Name: Um novo método simples para a medição de Lipofilicidade (logP) usando 19espectroscopia RMN de F (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-30T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 32 s
Description: Aprenda a medir lipofilicidade (logP) de compostos fluorados usando espectroscopia de RMN de 19F. Este método simplificado não exige pureza total, medições de massa exatas ou curvas de calibração, sendo ideal para pesquisa em química medicinal.

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Esta pesquisa é financiada como parte do EPSRC concede EP/K016938/1 e EP/P019943/1 (ZW, HRF) e de um prêmio de conversão caso EPSRC/AstraZeneca (BFJ). Universidade de Southampton é agradeceu apoio adicional. O EPSRC é agradeceu ainda mais para uma concessão de capacidade de núcleo EP/K039466/1.

1. particionamento
<ol><li>Adicionar 4,4,4-trifluorobutan-1-ol (composto X, ca. 6,0 mg) e 2, 2,2-trifluoroethanol (referência composto, ca. 3,0 mg) para um balão em forma de pera com 10 mL, dissolver em n- octanol (grau HPLC, ca. 2 mL) e adicionar água (grau HPLC, ca. 2 mL). Nota: Este experimento é executado em triplicado. Composto solubilidade em água e n- octanol deve ser verificada. A quantidade do composto usado para partição deve ser considerada com cuidado para evitar supersaturação do composto em qualquer camada. A proporção de massa entre compostos X e referência ref composto também deve ser considerado para evitar que os rácios integrantes de uma determinada amostra NMR são fora um intervalo de 10/1 a 1/10. Por exemplo, se há uma diferença de < 2 unidades logarítmicasP entre compostos X e ref, óptima relação massa posso assegurar que os rácios de integração em amostras de água e 1-octanol NMR são dentro de um intervalo de 10/1 a 1/10. Em contrapartida, se uma relação de integração de 50/1 em uma camada é obtida, haverá mais prováveis relativamente maiores erros na integração para o pico com concentração mais baixa. A equação abaixo pode ser usada para prever a óptima relação massa composta: mX / mref = {(cP X/Pref)-0,5 * (MX/ Mref) * [(1 + cPX) / (1 + Pref)]} / (NX / Nref) m, em massa; M, massa molecular; N, o número de átomos de F; P, coeficientes de partição; cP, coeficientes de partição calculado.</li>
	<li>Coloque os frascos dentro de um recipiente de temperatura controlada, acima de um stirplate e se conectar a um chiller de recirculação. Agite a mistura bifásica a 25 ° C, durante 2 h, com agitando a velocidade de 600 rpm.</li>
	<li>Equilibrar a mistura a 25 ° C durante a noite (ca. 16 h), para permitir a separação completa fase. Nota: Em alguns casos, a formação de uma espuma entre a n- octanol e água limite pode ser observada. Neste caso, a mistura foi transferida para um frasco de vidro de 4 mL e centrifugada até o desaparecimento da espuma. A mistura bifásica foi então esquerda para equilibrar novamente a 25 ° C durante a noite.</li>
</ol>2. preparação da amostra NMR
<ol><li>Corrigi o frasco a um carrinho de retorta com uma pinça.</li>
	<li>Tirar uma alíquota de ca. 0,70-0,85 mL da água e n- octanol camadas, usando seringas de plástico descartáveis de 1ml com agulhas longas.<ol>
<li>Para tomar a água alíquota, desenhe ca. 0,02 mL de ar para a seringa antes de colocar a agulha na mistura. Ao mover a agulha através da superior n- octanol camada camada de água, empurre suavemente para fora o ar para impedir a entrada da agulha de n- octanol solução.</li>
		<li>Retire a agulha longa da mistura. Descarte uma pequena quantidade de amostra de água, deixando ca. 0,6 mL de amostra de esquerda na seringa. Cuidadosamente Limpe a agulha com pano seco e injetar ca. 0,5 mL de amostra de água em um tubo limpo de NMR. Feche rapidamente o tubo NMR com um boné.</li>
		<li>Para a amostra de n- octanol, retire a agulha longa da camada n- octanol. Descarte uma pequena quantidade de amostra de n- octanol, deixando ca. 0,6 mL de amostra de esquerda na seringa. Cuidadosamente Limpe a agulha com o tecido seco e injetar ca. 0,5 mL de n- octanol amostra em um tubo limpo de NMR. Feche rapidamente o tubo NMR com um boné.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Inspecione visualmente as duas amostras de n- octanol e água para qualquer contaminação (EG., pequenas gotas de n- octanol em amostra de água ou pequenas gotas de água na amostra de n- octanol). Nota: Se houver qualquer contaminação, a alíquota amostra precisa ser re-preparado a mistura bifásica. Como a medição é feita em triplicado, obtêm-se seis tubos NMR.</li>
	<li>A cada tubo NMR, adicionar 0,1 mL de solvente deuterado NMR é miscível com água e n- octanol (EG., acetona-d6) para habilitar o bloqueio de sinal durante a aquisição de NMR.</li>
	<li>Para compostos com pontos de ebulição baixos (EG., < 120 ° C), selar os tubos NMR usando um maçarico e, após resfriamento, inverta o tubo para verificar se há fugas. Cuidadosamente, invertido que o NMR selada ou não seladas tubos 20 vezes para obter uma solução homogénea para 19F NMR experiências.</li>
</ol>3. NMR experimentos
<ol><li>Executar, usando as configurações padrão do parâmetro NMR (NS 64, D1 1 s, SW 300 ppm, O1P-100 ppm), experiências de NMR F {1H} 19para identificar mudanças químicas de 4,4,4-trifluorobutan-1-ol (composto X) e 2, 2,2-trifluoroethanol (composto de referência) em ambos os n amostras de NMR - octanol e água.</li>
	<li>Medir o tempo de relaxação spin-lattice (T1) para núcleos de flúor diagnóstico usando uma sequência de inversão-recuperação22. Medir o nível de tempo de atraso de pulso apropriada (D1, definido como ≥ 5 * T1) dos valores obtidos de T1 para integração de NMR quantitativo preciso. Nota: Isto é muito demorado, mas uma D1 de 60 s para a amostra de fase da água e de 30 s para a amostra de fase octanol, são configurações conservadoras que cumprirá com segurança o D1 ≥ 5 * T1 criterium.</li>
	<li>Executar 19experiências NMR F {1H} novamente com ajustado as configurações de parâmetros como segue: um) uso D1 ≥ 5 * T1; b) a frequência de centro deslocamento ponto (O1P) entre os dois sinais de diagnóstico flúor, então ambos os núcleos podem ser igualmente animados; c) definir a largura espectral (SW) como 300 ppm, mas reduzir-se uma melhor relação SNR se necessário; d) definir o número de transientes (NS) como 64 mas aumentar se SNR superior é exigido. Nota: Não-dissociado 19F NMR experimentos podem ser usados também para aquisição de dados NMR. No entanto, dissociados de próton 19F NMR experimentos são preferidos aqui como simplifica os sinais de flúor através da remoção de acoplamentos de próton-flúor, que também aumenta a relação sinal-ruído. Nós usamos o inverso-bloqueadas dissociação para obter um espectro dissociado sem nOe (nuclear Overhauser efeito) melhorias23. Para integração quantitativa, uma relação sinal-ruído (≥300) é desejada. 24
</li>
</ol>4. processamento de dados
<ol><li>Processe os dados obtidos usando ACD/NMR processador Academic Edition ou outro software de processamento personalizado NMR.<ol>
<li>Abra o arquivo de dados NMR e, em seguida, abra a pasta pdata , seguida de pasta 1. Exclua o arquivo 1r .</li>
		<li>Retornar ao arquivo de dados NMR e arraste o arquivo fid para a janela ACD/NMR processador.</li>
		<li>Clique no botão WFunctions , selecione exponencial, defina o valor LB como 2e clique no botão OK .</li>
		<li>Clique no botão Preenchimento Zero , aumentar a Contagem de pontos para 4 vezes de sua Contagem de pontos Original clicando em um pequeno botão ao lado do número e clique o Okey botão.</li>
		<li>Clique no botão de Fourier TR.. .</li>
		<li>Clique no botão de fase , então clique no botão do Mouse PhD , clique e mantenha pressionado o botão esquerdo do mouse, mova o mouse para a frente ou para trás até os maiores picos do espectro é corretamente em fases.<ol>
<li>Clique e mantenha pressionado o botão direito do mouse, mova o mouse para a frente ou para trás até que a outra técnica do espectro é corretamente em fases. Em seguida, desmarque o botão do Mouse PhD , ampliar a área espectral com os picos de flúor, clique em Sintonia fina, realizar a correção de fase, se necessário, conforme descrito anteriormente, até que todos os picos estão corretamente em fases e, em seguida, clique o carrapato botão.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Clique no botão de linha de base , em seguida, o botão Opções . Selecione Uma média de espectro para modelos automáticos, ajuste o número de pontos para a caixa a metade da largura, se necessário (em especial para o espectro com baixa relação S/R), clique em Okey | Autoe, em seguida, clique no botão de carrapato .</li>
		<li>Clique em integração, integrar os picos de diagnóstico flúor e clique no botão de carrapato . Nota: Se a curva integral não é paralela à linha de base, clique no botão de Corr. de Bias e ajustar a inclinação e a inclinação até a curva é paralela à linha de base.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Obter as relações de integração de n- octanol e água NMR amostras e usar a equação de cálculo logP (Figura 1, EQ. 4) para obter o valor de logP de 4,4,4-trifluorobutan-1-ol (composto X).</li>
</ol>

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</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

O protocolo descrito no documento é um método simples para logP medição de compostos fluorados. Este método é aplicável a compostos fluorados com um logP valor de -3 a 3. Para obter mais hidrófila (logP < -3) ou compostos lipofílicos (logP > 3), este método pode ainda ser usado, mas vai exigir muito mais tempo de experiência NMR como número alargado de transientes é necessárias para obter uma boa relação sinal-ruído. Portanto, esta é uma limitação do método. Não há nenhuma exigência pa...

Lipofilicidade é um parâmetro chave e físico-químico das moléculas de drogas que influencia as propriedades de candidatos da droga em muitos aspectos, incluindo a solubilidade da droga, biodisponibilidade e toxicidade1. Lipofilicidade é medida como o logaritmo (logP) da razão de concentrações de compostos após particionamento entre n-octanol e água. Intervalos de Lipofilicidade ideal têm sido propostos com base em dados estatísticos de medicamentos administrados por via oral, de que a regra de Lipinski"de 5 ' é o mais famoso exemplo2,3. Com efeito, controlar Lipofilicidade mostrou para ser essencial para melhorar a perspectiva de candidatos da droga. Aumentando a afinidade de ligação da droga pela elevada Lipofilicidade foi identificado como um dos principais problemas em projetos de descoberta de drogas durante as últimas décadas, levando ao aumento do atrito taxas3. Portanto, sugeriu-se que o desenvolvimento de drogas bem sucedida é associado com manter a lipofilicidade molecular dos candidatos dentro dos limites ideais droga durante o processo de otimização do afinidade3,4. A esse respeito, novos conceitos (tais como índices de eficiência lipofílicos) foram introduzidos5,6.
Assim, é de grande importância para medir com precisão a lipofilicidade durante o processo de desenvolvimento de drogas. Além disso, a disponibilidade de métodos simples para medição Lipofilicidade está na demanda como investigação fundamental visa identificar soluções para logP modulação. Actualmente, numerosos métodos estabelecidos são acessíveis para Lipofilicidade determinação1. O método de 'agitar-aferido (SF)'7e suas variações são comumente empregadas para medir valores logP diretamente, o que, na maioria dos casos, dependem de espectroscopia UV-Vis para quantificação. A principal desvantagem deste método clássico de SF é a sua natureza de trabalho intensiva. Além disso, pode ocorrer a formação de emulsões, especialmente para compostos altamente lipofílicos8,9. Vários métodos foram desenvolvidos para contornar esses problemas, tais como utilizando análise de injeção de fluxo, tubulação da diálise, etc. 9,10. No entanto, nenhum desses métodos são simples ou facilmente aplicável em laboratórios não especializados.
Existem também muitos métodos indiretos disponíveis para uso, tais como titulação potenciométrica11métodos eletroforética12,13, métodos cromatográficos baseados em RP-HPLC, métodos baseados em massa-espectrometria de14, etc. Estes são os métodos indiretos, como os valores de logP são obtidos por curvas de calibração. Entre esses métodos, o método de RP-HPLC foi amplamente utilizado porque é fácil de usar e economia de tempo. No entanto, sua precisão depende do conjunto de treinamento usado para estabelecer a curva de calibração, e a lipofilicidade estimada depende a partição sistema utilizado13,15.
Há um número de métodos baseados em H NMR de 1relatados na literatura para determinação de Lipofilicidade. Et al . mo desenvolveu um método para a medição de logP usando 1H NMR sem solventes deuterados. Água e octanol, como solventes de partição, foram utilizados como referências para a quantificação da concentração de soluto em cada fase16. Heath e colegas de trabalho também relataram uma abordagem, por que o experimento de partição ocorreu diretamente num tubo NMR, onde os dados NMR da camada aquosa inferior D2O foram coletados antes e após a extração com o 1-octanol, para obter a distribuição coeficiente de17. Além disso, Soulsby et al explorados 1H NMR como uma ferramenta de análise, determinar a amplitude dos sinais por meio de redução completa ao software de tabela de frequência de amplitude. A relação entre as amplitudes em ambas as camadas que levou para o coeficiente de partição medido18. Estes métodos são relativamente simples de usar, mas muitas vezes requerem a calibração de pulsos seletivos e os níveis de energia ou o uso de em forma de pulsos de gradientes para garantir a supressão de solvente apropriado e seletividade do sinal.
Valores deP (Pde tamanco) log calculado para compostos também podem ser obtidos. Estão disponíveis vários métodos de cálculo e software comercialmente disponível. Tais valores de tamancoP são comumente usados na indústria farmacêutica, ao avaliar um grande número de moléculas de drogas. No entanto, grandes erros de entupirP valores não são incomuns19,20.
Os requisitos de UV-atividade para análise da concentração e o estabelecimento de curvas de calibração para cálculo de logP impedem o progresso de pesquisa neste campo. Em particular, este é o caso dos compostos alifáticos não-UV-ativas. Fluorados alifáticos metades tornaram-se cada vez mais atraentes para o design de drogas nos últimos anos, e sua influência na Lipofilicidade total do composto é um tópico de pesquisa em nosso grupo21. Além disso, 19F é um núcleo ativo de NMR altamente sensível, fazendo 19F NMR uma ferramenta útil para a análise de compostos fluorados. Ele também tem uma gama maior de shift química comparada com a de 1H. Portanto, vale a pena desenvolver um método simples para logP determinação de compostos fluorados UV-inativos por espectroscopia de RMN de F 19. Portanto, o objetivo geral deste método é conseguir a determinação Lipofilicidade conveniente de compostos fluorados.
O princípio-chave da nossa 19método baseado em F NMR é adicionar uma referência de fluorados composta na partição experimento (Figura 1)21. Compostos X e composto de referência (ref) são divididos entre água e n- octanol. Após desenroscada, uma alíquota de cada fase é levada em um tubo de NMR e 19F NMR experimentos são executados em ambas as amostras de NMR. A intensidade dos picos do flúor é proporcional aos compostos concentração (C) e o número de átomos de flúor (n) dos compostos. Entre compostos X e ref, rácios integrais podem ser obtidos por ambas as fases. A relação em n- octanol camada é definida como ρocte ρaq para a camada de água (EQ. 1). A relação dos valores ρ é igual a proporção dos coeficientes de partição (P) dos compostos X e ref (EQ. 2). Isto conduz à equação final (EQ. 4) para logP medição do composto X. Portanto, a fim de determinar o valor deP de um desconhecido X composto, rácios de integração somente (ρoct e ρaq) de log em ambas as camadas são necessárias para ser medido por 19F NMR.

<table><tbody><tr><td>RMN (400 MHz) com sonda Bruker SEF de 5 mm</td><td>Bruker</td><td>n/a</td><td>AVIIIHD400</td></tr><tr><td>RMN (400 MHz) com sonda SMART Bruker de 5 mm</td><td>Bruker</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Reator DrySyn Snowstorm</td><td>Chiller de recirculação Asynt</td><td>ADS13-S</td><td></td></tr><tr><td></td> Modelo <td>Asynt</td><td>n/a</td>:Placa de agitação magnética <td>Grant-LTC2</td></tr><tr><td></td><td>Asynt</td><td>ADS-HP-NT</td><td></td></tr><tr><td>Software do processador ACD/NMR</td><td>ACD/Labs</td><td>n/a</td><td>Processador ACD/NMR edição acadêmica ou processador ACD/Spectrus 2015</td></tr></tbody></table>

um novo método simples para a medição de lipofilicidade (logp) usando 19espectroscopia rmn de f

A New Straightforward Method for Lipophilicity (logP) Measurement using 19F NMR Spectroscopy

Fluoração tornou-se uma ferramenta eficaz para otimizar as propriedades físico-químicas de compostos bioativos. Uma das aplicações da introdução de flúor é de modular a lipofilicidade do composto. No nosso grupo, estamos interessados no estudo do impacto da fluoração na Lipofilicidade da fluorohydrins alifáticos e fluorados hidratos de carbono. Estes não são UV-ativo, resultando em uma determinação de Lipofilicidade desafiador. Aqui, apresentamos um método simples para a medição da Lipofilicidade de compostos fluorados por espectroscopia de RMN de F 19. Este método não requer nenhuma atividade-UV. Massa exata de soluto, solvente e alíquota volume também não são obrigados a ser medido. Usando esse método, Nós medimos as lipophilicities de um grande número de alkanols de gases fluorados e hidratos de carbono.

Dois conjuntos de dados, como controle de experimentos são mostrados na Figura 2,21. Usando 2, 2,2-trifluoroethanol como composto de referência, valores logP foram obtidos por 2-fluoroethanol e 3,3,3,2,2-pentafluoropropanol-0,75 e +1.20, respectivamente (Figura 2A). Posteriormente, a lipofilicidade da 2-fluoroethanol determinou-se novamente, mas com 3,3,3,2,2-pentafluoropropanol como a referência ...

Um romance e uma variação simples do método agitar-balão foi desenvolvido para a medição exata Lipofilicidade de compostos fluorados por espectroscopia de RMN de F 19.

Um novo método simples para a medição de Lipofilicidade (logP) usando 19espectroscopia RMN de F

Fluorination has become an effective tool to optimize physicochemical properties of bioactive compounds. One of the applications of fluorine introduction ...

Desenvolvemos um método simples para a medição da lipofphilicidade de compostos frenéticos usando RMR flúor que é árido o suficiente para reproduzir medimos pequenas diferenças na lipoffilia. Este método pode ser usado para estudar sistematicamente o impacto da formação de compostos orgânicos nas mudanças de lipofífilidade resolvidas, o que é de interesse na química medicinal geral. As vantagens deste método incluem que os compostos não têm que ser reativos, e eles não têm que ser completamente puros.Não há necessidade de medir a massa exata ou os volumes, e não há necessidade de estabelecer curvas de calibração. Deve-se escolher um composto de referência adequado e evitar a contaminação cruzada da alíquota durante a fase de amostragem. Neste vídeo, demonstraremos habilidades práticas apropriadas para amostragem, vedação de tubos NMR e uso correto de software NMR para processamento de dados.Adicione 6,0 miligramas de Composto X e 3,0 miligramas do Composto de Referência a um frasco em forma de pera de 10 mililitros. Dissolva os compostos em aproximadamente dois mililitros de n-Octanol de grau HPLC, e adicione dois mililitros de água de grau HPLC. Coloque os frascos dentro de um recipiente controlado pela temperatura acima de uma placa de mexida e conecte-se a um refrigerador recirculador.Mexa a mistura bifásica a 25 graus Celsius por duas horas, com velocidade de agitação a 600 RPM. Equilibre a mistura a 25 graus Celsius durante a noite para permitir a separação completa da fase. Fixar o frasco em uma bancada de réplica com um grampo.Pegue uma alíquota de aproximadamente 0,70 a 0,85 mililitros de ambas as camadas de água e n-Octanol usando uma seringa plástica descartável mililitro com agulhas longas. Para tomar a alíquota da água, desenhe aproximadamente 0,02 mililitros de ar na seringa antes de colocar a agulha na mistura. Ao mover a agulha através da camada n-Octanol superior para a camada de água, empurre suavemente o ar para evitar que a solução n-Octanol entre na agulha.Retire a agulha longa da mistura. Descarte uma pequena quantidade de água, deixando aproximadamente 0,6 mililitros de amostra deixados na seringa. Limpe cuidadosamente a agulha com tecido seco e injete aproximadamente 0,5 mililitros da amostra de água em um tubo NMR limpo.Feche rapidamente o tubo NMR com uma tampa. Para a amostra n-Octanol, remova a agulha longa da camada n-Octanol. Descarte uma pequena quantidade de amostra n-Octanol, deixando aproximadamente 0,6 mililitros de amostra deixadas na seringa.Depois de limpar cuidadosamente a agulha com tecido seco, injete aproximadamente 0,5 mililitros da amostra n-Octanol em um tubo NMR limpo. Feche rapidamente o tubo NMR com uma tampa. Inspecione visualmente amostras de n-Octanol e água para obter qualquer contaminação da outra fase.A cada tubo NMR, adicione 0,1 mililitros de um solvente NMR desuterado que é miscível tanto com n-Octanol quanto com água, para permitir o bloqueio de sinal durante a aquisição de NMR. Para compostos com baixos pontos de ebulição, sele os tubos NMR usando um maçarico e, após o resfriamento, inverta o tubo para verificar se há vazamentos. Inverta cuidadosamente os tubos NMR selados ou não selados 20 vezes para obter uma solução homogênea para experimentos de RMR F19.Execute experimentos de RMR de flúor dissociados de prótons para identificar mudanças químicas do Composto X e do Composto de Referência em amostras de N-Octanol e NMR de água. Use as configurações padrão do parâmetro NMR conforme listado no protocolo de texto. Meça o tempo de relaxamento de rede de spin, ou T1, para núcleos de flúor diagnóstico usando uma sequência de recuperação de inversão.Avalie o nível de tempo de atraso de pulso adequado dos valores T1 obtidos para uma integração quantitativa precisa de RMR. Execute um espectro F19 H1 rápido para configurar os parâmetros iniciais. Meça a largura de pulso de 90 graus e, em seguida, defina o parâmetro para o experimento de medição T1 e execute o experimento de medição T1 usando uma sequência de recuperação de inversão.Execute experimentos de RMR de flúor dissociados novamente com configurações de parâmetros ajustados. Defina D1 e centralizar o ponto de deslocamento de frequência entre os dois sinais de flúor diagnóstico para que ambos os núcleos possam ser igualmente animados. Além disso, defina a largura espectral como 300 PPM, e defina o número de transitórios para 64.Ajuste esses valores se for necessária uma maior relação sinal-ruído. Processe os dados obtidos usando o ACD NMR Processor Academic Edition ou outro software de processamento NMR personalizado. Abra o arquivo de dados NMR.Em seguida, abra a pasta pdata, seguida pela pasta 1. Exclua o arquivo 1r. Retorne ao arquivo de dados NMR e arraste o arquivo FID para a janela do processador ACD NMR.Clique no botão de função da janela, selecione exponencial, defina o valor de ampliação da linha como dois e clique no botão ok. Agora, clique no botão de preenchimento zero, aumente a contagem de pontos para quatro vezes da contagem de pontos original clicando em um pequeno botão ao lado do número e clique no botão ok. Selecione o botão de transformar fourier.Em seguida, clique no botão de fase e clique no botão de eliminação do mouse. Clique e segure o botão esquerdo do mouse e prossiga para mover o mouse para frente ou para trás até que o pico principal do espectro seja devidamente gradual. Agora, clique e segure o botão direito do mouse e mova o mouse para frente ou para trás até que os outros picos do espectro sejam devidamente gradualmente.Em seguida, desbocote o botão de esfinge do mouse e amplie na área espectral com os picos de flúor. Clique em ajuste fino, execute a correção de fase, se necessário, conforme descrito anteriormente e clique no botão tick. Clique no botão da linha de base e, em seguida, no botão opções.Selecione a média de espectro para modelos automáticos, ajuste o número de pontos para meia largura da caixa, se necessário. Clique bem, auto e clique no botão tick. Em seguida, clique em integração, integre os picos de flúor diagnóstico e clique no botão tick.Finalmente, obtenha as razões de integração das amostras N-Octanol e NMR de água e use-as na equação de cálculo logP para obter o valor logP do composto X.Usando 2, 2, 2-Trifluoroetanol como Composto de Referência, um valor logP de 0,75 foi obtido para dois fluoroetanol, e um valor logP de 1,20 positivo foi encontrado para 3, 3, 3, 2, 2-pentafluoropropanol. Posteriormente, a lipofilia de dois fluoroetanol foi determinada novamente, mas com 3, 3, 3, 2, 2-pentafluoropropanol como referência. O valor de logP medido foi de 0,76, que só teve diferença de 0,01 unidades logP quando comparado com o valor medido utilizando 2-2-2-trifluoroetanol como referência.Da mesma forma, para cis-2, 3-difluro-1, 4-butano-diol, a diferença nos valores de logP medidos usando dois fluoroetanol e seu trans-isômero são muito pequenos. Isso demonstra boa reprodutibilidade, e que a seleção do Composto de Referência não tem impacto na medição do logP. Exemplos selecionados adicionais são mostrados aqui.Todos esses compostos a fafáticos ativos não UV, desde carboidratos fluorados, até fluorohidrinas, podem ser facilmente medidos com este método. Outros métodos baseados em NMR podem ser usados se o composto não contiver flúor, e se o composto contiver Cromofor UV, então a medição do logP pode ser realizada usando quantificação UV. A lipoficidade de uma ampla gama de fluorohidrinas ativas não UV e carboidratos desoxifluoados foi medida.A biblioteca de dados obtida foi utilizada para estabelecer tendências e regras para o impacto da fluoretação alifática na lipofoficidade. Octanol e água representam riscos mínimos de segurança. É claro que os perigos que são medidos e o Composto de Referência devem ser sempre levados em consideração.

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Research

JoVE Journal

Chemistry

Química

Descrevemos um novo método lipidomics quantitativos para identificação de espécies de lipídios numerosos em levedura utilizando pesquisa scan-espectrometria de massa de ionização electrospray (ESI / MS). Este método ultrapassa atualmente os métodos disponíveis para identificação e quantificação de lipídios na capacidade de resolver diversas formas moleculares de lipídeos, sensibilidade e velocidade.

A avaliação quantitativa do Lipidome fermento usando Electrospray Espectrometria de Massa de Ionização

Este protocolo demonstrará a extração e análise de ácidos graxos bioativos livres e esterificados das células. Os ácidos graxos são quantificados com precisão usando diluição de isótopos estáveis, cromatografia líquida quiral, espectrometria de massa de monitoramento de reações múltiplas de ionização química atmosférica de captura de elétrons (SID-LC-ECAPCI-MRM/MS).

Extração de lipídeos celulares para Targeted diluição de isótopos estáveis ​​Líquido Análise Espectrometria de Massa-Cromatografia

Este artigo descreve métodos para marcação de spin dirigida ao local e reconstituição de canais controlados por ligantes pentaméricas para estudos de ressonância paramagnética eletrônica. Este protocolo pode ser adaptado para qualquer proteína de membrana. O método de reconstituição descrito aqui também pode ser usado para medições de patch clamp de correntes macroscópicas e de canal único em um sistema lipídico definido.

Local Dirigido Labeling rotação e EPR espectroscópicos Estudos de Canais pentamérica Ligand-Gated Ion

Aqui, de alta resolução de 1 H e 13 C de Ressonância Magnética Nuclear (RMN) foi usada como uma ferramenta rápido e fiável para a análise quantitativa e qualitativa dos suplementos de óleo de peixe encapsulado.

Espectroscopia de RMN como uma ferramenta robusta para a avaliação rápida do perfil lipídico do óleo de peixes suplementa

Uma técnica simples e non-destructive que mede o teor médio de substâncias de droga em medicamentos formulados contendo flúor usando o domínio do tempo da baixo-campo flúor-19 (19F) (TD) ressonância magnética nuclear (NMR) é aqui apresentada. A técnica pode ser aplicada para o desenvolvimento e a fabricação de medicamentos na indústria farmacêutica.

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Aqui, apresentamos um protocolo para a produção e purificação de proteínas que são rotulados com isótopos estáveis e posterior caracterização das interações da proteína-proteína usando espectroscopia de ressonância magnética Nuclear (RMN) e microescala Experimentos de Thermophoresis (MST).

Interações de proteínas globulares e filamentosas por espectroscopia de ressonância magnética Nuclear (NMR) e Thermophoresis de microescala (MST) de medição

Aqui, apresentamos um protocolo para estudar o mecanismo molecular de translocação de prótons através das membranas lipídicas de lipossomas único, usando citocromo bo3  como exemplo. Combinando a eletroquímica e microscopia de fluorescência, mudanças de pH no lúmen do única vesículas, contendo uma única ou várias enzimas, podem ser detectados e analisados individualmente.

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Aqui, descrevemos protocolos usando sensores lipídicos fluorescentes e lipossomos para determinar se uma proteína extrai e transporta fosfatidylserina ou fosfattidylinositol 4-fosfato in vitro.

Medidas baseadas em fluorescência de fosfatidaserina/fosfattidylinositol 4-fosfato troca entre membranas

Este artigo descreve os protocolos de preparação de amostras, redução de dados e análise de dados em estudos de eco de giro de nêutrons (NSE) de membranas lipídicas. A rotulagem criteriosa de deutério de lipídios permite o acesso a diferentes dinâmicas de membrana em comprimento mesoscópico e escalas de tempo, sobre as quais ocorrem processos biológicos vitais.

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Aqui, estabelecemos um método de análise quantitativa para quatro componentes em um sistema de entrega de RNA de nanopartículas lipídicas (LNP) usando cromatografia líquida de alta eficiência combinada com um detector de espalhamento de luz evaporativo (ELSD). O método tem boa separação, alta sensibilidade e alta eficiência.

Determinando quatro componentes em um sistema de entrega de RNA de nanopartículas lipídicas por cromatografia líquida combinada com detector de espalhamento de luz evaporativa

Aprenda a medir lipofilicidade (logP) de compostos fluorados usando espectroscopia de RMN de 19F. Este método simplificado não exige pureza total, medições de massa exatas ou curvas de calibração, sendo ideal para pesquisa em química medicinal.

Um novo método simples para a medição de Lipofilicidade (logP) usando ¹⁹espectroscopia RMN de F

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