Name: Ortotópico injeção de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária de ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 5 s
Description: Aprenda a implantar células de câncer de mama na almofada de gordura mamária de camundongos com técnica ortotópica minimamente invasiva. Este método permite estudar o crescimento tumoral em ambiente fisiológico relevante para pesquisa oncológica.

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Os autores gostaria de agradecer a Fundação Nacional de ciências naturais da China (grant n º 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), a Fundação de ciência Natural de Beijing (grant n º 7172095, 7162084, 7162083) e a Xu Xia Fundação do Hospital de Beijing Medicina tradicional chinesa (conceder n, xx201701). Agradecemos o Prof Chang-Zhen Liu, do centro de pesquisa Experimental, China da Academia de ciências médicas chinesas, para imagens bioluminescentes.

Experimentos com animais foram conduzidos de acordo com a disposição e recomendação geral de chinês Experimental Animal administração legislação e foram aprovados pelo Comitê de uso de Capital médica Universidade e instituição de cuidado Animal (Ref não. AEEI-2014-052). Foram utilizados camundongos Balb/c fêmeas com idade de 6 a 8 semanas.
1. preparação das células e animais
<ol><li>Um dia antes da operação, raspe os pelos ao redor dos mamilos quarto para expor a área de atuação.<ol>
<li>Utilize uma mão para segurar o mouse firmemente para trás para certificar-se de que o mouse não irá mover-se livremente, transformar-se o mouse para expor sua barriga ao operador e então usar a outra mão para raspar a pele ao redor dos mamilos quarta com uma máquina eletrônica.</li>
		<li>Coloque uma camada fina de depilação creme ao redor dos mamilos para 30-60 s, limpar o creme com água destilada e seque o mouse com papel macio.</li>
	</ol>
</li>
	<li>No dia da operação, coletar células de câncer de mama murino (4T1-luc2), contar o número de células e ajustar a densidade da célula a 2 x 105 células/mL de tampão fosfato salino (PBS) em tubos estéreis microcentrifuga e mantê-los no gelo. Para cada rato, 1 x 104 células/50 µ l em uma seringa de 1 mL é preparada.</li>
</ol>2. ortotópico injeção
<ol><li>
Anestesia de ratos
	<ol>
<li>Induzi a anestesia. Colocar os ratos em um recipiente transparente fechado e vire na queda e 2% de isoflurano gás para anestesiar os ratos por cerca de 5 min, até que todos mentem para baixo dormindo.</li>
		<li>Manter a anestesia. Transferir os ratos do recipiente para máscaras individuais de anestesia, colocar alguma pomada de veterinário em seus olhos para evitar ressecamento, manter os ratos passivamente com os mamilos expostos ao operador e deixá-los continuar a inalar gás de isoflurano durante alguns minutos até o injeção foi executada.</li>
		<li>Confirme o sucesso da anestesia pela falta de um reflexo de retirada de pitada de dedo do pé.</li>
		<li>Aplica a pomada oftálmica aos olhos dos ratos para evitar ressecamento do olho. Nota: De acordo com o tamanho do recipiente e o número de máscaras de anestesia individuais disponíveis, um grupo de ratos pode ser anestesiado juntos e injetou um sob anestesia individual.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Desempenho da injeção
	<ol>
<li>Utilize uma mão para tenda a pele ao redor do mamilo quarto com uma pinça, para criar um "túnel" Erguido para a seringa seguir. Use a outra mão para segurar a seringa com a agulha virada para cima para entrar na pele por via subcutânea em 5-10 mm de mamilo; em seguida, siga o "túnel" até que a ponta da agulha aproxima-se o mamilo, cuidadosamente mover a agulha é dica para do tecido mamário até o olho de agulha vem sob a ponta do mamilo, descartar a pinça e injetar as células lentamente.</li>
		<li>Vire a agulha um pouco e retirar a seringa lentamente; Use um cotonete para pressionar a agulha ferida para 10-20 s para certificar-se de que não há nenhum escoamento de fluidos.</li>
		<li>Observar o mamilo quarto para confirmar uma injeção bem sucedida: uma esfera branca transparente plana com o mamilo como o centro pode ser observada (Figura 1).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Manter os ratos anestesiados por mais um minuto evitar que os ratos recuperar e mover-se muito rapidamente, que fará com que a injeção ferida para abrir e as células do tumor a vazar.</li>
</ol>3. análise do crescimento tumoral e metástase
Nota: Tumores primários são identificados como solavancos transparentes ou bolha-como após as injeções e como esféricos ou elipsoide pedaços sólidos com o mamilo alguns dias mais tarde. O crescimento do tumor é avaliado pelo volume do tumor e bioluminescência do tumor.
<ol><li>Para estabelecer o volume do tumor, segure o mouse com uma mão. Expor sua barriga ao operador e use a outra mão para pinça apoio o tumor comprimento (L) e largura (W). Calcule o volume do tumor (V) como segue. V = (L x W2) / 2</li>
	<li>Para capturar a bioluminescência de tumor, injete 150 mg/kg D-luciferina nuca do rato, 10 minutos antes da imagem latente. Anestesiar os ratos com gás de isoflurano 2% por 5 min e transferi-los para máscaras individuais de anestesia para deixá-los a inalar gás de isoflurano por mais 5 min. Seguindo as instruções do fabricante, capture imagens de bioluminescência do tumor primário e metástases, com tempo de exposição automática, binning médio e de f/stop em 1.</li>
</ol>4. colheita do Tumor primário e metástases órgãos para análise
Nota: Quando alcançar o objetivo deste experimento, ou atingindo o ponto de extremidade humano, o tumor primário pode ser colhido para um estudo mais aprofundado. Neste estudo, os tumores são removidos em 4 a 5 semanas após a injeção, quando o volume do tumor atinge cerca de 800 mm3. Os pulmões são removidos na semana 8.
<ol><li>
Colheita do tumor primário
	<ol>
<li>Realizar a cirurgia em um capuz estéril para manter um ambiente estéril. Anestesia os animais por isoflurano. Confirme o sucesso da anestesia pela falta de reflexos de retirada de pitada de dedo do pé. Aplica a pomada oftálmica aos olhos dos ratos para evitar que sequem.</li>
		<li>Dissocia o tumor da pele com uma tesoura, gota a gota analgésico (tramadol 1mg/mL, 1 gota de cerca de 50 µ l por rato) para aliviar a dor pós-operatória.</li>
		<li>Costurar a pele com uma sutura cirúrgica, cortar o excesso sutura, drape fora da incisão.</li>
		<li>Cortado ao meio com um bisturi, o tumor primário, coloque 1/2 do tumor em paraformaldeído 4% para mais hematoxilina e eosina (H & E) coloração e imuno-histoquímica e congelar imediatamente a outra 1/2 com nitrogênio líquido para a mancha ocidental ou um RNA estudo de isolamento mais tarde.</li>
		<li>Após a sutura, aquecer os ratos com uma lâmpada, até se recuperarem, manter os ratos em gaiolas simples até totalmente recuperado. Continuamente, administre tramadol 10 mg/kg com uma oral gavagem para 3 d após a cirurgia.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Colheita de órgãos de metástase
	<ol>
<li>Eutanásia em ratos com uma overdose de pentobarbital, abrir o peito com uma tesoura, delicadamente tirar os pulmões e lavá-los com PBS. Focos de metástase pulmonar podem ser identificados como branco transparente solavancos que são morfologicamente diferentes e distinguíveis de tecido pulmonar normal de rosa.</li>
		<li>Colocar os pulmões em paraformaldeído 4%, para verificar se a metástase por H & E mancha.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Torre, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cancer+statistics%5BTitle%5D)+AND+%22CA%3A+A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Global cancer statistics.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 65 (2), 87-108 (2012).</li>
<li>Rashid, O. M., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+exploring+the+pharmacokinetics+of+breast+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Drug+Metabolism+%26+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies.</a> Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).</li>
<li>Wagner, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+breast+cancer%3A+quo+vadis%2C+animal+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Models of breast cancer: quo vadis, animal modeling.</a> Breast Cancer Research. 6 (1), 31-38 (2004).</li>
<li>Horas, K., Zheng, Y., Zhou, H., Seibel, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+breast+cancer+metastasis+to+bone%3A+opportunities+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Investigation%22%5BJournal%5D)">Animal models for breast cancer metastasis to bone: opportunities and limitations.</a> Cancer Investigation. 33 (9), 459-468 (2015).</li>
<li>Kawaguchi, T., Foster, B. A., Young, J., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+Update+of+Patient-Derived+Xenograft+Model+for+Translational+Breast+Cancer+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mammary+Gland+Biology+and+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).</li>
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<li>Cassidy, J. W., Batra, A. S., Greenwood, W., Bruna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+tumour+xenografts+for+breast+cancer+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine-Related+Cancer%22%5BJournal%5D)">Patient-derived tumour xenografts for breast cancer drug discovery.</a> Endocrine-Related Cancer. 23 (12), T259-T270 (2016).</li>
<li>Stiedl, P., Grabner, B., Zboray, K., Bogner, E., Casanova, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+cancer+using+genetically+engineered+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Modeling cancer using genetically engineered mice.</a> Methods in Molecular Biology. 1267, 3-18 (2015).</li>
<li>Menezes, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+engineered+mice+as+experimental+tools+to+dissect+the+critical+events+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer.</a> Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).</li>
<li>Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+to+evaluate+novel+and+conventional+therapeutic+strategies+for+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer.</a> The American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).</li>
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<li>Yano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-targeting+adenovirus+OBP-401+inhibits+primary+and+metastatic+tumor+growth+of+triple-negative+breast+cancer+in+orthotopic+nude-mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Tumor-targeting adenovirus OBP-401 inhibits primary and metastatic tumor growth of triple-negative breast cancer in orthotopic nude-mouse models.</a> Oncotarget. 7 (51), 85273-85282 (2016).</li>
<li>Kocaturk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments. (96), e51967(2015).</li>
<li>Tavera-Mendoza, L. E., Brown, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+less+invasive+method+for+orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mouse+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">A less invasive method for orthotopic injection of breast cancer cells into the mouse mammary gland.</a> Lab Animal. 51 (1), 85-88 (2017).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+murine+breast+tumor+model+by+subcutaneous+or+orthotopic+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology+Letters%22%5BJournal%5D)">Establishment of a murine breast tumor model by subcutaneous or orthotopic implantation.</a> Oncology Letters. 15 (5), 6233-6240 (2018).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gubenyiliu+II+Inhibits+Breast+Tumor+Growth+and+Metastasis+Associated+with+Decreased+Heparanase+Expression+and+Phosphorylation+of+ERK+and+AKT+Pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Gubenyiliu II Inhibits Breast Tumor Growth and Metastasis Associated with Decreased Heparanase Expression and Phosphorylation of ERK and AKT Pathways.</a> Molecules. 22 (5), (2017).</li>
<li>Kwon, Y. S., Lee, K. S., Chun, S. Y., Jang, T. J., Nam, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppressive+effects+of+a+proton+beam+on+tumor+growth+and+lung+metastasis+through+the+inhibition+of+metastatic+gene+expression+in+4T1+orthotopic+breast+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Suppressive effects of a proton beam on tumor growth and lung metastasis through the inhibition of metastatic gene expression in 4T1 orthotopic breast cancer model.</a> International Journal of Oncology. 49 (1), 336-342 (2016).</li>
<li>Kalra, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validating+the+use+of+a+luciferase+labeled+breast+cancer+cell+line%2C+MDA435LCC6%2C+as+a+means+to+monitor+tumor+progression+and+to+assess+the+therapeutic+activity+of+an+established+anticancer+drug%2C+docetaxel+%28Dt%29+alone+or+in+combination+with+the+ILK+inhibitor%2C+QLT0267%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biology+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Validating the use of a luciferase labeled breast cancer cell line, MDA435LCC6, as a means to monitor tumor progression and to assess the therapeutic activity of an established anticancer drug, docetaxel (Dt) alone or in combination with the ILK inhibitor, QLT0267.</a> Cancer Biology & Therapy. 11 (9), 826-838 (2011).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation%3A+a+bridge+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Investigational+New+Drugs%22%5BJournal%5D)">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Investigational New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+orthotopic+xenografts%3A+better+mimic+of+metastasis+than+subcutaneous+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts.</a> Nature Reviews Cancer. 15, 451(2015).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

As células utilizadas neste estudo são 4T1-luc2, células cancerosas murino mama triplo-negativo com rotulagem luciferase, que são uma ferramenta útil para investir efeitos antitumorais e antimetastatic de drogas devido à sua natureza altamente invasivo2,19 . Luciferases, estáveis para a próxima geração de célula, são usados para indicar o tumor de vida células, ambos na glândula mamária e em outros órgãos distantes20. Em alguns casos, hipó...

Câncer de mama é a principal causa de mortalidade feminina em todo o mundo. Com sua incidência progressivamente crescente, câncer de mama tornou-se um sério desafio para a saúde pública1. Modelos de câncer murino são boas pontes entre os estudos pré-clínicos e clínicos, e um modelo de bom imitar murino doença aumentará a precisão das pesquisas sobre a doença e a medicina.
O crescimento do tumor primário começa o progresso da doença maligna, enquanto metástase e as complicações são as principais causas de morte e qualidades de vida pobre, na maioria dos pacientes de câncer. Vários modelos de murino são usados para imitar a patologia do câncer de mama humano2,3,4. Modelos de enxerto são amplamente utilizados para o estudo do câncer entender os personagens patológicos e às drogas da tela para a segurança e eficácia de6,5,7. Ratos geneticamente modificados (GEM) são gerados para imitar o câncer de mama humano pela segmentação determinados oncogenes ou tumor supressor genes8. GEM tem um fundo relativamente simples e uniformizado para entender o papel dos genes em andamento canceroso; no entanto, o ambiente artificial e fundo limitam-se a investigar a patologia de metástase e relacionados a terapias9. Células cancerosas humanas, embora com características patológicas humanas, poderá apenas ser implantadas em camundongos deficientes em imune, e a insuficiência da interação imune tumor-hospedeiro pode conduzir a resultados tendenciosos10.
Onde inicia o tumor sólido tem uma influência direta sobre os caracteres biológicos e patológicos da doença11,12,13. Desde que progresso canceroso é o complicado resultado das interações entre as células do tumor, células do estroma, células de Imunologia, células inflamatórias, fatores de crescimento e proteases, tumores primários implantados em situ fornecerá uma visão melhor e imitar o processo canceroso mais precisão do que tumores induzidos por agentes químicos ou uma injeção subcutânea de tumor de células. Agentes químicos utilizados para induzir tumores podem ser prejudiciais para os pesquisadores e o meio ambiente e até são proibidos em alguns países. Devido à ausência de um ambiente do tecido mamário, a evolução patológica de uma injeção subcutânea pode diferir com que em pacientes de câncer de mama real, cujo câncer se origina e irrita do pad gordo mamário. As desvantagens de injecções subcutâneas incentivam a utilização de modelos ortotópico para estudar o crescimento do tumor. Na pesquisa anterior, altamente metastáticos tumores MDA-MB-231, desenvolvidos após sete transplantes ortotópico, indicaram a importância da injeção local14. Recentemente, a implantação ortotópico de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária com cirurgia foi relatado15,16. Com o ambiente de almofada mamária, o crescimento do tumor e a migração para o disfarce de órgãos distantes de todo o processo de câncer de mama em sites relevantes patologicamente, que torna este modelo uma miniatura do progresso de doenças humanas. No entanto, após a cirurgia, a pele automaticamente tentativas para curar a próprio, que pode trazer o risco potencial de interferir com a originação de câncer mamário normal e influenciar os resultados.
Nós temos comparado a alguns modelos de câncer de mama e estabeleceu um modelo ortotópico minimamente invasiva para investigar o potencial efeito das drogas sobre1817,progressão do cancro da mama. Neste estudo, um protocolo de vídeo sobre como orthotopically injetar células de câncer de mama a almofada de gordura mamária de forma simples, da maneira menos invasiva é apresentada. Este método de injeção ortotópico sem cirurgia é vantajoso em muitos aspectos. Primeiro, a operação é simples e rápida, cerca de 1 minuto por rato. Em segundo lugar, com focos de tumor primário começando no sites bem patológicos, abrange o processo inteiro tumorigênico da progressão de câncer de mama do crescimento do tumor para outras metástases de órgãos, que fornece um bom modelo animal experimental para estudar a interação de células tumorais e o microambiente do tumor. Além disso, pode ser um modelo valioso para estimar os efeitos do tratamento em todas as fases do câncer de mama. O objetivo desse método é fornecer um modelo animal para a progressão de câncer de mama humano imitar màxima.

<table><tbody><tr><td>máquina de anestesia</td><td>Midmark Corporation, Dayton, OH, USA</td> Sistema de Imagem In-Vivo de <td>anestesia</td><td>Matrx VMS</td></tr><tr><td></td><td>PerkinElmer</td><td>IVIS Spectrum</td><td>usado para detecção de bioluminescência</td></tr><tr><td>&nbsp; isoflurano</td><td>Hebei yipin reagentes químicos&nbsp; empresa</td><td>O21400</td><td>anestesia</td></tr><tr><td>seringa de 1 ml</td><td>Becton,Dickinson e&nbsp; Empresa</td><td>A257</td><td>paquímetro digital de injeção de células</td></tr><tr><td></td><td>Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd.</td><td>Medição de</td><td>volume</td>SH</tr><tr><td>tramadol</td><td></td> <td>Mundipharma</td> <td>analgésico</td></tr><tr><td>D-luciferina</td><td>Gold Biotechnology Inc.</td><td>LUCK-1G</td><td>usado para detecção de bioluminescência</td></tr><tr><td>O anticorpo primário contra cluster de diferenciação (CD) 31</td><td>Abcam</td><td>&nbsp; ab28364</td><td>usado para detecção de MVD</td></tr> kit <tr><td>de coloração de hematoxilina e eosina</td><td>&nbsp; Pequim Zhong Shan Jinqiao Biotecnologia Co., Ltd.</td><td>ZLI-9615</td><td>histologia&nbsp;</td></tr><tr><td>creme de depilação</td><td></td> <td>Veet-creme de</td> <td>depilação</td></tr><tr><td>Carbomer Eye Gel</td><td>Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH-pomada</td><td></td> <td>oftálmica</td></tr><tr><td>agulha de costura</td><td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd.&nbsp;</td><td>17U0302J</td><td>sutura</td></tr></tbody></table>

ortotópico injeção de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária de ratos

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Um modelo animal adequado é crucial para uma melhor compreensão de doenças. Animal modelos estabelecidos por métodos diferentes (injecções subcutâneas xenografts, manipulação genética, indução de reagentes químicos, etc.) tem vários personagens patológicas e desempenhar um papel importante na investigação de certos aspectos da doenças. Embora nenhum modelo único totalmente pode imitar a progressão da doença humana inteira, modelos de doença ortotópico órgãos com um ambiente adequado do estroma desempenham um papel insubstituível na compreensão de doenças e de rastreio de drogas potenciais. Neste artigo, descrevemos como implante de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária de forma simples, de maneira menos invasiva e fácil de manusear e siga a metástase para órgãos distantes. Com os recursos adequados de crescimento do tumor primário, da mama e alterações patológicas do mamilo e uma alta ocorrência de metástase de outros órgãos, este modelo màxima imita a progressão do câncer de mama humano. Tumor primário crescimento em situ, long-metástase à distância e o microambiente do tumor do câncer de mama podem ser investigada usando este modelo.

Depois de uma injeção bem sucedida, uma esfera branca transparente plana com o mamilo como a out-superfície redondo centro pode ser observado (Figura 1). O crescimento do tumor primário pode ser medido pelo volume do tumor e vivos tumor celular bioluminescência (Figura 2). Tanto o volume do tumor e o fluxo total aumentaram durante o experimento antes de ressecção. Numa fase inicial, a metástase não pode ser encontrado porque nenh...

Aqui, apresentamos um protocolo para implante de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária de forma simples, menos invasiva e fácil de manusear de maneira, e este modelo de câncer de mama ortotópico rato com um ambiente adequado do tecido mamário pode ser usado para investigar vários aspectos da câncer.

Ortotópico injeção de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária de ratos

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo do câncer sobre como o microambiente apoia o crescimento do tumor ou se uma droga específica pode efetivamente inibir a progressão do câncer de mama. As principais vantagens da técnica de indução do tumor são que não é necessária cirurgia e é uma forma menos invasiva para estabelecer o câncer de mama in situ. Usando essa técnica, as células tumorais crescem dentro da almofada de gordura mamária, no ambiente de tecido apropriado, imitando a progressão do câncer de mama humano mais de perto do que a injeção subcutânea ou xenoenxerto para células de camundongos.Ke-Xin Cao, nosso técnico, e eu, ajudaremos Gan-Lin Zhang a demonstrar este procedimento. No dia anterior à operação, contenha manualmente o rato receptor e vire o lado da barriga do animal até a pele para ser raspado ao redor dos quartos mamilos. Limpe a pele com uma fina camada de creme depilatório.Use água destilada para remover o creme após 30 a 60 segundos e seque o mouse com toalhas de papel macio. No dia da operação, diluir a suspensão da célula de câncer de mama murina para duas vezes dez a cinco células por mililitro de concentração de PBS, em um tubo de mi

orthotopic-injection-breast-cancer-cells-into-mice-mammary-fat

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Neste artigo, discutimos como estabelecer um modelo de câncer de mama em camundongos fêmeas injetando células de câncer de mama na almofada de gordura mamária. O protocolo de exemplo demonstra a injeção ortotópica.

Injeção ortotópica na almofada de gordura mamária: estabelecendo câncer de mama em camundongos

O vídeo demonstra a técnica de inoculação ortotópica do câncer de mama em um modelo de camundongo. Esta técnica produz uma alta taxa de tumorigênese com menos variabilidade no tamanho e forma do tumor em comparação com a injeção subcutânea ou não cirúrgica.

Injeção ortotópica: implante de células cancerígenas específicas do tecido em um camundongo adulto

Um modelo do rato de mama câncer no cérebro metástase é estabelecida com ultra-som guiada por imagem injeção intracardíaca de células MDA-MB231/Br-GFP. Desenvolvimento de metástases intracranianas multifocais tem sido monitorada longitudinalmente usando alta resolução de 9.4 T MRI.

Ecografia-guiada injeção intracardíaca para desenvolver um modelo do rato de mama metástases do cancro cerebral Seguido por Longitudinal MRI

Ativação de mutações latentes com adenovírus-Cre no sistema ductal resultados mamárias em um câncer de mama metastático clinicamente relevante. Incorporação de um promotor YFP permite o rastreamento de células tumorais metastáticas distais. Este modelo é útil para estudar metástase latente, a imunidade anti-tumor, e para a concepção de novas imunoterapias para tratar o câncer de mama.

Início do Carcinoma de mama metastático por Segmentação do ductal Epithelium com Adenovírus-Cre: Um Modelo Novel de camundongo transgênico do Câncer de Mama

O cancro é uma doença complexa que é influenciada pelo tecido circundante do tumor, bem como pro- local e anti-inflamatórias mediadores. Portanto, os modelos de injeção ortotrópicas, ao invés de modelos subcutâneos pode ser útil para estudar a progressão do câncer de uma forma que melhor mimetiza patologia humana.

Injeção Orthotopic de células cancerosas da mama na mamária Fat Pad de Ratos para o Estudo de crescimento tumoral.

Um modelo de tumor primário do cancro da mama ortotópico e remoção cirúrgica do tumor primário para prolongar a vida do rato para gerar metástase espontânea são descritos. O crescimento do tumor e progressão são monitorados e quantificado por imagens de fluorescência da luciferase.

Um modelo de camundongo ortotópico de câncer de mama espontânea metástase

Aqui descrevemos o modelo e a abordagem para estudar as funções dos macrófagos alveolares pulmonares na metástase do câncer. Para demonstrar o papel dessas células na metástase, foi utilizado o modelo singênico (4T1) de câncer de mama em conjunto com a depleção de macrófagos alveolares com lipossomas de clodronatos.

Estudar o papel dos macrófagos alveolares em câncer de mama metastático

Este trabalho predefine um protocolo avançado para avaliar com precisão o carregamento de tumores por meio da detecção de sinais de proteína fluorescente verde e bioluminescência, bem como a integração da técnica de detecção molecular quantitativa.

Estudando o câncer de mama triplo negativo usando modelo de câncer de mama ortotópico

Modelos de xenoenxerto derivados da paciente (PDX) e modelos transplantáveis de camundongos geneticamente modificados recapitulam fielmente a doença humana e são modelos preferidos para pesquisas básicas e translacionais sobre câncer de mama. Aqui, um método é descrito para transplantar ortotopicamente fragmentos de tumor de mama na almofada de gordura mamária para estudar biologia tumoral e avaliar a resposta medicamentosa.

Transplante Ortotópico de Tumores mamários como Modelos Pré-Clínicos para o Câncer de Mama

O manuscrito descreve uma metodologia para o estabelecimento, bem como o monitoramento longitudinal do crescimento de metástases pulmonares espontâneas de tumores de mama injetados ortotopicamente, passíveis de intervenção em todos os estágios da cascata metastática.

In vivo Imagem para medir metástase pulmonar espontânea de células tumorais de mama injetadas ortotopicamente

Este protocolo descreve um método eficiente e não cirúrgico para a implantação ortotópica de xenoenxertos derivados de pacientes com câncer de mama em camundongos. A técnica envolve a dissociação enzimática do tumor seguida de injeção direta nas bolsas de gordura mamária, permitindo a implantação de alto rendimento. A validação abrangente garante a fidelidade do modelo, facilitando estudos rigorosos em vários subtipos de câncer de mama.

Dissociação de alto rendimento e implantação ortotópica de xenoenxertos derivados de pacientes com câncer de mama

Aprenda a implantar células de câncer de mama na almofada de gordura mamária de camundongos com técnica ortotópica minimamente invasiva. Este método permite estudar o crescimento tumoral em ambiente fisiológico relevante para pesquisa oncológica.

Ortotópico injeção de células de câncer de mama para a almofada de gordura mamária de ratos

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