Name: Técnicas de biópsia da glândula mamária bovina (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 53 s
Description: Aprenda técnicas de biópsia da glândula mamária bovina usando instrumentos de agulha e núcleo para análise de expressão gênica e histologia. Este método minimamente invasivo permite estudos repetidos de fisiologia mamária em vacas leiteiras.

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Esta pesquisa foi apoiada pelo programa nacional de Nutrição Animal e Virginia Tech. A assistência técnica da Sra. Tara Pilonero, Dr. Julie Settlage e Dr. Izabelle Teixeira são reconhecidos com gratidão.

Todos os métodos descritos foram aprovados pelo Comitê de uso (IACUC) e Virginia Tech institucional Cuidado Animal.
1. o pessoal
<ol><li>Tem pelo menos dois assistentes com experiência cirúrgica e manipulação de vaca.</li>
	<li>Treine todos os assistentes, pelo menos três vezes, se possível, usando material cadavérico, antes de realizar procedimentos associados com este protocolo em animais vivos. Nota: O treinamento deve ser conduzido por um instrutor que tenha sido previamente treinado e executada a técnica.</li>
	<li>Tenho um grande animal veterinário na mão para administração de drogas e no evento que o tratamento de emergência torna-se necessário durante o procedimento. Emergências que possam ocorrer durante este procedimento incluem mas não estão limitadas a: hemorragia, overdose de α-2 agonista e edema pulmonar, regurgitação e aspiração do alimento material, dor e resistência paciente exigindo mais sedação.</li>
</ol>2. preparação dos instrumentos cirúrgicos, mantimentos e instalações
<ol><li>Inventário e comprar todos os equipamentos e suprimentos (ver Tabela de materiais).</li>
	<li>Limpo e cirúrgico drapeja autoclave, instrumentos de biópsia, titulares de bisturi, toalhas cirúrgicas e fórceps.</li>
	<li>Ter um tamanho adequado apertar para-quedas e portão de cabeça para conter as vacas.</li>
	<li>Estabelece um espaço de trabalho com uma mesa perto do para-quedas do aperto.</li>
	<li>Certifique-se que a área de trabalho é limpa e tem limitado a vaca através de tráfego.</li>
	<li>Organize e equipamentos no espaço de trabalho para facilitar o acesso.</li>
	<li>Tem iluminação apropriada dentro do espaço de trabalho.</li>
</ol>3. preparação dos animais
<ol><li>Um dia antes da biópsia regular, lave e esfregue o animal, particularmente o úbere para remover material suja e estrume.</li>
	<li>Siga os procedimentos para a contenção segura e humana de gado.</li>
	<li>Previamente a biópsia e novamente no momento da biópsia, avalie a saúde, a condição física e o comportamento do animal. Nota: Um exame mínimo inclui temperatura, pulso e taxas respiratórias, bem como exame para dermatite sobre o local cirúrgico proposto ou outras áreas de infecção bacteriana. Coletar amostras de leite de cada trimestre e verificar para mastite.</li>
	<li>Use apenas as vacas saudáveis.</li>
	<li>Completamente o leite da vaca.</li>
	<li>Mova o animal para o contentor de aperto, idealmente até 2 horas após a ordenha para minimizar a presença de leite nas glândulas.</li>
	<li>Conter o animal com um portão de cabeça.</li>
</ol>4. analgesia e sedação
<ol><li>Coloque um cabresto de corda na cabeça da vaca para impedir para trás e para frente o movimento.</li>
	<li>Puxe a cabeça do animal para um lado e amarrar a corda para o para-quedas aperto usando um nó de liberação rápida para segurar a cabeça no lugar.</li>
	<li>Limpe o local da injeção com um algodão com álcool isopropílico 70% e administrar por via intravenosa o flunixin meglumine (1,1 a 2,2 mg/kg de peso corporal) através do veia jugular 15-20 min antes para biópsia. Nota: em alguns protocolos, antiinflamatórios não-esteroides anti-inflamatórios não esteroides são administrados após a biópsia se drogas antiinflamatórias não afetará os resultados da investigação.<ol>
<li>Localize a veia jugular.</li>
		<li>Elevar a veia jugular por aplicação de pressão na base do sulco jugular.</li>
		<li>Verifique se que não há nenhum bolhas na seringa.</li>
		<li>Insira a agulha na veia jugular levantada e desenhar 0,5 mL de sangue para a seringa duas vezes e misturar com o conteúdo. Se não há sangue mostra na seringa, realoca a agulha. Se a agulha é residente na veia, injete o conteúdo.</li>
		<li>Remova cuidadosamente a agulha.</li>
		<li>Aplica gaze com ligeira pressão no local da injeção para evitar sangramento.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Administrar por via intravenosa o cloridrato de xilazina (0,01 a 0,05 mg/kg de peso corporal) no recipiente coccígeo aproximadamente 5-10 min antes da biópsia para permitir tempo suficiente para o estabelecimento de sedação. Atenção: Verifique se o animal para sinais de edema pulmonar. Os sinais clínicos de edema pulmonar incluem dificuldade respiratória, dispneia grave, dificuldades respiratórias, tosse, expectoração espumosa e língua azul. Se forem observados sinais de edema pulmonar, é recomendável usar tolazine (2 a 4 mg/kg de peso corporal) para reverter os efeitos de xilazina.
	<ol>
<li>Levantar o rabo e limpe o local da injeção com um algodão com álcool isopropílico 70%.</li>
		<li>Verifique se que não há nenhum bolhas na seringa.</li>
		<li>Insira a agulha no vaso a cauda, desenhar 0,2 mL de sangue para a seringa e misture com o conteúdo para assegurar que a agulha é residente no vaso. Se a agulha for residente no vaso, injete o conteúdo da seringa.</li>
		<li>Remova cuidadosamente a agulha.</li>
		<li>Aplica gaze com pressão suave para o local da injeção.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. preparação do local da biópsia
<ol><li>Tenho uma assistente que amarrar a cauda para o procedimento.</li>
	<li>Selecione o local da biopsia no úbere (tipicamente em uma área superior a minimizar a coleção de tecido conjuntivo e para evitar a penetração dentro da cisterna da glândula, Figura 1) e remover qualquer material sujo ou estrume do local da biopsia selecionado.</li>
</ol><img alt="Úbere de vaca com área marcada mostrando inflamação, indicando possível mastite." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig1v2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Figura 1 . Imagem do úbere bovino ilustrando o local da biopsia. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> 
<ol start="3"><li>Observar e palpar a pele com especial atenção para identificar qualquer grandes vasos subcutâneos para evitar estes navios durante a biópsia.</li>
	<li>Corte o cabelo de uma área de 15 x 15 cm em torno do local da biópsia.</li>
	<li>Prepare a área de biópsia com iodo-povidona (0,75% de iodo disponível) ou esfoliação de gluconato de clorexidina. Alternam-se com álcool isopropílico a 70% pelo menos três vezes para remover todos os resíduos visíveis e invisíveis. Aplica a solução esfoliante asséptico e álcool isopropílico em movimentos circulares usando a abordagem de dentro para fora. Certifique-se de que a solução anti-séptica esfoliante permanece em contacto com a pele pelo menos 5 min.</li>
	<li>Use uma conjunto com uma agulha de 18 G de infusão de borboleta para depositar 6 mL de cloridrato de lidocaína a 2% por via subcutânea no local da incisão, para criar um linha-bloco. Não penetra os tecidos mais profundos. Nota: A dosagem de lidocaína varia entre 3 e 8 mL.</li>
	<li>Permitir que o anestésico local difundir para 3 a 5 min. realizar outra repetição de solução esfoliante e álcool antes da incisão. Enquanto espera, prepare-se os instrumentos de biópsia.</li>
</ol>6. a biópsia
<ol><li>Utilize técnicas assépticas quando manusear as ferramentas de biópsia e para a incisão.</li>
	<li>Lave as mãos para remover a contaminação visível todas e aplicar luvas cirúrgicas estéreis.</li>
	<li>Disponha os instrumentos cirúrgicos em uma área estéril em ordem de uso. Tenho um bisturi número 10, gaze estéril, um instrumento de biópsia montado e uma toalha estéril para hemostasia. Nota: Siga o procedimento 1, para realizar uma biópsia do núcleo ou procedimento 2 para realizar uma biópsia de agulha.
</li>
</ol><img alt="Diagrama de montagem de um sistema de cromatografia; componentes marcados e numerados para o processo de separação de DNA." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> Figura 2 . Representação esquemática da montagem e instalação da ferramenta de biópsia de núcleo descrita por V. C. Farr, et al 9 barra de escala é 1 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig2large.jpg" target="_blank">clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<ol start="4"><li>Instrumento de biópsia do núcleo (Farr et al.9)<ol>
<li>Monte o instrumento de biópsia do núcleo usando luvas estéreis (Figura 2).<ol>
<li>Coloque os 7 pedaços de estéril sobre um pano estéril (Figura 2A).</li>
			<li>Coloque a lâmina (parte 1) no sistema de acoplagem na parte 2 (Figura 2B ). Atenção: Não coloque os dedos diretamente na linha de lâmina.
</li>
			<li>Inserir parte 3 sobre parte 2 (Figura 2), garantindo que a docking station alinhará. Nota: Observe um sistema de encaixe na parede interior da parte 4 (Figura 2D).</li>
			<li>Encaixe a extremidade final da lâmina (parte 1) no sistema de acoplagem da peça 4 (Figura 2D).</li>
			<li>Empurre para a frente a parte 4 e observar se a parte 4 está ao lado de parte 3 (Figura 2E).</li>
			<li>Insira a peça 5 no dispositivo (blade + parte 2) (Figura 2F).</li>
			<li>Certifique-se de que a docking station está alinhada (Figura 2).</li>
			<li>Insira o topo da peça 2 peça 6 (lado oposto da lâmina) (Figura 2 H)</li>
			<li>Certifique-se de que a docking station está alinhada (Figura 2 H).</li>
			<li>Insira o parafuso de bloqueio (parte 7) na estação de ancoragem (Figura 2I).</li>
			<li>Empurre para a frente, parte 3 (preto) para cobrir o parafuso de bloqueio. Atenção: Não coloque os dedos sobre a saída de lâmina.
</li>
			<li>Ativar a ferramenta empurrar para a frente a parte 4 e observar a lâmina fora a ferramenta.</li>
			<li>Puxe a parte 4 para retrair a lâmina na ferramenta (pronta para uso). Nota: A lâmina deve ser ativada somente quando a ferramenta penetrou a distância desejada dentro do tecido a biopsar.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Certifique-se que a vaca está suficientemente sedada e no local da biópsia é suficientemente anestesiado. Belisca a pele para não garantir nenhuma reação.</li>
		<li>Faça uma incisão vertical de 2 a 3 cm, através da pele e tecidos subcutâneos de proximal para distal, usando um bisturi número 10.</li>
		<li>Anexe o instrumento de biópsia a um berbequim, usando uma técnica estéril.</li>
		<li>Coloque a broca contra a ferramenta de biópsia e verifique se a ferramenta está firmemente acoplada ao perfurador.</li>
		<li>Assegure a contenção adequada por ter um indivíduo elevar a cauda durante todo o procedimento.</li>
		<li>Liga a furadeira, usando a rotação no sentido horário e baixa velocidade. Nota: A broca não é estéril, e o operador não permaneça estéril quando usando a broca.</li>
		<li>Avance a ferramenta toda biópsia (cerca de 7,5 cm) para o úbere através da incisão enquanto a broca é rodar o pedágio.</li>
		<li>Desligue a broca e estender manualmente parte 4 da ferramenta.</li>
		<li>Liga a furadeira, usando a rotação no sentido horário e baixa velocidade.</li>
		<li>Retire o instrumento que contém o núcleo do tecido do úbere.</li>
		<li>Aplique pressão forte imediatamente o ferimento com uma toalha estéril pelo menos 20 min. Nota: Tem uma assistente executar esta usando seu punho para garantir a adequada pressão é aplicada.</li>
		<li>Remova o tecido da ferramenta de biópsia usando uma pinça.</li>
		<li>Manter a amostra em 1 tamponado de fosfato x salina e avaliar a quantidade de tecido.</li>
		<li>Tirar os sinais vitais da vaca cada 10min após a biópsia pelo menos 30 min.</li>
		<li>Verifique se há sangramento depois de 20 min de pressão no local da biopsia. Se existem pingos de sangue continuam a aplicar pressão para um adicional 5-10 min.</li>
		<li>Feche as incisões usando grampos de aço inoxidável em intervalos de 5 mm, afinal a hemorragia parou. Usar entre 5 e 8 grampos.</li>
		<li>Aplica um curativo de aerossol para a área da biópsia.</li>
		<li>Observe o animal durante 50 minutos após o procedimento.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Instrumento de biópsia de agulha
	<ol>
<li>Siga as instruções do fabricante para o dispositivo.</li>
		<li>Retire a agulha de biopsia do pacote usando técnicas estéreis.</li>
		<li>Descarte a agulha se observar qualquer dano.</li>
		<li>Fixe a agulha no dispositivo.</li>
		<li>Feche a tampa e galo o dispositivo.</li>
		<li>Certifique-se que a vaca está suficientemente sedada e no local da biópsia é suficientemente anestesiado. Belisca a pele para não garantir nenhuma reação.</li>
		<li>Faça uma incisão vertical de 1 a 2 cm, através da pele e tecidos subcutâneos de proximal para distal, usando um bisturi número 10. Nota: A incisão para o instrumento de agulha de biópsia pode ser menor (1-2 cm) do que para o instrumento de biópsia do núcleo.</li>
		<li>Insira a agulha de biópsia no local da incisão (cerca de 10 a 13 cm de pele).</li>
		<li>Ative o dispositivo de agulha de biopsia para coletar o tecido.</li>
		<li>Retire a agulha do úbere.</li>
		<li>Aplique uma pressão imediata e forte da ferida usando uma toalha estéril pelo menos 20 min.</li>
		<li>Remova o tecido da agulha de biopsia usando uma pinça.</li>
		<li>Manter a amostra em 1 tamponado de fosfato x salina e avaliar a quantidade de tecido.</li>
		<li>Leve os sinais vitais cada 10min após a biópsia pelo menos 30 min.</li>
		<li>Verifique se há sangramento depois de 20 min de pressão no local da biopsia.</li>
		<li>Feche as incisões usando grampos de aço inoxidável, afinal a hemorragia parou.</li>
		<li>Aplica um curativo de aerossol para a área da biópsia.</li>
		<li>Observe o animal durante 50 minutos após o procedimento.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. pós-biópsia cuidados com animais
<ol><li>Documente todas as drogas administradas aos animais. Nota: O leite foi Descartado durante um período de 36 h após o procedimento; retirada de carne foi 4 d. intervalos de segurança para leite e carne podem variar consoante o país ou jurisdição e as drogas usadas. Por favor, verifique as regras locais e regulamentos.</li>
	<li>Verificar a presença de sangue no leite por 7 a 10 d depois da biópsia.</li>
	<li>Mão de coágulos de sangue tira do bairro uma biópsia no ordenhas subsequentes e certifique-se de que o leite completo remoção ocorre. Nota: A presença de coágulos de sangue do bairro uma biópsia para ordenhas de 1-3 o procedimento a seguir é esperada. Sangue no leite pode ser observados para 1 a 6 d depois da biópsia.</li>
	<li>Observar o leite rende, e se possível, o individual diário alimenta ingestão até grampos cirúrgicos foram removidos.</li>
	<li>Monitore o animal duas vezes por dia para a temperatura do corpo, respiração e taxas de coração e comportamento até grampos cirúrgicos foram removidos.</li>
	<li>Verifique o local da biopsia duas vezes ao dia para inchaço, ternura e todos os sinais de drenagem até os grampos cirúrgicos foram removidos. Se estas forem observadas, consulte um veterinário. Nota: Limpe o local da biopsia e reaplicar o curativo de aerossol cada um a três dias, conforme necessário.</li>
	<li>Retire os grampos do local da incisão de 10 a 14 d após a biópsia, dependendo da taxa de cura.</li>
	<li>Consulte um veterinário, se forem observados sinais de infecção local ou sistêmica.</li>
</ol>

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<li>Soberon, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+increased+milking+frequency+on+metabolism+and+mammary+cell+proliferation+in+Holstein+dairy+cows%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Science%22%5BJournal%5D)">Effects of increased milking frequency on metabolism and mammary cell proliferation in Holstein dairy cows.</a> Journal of Dairy Science. 93 (2), 565-573 (2010).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Métodos de biópsia Core e agulha foram descritos no presente protocolo9,16. Uma avaliação detalhada da saúde animal e incidência de mastite14 antes da biópsia é necessária para ambos os procedimentos. Para fins de pesquisa, realizando a técnica em animais com sinais evidentes de inflamação ou doenças infecciosas deve ser evitado. Isso reduzirá o risco de complicações durante e após uma biópsia. Todos os dispositivos e instrumentos de biópsia devem ser limpos, desinfectados e esterilizados para evitar a contaminação do local da biopsia. Antes do procedimento, é necessário minimizar infecções do sítio cirúrgico (SSI). Em geral, a SSI está associada com morbidade animal, perdido desempenho e custos de produção mais elevados em vacas leiteiras. Estudos anteriormente relataram métodos para evitar a SSI devido à biópsia incluindo recorte o cabelo em torno do local da incisão, lavando a área de biópsia para remover contaminação9,14e usando agentes anti-séptico (álcool 70%, iodo cirúrgico Esfregue-se9, de solução de acetato de clorexidina 2%14, 10% de iodo-povidona8) para a preparação da pele. Em alguns estudos, a administração de antibióticos foi adotada durante7 ou imediatamente após a biópsia,9; no entanto, profilaxia antibiótica não foi utilizada no presente trabalho, e não infecções do local da biópsia foram observadas. Para evitar a contaminação da ferida da biópsia, a cauda deve ser protegida para evitar o contato com o local da biópsia até o curativo de aerossol foi aplicado. Neste protocolo, grampos são removidos cerca de 10 a 14 d depois da biópsia.
Antes de uma biópsia do núcleo, é importante para corretamente configurar a ferramenta e anexá-lo para a broca; Escolha uma velocidade de rotação lenta, selecionar a rotação para frente e não use o modo reverso da broca. Durante o procedimento, é importante usar pressão digital em ambos os lados da incisão para separar as bordas de pele e ter uma incisão tempo suficiente para permitir a entrada de ferramenta sem contato com a pele ou tecido conjuntivo. Se este procedimento não é feito, um arrasto sobre as bordas da incisão durante a rotação do instrumento de biópsia do núcleo pode ocorrer e causar trauma de tecido de pele adicional que aumentará o risco de infecção e pode retardar a cicatrização de feridas. Os presentes procedimentos de biópsia descritos neste protocolo foram realizados por um cirurgião credenciado de animais grande. As cirurgias foram realizadas com sucesso (Figura 5). Ambas as técnicas são relativamente fáceis e rápidos para realizar em comparação com o procedimento da excisão cirúrgica.
Sangramento do local da biopsia são comuns após biópsia MG em vacas leiteiras8,9,10,14. No presente protocolo, sangramento observado foi mínimo (Figura 4), que pode ser devido à aplicação de pressão (forte) adequada na ferida imediatamente após o procedimento. Forte pressão pelo menos 20 min é necessária, e pode ser necessária para mais de 30 min, em alguns casos. Se moderada a grave sangramento é observada após a aplicação de pressão para o local da biopsia, é aconselhável continuar a pressão e imediatamente, entre em contato com um veterinário.
Como a hemostasia é um fator importante para reduzir a morbilidade da vaca, um estudo lotaram almofadas hemostáticas no local da biópsia para controle do sangramento9. No entanto, o uso de almofadas hemostáticas de tal forma tem um alto risco potencial de contaminação microbiológica no ambiente de fazenda de gado leiteiro. Outro estudo14 aplicada pressão manual para entre biópsias repetidas e após o encerramento de biópsia e a pele no local da biópsia e aplicado gelo o local pelo menos 2h após a biópsia. No presente protocolo, a forte pressão aplicada no local da biópsia para 20 a 25 min foi adequada para controlar a hemorragia.
Uma técnica bem sucedida biópsia deve resultar em sangue mínimo no leite que persiste por um curto período de tempo após o procedimento. Para evitar a interrupção da secreção de leite durante infecções de decepção e mastite leite, coágulos sanguíneos intramamário devem ser removidos por mão descascar da biopsia trimestre10,14. No presente protocolo, sangue foi observada no leite até 48 h após a biópsia. Entretanto, num estudo que usou um número maior de animais, sangue no leite foi observada na maioria das vacas por menos de 6 dias. Alguns animais apresentaram sangue no leite após 6 dias8. Por esta razão, observação diária de aparência de leite é necessária para 6 d após o procedimento. Animais não apresentam sinais de infecção de mastite quando obteve-se uma amostra de tecido grande14. No entanto, as pesquisas anteriores que realizada biópsias repetidas do mesmo animal, usando uma agulha encontraram que essa incidência de infecção de mastite foi de aproximadamente 12% seguindo o procedimento8. No presente protocolo, nem animal tinha sinais visíveis de infecção de mastite clínica após o procedimento. Há também uma ligeira possibilidade de que o local da incisão pode tornar-se infectado depois da biópsia.
Cloridrato de tolazolina, uma droga que reverte os efeitos de sedação, deve estar disponível no caso de uma overdose de xilazina. Uma dose excessiva de xilazina pode causar edema pulmonar. Os sinais clínicos de edema pulmonar incluem dificuldade respiratória, dispneia grave, dificuldades respiratórias, tosse e expectoração espumosa. Se forem observados sinais de edema pulmonar, é recomendável usar tolazine (2 a 4 mg/kg de peso corporal) para reverter os efeitos de xilazina.
O presente protocolo descreve a técnica para realizar uma biópsia de agulha e biopsias. Em geral, a vantagem de uma biópsia do núcleo em comparação com a biópsia de agulha é o maior de tecido amostra (0,75 a 1 g)9 com mínimo efeito negativo sobre a saúde do úbere. A biópsia de agulha é um método menos invasivo do que o instrumento de biópsia do núcleo. No entanto, biópsia múltiplas tentativas para obter uma maior quantidade de tecido usando que um procedimento de biópsia de agulha pode aumentar o risco de sangramento importante após o procedimento, bem como coágulos de sangue no leite. Ambas as técnicas causaram morbidade mínima de vaca e foram facilmente alcançadas com treinamento mínimo de pessoal cirúrgico. Uma mudança a curto prazo na produção de leite diária (8 a 10% de redução) e sua composição9 e de redução de consumo de ração14 é esperada após os núcleo e agulha biópsias, respectivamente. Limitações do procedimento de biópsia de agulha são o pequeno volume de tecido removido com a agulha. O instrumento precisa ser ativado somente quando a agulha está dentro do tecido a biopsar e várias tentativas, muitas vezes, são necessárias para obter a quantidade adequada de tecido, o que aumenta o risco de sangue no leite e mastite após o procedimento. Limitações da biópsia núcleo incluem um maior risco de sangramento após o procedimento, se uma grande quantidade de tecido (> 200 mg) é obtido. Além disso, a ferramenta de biópsia é mais difícil de montar que exigem treinamento adequado antes do uso.

A biópsia é um procedimento para colher uma seção do núcleo de tecido do temas para médica ou para fins de pesquisa. É uma técnica minimamente invasiva e amplamente utilizada para coletar o tecido como uma alternativa à eutanásia1 para permitir a análise de respostas teciduais ao tratamento ou outros fatores de interesse. Amostras de tecidos de glândula mamária bovina (MG) são essenciais para lácteos pesquisa estudar a expressão de gene e proteína, histologia, a organização das organelas celulares, sinalização de caminhos e processos metabólicos em resposta a alterações na gestão ou a meio ambiente. Além disso, tecido de MG é necessária para diagnosticar e investigação de determinadas doenças infecciosas, como a mastite bovina causada por infecções bacterianas2.
O úbere de bovinos contém quatro glândulas separadas e cada glândula contém um sistema secretor de leite independente coletivamente chamado parênquima. Os alvéolos, ductos e tecido conjuntivo estão presentes no parênquima mamário. Os alvéolos são estruturas ocas esféricas microscópicas são compostos de células epiteliais na superfície interna (luminal) e mioepiteliais especializadas células na superfície externa (basal). Os alvéolos são responsáveis pela síntese e secreção de leite. O tecido conjuntivo fibroso presente no parênquima pode separar um grupo de alvéolos de outros grupos de alvéolos e cada grupo é chamado um lóbulo3. Vários fatores podem afetar o desenvolvimento e a função do MG, incluindo a fisiologia animal, nutrição, gestão, genética e o ambiente4. Mastite é também um fator crítico que afeta negativamente a MG função e leite de qualidade5. As toxinas liberadas por patógenos mastitic podem causar danos aos alvéolos e induzir necrose resultando em alterações bioquímicas e histológicas no tecido MG6. Assim, a histologia e processos metabólicos de cada alvéolo ou lóbulo na MG podem ser significativamente diferentes dos outros. Como tal, biópsias que são amostras representativas da glândula mamária inteira são desejáveis. Biópsias pequenas podem capturar apenas um único lóbulo ou alvéolos individuais, limitando a informação científica ou diagnóstica resultante. Para fins de investigação, é necessário estar ciente que uma biópsia mamária fornece um 'instantâneo' das características do tecido, mas uma biópsia adequadamente não pode caracterizar a função mamária total na ausência de estimativas do total da glândula mamária em massa.
Várias ferramentas de biópsia foram desenvolvidas nos últimos 30 anos para uso humano. Atualmente, adaptações desses instrumentos estão disponíveis para uso com os animais. Para o gado leiteiro, foram obtidas amostras de tecido de MG usando técnicas diferentes, incluindo excisão cirúrgica (dissecção romba)7, biópsia agulhas1,8e núcleo biópsia instrumentos9,10. Assim, técnicas de biópsia MG em vacas leiteiras lactantes têm uma transição de procedimentos usando sedação reclinada com dissecação cirúrgica utilizando eletrocautério hemostasia em 19927 a coleção de biopsias sob permanente sedação9, 10,11,12. Biópsia cirúrgica é um método invasivo, que pode ser caro e têm uma maior incidência de complicações como hematoma, ferida de problemas, e o tumor espalhou13. Atualmente, biopsias e biópsia de agulha (também conhecido como uma biópsia de tru-cut) foram amplamente adotados como alternativas para biópsia cirúrgica. As vantagens do núcleo e agulha biópsias em comparação com a biópsia cirúrgica incluem: o procedimento é minimamente invasivo; as principais complicações são raras; anestesia geral não é necessária; o procedimento é confortavel rápida; o tempo de recuperação é curto; Há um mínimo de efeitos negativo sobre a saúde do úbere e apenas os efeitos a curto prazo em leite rendimento e composição8,9,10; e o custo é de biópsia cirúrgica menos de13.
Um procedimento de biópsia do núcleo descrito em 1996 usado uma estéril, cânula de aço inoxidável com uma lâmina retrátil removível para remover uma quantidade representativa de tecido da MG bovina sem anestesia geral9,10,11 ,12. Durante o procedimento, o instrumento foi anexado a um berbequim para criar uma baixa velocidade, o movimento rotacional que limpa, cortar um núcleo de tecido como a ferramenta foi avançada no tecido. O benefício foi um tecido maior amostra (70 mm x 4 mm de diâmetro, cerca de 0,75 a 1 g) 9. Um recente estudo10 mostrou que o procedimento de biópsia, descrito por V. C. Farret al . 9 pode ser usado para executar repetidas coleções de tecido MG sem o impacto negativo sobre a saúde de desempenho e úbere de vacas em lactação. Mais recentemente, um estudo14 foi realizado em vacas leiteiras para avaliar repetidas biópsias do MG usando um trocarte maior (31 cm longo, exterior diâmetro de 9,5 mm, diâmetro interno de 8 mm) com vácuo aplicado a uma cânula interna de inox para coletar a biópsia . Este método usado (xilazina) de sedação e anestesia local (cloridrato de lidocaína 2%).
A biópsia de agulha é outra técnica para coletar o tecido mamário. Vários estudos têm adotado essa técnica. Um estudo1 usado sedação (detomidine) e anestésico local (lidocaína a 1%) no procedimento. Após a biópsia, as vacas receberam um tratamento antibiótico profilático. A glândula mamária foi massageada manualmente antes e após a ordenha. Sangue no leite foi observado para até 84 h depois da biópsia. A quantidade e a composição do leite foram afetados por um curto período de tempo. Recentemente, um estudo usado uma agulha de biópsia para realizar biópsias repetidas de MG em vacas leiteiras8. (Acepromazina 1%, intramuscular) de sedação e anestesia local (2% cloridrato de lidocaína, subcutânea) foram administrados aos animais. Os animais não receberam drogas intramamárias ou antibióticos antes ou após o procedimento, e não havia sinais de infecção no local da biopsia durante o período pós-cirúrgico. Neste estudo, repetidas biópsias MG bovina, usando uma agulha tinham um menor impacto negativo sobre a saúde de produção e úbere de leite de vacas leiteiras. Em geral, a biópsia de agulha parece ser um método menos invasivo do que o instrumento de biópsia do núcleo. No entanto, conforme observado anteriormente, é essencial para a técnica de biópsia colher uma amostra representativa do tecido MG. A limitação de uma biópsia de agulha é que uma pequena quantidade de tecido bovino de MG é obtida (cerca de 20 a 25 mg)8,15.
Quase todos os estudos usou uma combinação de α-2 agonista sedação e anestesia local8,9,10, se a biópsia foi através de uma agulha ou um núcleo maior. Na espécie bovina MG, a maioria das terminações nervosas estão associadas com a pele. Inervação aos tecidos parenquimatosos é em grande parte através de receptores de estiramento com esparso tipo um fibras nervosas para detectar dor aguda cirúrgica. Como resultado, os mecanismos fisiológicos da dor devido à manipulação cirúrgica do MG é através da pele e tecidos subcutâneos3 e não tecidos tais como tecidos parenquimatosos. Portanto, para procedimentos de biópsia, é apenas necessário anestesiar localmente a pele e tecido subcutâneo, como infiltração de anestésico local em tecidos mais profundos não contribui significativamente para reduzir dor cirúrgica. Após uma preparação adequada da área da biópsia, desconforto animal é, principalmente, associado com moderação.
Coleção de amostras maiores pode aumentar a formação de hematoma e aumentar o risco de infecção dentro do parênquima do MG. Portanto, peri-operatório protocolos geralmente incluem administração de antibióticos parenteral7, embora não seja universais8. Alcançar a hemostasia é também um fator importante para reduzir a morbilidade de vaca. No referido estudo usar um grande núcleo de instrumento de biópsia14, pressão manual aplicou-se para o local da biopsia e um sutiã de vaca foi usado para aplicar gelo para as feridas pelo menos 2h após o procedimento. Apesar da grande quantidade de tecido colhido, observaram-se reduções apenas ligeiras no rendimento de leite e ingestão de alimentos, e o procedimento foi repetido a cada três semanas, sem efeitos negativos sobre a saúde da vaca.
Pesquisadores realizando biópsia MG em vacas leiteiras precisam considerar a qualidade analítica ou diagnóstica da biópsia resultante, facilidade da técnica e a morbidade de vaca. Técnicas cirúrgicas precisas e previamente planejadas são imperativas para atingir esses objetivos. Até à data, estudos de biópsia MG centraram-se em descrever os resultados da biópsia, em oposição a descrever a técnica de biópsia em si, e descrições para vacas leiteiras em lactação faltam pormenor suficiente para permitir a replicação. Assim, o objetivo deste trabalho foi descrever tanto a agulha de biópsia e maiores técnicas de biópsia do núcleo em detalhes suficientes para permitir replicação segura e humana de biópsia MG de gado.

<table><tbody><tr><td>Álcool isopropílico 70%&nbsp;</td><td>Walmart&nbsp;</td><td>565106257</td><td>1 L</td></tr><tr><td>Spray aerossol para matar e repelir moscas</td><td>MWI</td><td>14339</td><td>1 frasco (se necessário)</td></tr><tr><td>Agulhas de biópsia, 12 G &vezes; 16 cm</td><td>C. R. Bard</td><td>MN1216</td><td>2</td></tr><tr><td>Conjunto de infusão de borboleta (agulha 18 G)</td><td>Fisher</td><td>22-258087</td><td>1</td></tr><tr><td>Pratos de cultura de células</td><td>Fisher</td><td>08-772E</td><td>4</td></tr><tr><td>Furadeira sem fio (baixa velocidade)</td><td>Hitachi& nbsp;</td><td>&nbsp; DS10DFL&nbsp;</td><td>1</td></tr><tr><td>Instrumento de biópsia de núcleo, Farr et al. (1996)</td><td></td><td></td><td>2, fabricação de metal personalizada. Para solicitar a ferramenta entre em contato com os autores.</td></tr><tr><td>Vacas bovinos</td><td></td><td></td><td>saudáveis</td></tr><tr><td>Flunixin meglumina</td><td>MWI/VetOne</td><td>501018</td><td>1,1 a 2,2 mg/kg de peso corporal</td></tr><tr><td>Mesa dobrável&nbsp; &nbsp;</td><td>Amazon</td><td></td><td>1</td></tr><tr><td>Fórceps</td><td>Fisher</td><td>09-753-50</td><td>1</td></tr><tr><td>Luvas não estéreis&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>17-200-845</td><td>9, dependente do tamanho</td></tr><tr><td>Escova dura&nbsp;</td><td>Sullivan Supply</td><td>18270</td><td>1, para lavar as vacas</td></tr><tr><td>Head gate&nbsp;</td><td></td><td></td><td>1, personalizado para vacas leiteiras</td></tr><tr><td>Cloridrato de lidocaína 2% injetável&nbsp;</td><td>MWI/VetOne</td><td>510212</td><td>6 mL foi usado,&nbsp; de 3 a 8 mL</td></tr><tr><td>Sabonete líquido para gado</td><td>eZall Technologies</td><td>39384</td><td>1, para lavar as vacas</td></tr><tr><td>Agulha 18 G&nbsp; (1 a 1/5")</td><td>Fisher</td><td>14-821-15A</td><td>6</td></tr><tr><td>Agulhas 20 G (1 a 1/5")</td><td>Fisher</td><td>14-815-526</td><td>6</td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato (0,9%)</td><td>Fisher</td><td>20-012-043</td><td>1 L</td></tr><tr><td>Povidona Povidona pomada</td><td>Jeffers</td><td>#VED1A</td><td>500 g (se necessário)</td></tr><tr><td>Solução de limpeza de iodopovidona (0,75% iodo)</td><td>MWI/VetOne</td><td>510094</td><td>1 L</td></tr><tr><td>Instrumento de biópsia reutilizável&nbsp;</td><td>C. R. Bard</td><td>MG1522</td><td>1</td></tr><tr><td>cabresto de corda</td><td>Nasco farm and ranch</td><td>C10852</td><td>2, lâminas de bisturi de tamanho de vaca</td></tr><tr><td>(#10)</td><td>MWI</td><td>033870</td><td>2</td></tr><tr><td>porta-bisturis</td> <td>MWI</td><td>602008</td><td>1</td></tr><tr><td>bolsa de autoclave auto-selante 10 x 5,5 pol.</td><td>Fisher</td><td>19-130-0038</td><td>1 caixa de 800</td></tr><tr><td>esponjas de gaze de algodão estéreis</td><td>Fisher</td><td>22-037-986</td><td>4</td></tr><tr><td>almofadas de gaze estéreis</td><td>Fisher</td><td>19-090-735</td><td>4</td></tr><tr><td>luvas cirúrgicas estéreis&nbsp;</td><td>Luvas cirúrgicas</td><td>19-166-679</td><td>3,&nbsp; dependentes do tamanho</td></tr><tr><td>Toalhas cirúrgicas estéreis</td><td>Fisher</td><td>50-118-0339</td><td>6</td></tr><tr><td>Estetoscópio</td><td>Littmann Master Classic II</td><td>1392</td><td>1</td></tr><tr><td>Máquina de tosquiar cirúrgica</td><td>Oster A5</td><td>078005-010-003</td><td>1, preparação do animal para biópsia Lâminas de</td></tr><tr><td>tosquiadeira cirúrgica (#40 )</td><td>Oster&nbsp;</td><td>78919-016</td><td>1, preparação do animal para biópsia</td></tr><tr><td>Removedor de grampos cirúrgicos</td><td>MWI</td><td>541</td><td>1</td></tr><tr><td>Grampeador cirúrgico pré-carregado</td><td>MWI</td><td>17713</td><td>5</td></tr><tr><td>Seringas de 10 mL</td><td>Fisher</td><td>14-823-224</td><td>3</td></tr><tr><td>Seringas de 2 mL</td><td>Fisher</td><td>22-028854</td><td>3</td></tr><tr><td>Seringas de 20 mL</td><td>Fisher</td><td>22-034507</td><td>3</td></tr><tr><td>Seringas de 5 mL</td><td>Fisher</td><td>22-028855</td><td>3</td></tr><tr><td>Termômetro</td><td>Agri-Pro Enterprises Inc</td><td>72000</td><td>1</td></tr><tr><td>Cloridrato de Tolazina</td><td>Akorn Animal Health</td><td>61311-486-10</td><td>2 a 4 mg/kg de peso corporal (se necessário)</td></tr><tr><td>Pinça&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>14-955-025</td><td>1, para manusear a amostra de tecido</td></tr><tr><td>Mangueira de água</td><td>Miracle-Gro, Walmart</td><td>554990501</td><td>1, para lavar as vacas</td></tr><tr><td>Bandagem aerossol resistente à água (pó de alumínio 40 mg)</td> <td>MWI</td><td>010728</td><td>1 garrafa&nbsp;</td></tr><tr><td>Cloridrato de xilazina</td><td>MWI / VetOne</td><td>510650</td><td>0,01 a 0,05 mg / kg de peso corporal</td></tr></tbody></table>

técnicas de biópsia da glândula mamária bovina

Bovine Mammary Gland Biopsy Techniques

Biópsias da glândula mamária bovina permitem aos investigadores coletar amostras de tecido para estudar Biologia celular, incluindo a expressão de gene, análise histológica, sinalização de caminhos e tradução de proteínas. Este artigo descreve duas técnicas para biópsia da glândula mamária bovina (MG). Três saudáveis vacas leiteiras Holstein foram os assuntos. Antes de biópsias, vacas ordenhadas e posteriormente contidas em um para-quedas do gado. Um analgésico (flunixin meglumine, 1,1 a 2,2 mg/kg de peso corporal) foi administrado via jugular venosa prévia de 15-20 min de injeção [IV] para fazer a biópsia. Para sedação em pé, cloridrato de xilazina (0,01-0,05 mg/kg de peso corporal) foi injetado através dos vasos coccígeas 5-10 min antes do procedimento. Uma vez adequadamente sedado, no local da biópsia foi assepticamente preparado e anestesiado localmente com 6 mL de cloridrato de lidocaína a 2%, via subcutânea. Utilizando técnica asséptica, uma incisão vertical de 2 a 3 cm foi feita usando um bisturi número 10. Foram utilizadas ferramentas de núcleo e uma agulha de biópsia. A ferramenta de biópsia do núcleo foi anexada a um berbequim e colocada no tecido MG através da incisão usando uma broca clock-wise ação. A ferramenta de biópsia de agulha foi inserida manualmente no local da incisão. Imediatamente após o procedimento, um assistente aplicar pressão no local da incisão para 20 a 25 min usando uma toalha estéril para obter hemostasia. Grampos cirúrgicos de aço inoxidável foram usados para opor-se a incisão da pele. Os grampos foram removido 10 dias após o procedimento. As principais vantagens das biópsias de núcleo e a agulha é que ambas as abordagens são procedimentos minimamente invasivos que podem ser executados com segurança em vacas saudáveis. Produção de leite após a biópsia não foi afetada. Esses procedimentos exigem um tempo de recuperação curto e resultam em menos riscos de complicações. Limitações específicas podem incluir sangramento após a biópsia e a infecção no local da biopsia. As aplicações destas técnicas incluem coleta de tecido para fins de investigação, tais como a cultura de célula primária e diagnóstico clínico.

No presente protocolo, a técnica de biópsia do núcleo produzido a amostra de tecido de 200 a 600 mg enquanto a biópsia de agulha produzidas amostras de 10 a 30 mg por biópsia. Os animais foram observados duas vezes por dia para 10 d após o procedimento. Sem complicações ocorreram durante o procedimento ou no período pós-operatório, com parâmetros vitais das vacas permanecendo dentro dos limites normais (média frequência respiratória = 31,4 ± 7.04 (SD) respirações por minuto, a média da frequência cardíaca = 75,9 ± 8,9 batidas por minuto e a média temperatura retal = 38,2 ± 0,68 ° C, Figura 3).
Após pressão manual sobre a área da biópsia para obter hemostasia (cerca de 25 min), a ferida aberta mostrou hemorragia mínima (Figura 4). As vacas foram alimentadas com a mesma dieta ad libitum, e os animais foram mantidos na mesma instalação de habitação durante o período pós-operatório. Os animais não mostrou sinais de infecção no local da biópsia; Não havia nenhuma dor, sangramento, inchaço, drenagem ou temperatura elevada (Figura 5). A ferida sarou dentro de 8 a 10 d da biópsia (Figura 5).
Um animal desenvolvido irritação de pele menores devido a ferimento esfregando no 8º dia após o procedimento. Esta vaca foi tratada por limpeza usando solução de iodo-povidona e álcool isopropílico a 70% no local da biópsia. Os grampos de aço inoxidável foram removidos para permitir a drenagem e pomada de iodo povidona (1%) foi aplicada duas vezes por dia no local da biópsia para 2 a 3 d. A irritação de pele desapareceu d 2 depois de aplicar a pomada povidone-iodo e a ferida sarou com sem maiores complicações.
Coágulos de sangue foram removidos pela mão de descascamento de leite do bairro uma biópsia antes da máquina de ordenha. No presente protocolo, a presença de coágulos de sangue no leite foi observada para até três ordenhas (cerca de 36 h) após a biópsia. Contaminação de sangue de leite foi observada para até 48 h após a biópsia. Não havia diferenças visuais observadas entre o núcleo e agulha biópsias em relação a quantidade de sangue no leite. Os animais não mostrou uma diminuição significativa na produção de leite após o procedimento (Figura 6). Composição média do leite foi 4.37% de gordura, proteína de 3,34% e 4.64% lactose. A contagem de células somáticas de leite de média (SCC) era menos de 200.000 células por mL.
O tecido de MG obtido pode ser usado para fins de investigação diferentes, tais como culturas de células primárias (Figura 7).
<img alt="Respiração, frequência cardíaca, temperatura vs. dias após a biópsia; gráfico de dispersão; ferramenta de núcleo vs. agulha." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> Figura 3 . Avaliação dos indicadores de saúde animal após a biópsia da glândula mamária bovina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig3large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a> 
<img alt="Anatomia bovina, exame de saúde do úbere, observação de inchaço, avaliação veterinária, pecuária leiteira." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig4v2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> Figura 4 . Aparência do site biópsia após pressão manual foi aplicado para a área da biópsia para obter hemostasia. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig4large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Cicatrização da biópsia com agulha vs. núcleo ao longo do tempo; Diagrama mostrando pontos aos 3, 6 e 10 dias após o procedimento." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig5.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> Figura 5 . Fotografias de biópsia local. (A) biópsia d 3 do site após o procedimento. (B) biópsia site d 6 após o procedimento. (C) biópsia site d 10 após o procedimento, ilustrando que a ferida foi curada adequadamente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig5large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Produção de leite versus tempo de biópsia; gráfico de dispersão com regressão, indicando variabilidade da ferramenta, P=0,99." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig6.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 6"> Figura 6 . Produção de leite diária antes e após a biópsia da glândula mamária bovina (n = 3 vacas). Um modelo linear estima-se que 10 dias antes da biópsia dos animais produziram 23,35 kg de leite por dia. A produção de leite não se alterou significativamente (P &gt; 0,05) de 10 dias antes de 10 dias após a biópsia apesar de um ligeiro aumento na produção de leite foi observada (aumento de 0,0005 kg/d de leite para cada dia de 10 dias antes da biópsia). Três animais foram utilizados no presente protocolo; um animal foi biopsiado duas vezes (Animal 1: core biópsia no lado esquerdo do úbere e agulha de biopsia no lado direito do úbere) e dois animais foram biopsiados uma vez (Animal 2 e 3: somente no lado direito do úbere usando o procedimento de núcleo ou agulha). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig6large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Monocamada de cultura de células, imagem de microscópio, estudo de morfologia celular, ferramenta de pesquisa biológica." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig7.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> Figura 7 . Imagens representativas da cultura primária bovina mamárias de células epiteliais. Barra de escala é 100 µm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig7large.jpg" target="_blank">clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Este artigo apresenta uma biópsia da glândula mamária bovina usando ferramentas de núcleo e uma agulha de biópsia. Colheita de tecido pode ser usado para cultura de células ou para avaliar a fisiologia mamária e metabolismo, incluindo a expressão de gene, expressão da proteína, modificações de proteína, imuno-histoquímica e as concentrações do metabólito.

Técnicas de biópsia da glândula mamária bovina

Bovine mammary gland biopsies allow researchers to collect tissue samples to study cell biology including gene expression, histological analysis, ...

Uma biópsia, como eu acho que a maioria de vocês sabe, é a remoção de um pouco de tecido do órgão de interesse e, neste caso, é a glândula mamária. A amostra de biópsia é muito útil se você vai fazer coisas como análise de expressão genética, se você vai fazer coisas como pegar um pouco do tecido e fazer uma análise histológica, olhar para a estrutura no nível microscópico da glândula mamária, também muito útil para determinar coisas como sinalizar caminhos relacionados à ação hormonal, por exemplo , então um dos cuidados que você precisa estar ciente quando você faz qualquer tipo de amostragem de tecido mamário, você pegou uma amostra que é realmente representativa? Porque, você pode capturar um lobule, que seria como um aglomerado de uvas, ou você pode capturar alguns alvéolos individuais que realmente não representam o normal, então, a esperança que você tem quando você faz sua biópsia mamária é que você está coletando tecido parenchímico, que é apenas uma palavra chique para dizer o tecido funcional responsável pela produção de leite , uma amostra que é representativa.A maioria das terminações nervosas sensoriais na glândula mamária estão associadas à pele, e por isso é importante perceber e apreciar que, uma vez que você tenha feito a preparação adequada da área onde você vai fazer a incisão inicial, para anestesiar a pele, então há muito pouco no caminho de quaisquer terminações nervosas sensoriais associadas com o tecido paríno em si , e assim o desconforto que o animal sentiria está principalmente associado com a pele. Então, há uma variedade de coisas que podem ser feitas com este tecido, e ele realmente permite reunir mais informações sobre como esse animal funciona, em comparação com o que pode ser obtido simplesmente observando o que foi alimentado com o animal e as respostas na produção de proteína do leite ou na saída de componentes do leite. Todos os métodos descritos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Virginia Tech.Um dia antes da biópsia programada, lave e esfregue o animal, particularmente o úbere, para remover estrume e material sujo. Avalie a saúde, a condição física e o comportamento do animal. Use apenas vacas saudáveis.Ordenha completamente a vaca. Mova o animal para o paraquedas de espremer, idealmente dentro de duas horas de ordenha para minimizar a presença do leite nas glândulas. Contenha o animal com um portão da cabeça.Coloque uma cabeleira de corda na cabeça da vaca para evitar movimentos para trás e para frente. Puxe a cabeça do animal para um lado e amarre a corda no paraquedas usando um nó de liberação rápida para manter a cabeça no lugar. Limpe a área de injeção com um cotonete de álcool isopropílico de 70% e administre a meglumina de flunixina de 1,1 a 2,2 miligramas por quilograma de peso corporal por via intravenosa, através da veia jugular, 15 a 20 minutos antes da biópsia.Localize a veia jugular. Levante a veia jugular por aplicação de pressão na base do sulco jugular. Verifique se não há bolhas na seringa.Insira a agulha na veia jugular levantada e desenhe 0,5 mililitros de sangue na seringa duas vezes e misture com o conteúdo. Se não aparecer sangue na seringa, realoque a agulha. Se a agulha estiver residente na veia, injete o conteúdo.Retire suavemente a agulha, aplique gaze com pressão suave no local da injeção para evitar sangramento. Administre a cloridrato de xilazina por via intravenosa, de 0,01 a 0,05 miligramas por quilograma de peso corporal no vaso coccygeal aproximadamente cinco a 10 minutos antes da biópsia para permitir tempo suficiente para o estabelecimento da sedação. Levante a cauda e limpe a área de injeção com um cotonete de álcool isopropílico de 70%.Verifique se não há bolhas na seringa. Insira a agulha no vaso da cauda, desenhe 0,2 mililitros de sangue na seringa e misture com o conteúdo para garantir que a agulha esteja residente no vaso. Se a agulha for residente, injete o conteúdo da seringa.Retire delicadamente a agulha. Aplique gaze com pressão suave no local da injeção. É muito importante ter uma reversão alfa dois na mão, como tolazolina, isso é porque as vacas leiteiras são sensíveis aos efeitos da xilazina, e uma overdose de xilazina pode causar edema pulmonar, o que pode ser fatal para a vaca leiteira, então observe sua vaca em busca de sinais de sedação excessiva e se isso ocorrer, então a quantidade apropriada de tolazolina pode ser dada.Queremos que nossas vacas fiquem de pé durante um procedimento. Muita xilazina pode fazer com que eles se sentem. Tenha um assistente amarrando a cauda para o procedimento, selecione o local da biópsia na úbere, tipicamente em uma área superior para minimizar a coleta de tecido conjuntivo e evitar penetração na cisterna da glândula.Observe e palpa a pele com atenção especial para identificar quaisquer vasos sanguíneos subcutâneos grandes, a fim de evitar esses vasos durante a biópsia. Corte o cabelo de uma área quadrada de 15 por 15 centímetros ao redor do local da biópsia, prepare a área de biópsia com um iodo povidone, 0,75% de iodo disponível, ou esfoliante de gluconato de clorexidina. Alterne o álcool isopropílico de 70% pelo menos três vezes para remover todos os detritos visíveis e invisíveis.Aplique a solução de esfoliação asséptica e o álcool isopropílico em movimento circular, utilizando abordagem de dentro para fora. Certifique-se de que a solução antisséptica permanece em contato com a pele por pelo menos cinco minutos. Use um conjunto de infusão de borboletas com uma agulha de 18 G para depositar seis mililitros de dois por cento de cloridrato de lidocaína subcutânea no local da incisão para criar um bloco de linha.Não penetre nos tecidos mais profundos. Permitir que o anestésico local se difunda por três a cinco minutos, realize outra repetição da solução de esfoliação e do álcool antes da incisão. Enquanto espera, prepare os instrumentos de biópsia.O que você quer fazer em termos de fornecer analgesia é dessensibilizar a pele. Isso porque temos mais inervação neural na pele e tecidos subcutâneos, e no parenchyma, estamos realmente falando apenas de receptores elásticos, e estes não sentem dor cirúrgica da mesma forma que a pele e os tecidos subcutâneos. Na verdade, se você acabar colocando anestésico local no parnchyma, você pode aumentar o risco de sangramento durante o procedimento.Use técnicas assépticas ao manusear as ferramentas de biópsia e para a incisão. Lave as mãos para remover toda a contaminação visível e aplique luvas cirúrgicas estéreis. Disponha os instrumentos cirúrgicos em uma área estéril por ordem de uso.Tenha um bisturi número 10, gaze estéril, e monte o instrumento de biópsia e uma toalha estéril para homeostase. Procedimento um, instrumento de biópsia do núcleo. Monte o instrumento de biópsia do núcleo usando luvas cirúrgicas.Coloque as sete peças estéreis em uma cortina estéril. Insira a lâmina no sistema de acoplamento na peça dois. Insira a peça três em cima da peça dois, garantindo que a estação de acoplamento se alinhe.Engaje a borda final da lâmina no sistema de acoplamento da peça quatro. Empurre a peça quatro e observe se a peça quatro está próxima da peça três. Insira a peça cinco no dispositivo.Certifique-se de que a estação de acoplamento está alinhada. Insira a peça seis na parte superior da peça dois. Certifique-se de que a estação de acoplamento está alinhada.Insira o parafuso de bloqueio na estação de acoplamento. Empurre a peça três para cobrir o parafuso de bloqueio. Ative a ferramenta, empurrando para a frente a peça quatro e observe a lâmina fora da ferramenta.Puxe a peça quatro para trás para retrair a lâmina na ferramenta. Certifique-se de que a vaca está suficientemente sedada e que o local da biópsia seja suficientemente anestesiado, belisque a pele para garantir que não haja reação. Faça uma incisão vertical de dois a três centímetros através da pele e tecidos subcutâneos de proximal a distal usando um bisturi número 10.Conecte o instrumento de biópsia a uma broca sem fio usando técnicas estéreis. Coloque a broca contra a ferramenta de biópsia e verifique se a ferramenta está firmemente ligada à broca. Certifique-se de contenção adequada, fazendo com que um indivíduo eleve a cauda durante todos os procedimentos.Ligue a broca usando rotação no sentido horário e uma baixa velocidade. Avance toda a ferramenta de biópsia em torno de 7,5 centímetros na úbere através da incisão enquanto a ferramenta está girando. Desligue a broca e amplie manualmente a peça quatro da ferramenta, ligue a broca usando rotação no sentido horário e uma baixa velocidade, remova o instrumento que contém o núcleo tecidual da úbere.Aplique forte pressão imediatamente na ferida usando uma toalha estéril por pelo menos 20 minutos. Insira a cânula no tecido. Empurre a peça para a frente para ativar a ferramenta.Gire em uma rotação lenta no sentido horário. A amostra de tecido está agora dentro da cânula. Remova o tecido da ferramenta de biópsia usando pinças.Mantenha a amostra em um x fosfato tamponado e avalie a quantidade de tecido. Pegue os sinais vitais da vaca a cada 10 minutos após a biópsia por pelo menos 30 minutos. Verifique se há sangramento após 20 minutos de pressão no local da biópsia.Se houver gotas de sangue, continue a aplicar pressão por mais cinco a 10 minutos. Feche as incisões usando grampos de aço inoxidável em intervalos de cinco milímetros depois que todo o sangramento parou. Aplique um curativo de aerossol na área da biópsia.Observe o animal por 50 minutos após o procedimento. Procedimento dois, instrumento de biópsia de agulha. Siga as instruções do fabricante para o dispositivo.Remova a agulha de biópsia da embalagem usando técnicas estéreis. Descarte a agulha se houver algum dano. Coloque a agulha no dispositivo.Feche a tampa e engatilhar o dispositivo. Certifique-se de que a vaca está suficientemente sedada e que o local da biópsia seja suficientemente anestesiado, belisque a pele para garantir que não haja reação. Faça uma incisão vertical de um a dois centímetros através da pele e tecidos subcutâneos de proximal a distal usando um bisturi número 10.Insira a agulha de biópsia no local da incisão, em torno de 10 a 13 centímetros da pele. Ative o dispositivo da agulha da biópsia para coletar o tecido. Remova a agulha da úbere.Aplique pressão forte imediata na ferida usando uma toalha estéril por pelo menos 20 minutos. Após remover o tecido da agulha, siga o procedimento descrito anteriormente para fechar a incisão. Todo o procedimento leva cerca de 45 minutos para ser concluído, por animal.Coágulos sanguíneos precisam ser retirados da biópsia do quarto. Além disso, é necessário observar a produção de leite e a ingestão alimentar, se possível. Certifique-se sempre da saúde e do bem-estar do animal antes, durante e depois do procedimento.Documente todas as drogas administradas aos animais. Verifique a presença de sangue no leite por sete a dez dias após a biópsia. Tire os coágulos sanguíneos do trimestre biópsia em ordenhas subsequentes e garanta que ocorra a remoção completa do leite.Observe a produção de leite e, se possível, a ingestão diária individual de ração até que os grampos cirúrgicos tenham sido removidos. Monitore o animal duas vezes por dia para temperatura corporal, respiração e batimentos cardíacos, e comportamento, até que os grampos cirúrgicos sejam removidos. Verifique o local da biópsia duas vezes por dia para inchaço, ternura e quaisquer sinais de drenagem até que os grampos cirúrgicos tenham sido removidos.Se estes forem observados, consulte um veterinário. Remova os grampos do local da incisão 10 a 14 dias após a biópsia, dependendo da taxa de cicatrização. Consulte um veterinário se algum sinal de infecção local ou sistêmica for observado.Assim que a biópsia é feita, você interrompeu o sangue e, portanto, o suprimento de nutrientes e oxigênio para esse tecido, e assim, se você não for muito rápido em remover esse núcleo tecidual, e de alguma forma parar a atividade tecidual, as concentrações que você pode medir em um momento posterior no tempo no laboratório pode não ser verdadeiramente reflexiva do que estava acontecendo naquele animal no momento da biópsia. Normalmente, removeríamos rapidamente o tecido, e o congelávamos em nitrogênio líquido para tentar preservar essa atividade. A outra coisa que se pode fazer com esse tecido, e isso é realmente algo que fizemos com o tecido que coletamos, foi se isolar e cultivar as células que estão presentes nesse tecido em um sistema de cultura.No nosso caso, estamos interessados nas células epiteliais que estão dentro desse tecido, porque essas são as células que realmente sintetizam e secretam os componentes do leite, e assim, essas células desses pedaços de tecido foram colocadas na cultura, e na verdade, elas ainda estão crescendo hoje. Os animais foram observados duas vezes por dia durante 10 dias após o procedimento. Não houve complicações durante o procedimento ou no período pós-operatório, com parâmetros vitais das vacas permanecendo dentro dos limites normais.Os modelos lineares mostram que 10 dias antes da biópsia, os animais produziam 23,35 quilos de leite por dia. Os animais não apresentaram alterações significativas na produção de leite de 10 dias antes para 10 dias após a biópsia. A biópsia da glândula mamária bovina é um procedimento minimamente invasivo, permitindo que o animal tenha um curto tempo de recuperação.Portanto, este procedimento de biópsia pode ser usado em muitos ensaios nutricionais e outros tipos de ensaios onde podemos usar medidas repetidas sobre os animais, por isso, por exemplo, se tivermos quatro períodos com quatro tratamentos nutricionais diferentes, poderíamos facilmente biópsia dessas vacas quatro vezes diferentes no final de cada período, permitindo talvez uma semana de descanso entre cada período , para garantir que os animais voltem à sua produção normal.

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