Name: Avaliar efeitos Neuroprotective do Glycyrrhizae Radix et Rhizoma extrair usando um modelo de Mouse de oclusão transitória de artéria Cerebral média (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Aprenda a avaliar efeitos neuroprotetores do extrato de Glycyrrhizae Radix et Rhizoma em modelo de AVC com oclusão da artéria cerebral média em camundongos. Este método reduz volume de infarto e melhora reprodutibilidade.

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Todos os procedimentos que envolvam animais foram aprovados pelo Comitê de ética da Universidade Nacional de Pusan (número de aprovação, PNU-2016-1087). Uma visão geral gráfica deste estudo é mostrada na Figura 1.
1. preparação e administração de GRex
Nota: O GR utilizado neste estudo foi comprado de uma empresa farmacêutica comercial.
<ol><li>Coloque 200 g de GR em 2.000 mL de metanol e incubar a temperatura ambiente (25 ° C) por 5 dias.</li>
	<li>Filtrar a mistura usando papel de filtro com 0,26 mm de espessura e tamanho de poros de 5 µm e em seguida, remover o sobrenadante. Adicione 1.000 mL de metanol ao resíduo GR e filtrar novamente.</li>
	<li>Combinar os dois sobrenadantes, filtrar por papel de filtro, concentrar-se sob vácuo e em seguida congela o resíduo para produzir GRex.</li>
	<li>Dissolver o GRex em dimetilsulfóxido (DMSO), diluir com soro fisiológico 0,9% e filtrar através de um filtro de seringa de 0,45 µm. Em seguida, ajuste a concentração final de DMSO a < 5%.</li>
	<li>Administre GRex (300 mg/kg de peso corporal) 1 h após a reperfusão de MCAO via oral gavage. Administre DMSO diluída em soro fisiológico (10 mL/kg de peso corporal) só para o grupo normal e grupos de controle, respectivamente. Nota: A concentração de GRex usado neste experimento foi determinada de acordo com a concentração que foi ativa através de nossa anterior estudo8.</li>
</ol>2. Mouse modelo de MCAO
<ol><li>Camundongos C57BL/6 machos de uso com idades entre 6 semanas e pesando 22-25 g. fornecer a todos os animais com acesso gratuito ao chow padrão e água e casa-los em um ambiente com temperatura controlada (22 ± 1 ° C) e um ciclo claro/escuro de 12 h.<ol>
<li>Divida os ratos em grupos de seis ratos cada, que devem consistir de GRex grupos de tratamento, controle e operação normal.</li>
		<li>Realizar a cirurgia MCAO (modificação do método de Koizumi et al 9) no controle e tratamento de GRex grupos usando um estereoscópio.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Induzi a anestesia por inalação em ratos usando 2% de isoflurano em 70% N2O e 30% O2. Anestesia é considerada suficiente quando o mouse se torna não responde a estímulos mecânicos aplicados a sua cauda. Manter a temperatura do corpo dos ratos a 36,5 ± 0,5 ° C, com um corpo de temperatura-terra arrendada cobertor conectado a um termômetro.</li>
	<li>Remover todos os pelos no peito e pescoços dos ratos de corte seguido pelo uso de creme depilatório, desinfectar o local cirúrgico da pele com esfoliante de betadine, alternando com álcool por duas vezes e então fazem uma incisão de aproximadamente 2 cm de comprimento com cirúrgica lâmina no centro do pescoço. Cuidadosamente, isole a artéria carótida comum esquerda (LCCA), artéria carótida externa e o ramo da artéria carótida interna de tecidos conectivos circundantes.</li>
	<li>Ligar a artéria carótida externa e artéria carótida comum com uma sutura cirúrgica (sutura de seda 4-0, half hitch nó) para bloquear temporariamente o fluxo sanguíneo na artéria carótida interna durante a operação.</li>
	<li>Inserir uma sutura de silicone revestido de nylon (monofilamento 8-0, 11 mm de comprimento) através da artéria carótida interna para a origem do MCA a esquerda. Ajustar a espessura da parte do silicone revestido do filamento de uma gama de 0,10-0.12 mm.</li>
	<li>Medir a diminuição do fluxo sanguíneo cerebral relativo (rCBF) no MCA usando um medidor de fluxo Doppler laser. MCAO será confirmada quando o rCBF é mantida no < 20% dos valores de condição de descanso durante todo o período de isquemia.</li>
	<li>Corrigir o filamento inserido para o vaso sanguíneo para 2 h, enquanto a artéria cerebral é obstruída e em seguida, Retire cuidadosamente o filamento para restaurar o fluxo de sangue para 22 h de reperfusão. Sutura da pele por costura em 5 lugares (sutura de seda 3-0, dois engates meio nó) e permitir que cada mouse para despertar da anestesia.</li>
	<li>No grupo normal, realizar uma operação de Souza, seguindo o mesmo procedimento acima (até 2.4), com a seguinte exceção. Ligar a artéria carótida comum e suturar a incisão no músculo e pele.</li>
</ol>3. a medição do Volume de tecido cerebral danificado
<ol><li>Após eutanásia dos ratos para medição de danos cerebrais com inalação de CO2 , impostos especiais de consumo o mouse cérebros 24 h após o início da MCAO usando uma tesoura cirúrgica íris e pinça angular.<ol>
<li>Depois de retirar a cabeça com uma tesoura, fazer uma incisão na pele na linha média da cabeça virar a pele do crânio.</li>
		<li>Quebrar os ossos parietais com pinça angular, descascando dura matéria ao mesmo tempo e então isolar o cérebro cuidadosamente do crânio.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Corte o tecido excisado em seções (1 mm de espessura) usando uma matriz de cérebro de rato e em seguida mancha as seções para 17 min em uma solução de cloreto de 2,3,5-triphenyltetrazolium de 2% (TTC).</li>
	<li>Corrigir as seções em formol a 10% pelo menos 2h e então fotografá-los usando uma câmera digital. TTC será observado para manchar o tecido viável vermelha enquanto que as áreas de necrose será brancas.</li>
	<li>Analisar e quantificar a área de infarto cerebral de cada seção usando o ImageJ.</li>
</ol>4. hematoxilina e eosina (H & E) e cresilo coloração violeta de cortes histológicos
<ol><li>Eutanásia por inalação de CO2 em ratos para estudo histológico e perfundi-los transcardially com 10 mL de tampão fosfato salino (PBS), seguido por 10 mL de paraformaldeído 4% (PFA). Isolar o cérebro usando o mesmo procedimento acima (3.1) e mergulhe o cérebro em 10 mL de 30% de sacarose durante a noite.</li>
	<li>Incorporar o tecido cerebral no ideal da temperatura de corte (OCT) composto e cortá-lo em seções de 15 µm de espessura usando um criostato. Monte as seções em lâminas de vidro, seguidas de coloração com hematoxilina e eosina (H & E) ou cresilo violetas.</li>
	<li>Imergir as lâminas de vidro em etanol a 80% por 1 min, seguido de coloração na solução de hematoxilina por 5 min.<ol>
<li>Mergulhe os slides em álcool ácido 1% duas vezes, mergulhe na solução saturada de carbonato de lítio por 30 s, lave com água da torneira por 30 s e em seguida corante de contraste em solução de eosina por 30 s.</li>
		<li>Lavar as lâminas em água da torneira, mergulhe em 95% e etanol absoluto consecutivamente.</li>
		<li>Secar ao ar livre os slides, eliminá-los em xilol pelo menos 10 min e montar as lamelas usando o meio de montagem.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Coloque as lâminas de vidro em um slide mais quente pelo menos 1 h, seguido de imersão em etanol a 50% diluída com clorofórmio durante a noite.<ol>
<li>Mancha os slides com violeta de cresilo 0,1% por 10 min em forno seco de 40 ° C.</li>
		<li>Mergulhe em etanol a 95% por 30 min e, em seguida, desidrata-se em etanol absoluto por 2 vezes.</li>
		<li>Clear 2 vezes em xilol por 5 min e, em seguida, montar com meio de montagem após a secagem do ar.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Usando um microscópio, observe as alterações histológicas que ocorreram após a lesão cerebral induzida por MCAO.</li>
</ol>5. análise estatística
<ol><li>Expressar os resultados experimentais como meios ± desvio-padrão e determinar a significância estatística entre os grupos usando um só de ida de análise de variância (ANOVA) seguido de análise post hoc de Tukey usando um software de análise de dados.</li>
	<li>Definir a significância estatística em um p-valor < 0,05.</li>
</ol>

<ol><li>Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rising+stroke+incidence+in+young+adults%3A+more+epidemiological+evidence%2C+more+questions+to+be+answered%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered.</a> Journal of the American Heart Association. 11 (5), (2016).</li>
<li>Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+inhibition+of+hydrogen+sulfide+synthesis+on+ischemic+injury+and+oxidative+stress+biomarkers+in+a+transient+model+of+focal+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stroke+and+Cerebrovascular+Diseases%22%5BJournal%5D)">Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24 (12), 2676-2684 (2015).</li>
<li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Article+in+Handbook+of+Clinical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemic stroke.</a> Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).</li>
<li>Kim, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+of+Stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+and+Neurorehabilitation%22%5BJournal%5D)">Animal Models of Stroke.</a> Brain and Neurorehabilitation. 4 (1), 1-11 (2011).</li>
<li>Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+exploration+of+licorice+metabolome%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">A new exploration of licorice metabolome.</a> Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).</li>
<li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+determination+of+flavonoids+in+licorice+and+comparison+of+three+licorice+species%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Separation+Science%22%5BJournal%5D)">Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species.</a> Journal of Separation Science. 39 (3), 473-482 (2016).</li>
<li>Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herbological+study+on+the+medicinal+effects+of+roasted+licorice+and+honey-roasted+licorice%5BTitle%5D)+AND+%22Yakushigaku+Zasshi%22%5BJournal%5D)">Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice.</a> Yakushigaku Zasshi. 50 (1), 38-45 (2015).</li>
<li>Lim, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Licorice+pretreatment+protects+against+brain+damage+induced+by+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Medicinal+Food%22%5BJournal%5D)">Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Journal of Medicinal Food. 21 (5), 474-480 (2018).</li>
<li>Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema%5BTitle%5D)+AND+%22Nosotchu%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema.</a> Nosotchu. 8 (1), 1-8 (1986).</li>
<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li>
<li>Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+unbiased+estimation+of+neuronal+number+in+the+rat+hippocampus+with+different+staining+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods.</a> Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).</li>
<li>Alberts, M. J., Ovbiagele, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+strategies+for+ischemic+stroke+prevention%3A+role+of+multimodal+combination+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies.</a> Journal of Neurology. 254 (10), 1414-1426 (2007).</li>
<li>Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrovascular+risk+factors+and+clinical+classification+of+strokes%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Vascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes.</a> Seminars in Vascular Medicine. 4 (3), 287-303 (2004).</li>
<li>Barlow, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+the+brain+regions+associated+with+acute+spasticity+in+patients+diagnosed+with+an+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Somatosensory+and+Motor+Research%22%5BJournal%5D)">Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke.</a> Somatosensory and Motor Research. 33 (2), 1-8 (2016).</li>
<li>Roth, S., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke+research+at+the+crossroads+-+where+are+we+heading%5BTitle%5D)+AND+%22Swiss+Medical+Weekly%22%5BJournal%5D)">Stroke research at the crossroads - where are we heading.</a> Swiss Medical Weekly. 146, 14329(2016).</li>
<li>Feuerstein, G. Z., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Today%22%5BJournal%5D)">Animal models of stroke.</a> Molecular Medicine Today. 6 (3), 133-135 (2000).</li>
<li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+stroke%3A+translational+potential+at+present+and+in+2050%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Neurology%22%5BJournal%5D)">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9 (5), 541-551 (2014).</li>
<li>Kumar, A., Gupta Aakriti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+animal+models+of+stroke%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">A review on animal models of stroke: an update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li>
<li>O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((History+of+animal+models+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Stroke%22%5BJournal%5D)">History of animal models of stroke.</a> International Journal of Stroke. 6 (1), 77-78 (2011).</li>
<li>Ji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioactive+constituents+of+Glycyrrhiza+uralensis+%28licorice%29%3A+discovery+of+the+effective+components+of+a+traditional+herbal+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine.</a> Journal of Natural Products. 79 (2), 281-292 (2016).</li>
<li>Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pharmacological+activities+of+licorice%5BTitle%5D)+AND+%22Planta+Medica%22%5BJournal%5D)">The pharmacological activities of licorice.</a> Planta Medica. 81 (18), 1654-1669 (2015).</li>
<li>Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-inflammatory+activity+of+licorice%2C+a+widely+used+Chinese+herb%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Biology%22%5BJournal%5D)">The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb.</a> Pharmaceutical Biology. 55 (1), 5-18 (2017).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Com o aumento da prevalência de doenças metabólicas como hipertensão crônica, diabetes e hiperlipidemia, quais são os principais fatores de risco para AVC, tratamento e prevenção de acidente vascular cerebral tornaram-se uma importante área de pesquisa médica12, 13. déficits na linguagem e movimento após um acidente vascular cerebral estão fortemente correlacionados com o grau de dano ao tecido14 no cérebro e resultar em uma pobre qualidad...

Danos cerebrais causados por isquemia e reperfusão do fluxo sanguíneo cerebral leva à morte das células nervosas e perda de tecido cerebral. Este tipo de dano cerebral continua a aumentar com o aumento da prevalência de doenças cerebrovasculares, devido à propagação de doenças metabólicas como obesidade, hipertensão arterial e diabetes mellitus1,2. O número absoluto de pacientes idosos com acidente vascular cerebral tem aumentado drasticamente em todo o mundo, e o custo da assistência médica para estes pacientes, que muitas vezes são deixados com deficiência a longo prazo, é um grande fardo societal. Portanto, a deficiência secundária deve ser atenuada tanto quanto possível para reduzir o encargo económico1,2.
O modelo de roedor mais comumente usado de infarto cerebral é o modelo de oclusão (MCAO) de artéria cerebral média (MCA), no qual o MCA é obstruído com um filamento de silicone revestido cirúrgico sutura para bloquear o fluxo sanguíneo, causando acidente vascular cerebral isquêmico3, 4. usando um filamento, como o material de oclusão permite o controle do tempo de oclusão e permanência manipulando-se a duração da inserção do filamento intra-luminal.
Estudos anteriores mostraram que, mesmo quando é usado o mesmo modelo MCAO de roedores, o volume total de infarto cerebral varia entre experimentos, causando baixa reprodutibilidade dos estudos. Para melhorar a reprodutibilidade, nós aperfeiçoamos a espessura do filamento mint utilizado no experimento. Os resultados de um estudo preliminar sobre o período de isquemia cerebral e infarto induzido mostrou que mais de 60 min e um período isquêmico permitido região volumétrica de danificado tecido cerebral para ser observada e quantificada.
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GR), também conhecida como alcaçuz, consiste nas raízes secas e rizomas de Glycyrrhiza uralensis e g. glabra. Ela tem sido usada na medicina tradicional chinesa e coreana para diversos fins, inclusive como um aditivo alimentar e medicinalmente5,6,7.
Em um anterior estudo8, pré-tratamento com GR extrato de metanol (GRex) mostrou um efeito antiapoptose em ratos MCAO, incluindo significativa prevenção da diminuição na expressão de proteínas de linfoma de célula B 2 (Bcl-2) e Bcl extra-grande (Bcl-xL). Este estudo foi realizado para melhorar a reprodutibilidade do modelo convencional de rato MCAO avaliando sua eficiência em determinar se o tratamento pós-infarto com GRex efetivamente reduziu o volume de infarto em dano cerebral induzida por MCAO.

<table><tbody><tr><td>Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td><td>Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Coreia</td><td></td><td>Glycyrrhizae Radix et Rhizoma</td></tr><tr><td>Papel de filtro qualitativo</td><td>Advantec</td><td>Papel de filtro nº 2</td><td>Papel de filtro qualitativo</td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>Sigma</td><td>D8418-250ML</td><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td></tr><tr><td>Filtro de seringa (0,45 &micro; m)</td> <td>Filtro</td> de seringa <td>Sigma CLS431220</td><td>(0,45 &micro; m)</td></tr> <tr><td>Microscópio Estéreo</td><td>Leica</td><td>M50</td><td>Microscópio Estéreo</td></tr><tr><td>Microscópio Estéreo</td><td>Nikon</td><td>SMZ745</td><td>Microscópio Estéreo</td></tr><tr><td>Laser Doppler</td><td>Moor Instrumento</td><td>moorVMS-LDF</td><td>Laser Doppler</td></tr> Anestesia Suporte de <tr><td>Mesa com N2O& Sistema de medidor de vazão de O2</td><td>Harvard Appratus</td><td>34-1352</td><td>Suporte de mesa de anestesia com N2O& Sistema de medidor de vazão de O2</td></tr><tr><td>Sistema de monitoramento homeotérmico</td><td>Harvard Appratus</td><td>55-7020</td><td>Sistema de monitoramento homeotérmico</td></tr><tr><td>Câmera digital</td><td>Canon</td><td>Eos-M2</td><td>Câmera digital</td></tr><tr><td>Criostato</td><td>Leica</td><td>CM3050S</td><td>Microscópio criostato</td></tr><tr><td></td><td>Carl Zeiss</td><td>Zeiss Axio</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio Análise de dados</td><td>Systat Software Inc.</td><td>SigmaPlot versão 12</td><td>Análise de</td></tr><tr><td>Dados Análise de Dados</td><td>NIH Image</td><td>ImageJ</td><td>Análise de Dados</td></tr><tr><td>Dieta de rato</td><td>Doo Yeol Biotech</td><td>Ração padrão para roedores</td><td>Dieta de rato</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>JOONGWAE</td><td>A02104781</td><td>Isoflurano</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>TROIKAA</td><td>ISOTROY 100</td><td>Isoflurano</td></tr><tr><td>Sutura de seda (4-0 Seda preta)&nbsp;</td><td>AILEE</td><td>SK47510</td><td>Sutura de seda (4-0 Seda preta)&nbsp;</td></tr><tr><td>Sutura de seda (3-0 Seda branca)&nbsp;</td><td>Sutura de seda Baekjae</td><td>57</td><td>(3-0 Seda branca)&nbsp;</td></tr><tr><td>Sutura de nylon (monofilamento 8-0)&nbsp;</td><td>AILEE</td><td>NB825</td><td>Sutura de nylon (monofilamento 8-0)&nbsp;</td></tr><tr><td>Cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC)</td><td>Sigma</td><td>T8877-25G</td><td>Cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC)</td></tr><tr><td>Formalina (solução de formaldeído)</td><td>JUNSEI</td><td>69360-1263 20KG</td><td>Formalina (solução de formaldeído)</td></tr><tr><td>Hematoxilina (Harris Hematoxilina)</td><td>YD Diagnostics</td><td>EasyStain</td><td>Hematoxilina (Harris Hematoxilina)</td></tr><tr><td>Eosina (Solução de Eosina Y a 1%)</td><td>MUTO PURE CHEMICALS</td><td>3200-2</td><td>Eosina (Solução de 1% de Eosina Y)</td></tr><tr><td>Violeta de Cresil (acetato)</td><td>Sigma</td><td>C5042-10G</td><td>Violeta de Cresil (acetato)</td></tr><tr><td>Paraformaldeído&nbsp;</td><td>Paraformaldeído</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148-1KG</td></tr><tr><td>Sacarose</td><td>JUNSEI</td><td>31365-0350 1KG</td><td>Sacarose</td></tr><tr><td>Temperatura de corte ideal (OCT) composto</td><td>Scigen</td><td>4583</td><td>Temperatura de corte ideal (OCT) composto</td></tr><tr><td>Faca de dissecação Ferramentas de</td><td>ciência fina</td><td>10055-12</td><td>Faca de dissecação</td></tr> <tr><td># 4 Fórceps</td> Ferramentas <td>de ciências finas</td><td>11241-30</td> <td># 4 Fórceps</td></tr> <tr><td># 5 Fórceps</td><td>Ferramentas de ciências finas</td><td>11254-20</td><td># 5 Fórx</td></tr> <tr><td># 6 Fórceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11260-20</td> <td># 6 Fórx</td></tr> <tr><td># 7 Fine Forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>11274-20</td> <td># 7 Pinça Fina</td></tr><tr><td>Tesoura Cirúrgica</td><td>Fine Science Tools</td><td>14001-12</td><td>Tesoura</td></tr><tr><td>Cirúrgica Tesoura Bonn Extra Fina</td><td>Ferramentas de Ciências Finas</td><td>14084-08</td><td>Tesoura Bonn Extra Fina</td></tr><tr><td>Moria Pascheff-Wolff Spring Tesoura</td><td>Fine Science Tools</td><td>15371-92</td><td>Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors</td></tr><tr><td>Vessel Dilating Forcep</td><td>Fine Science Tools</td><td>18153-11</td><td>Vessel Dilating Forcep</td></tr></tbody></table>

avaliar efeitos neuroprotective do glycyrrhizae radix et rhizoma extrair usando um modelo de mouse de oclusão transitória de artéria cerebral média

Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model

Isquemia seguida de reperfusão do fluxo sanguíneo cerebral após um acidente vascular cerebral leva à morte das células nervosas e perda de tecido cerebral. O modelo animal mais comumente usado para estudar o curso é o modelo de oclusão (MCAO) da artéria cerebral média. Estudos anteriores relataram tamanhos diferentes de infarto mesmo quando a mesma espécie de animal experimental foi utilizada em condições similares MCAO. Portanto, nós desenvolvemos um método experimental melhorado para resolver esta discrepância. Os ratos foram submetidos a MCAO usando um filamento como o material de oclusão para imitar as condições do acidente vascular cerebral humano e espessura do filamento foi otimizada para estabelecer mais volume de infarto pode ser reproduzido. Camundongos tratados com um metanol extrair do Glycyrrhizae Radix et rizoma (GRex) após a indução de acidente vascular cerebral mostrou um volume de infarto total significativamente diminuída e aumento do número de sobreviventes de células em relação ao grupo controle não tratado. Este modificado com êxito o protocolo experimental e reproducibly demonstrado o efeito benéfico de GRex sobre acidente vascular cerebral isquêmico.

O grupo normal de operação, sem infarto cerebral observa-se Considerando que no grupo controle, observa-se uma gama relativamente ampla de áreas danificadas. Nos ratos, 300 mg/kg administrado GRex no grupo modelo MCAO, uma redução estatisticamente significativa na área danificada é observada (Figura 2).
As alterações histológicas são investigadas pela coloração de seções de isquemia cerebral com H &...

Neste estudo, nós modificamos um método experimental existente para obter resultados mais reprodutíveis, estabelecendo um modelo do rato (MCAO) de oclusão de artéria cerebral média. A administração oral de Glycyrrhizae Radix et extrato de metanol de rizoma (GR) (GRex), após indução de acidente vascular cerebral, diminuiu significativamente o volume de infarto total em relação ao grupo controle não tratado.

Avaliar efeitos Neuroprotective do Glycyrrhizae Radix et Rhizoma extrair usando um modelo de Mouse de oclusão transitória de artéria Cerebral média

Ischemia followed by reperfusion of cerebral blood flow after a stroke leads to the death of nerve cells and loss of brain tissue. The most commonly used ...

Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave nos campos de pesquisa de neurociência e medicina oral tradicional sobre a triagem de compostos naturais neuroprotetores relevantes para o Modelo. A principal vantagem dessa técnica é que a maior produtibilidade do volume de infecção está de acordo com a dose isquêmica de tempo. A demonstração visual deste método é fundamental, pois é típico inserir um implemento muito fino na artéria cerebelar média usando um microscópio estéril.Demonstrando o procedimento será Se-Eun Lee, uma aluna estudando no meu laboratório. Para preparar o extrato de Glycyrrhizae Radix et Rhizome, ou GRex, adicione primeiro 200 gramas de Glycyrrhizae Radix et Rhizome, ou GR, a dois litros de metanol para uma incubação de cinco dias à temperatura ambiente. No final da incubação, coe a solução através de papel filtro de 0,26 milímetros de espessura com um tamanho de poros de cinco milímetros.Adicione o resíduo GR a um litro de metanol fresco e filtre a solução novamente. Combine os dois filtros e coe-os através de um novo pedaço de papel filtro. Em seguida, concentre o extrato sob vácuo antes de secar congelante para produzir GRex.Para preparar o GRex para a

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Ligadura da artéria cerebral média (MCA) é uma técnica para estudo da isquemia cerebral focal em modelos animais. Neste método, o da artéria cerebral média é exposto por craniotomia e ligados por cauterização. Este método dá volumes infarto altamente reprodutível e aumentou as taxas de sobrevivência pós-operatória em comparação com outros métodos disponíveis.

A aplicação de ligadura da artéria Cerebral Média Permanente no mouse

Fonte: Zheng, Y., et al. Modelos experimentais para estudar a neuroproteção do pós-condicionamento ácido contra isquemia cerebral. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demonstra a aplicação do pós-condicionamento ácido (APC) para avaliar seus efeitos neuroprotetores contra lesão isquêmica em um modelo de camundongo de oclusão da artéria cerebral média (MCAO). Ele descreve as etapas envolvidas na reperfusão no modelo MCAO e a aplicação de APC durante a reperfusão para mitigar a excitotoxicidade, o...

 Avaliação dos efeitos neuroprotetores do pós-condicionamento ácido em um modelo de camundongo com isquemia cerebral

Fonte: Lee, S. E., et al. Avaliação dos efeitos neuroprotetores do extrato de Glycyrrhizae Radix et Rhizoma usando um modelo transitório de camundongo com oclusão da artéria cerebral média. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra o procedimento para avaliar o efeito neuroprotetor de um composto de teste em um modelo de camundongo com oclusão da artéria cerebral média. O composto entra no cérebro, previne a morte neuronal e reduz o volume do infarto, confirmando seu efeito neuroprotetor em...

Avaliando os efeitos neuroprotetores de um composto de teste em um modelo de camundongo com oclusão da artéria cerebral média

Este protocolo descreve o pré-condicionamento hipóxico repetitivo ou breves exposições à hipóxia sistêmica que reduzem os volumes de infarto e a ruptura da barreira hematoencefálica após oclusão transitória da artéria cerebral média em camundongos. Ele também detalha a quantificação dupla do volume do infarto e da ruptura da barreira hematoencefálica após o AVC para avaliar a eficácia da proteção neurovascular.

Quantificação de Proteção Neurovascular sequência repetitiva Hypoxic Pré-condicionamento e Transient Oriente oclusão da artéria cerebral em ratos

A fim de compreender a patofisiologia de acidente vascular cerebral, é importante o uso de modelos fiáveis. Este documento descreve um dos modelos de AVC mais utilizados em camundongos, denominado o meio modelo de oclusão da artéria cerebral (MCAo) (também denominado o filamento intraluminal ou modelo de sutura) com a reperfusão.

Abordagem cirúrgica para oclusão da artéria cerebral média e reperfusão induzida por acidente vascular cerebral em ratos

oclusão cirúrgica de um ramo distal da artéria cerebral média (MCAo) é um modelo usado com freqüência em pesquisa acidente vascular cerebral experimental. Este manuscrito descreve a técnica básica de MCAo permanente, combinada com a inserção de uma janela craniana lateral, que oferece a oportunidade para microscopia intravital longitudinal em ratinhos.

Lateral Crônica Cranial Janela Preparação Ativa In Vivo Observação Após Distal Middle Cerebral Oclusão da Artéria em Ratos

Descrevemos um modelo de camundongo de AVC induzido pela oclusão da artéria cerebral média usando uma sutura revestida de silicone. O protocolo pode ser aplicado para induzir oclusão permanente ou isquemia temporária, seguida de reperfusão.

Indução de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico e isquemia-reperfusão em ratos usando a técnica de oclusão da artéria Oriente e Visualização de infarto Área

Aqui, descrevemos um modelo de camundongo de isquemia de retina por oclusão da artéria carótida comum bilateral transitória usando suturas simples e um grampo. Este modelo pode ser útil para entender os mecanismos patológicos da isquemia da retina causada por anormalidades cardiovasculares.

Um modelo murino de lesão isquêmica da retina induzida pela oclusão da artéria da carótida comum bilateral transitória

Este protocolo demonstra um modelo único de acidente vascular cerebral em camundongo com um infarto de tamanho médio e uma excelente taxa de sobrevida. Esse modelo permite que os pesquisadores pré-clínicos do AVC estendam a duração da isquemia, usem camundongos envelhecidos e avaliem os resultados funcionais a longo prazo.

Modelo de Oclusão Transcraniana da Artéria Cerebral Média Modificada para Estudo de Resultados de Acidente Vascular Cerebral em Camundongos Idosos

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de oclusão da artéria cerebral média distal (dMCAO) por meio de eletrocoagulação transcraniana em camundongos C57BL/6J e avaliar o comportamento neurológico subsequente e as características histopatológicas.

Indução de AVC Isquêmico Agudo em Camundongos Usando a Técnica de Oclusão Distal da Artéria Média

Aprenda a avaliar efeitos neuroprotetores do extrato de Glycyrrhizae Radix et Rhizoma em modelo de AVC com oclusão da artéria cerebral média em camundongos. Este método reduz volume de infarto e melhora reprodutibilidade.

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Avaliar efeitos Neuroprotective do Glycyrrhizae Radix et Rhizoma extrair usando um modelo de Mouse de oclusão transitória de artéria Cerebral média

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