Name: 절연, 특성, 및 성인 마우스 심장에서 심장 줄기 세포의 분화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 45 s
Description: 배우세요 성인 마우스 심장에서 심장 줄기 세포를 분리하고 특성화하며 분화시키는 표준화된 프로토콜을 사용하는 방법을. 이 비용 효율적인 기술은 심혈관 질환 및 심부전 연구에 중요한 통찰을 제공합니다.

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이 작품에서에서 지원 됩니다, 부품, HL-113281 및 HL116205 성명서 쿠마 Mishra에 건강의 국가 학회 교부 금에 의해.

주택, 마 취, 그리고 마우스의 희생은 네브라스카 대학 의료 센터의 승인된 IACUC 프로토콜에 따라 하는 것을 수행 했다.
1입니다. 자료
<ol><li>사용 10-에 12 주 된 C57BL/6J 블랙 남성 쥐, CSCs CSCs의 격리에 대 한 제도적 동물 시설에서 사내 보관 수도 비 임신 여성 쥐에서 격리 되어야.</li>
	<li>모든 필요한 수술 악기, 수술가 위, 등 정밀한 수술가 위, 곡선된 칼 집게, 외과 블레이드, 압력가 마로 소독 하 여 소독 마우스의 안락사 전에 그들.</li>
	<li>멸 균된 상태에서 CSC 절연 버퍼를 준비 하 고 얼음에 4 ° C에서 저장. 이 버퍼는 polysucrose 및 나트륨 diatrizoate 솔루션 1.077 g/mL의 조밀도를 조정, 불완전 한 Dulbecco의 수정이 글의 중간, 1 x 햄의 소금물 (HBSS), 균형 및 문화-학년 1 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) x 셀. 1% 콜라 II 재고 솔루션 (필터링 및 소독)와 0.2% 작업 솔루션 HBSS에서 준비 합니다.</li>
	<li>캐비닛, 10 mm 페 트리 접시, 등 6 잘 플레이트, 24-잘 접시, T-25 및 T-75 문화 플라스 크, 15 mL 및 50 mL 원뿔 튜브, 일회용 serological 펫 40 µ m와 100는 biosafety에 멸 균된 상태에서 조직 문화 자료를 유지 -0.22 μ m 필터 µ m 세포 멤브레인.</li>
	<li>10 µ L, 200 µ L, 및 1000 µ L 피 펫 팁 오토 클레이 브 소독.</li>
	<li>파우더 프리 니트 릴 장갑, 70% 에탄올을 사용 하 여 실험을 통해 무 균 상태를 유지 하기 위해.</li>
	<li>10% 표 백제를 사용 하 여 살 균 제로.</li>
	<li>사용 하 여 상용 CSC 유지 보수 매체 cardiomyocytes 차별화 매체 문화, CSCs의 차별화에 대 한 각각.</li>
</ol>2. 절연 방식의 심장 줄기 세포
<ol><li>4-5 성인 남성 (또는 비 임신 여성) 안락사는 CO2 챔버를 사용 하 여 마우스. 핀 이나 끈 적 테이프와 함께 별도 해 부 골 판지에 각 마우스의 무기를 수정.</li>
	<li>외부 세균을 제거 하 고 심장의 수확 하는 동안 멸 균된 상태를 유지를 마우스에 70% 에탄올을 스프레이. 복 부 중간에 위로 절 개 하 고 직선에서에서 가슴까지 복 부 피부를 잘라. 피부와 머리카락의 복 부 영역을 지우려면 중간 컷의 양쪽에서 피부를 제거 합니다. 가 위, 핀셋를 사용 하 여 흉 곽 아래 횡 경 막 잘라.</li>
	<li>후드 안쪽 흉 곽을 절단 하 여 마우스의 흉 강을 엽니다. 마음 하 고 심장 근처 혈액을 제거. 워시는 심장 주변 모든 혈액의 제거를 얼음 처럼 차가운 PBS 가진 심장의 주변 지역.</li>
	<li>수술가 위 핀셋을 사용 하 여 심장 해 부. 얼음 처럼 차가운 PBS의 10 mL를 포함 하는 100 mm 페 트리 접시에 마음을 놓습니다.</li>
	<li>Palpitate 곡선된 칼 집게를 사용 하 여 심장 고 마음 안에 잔여 혈액을 제거 합니다.</li>
	<li>온 마음을 사용 하 여 CSCs의 격리에 대 한.</li>
	<li>모든 4 개 또는 5 개의 전체 마음 얼음 처럼 차가운 HBSS의 10 mL를 포함 하는 50 mL 원뿔 튜브에 전송. 추가 처리까지 얼음에 튜브를 유지.</li>
	<li>내부와 외부는 biosafety 멸 균된 환경을 만들기 위해 70% 에탄올과 캐비닛 닦아냅니다. 심장-포함 된 튜브와 70% 에탄올과 다른 필요한 재료를 소독. 추가 처리를 위해 캐비닛에 biosafety 심장 포함 된 튜브를 놓습니다.</li>
	<li>100 mm 페 트리 접시 얼음 HBSS의 10 mL를 포함 하는 마음을 전송 합니다. Palpating 마음 안에 어떤 잔여 혈액을 제거 하 여 다시 마음을 씻어. 혈액의 완전 한 제거를 보장 하기 위해 각 세척 후 HBSS 솔루션을 변경 합니다.</li>
	<li>마음 HBSS 솔루션의 5-7 mL를 포함 하는 100 mm 페 트리 접시에 잘 수술가 위 또는 외과 블레이드를 사용 하 여 작은 조각으로 잘라. 집게의 쌍을 가진 각 마음을 누른 수술 잘가 위 또는 외과 블레이드를 사용 하 여 심장 2-4 밀리미터 조각으로 잘라. HBSS 솔루션 혈액 무료 HBSS을 자주 변경 합니다. HBSS 용액에 마음을 말하다.</li>
	<li>원심 5 분 삭제 4 ° C에서 500 x g 에 다진된 조직은 상쾌한 고 펠 릿을 유지.</li>
	<li>5-6 ml 50 mL 원뿔 튜브에 0.2% 콜라 II 솔루션의 펠 릿을 resuspend. 콜라 솔루션의 볼륨 이어야 한다 거의 1.5-에 2 배는 펠 릿의 볼륨. 참고: 대 한 소화 조직, 0.2% 콜라 나 및 2.5 U/mL dispase 솔루션 0.2% 콜라 II를 바꿀 수 있습니다. Dispase 솔루션은 콜라의 거의 동일한 볼륨을 사용 하 여 난 솔루션.</li>
	<li>철저 하 게 혼합 펠 릿 0.2% 콜라 II 솔루션 튜브를 교 반 또는 37 ° c.에 45-60 분에서 75 x g 통에 튜브 락 흔들어 튜브 적극적으로 손으로 세포를 향상 시키기 위해 모든 20-30 분 후.</li>
	<li>5 mL 혈 청 학적인 피 펫 및 1 mL 피 펫 팁을 사용 하 여 단일 셀 서 스 펜 션으로 조직 덩어리를 해리 하 lysed 조직 믹스 triturate 참고:는 CSCs의 최대 복구를 얻으려면, 적어도 5 분 동안 세포 믹스 triturate. 조직 덩어리 상대적으로 큰 경우에가 위 또는 외과 블레이드 1 mL 피 펫 팁의 끝을 잘라 고 분쇄에 대 한 그것을 사용 합니다.</li>
	<li>상용 CSC 유지 보수 매체를 추가 하 여 조직의 효소 세포를 중지 합니다. 2.14 단계에서 lysed 조직의 볼륨으로 거의 2-3 배 많은 유지 보수 매체를 추가 합니다.</li>
	<li>모든 소화 되지 않은 조직 조각을 제거를 100 µ m 셀 스 트레이너를 통해 소화 세포 현 탁 액을 전달 합니다.</li>
	<li>2.16 40 µ m 셀 스 트레이너를 사용 하 여 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>조밀도 기온 변화도 원심 분리를 통해 셀 구분 합니다. 세포의 분리에 대 한 polysucrose 및 나트륨 diatrizoate 솔루션 위에 filtrate의 동일한 볼륨을 오버레이 부드럽게 합니다. 예를 들어 첫째, 50 mL 원뿔 튜브에 polysucrose 및 나트륨 diatrizoate 솔루션의 20 mL를 추가 하 고, polysucrose 및 나트륨 diatrizoate 솔루션을 통해 단계 2.17에서에서 여과 액 20 mL를 추가. 참고: Prewarm는 polysucrose 및 전에 37 ° C에 나트륨 diatrizoate 솔루션 셀으로 사용합니다. 매우 신중 하 고 천천히는 filtrate 단계의 2.17 polysucrose와 나트륨 diatrizoate 솔루션을 통해 추가 두 솔루션의 어떤 혼합을 피하기 위해. 이 중요 한 단계로 간주 됩니다.</li>
	<li>500 x g 스윙 양동이 원심 분리기를 사용 하 여 실 온에서 20 분에서 두 솔루션을 포함 하는 튜브 원심 낮은 가속 및 감속 속도 두 가지 솔루션을 혼합 하지 마십시오 및는 CSCs의 적절 한 분리는 분리기를 설정 합니다. 이것은 CSC 격리에 중요 한 단계입니다. 튜브는 원심 분리기 내부 방해 없이 아주 천천히 그라데이션 혼합물을 포함 하 고 원심 분리에 대 한 설정 합니다.</li>
	<li>15 mL 소독된 튜브에 1 mL 피 펫 또는 플라스틱 파스퇴르 피 펫을 사용 하 여 상위 계층에서 추가 솔루션 함께 버 피 코트를 꺼내. 이 버 피 레이어는 CSCs 포함 됩니다. 참고: 주의 사항 추가 pipetting 없애려고 하지 polysucrose와 나트륨 diatrizoate 솔루션 레이어 CSCs에 독성 때문에 버 피 코트의 동안.</li>
	<li>단계 2.20에서에서 CSC 유지 보수 매체의 동일한 볼륨 세포 현 탁 액을 추가 있는 경우 제대로 잔여 polysucrose 및 나트륨 diatrizoate 솔루션, 중화를 섞는다.</li>
	<li>4 ° c.에서 5 분 동안 500 x g 에서 위의 세포 현 탁 액을 원심 폐기는 상쾌한.</li>
	<li>불완전 한 DMEM 매체의 7-10 mL에 펠 릿을 resuspend 하 고 모든 잔여 polysucrose 및 나트륨 diatrizoate 솔루션의 제거를 4 ° C에서 5 분 동안 500 x g 에서 원심.</li>
	<li>순화 CSCs 포함 된 펠 릿을 수집 합니다.</li>
	<li>CSC 유지 보수 매체의 1 mL에 펠 릿을 resuspend, CSC 수를 계산 하 고 문화에 대 한 펠 릿을 사용 합니다. CSC 수를 계산 하려면 Trypan 푸른 얼룩과 hemocytometer를 사용 합니다. 4 남성 쥐 마음, CSCs의 수익률은 ~1.8 백만.</li>
	<li>씨앗 6-잘 문화 접시에 CSCs 0.5 %fibronectin 포함 된 0.02% 젤라틴 솔루션과 코팅. 완전 한 유지 보수 매체의 2 개 mL를 사용 하 여 시드를 위한. 문화 접시 5% CO2와 37 ° C에서 인큐베이터에 품 어.</li>
	<li>제 3의 날까지 매일 완전 한 CSC 유지 보수 매체와 문화 CSCs의 중간을 교체 합니다. 그 후, 다른 일에 매체를 변경 합니다.</li>
	<li>현미경으로 관찰 하 여는 CSCs의 성장을 결정 합니다.</li>
</ol>3. 유지 보수 및 심장 줄기 세포의 문화
<ol><li>상업적으로 사용 가능한 유지 보수 매체에 격리 CSCs 문화. 다른 일에 신선한 유지 보수 매체와 문화 매체를 교체 합니다. CSC 문화는 confluency에 도달 하면 단계 2.26에서에서 설명 했 듯이 젤라틴과 fibronectin, 코팅 새로운 플레이트는 CSCs 전송. 효소 세포 분리 버퍼 교양된 CSCs 분리 합니다. 문화 판에서 셀 분리의 표준 프로토콜을 따릅니다. 이 단계에서 CSCs는 0 (P0) 무대 통로에 간주 됩니다.</li>
	<li>새로운 젤라틴에 문화 P0 CSCs fibronectin 코팅 접시 5% CO2 배양 기에서 37 ° C에서 완전 한 CSC 유지 보수 매체에 confluent, 수 수와 다음 단계 통과 1 (P1) CSCs 저장소 P1 CSCs 액체 질소에 또는 experi에 대 한 그들을 사용 하 여 3.1 사항입니다.</li>
	<li>6 잘 플레이트 또는 그것의 초기 단계에서 CSC 문화를 유지 하기 위해 T-25 1 백만 셀 씨 0.5 백만 셀.</li>
	<li>85%-90% 합칠 때 CSCs 통로. CSCs 4 ~ 6 주까지 유지 보수 매체에 경작 될 수 있다. 참고: 계속 CSCs 상대적으로 높은 (40%-50%)의 초기 시드 밀도 때문에, 낮은 시드 밀도 CSCs 평평 하 고 길쭉한를 그들의 형태 변경 될 수 있습니다.</li>
</ol>4입니다. 심장 줄기 세포의 특성
<ol><li>교양된 CSCs 특성, 살 균 소-대조 또는 밝은 분야 현미경 관찰 합니다. 형광 현미경의 목표에 포함 하는 CSC 접시를 놓습니다. 배율을 상당히 낮은 (10 배) 셀 초점을 설정 합니다. 단계 대조 조리개를 사용 하 여 셀을 관찰. 20 X 배율 대물 렌즈를 변경 하 여 증가 하 고 이미지 CSCs. 증가 40 X 목표는 CSCs 이미지. 2 일에는 CSCs 나타납니다 거의 둥근 모양만 시간, 그리고 7 일 셀 증가의 크기, CSCs는 거의 원통 모양 (그림 1A - 1 C).</li>
	<li>Immunostaining는 CSCs의 pluripotency/stemness (OCT4, SOX2, 또는 Nanog), 확산 (기-67) (그림 2A - 2D), 그리고 심장 근원/시 조 세포 (Sca 1, NKX2-5, 또는 GATA4)의 마커를 수행 (그림 3A - 3c).<ol>
<li>CSCs의 immunostaining에 대 한 24-잘 문화 접시에 10000 CSCs 씨.</li>
		<li>다음 다음날 (18-24 h), 10 분 동안 4 %paraformaldehyde 300 µ L에는 CSCs 수정.</li>
		<li>얼음 처럼 차가운 PBS의 500 µ L와 CSCs 씻어 5 분 간격으로 3 배.</li>
		<li>0.2% 트라이 톤 X-100 10 분에 대 한 PBS에 희석의 300 µ L와 CSCs permeabilize</li>
		<li>얼음 처럼 차가운 PBS의 500 µ L와 CSCs 씻어 5 분 간격으로 3 배.</li>
		<li>1% BSA PBST에 희석의 300 µ L로는 CSCs의 차단 수행 (PBS + 0.1% Tween 20) 또는 10% 일반 닭 혈 청 1 h PBST에 희석의 300 µ L.</li>
		<li>1 차적인 항 체 4 ° c.에 하룻밤 솔루션을 차단에 희석의 200 µ L에서 CSCs 품 어 희석 주 항 체 또는 항 체의 표준화에 따라 데이터 시트에서 권장 하는 대로.</li>
		<li>얼음 처럼 차가운 PBS의 500 µ L와 CSCs 씻어 5 분 간격으로 3 배.</li>
		<li>이차 항 체 솔루션을 차단에 희석의 200 µ L에서 CSCs 품 어 (단계 4.2.6 참조) 실 온에서 1 h. 희석 이차 항 체 또는 항 체의 표준화에 따라 데이터 시트에서 권장 하는 대로.</li>
		<li>얼음 처럼 차가운 PBS의 500 µ L와 CSCs 씻어 5 분 간격으로 3 배.</li>
		<li>DAPI의 200 µ L와 CSCs counterstain (1 µ g/mL) 5 분에 대 한 PBS에 희석.</li>
		<li>1 CSCs 씻어 얼음 처럼 차가운 PBS의 500 µ L x. 그런 다음, 각 우물에 얼음 처럼 차가운 PBS의 300 µ L를 추가 합니다.</li>
		<li>형광 현미경을 사용 하 여 이미지를 수행 합니다. 형광 이미징, 접시에 직접 빛을 피하는 등의 지침을 따릅니다. 현미경 문화 접시를 유지. 다른 배율에서 셀의 초점을 맞춥니다. 단계 대조 및/또는 다른 여기 필터에서 세포를 관찰 하 고 이미지를 저장.</li>
		<li>4 ° c.에 어둠 속에서 접시를 저장</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Cardiomyocyte에 심장 줄기 세포의 분화
<ol><li>CSCs의 차별화, prewarm (37 ° C) 상용 CSC 유지 보수 매체의 2 mL와 함께 6 잘 플레이트에 500000 CSCs 씨.</li>
	<li>포함 하는 37 ° c.에 CO2 배양 기에서 CSCs 접시를 품 어 연결 하 고 하위 confluent 성장까지 증식 CSCs 허용. 매체 노란색, 문화 매체를 신선한 유지 보수 매체 바꿉니다.</li>
	<li>85%-90 %confluency prewarm (37 ° C) cardiomyocytes의 2 mL와 함께 유지 보수 매체 교체 차별화 매체. 최대 2-3 주 동안 37 ° C에서 CO2 인큐베이터에 접시를 품 어.</li>
	<li>모든 2-3 디 좋은 문화 조건 되도록 변경 매체 동안 때마다 현미경 CSCs' 형태 관찰 차별화 매체를 변경 합니다.</li>
	<li>CSC 문화 차별화 매체에서의 12 d, 후 이미지 CSCs 분화 마커 표준 immunostaining 다음에 대 한 프로토콜 (단계 4.2.1-4.2.14 참조) 합니다. Cardiomyocytes 표식 (그림 4A - 4B)의 표현에 대 한 형광 이미지를 저장 합니다.</li>
</ol>

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<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+a+Sca-1%2B%2FCD31-+progenitor+cell+lineage+derived+from+mouse+heart+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of a Sca-1+/CD31- progenitor cell lineage derived from mouse heart tissue.</a> BMC Biotechnology. 14, 75(2014).</li>
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</ol>

저자는 공개 없다.

이 CSC 격리 프로토콜의 중요 한 단계는 다음과 같습니다. 1) 멸 균된 조건이 생쥐에서 심 혼의 추출에 대 한 유지 되어야 합니다. 심장 추출 하는 동안 어떤 오염 든 지 CSCs. 2의 품질을 손상 수 있습니다) 혈액 조각 HBSS 솔루션 전체 마음과 심장의 여러 가지 세척에 의해 이루어집니다 마음을 닦지 하기 전에 완전히 제거 해야 합니다. 3) 심장 조각은 콜라 솔루션으로 단일 셀 서 스 펜 션으로 완전히 lysed 될 해야 합니다. 4) polysucrose와 나트륨 diatrizoate 그라데이션 솔루션 셀의 분리를 위한 prewarmed 해야 합니다. 5) CSC 문화 매체를 prewarmed 해야 합니다. 6) 문화 접시에 시드 동안 CSCs의 합류 때문에, 낮은 confluency, CSCs는 그들의 형태를 변경 될 수 있습니다 높은 해야 합니다. CSC 번호 7) 마음에서 그리고 문화 접시에 도금 하기 전에 격리 후 득점 한다. CSCs 수 마음에서 격리의 효율성을 나타냅니다. CSCs의 계산 하는 것은 문화...

허 혈 성 심장 질환, 심근 경색 (MI)를 포함 하 여 세계1주위 죽음의 주요 원인입니다. 죽은 심근 재생을 위한 줄기 세포 치료는 미 심장2,3,,45의 심장 기능을 개선 하는 주요 접근 남아 있다. 다른 종류의 줄기 세포 죽은 심근을 보충 하 고는 내 심장의 심장 기능을 개선 하기 위해 사용 되었습니다. 그들은 광범위 하 게 배아 줄기 세포6 및 성인 줄기 세포로 분류 될 수 있습니다. 성인 줄기 세포에서 다양 한 종류의 줄기 세포 사용 되었습니다, 단 세포 골 수에서 파생 된7,8, 골9,10, 지방 조직 에서에서 파생 된 중간 엽 줄기 세포 등 11,12및 탯13, CSCs14,15. 줄기 세포 심장 재생 paracrine 또는 내 분 비 작업16,17,18,,1920를 통해 홍보할 수 있습니다. 그러나, 줄기 세포 치료의 주요 한계 확산 수 있는 특정 심장 혈통21,22향해 분화 줄기 세포의 적절 한 번호를 얻는 이다. 헌 및 allogenic 이식 줄기 세포의 줄기 세포 치료9에 있는 중요 한 도전 이다. 그들은 마음에서 파생 하기 때문에 그들은 분화 될 수 있다 더 쉽게 심장 계보에 비 심장 줄기 세포 보다 CSCs 심장 재생을 위한 더 나은 방법은 수 있습니다. 따라서, 기형종의 위험을 줄여줍니다. 또한, 내 분 비 및 paracrine 효과 CSCs의 exosomes 등 miRNAs는 CSCs에서 파생 된 줄기 세포의 다른 유형 보다 더 효과적인 수 있습니다. 따라서, CSCs는 심장 재생23,24에 대 한 더 나은 옵션을 남아 있다.
CSCs는 그들의 심장 근원 때문에 미 마음에 심장 재생을 위한 더 나은 후보자, CSCs는 주요 한계는 효율적인 절연 방법의 부족으로 인해 더 적은 수확량. 또 다른 한계는 cardiomyocytes 리니지2,25,,2627향해 CSCs의 장애인된 차별 될 수 있습니다. 이러한 한계를 회피, CSC, 특성화, 고립과 심장 혈통으로 차별화에 대 한 효율적인 프로토콜을 개발 하는 것 중요 하다. CSCs에 대 한 단일 허용 마커 없는 고는 특정 세포 표면 마커 기반 격리 CSCs의 적은 CSCs 수익률. 여기, 우리는 비용 효율적 이며 CSCs의 증가 수확량에서 결과 마우스 심장 CSCs 격리 하기 위해 간단한 그라데이션 원심 접근 표준화. 이러한 격리 CSCs 형광 활성화 셀 단락에 의해 특정 세포 표면 표식에 대 한 선택할 수 있습니다. CSCs 격리, 뿐만 아니라 우리는 CSC, 특성화, 문화와 cardiomyocyte 혈통으로 차별화에 대 한 프로토콜을 제공 했습니다. 따라서, 우리는 격리, 성격, 문화, CSCs 성인 마우스 마음 (그림 5)에서 분화 하는 우아한 방법 제시.

<table><tbody><tr><td>Mice</td><td>The Jackson laboratory, USA</td><td>재고번호 000664</td><td></td></tr><tr><td>항체:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>OCT4-Abcam</td><td></td> <td>ab18976 (rabbit polyclonal)</td><td>OCT4-Primary antibody- 1:100 dilution, secondary antibody- 1:200 dilution, in blocking solution</td></tr><tr><td>SOX2</td><td>Abcam</td><td>ab97959 (rabbit polyclonal)</td><td>SOX2-1차 항체- 1:100 희석, 2차 항체- 1:200 희석, 차단 용액 내</td></tr><tr><td>Nanog</td><td>Abcam</td><td>ab80892 (토끼 다클론)</td><td>나노그-1차 항체- 1:100 희석, 2차 항체- 1:200 희석, 차단 용액</td></tr><tr><td>Ki67</td><td>Abcam</td><td>ab16667 (토끼 다클론성)</td><td>Ki67-1차 항체- 1:100 희석, 2차 항체- 1:200 희석, 차단 용액</td></tr><tr><td>Sca I</td><td>Millipore</td><td>AB4336 (rabbit polyclonal)</td><td>Sca I 1차 항체- 1:100 희석, 2차 항체- 1:200 희석, 차단 용액</td></tr><tr><td>NKX2-5</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-8697 (goat polyclonal)</td><td>NKX2-5-1 차 항체- 1:50 희석, 2차 항체- 1:200 희석, 차단 용액</td></tr><tr><td>GATA4</td><td>Abcam</td><td>ab84593 (rabbit polyclonal)</td><td>GATA4-1차 항체- 1:100 희석, 2차 항체- 1:200 희석, 차단 용액</td></tr><tr><td>MEF2C</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-13268 (염소 다클론)</td><td>MEF2C-1차 항체- 1:50 희석, 2차 항체- 1:200 희석, 차단 용액 중</td></tr><tr><td>Troponin I</td><td>Millipore</td><td>MAB1691(마우스 단클론)</td><td>트로포닌 I-1차 항체- 1:100 희석, 2차 항체- 1:200 희석, 차단 용액 내</td></tr><tr><td>Actinin</td><td>Millipore</td><td>MAB1682 (마우스 단클론)</td><td>Actinin-1차 항체- 1:100 희석, 2차 항체- 1:200 희석, 차단 용액 ANP</td></tr><tr><td></td><td>Millipore</td><td>AB5490 (마우스 다클론)</td><td>ANP-1차 항체- 1:100 희석, 2차 항체- 1:200 희석, 차단 용액</td></tr><tr><td>Alex Fluor-488 checken anti-rabbit</td><td>Life technology</td><td>참조 번호 A21441</td><td></td></tr><tr><td>Alex Fluor-594 goat anti-rabbit</td><td>Life technology</td><td>참조 번호 A11012</td><td></td></tr><tr><td>Alex Fluor-594 rabbit anti-goat</td><td>Life technology</td><td>참조 번호 A11078</td><td></td></tr><tr><td>Alex Fluor-488 checken anti-mouse</td><td>Life technology</td><td>참조 번호 A21200</td><td></td></tr><tr><td>Alex Fluor-594 checken anti-goat</td><td>Life technology</td><td>참조 번호 A21468</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>코멘트</td></tr><tr><td>배양 배지: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CSC 유지 관리 배지</td><td>Millipore</td><td>SCM101</td><td>참고: CSC 배양의 경우, PBS 또는 불완전한 DMEM 배지를 사용하여 세포</td></tr><tr><td>심근세포 분화 배지</td><td>Millipore</td><td>SCM102</td><td></td>를 세척했습니다.</tr><tr><td>DMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5546</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Cell Isolation buffer:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>polysucrose and sodium diatrizoate solution (Histopaque1077)</td><td>Sigma</td><td>10771</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Gibco</td><td>2018-03</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase I</td><td>Sigma</td><td>C0130</td><td></td></tr><tr><td>Dispase 용액</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>7913</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>LONZA</td><td>S1226</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Accutase 세포 해리 시약 Thermoscientific</td><td></td><td></td> A1110501<td></td></tr><tr><td>기타 시약: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>시그마</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>일반 검사 혈청</td><td>벡터 실험실</td><td>S3000</td><td></td></tr><tr><td>DAPI 솔루션</td><td>Applichem</td><td>A100,0010</td><td>Dapi, 작업 농도 -1 &micro; g/mL</td></tr><tr><td>트리판 블루</td><td>Biorad</td><td>145-0013</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Sigma</td><td>T4049</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Accutase 세포 해리 시약</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1110501</td><td></td></tr><tr><td>포름알데히드</td><td>시그마</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>ACROS</td><td>Cas No. 900-293-1</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Fisher Sceintific</td><td>로트 번호 160170</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>조직 배양 재료:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>100 mm 페트리 접시</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>6웰 플레이트</td>, <td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>24웰 플레이트</td><td>, Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>T-25 플라스크</td>, <td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>T-75 플라스크</td>, <td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>15ml 원뿔형 튜브</td><td>, Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50mL 코니컬 튜브</td>, <td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>40 & 마이크로; m 세포 염색기</td><td>Fisher Scientific</td><td>22363547</td><td></td></tr><tr><td>100 &micro; m 세포 염색기</td><td>Fisher Scientific</td><td>22363549</td><td></td></tr><tr><td>0.22 &마이크로; m 필터</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-719C</td><td></td></tr><tr><td>10 mL 주사기</td><td>BD</td><td>참조 번호 309604</td><td></td></tr><tr><td>10 &micro; L, 200 &마이크로; L, 1000 &마이크로; L 피펫 팁</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5 mL, 10mL, 25 mL 일회용 플라스틱 피펫</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Instruments</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>원심분리기 기계</td><td>Thermo Scientific</td><td>LEGEND X1R 원심분리기</td><td></td></tr><tr><td>EVOS 현미경</td><td>생명 기술</td><td></td><td></td></tr><tr><td>자동 세포 계수기</td><td>Biorad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>세포 계수 슬라이드</td><td>Biorad</td><td>145-0011</td><td></td></tr><tr><td>Pippte aid</td><td>Thermo Scientific</td><td>S1 피펫 필러</td><td></td></tr><tr><td>Name<</td><td> strong>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>코멘트</td></tr><tr><td>Surgical Instruments:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surgical Scissors</td><td>Fine Scientific Tool</td> Fine surgical Scissors <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Fine Scientific Tool</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Curve shank junps</td><td>Fine Scientific Tool</td><td></td><td></td></tr><tr><td>수술 용 블레이드</td><td>파인 사이언티픽 도구</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

절연, 특성, 및 성인 마우스 심장에서 심장 줄기 세포의 분화

Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

심근 경색 (MI)는 병 적 상태와 사망률 세계 각국의 주요 원인입니다. 재생 의학의 주요 목표는 미 후 죽은 심근을 보충. 여러 전략 심근을 다시 생성 하는 이용 되었다, 줄기 세포 치료는 내 심장의 죽은 심근을 보충 하는 주요 접근 남아 있다. 증거를 축적 성인 심장 및 심장 재생, paracrine 또는 내 분 비 효과에서 주민 심장 줄기 세포 (CSCs)의 존재를 제안 합니다. 그러나, CSC 절연 특성 및 심근 세포, 특히 cardiomyocytes 향해 차별화 기술 도전 남아 있습니다. 현재 연구에서 우리는 절연, 특성, 및 성인 마우스 마음에서 CSCs의 차별화에 대 한 간단한 방법을 제공. 여기, CSCs, 심장 0.2% 콜라 II 솔루션에 의해 소화 된다의 절연에 대 한 밀도 그라데이션 방법을 설명 합니다. 격리 CSCs 특성, 우리는 Sca 1, NKX2-5, 및 GATA4, CSCs/심장 마커 및 pluripotency/stemness 마커 OCT4, SOX2, 및 Nanog 식 평가. 우리는 또한 배양 접시에 배양 하 고 확산 표식 기-67의 식을 평가 하 여 절연된 CSCs의 확산 가능성을 결정. CSCs의 감 별 법 잠재력을 평가, 우리는 7-10 일 교양 CSCs 선택. 우리는 cardiomyocyte 차별화 매체와 새로운 접시에 그들을 전송. 그들은 셀 문화 인큐베이터에서 12 일 동안 incubated는 차별화 매체는 3 일 마다 변경 하는 동안. 차별화 된 CSCs 익스프레스 cardiomyocyte 특정 마커: actinin와 분 나. 따라서,이 프로토콜 절연 CSCs stemness 있고 심장 마커, 그리고 그들은 확산 및 cardiomyocyte 혈통으로 차별화에 대 한 가능성.

현재 연구에서 우리는 10 월에 12 주 된 C57BL/6J 남성 쥐 마음에서 CSCs 고립. 여기, 우리는 CSC 격리 및 pluripotency의 마커를 사용 하 여 특성을 위한 간단한 방법을 제시 했습니다. 우리는 또한 CSC 차별화 우아한 메서드와 CSCs cardiomyocytes 혈통으로 분화의 특성을 제시. 2-하 3-일-교양 CSCs (그림 1A 및 1B) 단계 대조 현미경의 스핀 들 모양 형태를 관찰합니다. 우리는 유지 보수 매체, 줄기 세포가이 시간 동안에 문화의 7 일 CSCs의 형태에 변화를 (그림 1C) 길쭉한 발견. 우리는 CSCs pluripotency의 표식에 대 한 특징 고 그들이 OCT4, SOX2, 및 (그림 2A - 2 C</stro...

이 글의 전반적인 목표, 특성화, 고립과 성인 마우스 심장에서 심장 줄기 세포 (CSCs)의 분화에 대 한 프로토콜을 표준화 하입니다. 여기, 우리가 murine CSCs 분리 밀도 그라데이션 원심 분리 방법 및 CSC, 확산, 문화와 cardiomyocytes로 차별화에 대 한 정교한 방법을 설명 합니다.

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...

이 문서의 전반적인 목표는 성인 마우스 심장에서 심장 줄기 세포, CSC의 격리, 특성화 및 분화에 대한 프로토콜을 표준화하는 것입니다. 이 방법은 심장 줄기 세포 치료 및 심부전과 같은 심혈관 질환 및 지역 치료 분야에서 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 적은 기간에 높은 원조와 비용 효과적이라는 것입니다.프로토콜에 설명된 바와 같이 멸균 된 상태에서 필요한 모든 재료, 계측기 및 격리 버퍼를 준비하여이 실험을 시작합니다. 안락사 마우스의 복부에서 피부를 제거 한 후, 흉부 구멍을 열 멸균 후드 내부의 흉곽을 잘라. 심장을 노출한 다음 1 밀리리터 주사기를 사용하여 심장 근처의 혈액을 제거합니다.심장 근처의 혈액을 제거하려면 얼음 차가운 PBS로 주변 지역을 씻으하십시오. 외과 가위와 핀셋을 사용하여 심장을 해부하고 10 밀리리터 얼음 차가운 PBS가 들어있는 100 mm 페트리 접시에 놓습니다. 구부러진 생크 집게를 사용하여 심장을 마비시키고 심장 내부의 잔류 혈액을 제거합니다.4~5개의 고립된 하트를 얼음 차가운 햄의 균형 잡힌 소금 용액 10밀리리터가 들어있는 100밀리리터 페트리 접시로 옮춥니까. 그들을 씻고 심장 안쪽에 잔류 혈액을 제거하기 위해 다시 마음을 망가. 혈액을 완전히 제거하려면 세척 할 때마다 HBSS 용액을 변경하십시오.각 심장에 집게를 들고 수술용 블레이드를 사용하여 각 심장을 100mm 페트리 접시에 5~7밀리리터를 함유한 페트리 접시에 2~4밀리미터 조각으로 자른다. 완전한 혈액 제거를 보장하기 위해 용액을 자주 변경합니다. 마지막으로 HBSS 솔루션에서 하트를 다진다.50밀리리터 원원형 튜브에 50밀리리터 원원형 튜브에 배치된 다진 하트를 500회 G, 섭씨 4도에서 5분간 원심분리한 다음 상퍼를 폐기합니다. 조직을 소화하기 위해 펠릿에 5~6밀리리터, 0.2%의 콜라게나아제 II 용액을 첨가합니다. 45~60분 동안 섭씨 37도에서 셰이커에 튜브를 75회 흔들어 펠릿을 철저히 정지시합니다.20-30분마다 손으로 튜브를 힘차게 흔들어 서다. 5밀리리터 세로지컬 파이펫을 사용하여 lysed 조직 믹스를 트리투레이하고, 1밀리리터 파이펫 팁을 사용하여 단일 세포 현탁액으로 조직 덩어리를 해리시화합니다. 조직의 효소 용액을 중지하려면, lysed 조직의 부피만큼 시판되는 CSC 유지 보수 매체의 2 ~3 배를 추가하십시오.소화되지 않은 조직 조각을 제거하기 위해 50 밀리리터 원내 튜브에 놓인 100 마이크로미터 세포 스트레이너를 통해 소화된 세포 현탁액을 전달합니다. 세포를 구밀도 원심 분리로 분리하려면 섭씨 37도, 예열된 다각형 및 디아트리조아테 용액을 50밀리리터 원추형 튜브에 추가합니다. 그런 다음 두 솔루션의 혼합을 피하면서 용액에 동일한 양의 여과를 부드럽게 천천히 추가합니다.45도에서 튜브를 기울여 튜브를 튜브 벽에 기울이면 혼합하지 않고 천천히 다각형 및 나트륨 디아트리조아테 용액위에 여과물을 추가하는 것이 중요합니다. 여과 위에 다각형 및 나트륨 디아트리조아테 용액을 첨가하지 마십시오. 튜브를 스윙 버킷 원심분리기에 매우 천천히 배치하여 솔루션을 방해하지 않도록 합니다.원심분리기는 2개의 용액을 혼합하지 않도록, 그리고 심장 줄기 세포의 적절한 분리를 위해 낮은 가속 및 감속 속도로 설정된 실온에서 20분 동안 500배 G에서. 원심분리기의 방해 없이 그라데이션 솔루션을 매우 신중하게 넣는 것이 중요합니다. 원심분리기의 가속과 감속은 하나 또는 0과 같은 가장 낮은 속도에 있어야 합니다.1mm 파이펫을 사용하여 CSC가 함유된 버피 코트를 상부 층에서 15밀리리터 멸균 튜브로 추가 용액으로 전송합니다. 동일한 양의 CSC 유지 보수 매체를 추가하고 제대로 혼합하여 잔류 다당류 및 나트륨 디아트리조아테 용액을 중화시합니다. 원심 분리기는 섭씨 4도에서 5분 동안 500배 G로 이 서스펜션을 사용한다.상부체를 폐기합니다. 불완전한 DMEM 솔루션으로 CSC의 세척을 적어도 두 번 반복하십시오. 원심분리기는 섭씨 4도에서 500회 G로 잔류 다각형 및 디아트리조아테 나트륨 용액을 제거합니다.상체를 제거한 후, 정제된 CSC를 함유한 펠릿을 1밀리리터 CSC 유지 보수 매체로 회수한 다음 세포를 계산합니다. CSC는 0.5%의 섬유네틴을 함유한 0.02%의 젤라틴 용액으로 코팅된 6웰 배양 판에 CSC를 시드하고 완전한 유지 보수 매체의 2밀리리터를 추가합니다. 5%의 CO2에서 섭씨 37도에서 세포를 성장시면 됩니다.CSC 배양이 합류에 도달하면 텍스트 프로토콜에 설명된 바와 같이 세포를 새로운 젤라틴 및 섬유넥틴 코팅 플레이트로 이송합니다. 문화권은 P0 CSC를 컨실루까지 5%의 CO2 인큐베이터에서 섭씨 37도의 완전한 CSC 유지 보수 매체로 전송했습니다. 추가 실험에 사용할 수 있는 P1 CSC를 만들기 위해 새 플레이트로 셀 전송을 반복합니다.초기 단계에서 CSC 배양을 유지하려면 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 셀을 더 시드합니다. 배양 된 세포를 특성화하기 위해, 형광 현미경의 목표에 플레이트를 포함하는 CSC를 배치합니다. 10배 배율을 사용하여 셀에 초점을 맞춥니다.세포를 관찰하려면 위상 대비 조리개를 사용하고 객관적인 렌즈를 변경하여 배율을 20배로 늘린 다음 CS를 이미지화합니다. 면역 염색을 수행 한 후, 형광 현미경 아래에 배양 판을 놓습니다. 다른 배율에 세포를 집중하고, 위상 대비 및 상이 다른 여기 필터하에서 세포를 관찰하고, 이미지를 저장합니다.세포 분화를 위해, 섭씨 37도, 미리 따뜻해지는 CSC 유지 보수 매체의 2밀리리터로 6웰 플레이트에서 CSC를 성장시다. 세포가 80 ~95%의 합류에 도달하면 유지 보수 매체를 섭씨 37도, 미리 따뜻워진 심근세포 분화 매체로 교체하십시오. 섭씨 37도에서 최대 2~3주 동안 5%의 CO2로 배양합니다.2~3일마다 분화 매체를 변경합니다. 중간 변화 동안, 좋은 배양 조건을 보장하기 위해 현미경으로 세포 형태를 관찰한다. 12일 후, 표준 면역염색 프로토콜에 따라 분화 마커에 대한 세포를 이미지화한다.2~3일 배양된 CSC는 위상 대비 현미경하에서 관찰될 때 스핀들 모양의 형태를 보여줍니다. 문화의 7 일 후, 그들은 길어지고 형태에 변화를 보여줍니다. 자발성 마커에 대한 면역 염색 후, CSC는 OCT4, SOX2 및 나노그의 발현을 보여줍니다.또한, CSC는 배양 배지에서 확산되고, 증식 마커 Ki67을 표현한다. CSC의 심장 기원을 특성화하기 위해 심장 마커의 발현을 검사하고 세포는 심장 마커 Sca-1, NKX2.5 및 GATA4에 대해 양성인 것으로 나타났다. 12일 동안 심근세포 분화 배지에서 배양한 후, 차별화된 CSCs는 ACTIN, 및 TROPONIN-I의 심근세포 마커의 발현을 보여준다.이 절차를 시도하는 동안 그라데이션 솔루션과 여과율을 혼합하지 않는 것이 중요합니다. 가속과 감속을 최저 속도로 설정하는 것도 중요합니다. 누구든지 오염하는 사람은 생물 안전 캐비닛 내부의 모든 세포 격리 공정을 수행하는 것이 좋습니다.이 절차에 따라, 자기 비드 기반 분리 또는 유동 세포 세포 선별 방법과 같은 다른 방법은 심장 줄기 세포의 균일 한 인구와 같은 추가 질문에 대답하기 위해 수행 될 수있다? 심장 줄기 세포의 균열 반경은 큰 마커이며 심근 세포에 대한 차이가 있습니다. 개발 후, 이 기술은 종종 허혈성 심부전의 재생 치료에 중요 할 수있는 마우스 심장에서 심장 줄기 세포의 높은 수율을 심혈관 질환의 분야에서 연구원을위한 길을 열 것입니다.수술용 블레이드, 표백제 및 DMSO와 함께 일하는 것은 위험할 수 있으며, 이 절차를 수행하는 동안 인력 보호 장비인 PPE를 사용하는 것과 같은 예방 조치를 취해야 합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

여기서 우리는 랑겐 관류 시스템을 사용하여 성인 마우스 된 심근의 분리에 대해 설명합니다. 얻어진 세포 + 내성 전기적 무부하 외 Ca2이며 배양 및 아데노 - 또는 유전자 발현을 조작하기 lentiviruses로 형질 감염 될 수있다. 그 기능 또한 MMSYS 시스템 및 패치 클램프 기술을 이용하여 분석 될 수있다.

절연, 문화, 그리고 성인 마우스 된 심근의 기능적 특성

야생형 마우스와 돌연변이 마우스의 개별 심근세포는 수축성과 칼슘 과도 상태를 연구하기 위해 심장에서 분리할 수 있습니다. 이를 통해 모든 원인에서 심장 기능 장애에 대한 세포 기능 장애의 기여도를 특성화할 수 있습니다.

마우스 심근의 분리 및 생리 학적 분석

우리는 성인 마우스 심근의 분리를 위해 신뢰할 수있는 방법에 대해 설명합니다. 이 프로토콜은 유전자 변형 마우스의 다양한 기능에서 성인 심근의 문화에 대한 일관성있는 결과를 얻을 수 있습니다.

분리 및 문화 성인 마우스 세포 신호 전달 용의 Cardiomyocytes과의<em&gt; 시험관</em&gt; 심장 비대

이 프로토콜은 높은 수율, 순도 및 생존력을 가진 성체 마우스 심근세포의 재현 가능한 분리 및 장기 배양을 위한 단계별 방법을 설명합니다.

격리, 문화 및 성인 마우스 심근 세포의 형질 도입

인간의 심장 조직 심근 재생에 적합 할 수있는 다 능성 혈관 주위 전구체 세포 집단을 항구. 주연 세포와 CD34 + CD146 - - 외막 세포, 인간 심근에서 여기에 설명 된 기술은 원시 혈관, 즉 CD34 + CD146와 연관된 두 능성 간질 세포 집단의 동시 분리 및 정제를 허용한다.

인간의 심장 조직에서 혈관 주위 능성 전구체 세포 집단의 분리

방법은 패치 클램프 전기 생리학 또는 이미징 연구를위한 성인 마우스의 동방 노드 근육 세포 (SAM을)의 분리를 위해 증명된다. 분리 된 세포를 직접 사용할 수 또는 부호화 유전자 리포터로서 관심 단백질의 발현을 허용하는 배양에서 유지 될 수있다.

성인 마우스에서 동방 노드 근육 세포의 분리, 문화 및 기능 특성화하는 방법

이 프로토콜은 청크 소화 접근법을 사용하여 성인 마우스 심장으로부터 단일 심방 심근세포를 분리하는 데 사용됩니다. 이 접근법은 패치 클램프 연구에서 심방 근세포 전기 생리학을 특성화하는 데 사용할 수 있는 우측 또는 좌심방 근세포를 분리하는 데 사용됩니다.

성인 마우스에서 심방 근세포의 격리

섬유아세포의 순수한 인구를 얻는 것은 상처 수선 및 섬유증에 있는 그들의 역할을 공부하는 것이 중요합니다. 여기에 기재된 상세한 방법은 면역형광, RTPCR, 형광 보조 세포 선별에 의한 순도 및 기능성의 특성화에 이어 부상을 입지 않은 마우스 하트로부터 섬유아세포 및 근섬유아세포를 분리하는 상세한 방법이며, 콜라겐 젤 수축.

성인 심장 섬유 아세포 및 근섬유 아세포의 격리 및 특성화

단일 성인 마우스 심장의 심실과 심실 모두에서 심근세포 및 비근구의 동시 절연을 위한 방법이 설명된다. 이 프로토콜은 매우 실행 가능한 심장 심근세포 및 비 근구세포의 일관된 수율을 초래하고 페노티핑 및 체외 분석을 위한 최적의 세포 별 배양 조건을 자세히 설명합니다.

성인용 마우스 심장에서 심방 심근 세포, 심실 심근 세포 및 비근구의 동시 격리 및 문화

여기에서 우리는 세포핵 준비를 설명하는 프로토콜을 제시합니다. 심장 조직을 단일 세포로 미세 해부 및 효소 해리한 후, 전구 세포를 동결한 다음, 순수 생존 세포를 분리하여 단일 핵 RNA 시퀀싱 및 고처리량 시퀀싱 분석을 통한 전이효소 접근 가능한 염색질에 대한 단일 핵 분석에 사용했습니다.

단일 세포 분해능에서 후성유전체 및 유전자 발현 프로파일링을 위한 마우스 심장 전구 세포에서 핵 분리

배우세요 성인 마우스 심장에서 심장 줄기 세포를 분리하고 특성화하며 분화시키는 표준화된 프로토콜을 사용하는 방법을. 이 비용 효율적인 기술은 심혈관 질환 및 심부전 연구에 중요한 통찰을 제공합니다.

절연, 특성, 및 성인 마우스 심장에서 심장 줄기 세포의 분화

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