Name: Ultra-som de alta frequência para a análise do desenvolvimento Fetal e placentário na Vivo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-08T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 43 s
Description: Aprenda a usar ultra-som de alta frequência para análise do desenvolvimento fetal e placentário em camundongos. Este método não invasivo permite monitorar o fluxo sanguíneo materno e fetal ao longo da gestação.

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Muitos agradecimentos a empresa de instrumento Imaging (especialmente a Magdalena Steiner, Katrin Suppelt e Sandra Meyer) pelo seu apoio rápido e agradável e por responder todas as perguntas sobre o sistema de imagem e seu uso rapidamente e completamente. Nós estamos gratos ao Prof Hans-Reimer Rodewald e Dr. Thorsten Feyerabend (DKFZ Heidelberg, Alemanha) para fornecer a colônia Cpa3. Além disso, agradecemos a Stefanie Langwisch, quem estava encarregado das colônias de rato e quem gerou as imagens na Figura 1.
O trabalho e o sistema da imagem latente foram financiados por subsídios da Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) para A.C.Z (ZE526/6-1 e AZ526/6-2) que eram projetos incorporados em DFG prioridade programa 1394 "mastócitos na saúde e na doença."

Todos os métodos descritos aqui foram aprovados pelo "Landesverwaltungsamt Sachsen Anhalt: 42502-2-1296UniMD."
1. procedimento experimental
<ol><li>Companheiro de 6 a 8 semanas de idade feminina MC-deficiente C57BL/6J-Cpa3Cre /+ (Cpa3Cre /+) ratos e MC-suficiente C57BL/6J-Cpa3+/+ (controles de colônia; Cpa3+/+) com os machos BALB/c.</li>
	<li>Definir o dia de gestação (gd) 0 após a confirmação do plugue vaginal e tratar as fêmeas imediatamente após a confirmação do plug. Nota: Um plug é o esperma do macho no orifício vaginal da fêmea.<ol>
<li>Injectar 250 µ l de PBS intraperitonealmente em controle Cpa3+/+ fêmeas.</li>
		<li>Injetar 250 µ l de anti-CD122 (0,25 mg) intraperitonealmente em MC-deficiente Cpa3Cre /+ fêmeas. Nota: Uma injeção de 0,25 mg de anti-CD122 esgota NKs periféricas e uNKs no MC-deficiente Cpa3Cre /+ fêmeas conforme descrito anteriormente,22.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Espere até gd5. Nota: No gd5, existe a possibilidade de mais antiga para análise de implantação.<ol>
<li>Prossiga com as etapas 2-5 para a análise de ultrassom.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Realizar a ultra-sonografia em gd5, 8, 10, 12 e 14.</li>
</ol>2. preparação do sistema de ultra-som
<ol><li>Ligue o sistema (figura 1A; poder principal na parte traseira e o computador em espera no local da esquerda), a plataforma aquecida (figura 1B; no painel de controle) e o gel aquecedor (Figura 1). Nota: O gel de ultra-som precisa aquecer durante aproximadamente 0,5 h.</li>
	<li>Certifique-se de que a unidade de isoflurano é encher suficientemente (Figura 1).</li>
	<li>Abra um Novo estudo ou Nova série em um estudo existente no navegador. Preencha todas as informações necessárias (proprietário, nome do estudo, nome da série, dados obtidos em animais) na janela de Informação de estudar . Clique Okey.</li>
	<li>Depois de clicar Okey, certifique-se de que aparece a janela de imagem modo-B e a imagem em modo-B começa automaticamente.</li>
</ol>3. Mouse manipulação
<ol><li>Anesthetization do rato<ol>
<li>Posicione o mouse na caixa "knockdown" (Figura 1E), fechar a caixa, abrir o tubo de isoflurano para a caixa "knockdown" e ative o isoflurano (3,5% de concentração).</li>
		<li>Quando o mouse é inferior (de 1,5% de concentração), anestesiados e redirecionar o fluxo de isoflurano através da abertura do tubo na direção da plataforma de aquecimento e fechar o fluxo de caixa "knockdown". Nota: Para chegar a anestesia suficiente, espere um adicional de 10 s depois já não estiver movendo o mouse.</li>
		<li>Transferir o mouse rapidamente da caixa de nocaute para a plataforma de aquecimento (Figura 1F) em posição dorsal e posicione suavemente seu nariz no nariz anestesia tubo localizado na parte superior da plataforma.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fixação, depilação e preparação do mouse para medir<ol>
<li>Óculos de proteção Coloque creme em cada olho do rato para prevenir olhos secos.</li>
		<li>Coloque uma gota de gel de eletrodo em cada uma das quatro áreas cobre na plataforma aquecida (Figura 1F).</li>
		<li>Bata as patas com fita cirúrgica sobre as áreas de gel-revestido eletrodo da plataforma de aquecimento.</li>
		<li>Verifique o ECG [valor ideal = 450-550 batimentos/minuto (BPM)] e fisiologia respiratória em todos os momentos. Nota: Usando uma sonda rectal, medição de temperatura do corpo é possível, mas não necessário.</li>
		<li>Lugar creme depilatório creme no abdômen do mouse, esfregue o creme com um cotonete e esperar cerca de 1 min. Retire o creme com uma compressa embebida em água. Repita este passo se não todos os pelos sumiram.</li>
		<li>Aplica o gel de ultra-som pré-aquecido na pele depilada.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. medições e aquisição de imagens e vídeos
<ol><li>Segure o transdutor (Figura 1) com a mão ou apertá-lo no dispositivo de exploração (Figura 1 H; segurando o dispositivo é recomendado).</li>
	<li>Identificar a bexiga com o transdutor e usá-lo como ponto de referência. Mova o transdutor para os sites de esquerda e direito do abdômen para implantações de rastreamento.</li>
	<li>B-modo de visualização das estruturas anatômicas na imagem 2D em tons de cinza<ol>
<li>Mover o transdutor ou aquecimento tabela plataforma onde o mouse está fixado, até a primeira implantação é visível na tela em seu tamanho maior.<ol>
<li>Selecione Imagem rótulo e digite um nome, ou Frame Store (armazenamento sem nome) para armazenar quadros único, ou Loja de Cine para armazenar um cineloop para medições de implantação inteira.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Mova o transdutor ou tabela para trazer a placenta para uma posição onde o fluxo de sangue na UmA é visível. Armazenar um único quadro ou cineloop (consulte a etapa 4.3.1.1) para medições da placenta. Nota: As medições da placenta são possíveis de gd10 em diante.</li>
		<li>Continue com todos os implantes, usando o mesmo método.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Modo doppler cor para visualizar e determinar a direção do fluxo de sangue<ol>
<li>Pressione o botão de cor .</li>
		<li>Mover a caixa de cor (nesta área, o sinal é visível) para a posição desejada usando o trackball. Se necessário, alterar o tamanho da caixa, pressionando a atualização e mover o trackball (para a direita/para cima = maior; para o esquerdo lado para baixo = menor). Quando a caixa tem o tamanho certo, pressione selecionar.</li>
		<li>Loja quadros simples ou cineloops, conforme descrito na etapa 4.3.1.1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Modo doppler de onda de pulso (PW) para quantificar o fluxo de sangue através os vasos (artéria uterina, UA) da artéria uterina e UmA<ol>
<li>Localize a região de interesse na aquisição de doppler a cor. Nota: A UA está localizado caudal para a bexiga, e a UmA situa-se entre o feto e a placenta.</li>
		<li>Imprensa PWe uma linha tracejada aparecerá. Mover esta linha para o vaso sanguíneo de interesse e ajustar o ângulo da linha usando o botão de "Ângulo Doppler" em consonância com o fluxo de sangue. Pressione a atualização. Nota: O ângulo entre a direção do fluxo de sangue e o transdutor deve ser consistente em todos os animais, especialmente quando usando ângulos superiores a 60° (aqui, 70° para UAs e 45° para UmAs foram usados).</li>
		<li>Armazene um cineloop das linhas doppler aparecendo na janela de aquisição doppler PW.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. revisão e acabamento de aquisição de dados e salvar uma série
<ol><li>Para rever os dados, pressione estudo gestão. Role até a imagem em miniatura de interesse e clique duas vezes em Update.</li>
	<li>Pressione primeiro Estudo gestão e depois fechar na janela do navegador para concluir a aquisição de dados e salvar uma série gravada. Nota: Depois de fechar uma série, não é possível armazenar quadros ou cineloops mais nesta série.</li>
</ol>6. Mouse manipulação após a aquisição de dados
<ol><li>Retire o gel o animal anestesiado com a ajuda de compressas secas.</li>
	<li>A fita cirúrgica cuidadosamente retire as patas.</li>
	<li>Feche o tubo de isoflurano (0% de concentração).</li>
	<li>Prosseguir com a seguinte análise de ultrassom no gd5, 8, 10 e 12.<ol>
<li>Coloque o animal sozinho em uma gaiola para um mínimo de 5 min para que ele tenha tempo para acordar e orientar.</li>
		<li>Coloque o mouse volta para a gaiola original. Nota: Não desligue o isoflurano antes de remover o gel e fita cirúrgica, como ratos acordem muito rapidamente (cerca de 20 s) depois de desligar o isoflurano.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Prosseguir com a seguinte análise de ultrassom em gd14.<ol>
<li>Sacrifica a fêmea antes que acorde por deslocamento cervical. Abra o animal, remover o útero, separar os fetos e placentas e medir pesos fetais e placentários.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. copiar e importar os dados
<ol><li>Marque uma ou mais séries, clicando em Exportar para e escolha o espaço de armazenamento para copiar dados para um disco rígido.</li>
	<li>Abra o software em um computador e clique em Copiar de e selecione a estudo/série do disco rígido para importar uma série/estudo para o software.</li>
	<li>Analise os dados com o software.</li>
</ol>

<ol><li>Abramowicz, J. S., Kremkau, F. W., Merz, E. <a target="_blank" href="https://www.thieme-connect.com/products/ejournals/abstract/10.1055/s-0032-1312759">Ultraschall in der Geburtshilfe: Kann der Fötus die Ultraschallwelle hören und die Hitze spüren?</a> Ultraschall in der Medizin. 33 (3), Stuttgart, Germany. 215-217 (1980).</li>
<li>Jones, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echolocation%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Echolocation.</a> Current Biology. 15 (13), R484-R488 (2005).</li>
<li>Simmons, J. A. <a target="_blank" href="https://nyaspubs.onlinelibrary.wiley.com/doi/pdf/10.1111/j.1749-6632.1971.tb13095.x">The sonar receiver of the bat.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 188, 161-174 (1971).</li>
<li>Zala, S. M., Reitschmidt, D., Noll, A., Balazs, P., Penn, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex-dependent+modulation+of+ultrasonic+vocalizations+in+house+mice+%28Mus+musculus+musculus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Library+of+Science+ONE%22%5BJournal%5D)">Sex-dependent modulation of ultrasonic vocalizations in house mice (Mus musculus musculus).</a> Public Library of Science ONE. 12 (12), e0188647(2017).</li>
<li>Wöhr, M., Seffer, D., Schwarting, R. K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+Socio-Affective+Communication+in+Rats+through+Playback+of+Ultrasonic+Vocalizations%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Studying Socio-Affective Communication in Rats through Playback of Ultrasonic Vocalizations.</a> Current Protocols in Neuroscience. 75, 1-8 (2016).</li>
<li>Hasiniaina, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+frequency%2Fultrasonic+communication+in+a+critically+endangered+nocturnal+primate%2C+Claire%27s+mouse+lemur+%28Microcebus+mamiratra%29%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Primatology%22%5BJournal%5D)">High frequency/ultrasonic communication in a critically endangered nocturnal primate, Claire's mouse lemur (Microcebus mamiratra).</a> American Journal of Primatology. , e22866(2018).</li>
<li>Yeo, L., Romero, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Color+and+power+Doppler+combined+with+Fetal+Intelligent+Navigation+Echocardiography+%28FINE%29+to+evaluate+the+fetal+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+in+Obstetrics+%26+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Color and power Doppler combined with Fetal Intelligent Navigation Echocardiography (FINE) to evaluate the fetal heart.</a> Ultrasound in Obstetrics & Gynecology. 50 (4), 476-491 (2017).</li>
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<li>Blank, W., Schuler, A. <a target="_blank" href="https://econtent.hogrefe.com/doi/full/10.1024/1661-8157/a002703">Sonografie der Schilddrüse - Update 2017.</a> Praxis. 106 (12), 631-640 (2017).</li>
<li>Hansen, K. L., Nielsen, M. B., Ewertsen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonography+of+the+Kidney%3A+A+Pictorial+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostics%22%5BJournal%5D)">Ultrasonography of the Kidney: A Pictorial Review.</a> Diagnostics. 6 (1), Basel, Switzerland. (2015).</li>
<li>Older, R. A., Watson, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+anatomy+of+the+normal+male+reproductive+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Ultrasound%22%5BJournal%5D)">Ultrasound anatomy of the normal male reproductive tract.</a> Journal of Clinical Ultrasound. 24 (8), 389-404 (1996).</li>
<li>Reeves, J. J., Rantanen, N. W., Hauser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transrectal+real-time+ultrasound+scanning+of+the+cow+reproductive+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Transrectal real-time ultrasound scanning of the cow reproductive tract.</a> Theriogenology. 21 (3), 485-494 (1984).</li>
<li>Sharma, M., Somani, P., Sunkara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+gall+bladder+by+endoscopic+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastrointestinal+Endoscopy%22%5BJournal%5D)">Imaging of gall bladder by endoscopic ultrasound.</a> World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 10 (1), 10-15 (2018).</li>
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<li>Quaia, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+tissue+perfusion+by+contrast-enhanced+ultrasound%5BTitle%5D)+AND+%22European+Radiology%22%5BJournal%5D)">Assessment of tissue perfusion by contrast-enhanced ultrasound.</a> European Radiology. 21 (3), 604-615 (2011).</li>
<li>Saw, S. N., Poh, Y. W., Chia, D., Biswas, A., Zaini Mattar, C. N., Yap, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+hemodynamic+wall+shear+stresses+in+human+umbilical+vessels+from+normal+and+intrauterine+growth+restricted+pregnancies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomechanics+and+Modeling+in+Mechanobiology%22%5BJournal%5D)">Characterization of the hemodynamic wall shear stresses in human umbilical vessels from normal and intrauterine growth restricted pregnancies.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. , (2018).</li>
<li>Kessler, J., Rasmussen, S., Godfrey, K., Hanson, M., Kiserud, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+growth+restriction+is+associated+with+prioritization+of+umbilical+blood+flow+to+the+left+hepatic+lobe+at+the+expense+of+the+right+lobe%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Fetal growth restriction is associated with prioritization of umbilical blood flow to the left hepatic lobe at the expense of the right lobe.</a> Pediatric Research. 66 (1), 113-117 (2009).</li>
<li>Laurin, J., Lingman, G., Marsál, K., Persson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+blood+flow+in+pregnancies+complicated+by+intrauterine+growth+retardation%5BTitle%5D)+AND+%22Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Fetal blood flow in pregnancies complicated by intrauterine growth retardation.</a> Obstetrics and Gynecology. 69 (6), 895-902 (1987).</li>
<li>Arduini, D., Rizzo, G., Romanini, C., Mancuso, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+blood+flow+velocity+waveforms+as+predictors+of+growth+retardation%5BTitle%5D)+AND+%22Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">Fetal blood flow velocity waveforms as predictors of growth retardation.</a> Obstetrics and Gynecology. 70 (1), 7-10 (1987).</li>
<li>Meyer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chymase-producing+cells+of+the+innate+immune+system+are+required+for+decidual+vascular+remodeling+and+fetal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Chymase-producing cells of the innate immune system are required for decidual vascular remodeling and fetal growth.</a> Scientific Reports. 7, 45106(2017).</li>
<li>Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Ablation+of+Uterine+Natural+Killer+Cells+and+Uterine+Mast+Cells+in+Mice+Leads+to+Poor+Vascularization+and+Abnormal+Doppler+Measurements+That+Compromise+Fetal+Well-being%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Ablation of Uterine Natural Killer Cells and Uterine Mast Cells in Mice Leads to Poor Vascularization and Abnormal Doppler Measurements That Compromise Fetal Well-being.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1913(2017).</li>
<li>Evans, D. H., Jensen, J. A., Nielsen, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+color+Doppler+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Interface+Focus%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic color Doppler imaging.</a> Interface Focus. 1 (4), 490-502 (2011).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Usando nosso sistema de ultra-som, demonstrámos restrição de crescimento fetal em mães MC/NK-deficiente de gd10 na. Além disso, no gd10 e 12, observamos dimensões reduzidas da placenta e no gd14 a ausência ou a reversão de fluxo diastólico de final nas UmAs de alguns fetos de ratos uMC/uNK-deficiente. Este sinal de vascularização pobre foi associado com um índice de resistência significativa das artérias indicando IUGR. Resultados confirmam o papel importante das uMCs e uNKs durante a gravidez e o bem-estar fetal e na co...

Ultra-som é ondas sonoras com frequências acima da faixa audível do ouvido humano, superior a cerca de 20 kHz1. Animais como morcegos, país de Gales, golfinhos2,3, ratos4, ratos5, e lémures rato6 todos usar ultra-som para orientação ou comunicação. Seres humanos aproveitam-se do ultra-som para diversas aplicações técnicas e médicas. Um aparelho de ultra-som é capaz de criar a onda sonora e distribuir e representar o sinal. Se o ultra-som encontra um obstáculo, o som é refletido, absorvido ou atravessá-la. A aplicação do ultra-som como um método de imagem, chamada ecografia, é usada para a análise dos tecidos orgânicos em humanos ou medicina veterinária como o coração (ecocardiografia)7,8, pulmão9, glândula tireoide10 , rins11e13.12,o trato urinário e reprodutivo; detecção de cálculos biliares tumores de14 e15; e a avaliação da perfusão dos vasos sanguíneos ou órgãos de16,17. Ultrassom é um método padrão no pré-natal durante a gravidez, e fetal do desenvolvimento incapacidades ou deficiências podem ser reconhecidas cedo. Especificamente, o crescimento de um feto é estreitamente monitorado em intervalos regulares para reconhecer um possível IUGR. Finalmente, o fluxo sanguíneo fetal pode ser monitorado, como isto pode apontar crescimento restrições18,19,20,21.
Uma grande vantagem da ultra-sonografia em comparação com outros métodos, como radiografia é a inocuidade do som dos tecidos para ser analisado. Este método fácil e rápido é não-invasivo, indolor e pode ser usado várias vezes. O gasto inicial de um aparelho de ultra-som é caro; no entanto, os materiais consumíveis necessários são baratos. O sistema de ultra-som utilizado neste manuscrito é apropriado para uma variedade de modelos animais (i.e., ratos e peixes) enquanto que para os seres humanos, um dispositivo de ultra-som requer uma frequência de 3-15 mHz, uma frequência de 15-70 mHz é necessária para os ratos.
O presente manuscrito descreve um protocolo para o uso do modo B, modo doppler cor e modo de onda de pulso doppler. A descrição inclui preparação de ratos, bem como desempenho, aquisição de dados e armazenamento. Este método foi cepas de rato com êxito aplicada para diferentes gestacional em todos os dias e pode ser usado para investigar o desenvolvimento fetal e da placenta, bem como os parâmetros do sangue materno e fetal. Aqui, todos os aplicativos estão explicados com base em nossos estudos empregando ratos grávidas MC/NK-deficiente e controle.

<table><tbody><tr><td>LEAF anti-Maus CD122 (IL-2Rb)</td><td>BioLegend</td><td>123204</td><td>Klon TM-&beta; 1; 500 &micro; g</td></tr><tr><td>Sistema Vevo 2100</td><td> FujiFilm VisualSonics Inc.</td><td></td><td>Transdutor&nbsp; Software MS550D-0421</td></tr><tr><td>Vevo LAB</td><td> FujiFilm VisualSonics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Baxter</td><td>PZN: 6497131</td><td></td></tr><tr><td>Gel de eletrodo</td><td>Parker</td><td>12_8</td><td></td></tr><tr><td>Fita cirúrgica</td><td>3M Transpore</td><td>1527-1</td><td></td></tr><tr><td>Creme para os olhos</td><td>Bayer</td><td>PZN: 1578675</td><td></td></tr><tr><td>Aplicadores com ponta de algodão</td><td>Raucotupf</td><td>11969</td><td>100 peças</td></tr><tr><td>Creme depilatório</td><td>Reckitt Benckiser</td><td></td><td></td>2077626</tr><tr><td>Compressas</td><td>Nobamed Paul Danz AG</td><td>856110</td><td>10 x 10 cm</td></tr><tr><td>Gel de ultrassom</td><td>Gello GmbH</td><td>246000</td><td></td></tr></tbody></table>

ultra-som de alta frequência para a análise do desenvolvimento fetal e placentário na vivo

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

Ecografia é um método usado para detectar anomalias de órgãos e tumores nos tecidos humanos e animais. O método é não-invasivo, indolor e inofensivo, e a aplicação é fácil, rápido e pode ser feita em qualquer lugar, mesmo com dispositivos móveis. Durante a gravidez, o ecografia canonicamente é usada para acompanhar atentamente o desenvolvimento fetal. A técnica é importante para avaliar a restrição de crescimento intra-uterino (IUGR), uma complicação de gravidez com a curto e longo prazo consequências da saúde para a mãe e o feto. Compreender o processo de IUGR é indispensável para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas eficazes.
O sistema de ultra-som utilizado neste manuscrito é um dispositivo de ultra-som produzido para a análise de pequenos animais e pode ser usado em várias áreas de pesquisa, incluindo a investigação de gravidez. Aqui nós descrevemos o uso do sistema de análise em vivo de fetos de natural killer (NK) célula/mastócito (MC)-deficientes mães que dão à luz filhotes crescimento restrito. O protocolo inclui a preparação do sistema, manipulação dos ratos antes e durante as medições e o uso do modo-B, color doppler e modo doppler de onda de pulso. Foram analisados tamanho fetal, tamanho da placenta e fornecimento de sangue para o feto. Encontramos tamanhos reduzidos de implantação e menores placentas em camundongos NK/MC-deficiente do meio da gestação em diante. Além disso, MC/NK-deficiência foi associado ausente e inverteu o fluxo de diastólica final no fetal umbilicalis mesentéricos(UmA) e um índice de resistência elevada. Os métodos descritos no protocolo podem ser facilmente usados para tópicos relacionados e não relacionados à pesquisa.

Componentes individuais do sistema de ultra-som usado neste manuscrito são mostrados na Figura 1. A Figura 2 mostra o representante ultra-som imagens adquiridas no modo B-gd5, 8, 10 e 12 (B) e medição de área de implantação correspondente resultados (A), demonstrando uma área de implantação de redução significativa de anti-CD122-tratados Cpa3Cre / + ratos de gd10 em diante.
<p clas...

Aqui descrevemos a técnica de ultra-som de alta frequência para análise na vivo de fetos em camundongos. Esse método permite o acompanhamento de fetos e a análise dos parâmetros da placenta, bem como o fluxo de sangue materno e fetal durante a gravidez.

Ultra-som de alta frequência para a análise do desenvolvimento Fetal e placentário na Vivo

Ultrasound imaging is a widespread method used to detect organ anomalies and tumors in human and animal tissues. The method is non-invasive, harmless, and ...

Esse método é muito importante para responder a perguntas-chave nas áreas de Oncologia, Neuro-Biologia, Cardiologia e Desenvolvimento Fetal, e, claro, também é importante na área de pesquisa reprodutiva. As principais vantagens dessa técnica são que ela é não invasiva, indolor, fácil, rápida e permite o acompanhamento de fetos em pontos de tempo gestacionais relevantes ao longo da gravidez. Pelo menos meia hora antes do procedimento de imagem, ligue o sistema de ultrassom, a plataforma aquecida e o aquecedor de gel.Abra um novo estudo ou nova série em um estudo existente no navegador. Digite todas as informações necessárias na janela de informações do estudo. Clique em OK e confirme se a janela de imagem do modo B é exibida.Quando o ultrassom estiver pronto, confirme a falta de resposta ao aperto do dedo do dedo em um rato anestesiado e aplique pomada nos olhos do animal. Coloque uma gota de eletro gel em cada uma das 4 seções de cobre da plataforma aquecida, e fixe as patas nas seções revestidas de eletro gel da plataforma. Retire o cabelo do abdômen do animal com creme depilatório e um cotonete, lavando o creme da pele depilada após um minuto com uma compressa encharcada de água.Em seguida, aplique gel de ultrassom pré-aquecido na área exposta. Uma das razões para a baixa intensidade do sinal pode ser a baixa quantidade de gel colocada entre o mouse e o feixe de ultrassom. Em nossa experiência, uma quantidade bastante grande de gel é necessária para uma boa qualidade de sinal.Quando o animal estiver pronto, coloque o transdutor sobre a bexiga para uso como ponto de referência, e mova a mesa da plataforma de aquecimento para os lados esquerdo e direito do abdômen para traçar as implantações fetais no modo B 2D, ajustando o transdutor ou plataforma conforme necessário até que a primeira implantação seja visível na tela, em seu maior tamanho. Selecione Rótulo de imagem e digite um nome para o arquivo de imagem. Ajuste a posição da imagem, até que o fluxo sanguíneo dentro da arteria umbilicalis da placenta esteja à vista, e armazene um único quadro ou cineloop para medições placentárias.Para colorir a imagem do Doppler para determinar a direção do fluxo sanguíneo, pressione o botão Color e use a trackball para mover a caixa de cores para a posição apropriada, clique em Atualizar para ajustar o tamanho da caixa conforme necessário. Quando a caixa estiver do tamanho correto, clique em Selecionar e armazenar a imagem como experimentalmente apropriada. Para quantificação doppler de onda pulsada do fluxo sanguíneo através dos vasos, localize a região de interesse no modo de aquisição do Doppler colorido e clique em Pulse Wave.Uma linha tracejada aparecerá. Mova a linha para o vaso sanguíneo de interesse e use o botão de ângulo Doppler para ajustar o ângulo da linha para se alinhar com o fluxo sanguíneo. Para medições de doppler de onda pulsada, é importante observar o ângulo entre a direção do fluxo sanguíneo e o feixe de ultrassom.Ângulos muito altos, ou ângulos diferentes entre animais no mesmo experimento podem levar a medições de velocidade imprecisas. Em seguida, clique em Atualizar e armazenar cineloop das linhas Doppler que aparecem na janela de aquisição do Doppler de onda pulsada. Para revisar os dados, clique em Gerenciamento de Estudos, role até a imagem de interesse da miniatura e clique duas vezes em Atualizar, em seguida, clique em Gerenciamento de Estudo novamente e clique em Fechar a janela do navegador, para concluir a aquisição de dados e salvar uma série gravada.Para exportar os dados, conecte um disco rígido, clique em Exportar para marcar uma ou mais séries de dados e selecione o espaço de armazenamento para copiar os dados no disco rígido. Aqui, são mostradas imagens representativas de ultrassom adquiridas no modo B nos dias gestacionais 5, 8, 10 e 12, e seus resultados correspondentes de medição da área de implantação, revelando uma redução significativa na área de implantação em camundongos deficientes de mastro tratados anti-CD122 a partir do dia 10 gestacional. A imagem no modo B facilita a imagem e a medição de partes individuais de uma implantação.Por exemplo, animais deficientes de mastro tratados anti-CD122 demonstram uma redução significativa na área placentária, espessura e diâmetro em comparação com camundongos não tratados nos dias gestacionais 10 e 12. Em contraste, a área placentária e o diâmetro são semelhantes entre os grupos no dia gestacional 14, e a espessura placentária, um aumento significativo nos animais transgênicos tratados anti-CD122 em comparação com camundongos não tratados no dia 14 gestacional. Onda pulsada Doppler imagem da arteria uterina para medição do pico de velocidade sistólica e velocidade diastólica, e índice de resistência calculado, revelam valores semelhantes entre os animais tratados e não tratados.O índice de resistência da arteria umbilicalis em animais deficientes de células de mastro tratados anti-CD122, no entanto, é significativamente aumentado em comparação com camundongos não tratados. Ao tentar esse procedimento, é importante ter em mente que você deve fazer isso a cada dois dias, em vez de todos os dias, para evitar o estresse, e o risco de narcotização repetitiva dos animais. Após esse procedimento, outras medidas, como medição 3D, visualização e quantificação do movimento tecidual ao longo do tempo, medidas de pressão arterial e também injeções guiadas por ultrassom podem ser realizadas.Após seu desenvolvimento, esse método abriu caminho para médicos e pesquisadores da área de cuidados obstétricos e pré-natal, pois é possível acompanhar o desenvolvimento fetal e reconhecer possíveis anormalidades durante a gravidez.

high-frequency-ultrasound-for-analysis-fetal-placental-development

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Morte fetal e perinatal é uma característica comum quando se estuda alterações genéticas que afetam o desenvolvimento cardíaco. De alta freqüência ultra-sonografia tem melhorado 2-D resolução e pode fornecer excelentes informações sobre o desenvolvimento cardíaco precoce e é um método ideal para detectar o impacto sobre a estrutura e função cardíaca antes da morte.

Ecocardiografia Fetal murino

Neste vídeo, demonstramos a ultrassonografia de alta frequência para obter imagens de locais de implantação embrionária em um modelo murino prenhe. Esta técnica de imagem detecta com sucesso a gravidez viável e caracteriza os locais de implantação do embrião durante o início da gravidez murina.

Caracterização precoce da gravidez baseada em ultrassonografia de alta frequência: uma técnica para estudar a implantação embrionária e a progressão da gravidez em modelo murino prenhes

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Ultra-alta freqüência ultra-som é uma ferramenta de imagem ao vivo poderoso para examinar anormalidades cardíacas em pequenos animais. Sua noninvasiveness permite manter o estado fisiológico de embriões. Aqui, vamos mostrar o uso do M-modo ultra-som para medir os batimentos cardíacos de embriões em E18.5 no útero.

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Aqui, apresentamos um protocolo para injetar agentes de contraste de microbolhas de ultra-som de estar, isoladas de fim de gestação de embriões palco murino. Este método permite o estudo de parâmetros de perfusão e de marcadores moleculares vasculares dentro do embrião usando de alta freqüência ultra-sonografia com contraste.

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Um novo uso da ultra-sonografia tridimensional de alta frequência para caracterização de gravidez precoce no Mouse

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Imagem cardiovascular fetal de camundongo usando um sistema de ultrassom de alta frequência (30/45MHZ)

Descrevemos um sistema que utiliza três métodos para avaliar a segurança e a eficácia da entrega da droga placenta-alvo: no vivo de imagem para monitorar o acúmulo de nanopartículas, ultra-som de alta frequência para monitorar o desenvolvimento placentário e fetal e HPLC para quantificar a entrega da droga ao tecido.

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Análise de Zebrafish larvas Músculo Esquelético Integrity com Evans Blue Dye

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