de condicionamento com dois ensaios condicionado por dia e em seguida são testados em pontos diferentes de tempo após o último julgamento de condicionamento. Neste paradigma de CPP, uma caixa de três-câmara de cloreto de polivinila (PVC), usada como o aparelho CPP é construída e o assoalho do aparelho é equilibrado. O aparelho consiste de duas câmaras de lado preto grande (30 cm × 25 cm × 30 cm, L × W × H) e um média branca câmara (11 cm × 25 cm × 30 cm, L × W × H) com piso de PVC branco liso. As câmaras do dois lado têm piso diferentes texturas como pistas somatossensorial: um com um piso de plexiglass de grade, o outro com um áspero piso de PVC.

<table><tbody><tr><td>Morfina</td><td>Shenyang Primeira Fábrica</td><td></td><td></td>Farmacêutica</tr><tr><td>CPP aparelho/Câmera</td><td>Anlai Technology Company</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SPSS</td><td>IBM Inc</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

um protocolo de preferência condicionada lugar para medir a incubação do desejo em ratos

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

Das principais causas de repetidas recaídas é um desejo pela droga. Drogas desejo aumenta progressivamente durante o período de abstinência, um fenômeno denominado incubação da ânsia da droga. Aqui, descrevemos um protocolo de preferência (CPP) do lugar de morfina condicionado para medir a incubação do desejo em ratos. Neste protocolo, um paradigma CPP, empregando principalmente sugestões somatossensorial é usado para estabelecer uma memória de recompensa a longo prazo de morfina. Uma caixa CPP de três-câmara que difere a textura do chão da câmara é construída. Em primeiro lugar, os animais são testados para sua preferência de linha de base para as câmaras de dois lado por três dias consecutivos. Então, eles são injectados intraperitonealmente com morfina/soro fisiológico e colocados na sua câmara não-preferenciais/preferenciais por 45 min. Depois de 6 dias de condicionamento, sua preferência para as câmaras de lado é testada por 15 min em pontos diferentes de tempo após a última sessão de condicionamento. Com este paradigma, a memória de recompensa de morfina pode durar pelo menos 18 dias. Para testar se o protocolo acima mencionado pode modelar o desejo maior, o número de entradas em câmaras de dois lado é contado durante o período de abstinência. Os resultados mostram que as entradas aumentaram, sugerindo que o paradigma do CPP poderia imitar a incubação de desejo. Estudos futuros podem empregar este modelo para estudar os mecanismos neurais subjacentes a memória de longo prazo e incubação de desejo.

Os seguintes resultados representativos mostraram que pode ser mantida uma morfina que cpp pode ser estabelecida com êxito pelo protocolo descrito acima e a longo prazo memória de recompensa de morfina (Figura 2). O número de entradas para os aposentos de lado, análogos ao número de respostas ativas no paradigma da auto-administração, reflete a propriedade reforço de morfina. O aumento do número de entradas (Figura 3), indicando a incubação do desejo, observou-se usando este paradigma CPP de morfina.
Memória CPP poderia durar pelo menos 18 dias após a última sessão de condicionamento.
Vinte e um ratos no grupo morfina e 10 ratos no grupo salino foram usados para testar a expressão da memória gratificante a longo prazo. Uma misto de ANOVA revelou diferenças significativas na interação entre o grupo e teste (F (3,87) = 4.973, p = 0,003), teste (F (3,87) = 18.237, p &lt; 0,001) e grupo (F (1,29) = 11.413, p = 0,002). Diferenças significativas entre os testes (F (3,60) = 46.628, p &lt; 0,001) no grupo de morfina, mas não salina group(F(3,27) = 1.576, p = 0.218) foram detectados por uma ANOVA One-Way repetida. A análise de comparação múltipla com ajuste de Bonferroni mostrou diferenças significativas entre os três testes e T0 no grupo morfina. Como mostrado na Figura 2, a memória de recompensa de morfina durou pelo menos 18 dias e diminuiu em uma tendência de tempo-dependente. Dados são obtidos de um anterior estudo publicado11.
Entradas para compartimentos laterais no grupo morfina aumentada progressivamente
Grupo de morfina Para testar a tendência das entradas, grupo (solução salina-emparelhado e morfina-emparelhado) como fator entre disciplinas e teste (T0, T1, T2 e T3) como fator de dentro-temas foram definidas por uma ANOVA mista. Não houve diferença significativa na interação entre o grupo e teste (F (2.311,92.449) = 1,915, p = 0,147) e grupo (F(1,40) = 0.898, p = 0.349), mas a significância no teste (F(2.311,92.499) = 24.243, p &lt; 0,001), foram detectados. A análise de comparação múltipla com menos significativo teste de diferença (LSD) mostrou diferenças significativas entre T1 e T0 (p &lt; 0,001), T2 e T0 (p &lt; 0,001) e T3 e T0 (p &lt; 0,001) no grupo morfina nas entradas de morfina-emparelhado. Sobre compartimentos de solução salina-emparelhado, significados estatísticos existiam entre T2 e T0 (p = 0,002) e T3 e T0 (p = 0,003) mas não T1 e T0 (p = 0.246), que é semelhante ao padrão da incubação de heroína24o desejo. Em geral, entradas para os aposentos de lado na morfina grupo maior tempo-dependente.
Ratos mais frequentemente entrados para o compartimento de morfina-emparelhado do compartimento de solução salina-pareado em T1 (t(1,21) =-2.833, p = 0,010) e T2 (t(1,21) =-4.458, p = 0,0002) mas não T3 (t(1,21) =-0.471, p = 0.642) (bicaudal pareado testes t).
Grupo salino Semelhante com o grupo de morfina, uma ANOVA mista foi aplicada e revelou não houve diferença significativa na interação entre o grupo e teste (F(3,54) = 0.345, p = 0.793), teste (F(3,54) = 1.793, p = 0,159) e grupo (F(1,18) = 0,151, p = 0.702). Assim, as entradas para os aposentos de lado no grupo salino foram estáveis ao longo do tempo.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58384/58384fig2.jpg"> Figura 2: memória do CPP pode durar pelo menos 18 dias, mas diminui com o tempo. Retenção da memória de CPP no grupo morfina (n = 21) e o grupo salino (n = 10) foi avaliada medindo-se a pontuação de CPP para vários pontos de tempo após a último condicionado (T1, 2 dias; T2, 10 dias e T3, 18 dias). Todos os valores dos escores do CPP são média ± SEM. # # # indica p &lt; 0,001 e # # significa p &lt; 0,01 em comparação com o grupo salino; indica p &lt; 0,001 comparado com T0 no grupo morfina. Esta figura foi modificada de Sun et al, 201711. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58384/58384fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58384/58384fig3.jpg"> Figura 3: entradas ao lado-chambers em grupos morfina e solução salina. Entradas de duas câmaras de lado no grupo morfina (n = 21) e o grupo salino (n = 10) foram avaliados em vários pontos de tempo após o último condicionamento (T1, 2 dias; T2, 10 dias e T3, 18 dias) e comparado com T0. Todos os valores das entradas são média ± SEM. No grupo de morfina (A), entradas para o lado de morfina-emparelhado aumentaram significativamente de T1 para T3 enquanto entradas da câmara salina-emparelhado só aumentada significativamente de T2. T pareado testes com compartimento de morfina-emparelhado e compartimento de solução salina-emparelhado mostrou um aumento muito significativo em T1 e T2. No grupo salino (B), não há nenhuma mudança significativa nas entradas para ambos os lados. Esta figura foi modificada de Sun et al, 201711. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58384/58384fig3large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Aqui, um protocolo de preferência (CPP) do lugar de morfina condicionado é descrito para medir a incubação do desejo em ratos.

Um protocolo de preferência condicionada lugar para medir a incubação do desejo em ratos

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...

Este método pode ajudar a abordar algumas questões-chave no campo do vício em drogas sobre os desejos de uso de drogas e a incubação da resposta ao desejo. Com apenas seis dias de condicionamento de morfina, a resposta de memória de preferência do local condicionado pode ser estendida para 18 dias para observação dos fenômenos de desejo no modelo de rato. As implicações deste modelo de condicionamento de morfina de rato estendem-se para o avanço de nosso entendimento dos mecanismos subjacentes à incubação de desejos.Antes de iniciar o procedimento, construa um aparelho de preferência de local condicionado de três câmaras, composto por duas câmaras laterais grandes e pretas de 30 por 30 centímetros. E uma câmara branca de 11 por 25 por 30 centímetros, com um piso de PVC branco e liso. Em seguida, adicione diferentes pistas táteis às câmaras laterais para testar as preferências iniciais do rato.Para pré-condicionamento dos animais, remova as portas da guilhotina para permitir o livre acesso a todo o aparelho. E coloque um rato na câmara do meio. Regisso recorde a atividade do animal por 15 minutos, calculando o tempo gasto nas duas câmaras laterais no terceiro dia como linha de base.Para condicionamento dos animais, injete o grupo de ratos condicionados à morfina com um mililitro por quilograma de 10 miligramas por hidreloreto de morfina mililitro IP pela manhã. E com um mililitro por quilo fisco 10 horas depois, todos os dias durante seis dias. Colocando cada rato em sua droga apropriada emparelhada, não preferida ou salina emparelhada, câmara preferida por 45 minutos imediatamente após cada injeção.Para o teste dos animais condicionados à morfina, nos dias dois, 10 e 18 após a última sessão de condicionamento, remova as portas da guilhotina para permitir o livre acesso a todo o aparelho. E registre a atividade de cada animal por 15 minutos após a colocação na câmara do meio para exploração gratuita de todo o aparelho em estado livre de morfina. A retenção de memória da preferência de local condicionado nos grupos de morfina e soro fisiológico é avaliada medindo o escore de preferência do local condicionado em vários pontos de tempo após a última sessão de condicionamento.O número de entradas nas câmaras laterais é análogo ao número de respostas ativas no paradigma da autoadministração, refletindo a propriedade reforçada da morfina e com um número crescente de entradas indicando a incubação do desejo. Como ilustrado, uma preferência de lugar condicionada à morfina pode ser estabelecida com sucesso usando este protocolo. Induzindo uma memória de recompensa de morfina de longo prazo por até 18 dias após a última sessão de condicionamento.Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de escolher equilibrar as pistas táteis. Após este procedimento, outras medidas como a reintegração após cada condicionamento podem ser realizadas. Responder a perguntas adicionais sobre se a reintegração sob a incubação do desejo tem mecanismos subjacentes semelhantes.Após a reintegração, essa técnica abriu caminho para pesquisadores do campo da adição de drogas explorarem a incubação do desejo em paradigmas de preferência de lugar condicionados aos ratos.

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Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Operante de drogas auto-administração e preferência local condicionado (CPP) procedimentos são utilizados em pesquisas expansiva para modelo de vários componentes de reforço de drogas, consumo e dependência em humanos. Neste relatório, nós combinamos os métodos tradicionais de CPP e auto-administração como uma nova abordagem para estudar o reforço de drogas e vício em ratos.

Aparelho novo e Método para Reforço de Drogas

Responder por sinais de alimentos ou drogas emparelhados aumenta ao longo de um período de abstinência e esta pode estar relacionada com uma susceptibilidade aumentada a comportamentos recaída. Aqui detalhamos um procedimento para avaliar este "incubação de desejo" em ratos que têm auto-administrado de sacarose.

Um método geral para a avaliação de Incubação de Craving Sacarose em Ratos

Este artigo descreve como microinject vetores virais em cérebro de camundongos e teste em um paradigma de preferência local condicionado, que inclui uma fase de aquisição, extinção e reintegração.

Microinjeção estereotáxica de vetores virais Expressando Cre Recombinase para estudar o papel de genes alvo em cocaína condicionado Lugar de Preferência

Este protocolo destina-se a permitir que os pesquisadores conduzam experimentos projetados para testar esses aspectos do vício usando a preferência de lugar condicionada e ensaios de sensibilização comportamental locomotora.

Avaliação da sensibilização comportamental induzida por cocaína e preferência por lugar condicionado em Ratos

Reatividade de sinalização é conceituada como sensibilidade para pistas ligadas com experiências de drogas que contribuem a ânsia e recaída em humanos abstinentes. Reatividade de sinalização é modelada em ratos por medição orientação atenção para pistas de drogas associadas que resulta em comportamento de abordagem repetido em um teste de reactividade deixa seguir auto-administração e forçado a abstinência.

Um protocolo para medição de reatividade de Cue em um modelo do rato do transtorno de uso de cocaína

Este protocolo descreve a preferência de lugar condicionado (CPP) como um modelo de recaída. Este procedimento permite a medição de recaída em animais de laboratório, considerando o impacto das drogas associadas Dicas ambientais como desejo e recaída em viciados em ausência é, atualmente, o foco dos programas de tratamento do abuso de drogas.

Reintegração de busca de drogas em ratos utilizando o paradigma de preferência lugar condicionado

Um procedimento que permite uma demonstração de aumento robusto de droga que procura, em ratos com restrição de alimentos é descrito. Após o treinamento de auto-administração de heroína, os ratos passam por um período de abstinência, em um ambiente livre de drogas, durante a qual eles são levemente restrição alimentar. Procura de droga é então testada no ambiente associadas à droga.

Um procedimento para estudar o efeito da restrição alimentar prolongada em heroína Buscando em ratos abstinentes

Influências de conteúdo de gordura da dieta, tanto o consumo de energia e composição de gordura corporal em mamíferos. Ao examinar a preferência dos ratos por alimentos ricos em gordura em uma série de experimentos de escolha, é possível testar diferenças genéticas e intervenções farmacológicas sobre sua preferência por alimentos ricos em gordura.

Preferência de Gordura: Um Modelo Novel de comportamento alimentar em ratos

Um procedimento para o estudo da capacidade de um álcool associado contexto ambiental para desencadear a renovação do comportamento de procura de álcool em ratos, está descrito.

Um procedimento para Observar Renovação induzida por Contexto de pavloviano condicionado Comportamento Álcool-seeking em Ratos

Hormônios gonadais, como o estrogênio, modulam a formação da memória em vários paradigmas experimentais, incluindo a memória de extinção do medo. Este protocolo descreve um conjunto de métodos para investigar a influência dos hormônios gonadais especificamente durante a extinção em fêmeas que circulam naturalmente, incluindo monitoramento do ciclo estral e administração de estrogênio exógeno.

Protocolo de Estudos de Extinção do medo condicionado em Naturally Ciclismo ratas

Aprenda um protocolo de preferência condicionada lugar com morfina para medir a incubação do desejo em ratos. Este método permite estudar os mecanismos subjacentes aos desejos por drogas e à dependência.

Um protocolo de preferência condicionada lugar para medir a incubação do desejo em ratos

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