Reconhecimento de objetos novos e localização de objeto comportamental testes em ratos em um orçamento

Aqui nós fornecemos um protocolo que inclui instruções abrangentes para o estabelecimento econômico da localização de murino objeto e objeto romance reconhecimento testes comportamentais, incluindo o custo, projeto e construção de equipamentos necessários, bem como execução de testes comportamentais, coleta de dados e análise.

Este método pode ajudar a responder perguntas-chave sobre regulação da memória. Por exemplo, determinamos o papel de proteínas específicas na memória testando camundongos transgênicos nessas tarefas. A principal vantagem dessa técnica é que é uma maneira rápida e econômica de realizar testes de memória em qualquer laboratório.

A demonstração da construção da arena é fundamental, pois a soldagem de solventes só trará resultados fortes se realizada com cuidado. Comece adquirindo cinco folhas de acrílico, cimento acrílico e um aplicador de hipo de 16 bitolas. Remova o revestimento de papel protetor das folhas acrílicas.

Em seguida, encaixe a seco todos os materiais para confirmar que os tamanhos estão corretos. Em seguida, monte e carregue a seringa com cimento acrílico. Alinhe a borda longa de uma parede externa com a borda superior da base e certifique-se de que eles são perpendiculares uns aos outros usando uma combinação ou quadrado maquinista.

Em seguida, use a seringa para aplicar uma pequena e constante série de cimento diretamente ao canto das duas peças que estão sendo unidas. Segure as duas peças no lugar por cinco minutos até que sejam inicialmente definidas. Repita os mesmos passos para anexar a outra parede externa à base.

Em seguida, anexar duas paredes internas, uma de cada vez, a base com cimento acrílico. Por fim, use a seringa para aplicar uma pequena e constante série de cimento diretamente ao canto que está sendo formado pela parede externa e pela parede interna. Inicie a sessão de habituação dividindo ratos em grupos de quatro, e abriga-os em gaiolas de exploração limpas individuais.

Em seguida, traga um grupo de ratos para a sala de testes e permita que eles se aclimatar por pelo menos 30 minutos. Após a aclimatação, comece a gravar o vídeo. Coloque cada rato na arena de frente para as paredes do canto de liberação, e permita que os ratos explorem as arenas livremente por seis minutos.

Em seguida, pare de gravar o vídeo e devolva os ratos às suas gaiolas limpas durante o intervalo de inter-ensaio. Limpe todas as arenas com métodos de limpeza recomendados por instalações animais, como limpar com 70% de etanol para minimizar as pistas olfativas. Finalmente, depois de completar um total de três sessões de habituação, devolva todos os ratos para suas gaiolas domésticas.

Após 24 horas, traga o mesmo grupo de ratos para a sala de testes, e permita que eles se aclimatem à sala de testes por pelo menos 30 minutos, como feito antes das sessões de habituação no dia anterior. Realize o teste de treinamento usando dois objetos colocados na arena. Afixar objetos com fita dupla face seis por seis centímetros de distância de dois cantos não-lançamento, de tal forma que eles são contrabalanceados na arena.

Permita que os ratos investiguem a arena e os objetos livremente por 10 minutos. Então pare a gravação de vídeo. Coloque os ratos de volta em suas gaiolas limpas por 20 minutos, e limpe as áreas com etanol.

Em seguida, para executar a tarefa de localização do objeto OLT, mova um dos objetos usados no teste de treinamento para um novo canto sem lançamento e afixe o objeto a seis centímetros de cada parede daquele canto com fita dupla face. Repita a mesma gravação de vídeo dos ratos na área por 10 minutos, como descrito anteriormente. Finalmente, para executar a nova tarefa de reconhecimento de objetos NORT, substitua o objeto que não foi movido durante o OLT por um novo objeto, e afixe o objeto novo a seis centímetros das duas paredes do canto com fita dupla face.

Repita a mesma gravação de vídeo dos ratos na área por 10 minutos, como descrito anteriormente. Durante o OLT, a memória para localização do objeto é refletida por um grupo de ratos gastando, em média, significativamente mais tempo com um objeto depois que ele se moveu. Isso também pode ser representado como um aumento do índice de discriminação.

No NORT, a memória para localização do objeto é refletida por um grupo de camundongos que gastam, em média, significativamente mais de 50% do tempo de investigação com o objeto novo ou mostrando um índice de discriminação significativamente maior que zero. Escolher objetos para os quais os ratos não têm preferência inerente é fundamental. Por exemplo, em um teste piloto com um tamanho amostral de quatro, os camundongos mostraram uma tendência para gastar menos de 50% do tempo de investigação com o objeto A quando emparelhados contra o objeto B.Quando o objeto A foi então usado como objeto novo em um NORT, com um tamanho amostral maior de 16, os ratos gastaram significativamente menos de 50% do tempo de investigação com o objeto A.Esses dados sugerem aversão inerente ao objeto A.Durante esse procedimento , é importante lembrar de limpar completamente todos os objetos e arenas entre o uso.

Neste método, a investigação de objetos pode ser pontuada manualmente por pesquisadores ou usando software comercial. O software tem custos iniciais mais altos, mas, uma vez calibrados, pode economizar tempo e recursos financeiros no longo prazo.