Name: Avaliações comportamentais de locomoção espontânea em um modelo murino induzida por MPTP a doença de Parkinson (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 38 s
Description: Aprenda a avaliar a função motora em modelo murino de Parkinson com MPTP usando testes de cilindro e campo aberto sem treinamento prévio. Este método eficiente auxilia pesquisadores a estudar a eficácia de fármacos como L-DOPA.

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Nosso trabalho é financiado pela Tianjin graduação programas de formação para inovação e empreendedorismo (Grant no. 63183004). Este projeto foi iniciado no estado chave laboratório de medicamentos químicos biologia na Universidade de Nankai. Os autores declaram que não há nenhum conflito de interesses.

Este estudo foi realizado de acordo com as regras internacionais, nacionais e institucionais, considerando as experiências com animais. O protocolo de estudo foi aprovado pelo Comitê de ética animal da Universidade de Nankai.
1. aminoácidos Excitatórios e l-dopa administração
Nota: Camundongos BALB/c fêmeas de dez semanas de idade foram fornecidos pelo Instituto de Zoologia, da Academia Chinesa de Ciências. Os ratos foram alojados seis por gaiola sob um ciclo claro/escuro de 12 h (luzes acesas às 08:00-20:00), uma temperatura constante de 21-22 ° C e uma humidade relativa de 55% ± 5%. Comida de ratos padrão autoclavado da mesma formulação e água ad libitum foi dado a todos os animais.
<ol><li>Após uma semana de aclimatação, divida os animais em três grupos de seis ratos cada.</li>
	<li>Para o grupo 1, administrar injeções intraperitoneal (ver passo 1.5) de 250 µ l/rato/dia de soro do dia 1 ao dia 7 e em seguida, executar administração intragástrico (ver passo 1.6) de 250 rato / µ l de solução salina no dia 8.</li>
	<li>Para o grupo 2, administrar injeções intraperitoneal de 20 mg/kg/dia de MPTP, todos os dias do dia 1 ao dia 7 e em seguida, executar intragástrico administração de 250 µ l/rato de solução salina no dia 8.</li>
	<li>Para o grupo 3, administrar injeções intraperitoneal de 20 mg/kg/dia de aminoácidos Excitatórios do dia 1 ao dia 7 e em seguida, executar intragástrico administração de 5 mg/kg de l-dopa no dia 8.</li>
	<li>Execute a injeção intraperitoneal como segue.<ol>
<li>Carrega a droga para uma seringa estéril 1 mL com agulha 26G. Elimine o ar da seringa.</li>
		<li>Nuca o mouse com a barriga virada para cima. Manter a cabeça, pescoço e corpo do mouse em uma linha reta, bem com a cabeça fixada.</li>
		<li>Ângulo da agulha penetrar no peritônio. Empurre a agulha para uma distância apropriada até que haja pouca resistência e em seguida, injetar a droga. Retire a agulha suavemente.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Execute a administração intragástrico como segue.<ol>
<li>Prepare a medicação em uma seringa de 1ml estéril com uma agulha de gavagem-oral. Elimine o ar da seringa.</li>
		<li>Segure o mouse com a barriga virada para cima. Mantenha a cabeça, pescoço e corpo do mouse em uma linha reta com a cabeça fixada.</li>
		<li>Manter a agulha paralela ao corpo do mouse e inseri-lo no canto da boca do mouse, pressionando a língua e empurrando para dentro contra o maxilar superior.</li>
		<li>Com pouca resistência, que mostra a agulha está entrando suavemente o esôfago, empurre com cuidado a agulha em uma distância apropriada. Antes que a ponta da agulha atinge a parte inferior do peito, injecte o medicamento.</li>
		<li>Retire a agulha suavemente.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. teste de cilindro
Nota: Os testes comportamentais foram realizados no dia 8. L-dopa foi injetada ao terceiro grupo de ratos 40 min antes dos testes comportamentais. Se os testes comportamentais não é feito na mesma sala onde os animais estão alojados, os animais precisam ser aclimatados à nova sala para 30-60 min antes do teste.
<ol><li>Realize o teste de 24 horas após a última dose de aminoácidos Excitatórios.</li>
	<li>Coloque um cilindro de vidro transparente (altura = 19,5 cm, diâmetro = 15 cm, peso ≥ 1 kg) no centro de uma tabela. Cercam o cilindro em três lados com papelão preto para reduzir o efeito de iluminação ambiental. Deixe um lado do cilindro virado para a câmera para gravação de vídeo. Nota: A distância entre o cartão e o cilindro deve estar cerca de 4 a 8 cm.</li>
	<li>Colocar uma câmera (> 1 milhão-pixels de resolução) em ~ 40-60 cm de distância do cilindro para garantir que o cilindro completo é visível. Nota: Esta é demasiado perto nem longe demais a fim de não perturbar o mouse enquanto gravava o vídeo de seu movimento.</li>
	<li>Colocar um rato dentro do cilindro de cada vez e começar a filmar imediatamente. Pare de filmar após 3 min. Nota: Durante este processo, tentar evitar o ruído ou mudanças de luz, a fim evitar influenciar o comportamento do rato.</li>
	<li>Coloque o mouse volta para a jaula para casa após o teste.</li>
	<li>Limpe a garrafa com água e em seguida, spray etanol a 70% v/v ao longo da parede interna higienizar e remover rato perfumes. Seque o cilindro antes de outro rato é colocado no.</li>
	<li>Reproduzir o vídeo em uma taxa de 0,5 x a velocidade normal e contar o número de elevadores de pata contra a parede de cada rato. Nota: Pata elevadores ocorrem quando o mouse cresce em seus membros traseiros, levanta as duas patas dianteiras acima do nível do ombro e terras. Um elevador do membro anterior não é contado. Normalmente, um mouse gera seus membros dianteiros para tocar as paredes do cilindro. Se o mouse gera seus membros dianteiros, acima dos ombros várias vezes continuamente sem pouso, ele deve ser contado apenas como uma vez.</li>
</ol>3. teste de campo aberto
<ol><li>Realize o teste de campo aberto 24 h após a dose de aminoácidos Excitatórios. Nota: Isso pode ser realizado ao mesmo tempo do teste do cilindro.</li>
	<li>Preparar uma caixa de reação de campo aberto transparente (45 cm L x 45 cm de larg x 25 cm H) com uma tampa da placa de madeira na parte inferior por um pano preto. Corrigir uma câmera (> 1 milhão-pixels de resolução) sobre o campo a uma altura de 1 m. Nota: A cor de fundo de caixa de campo aberto deve ser diferente da cor do mouse testado para assegurar o contraste de cores no vídeo.</li>
	<li>Ajuste a câmera para certificar-se de que a caixa de reação de campo aberto é bem no centro do vídeo.</li>
	<li>Colocaram um rato de teste na caixa e deixe o mouse familiarizar-se com o ambiente por cerca de 1 min.</li>
	<li>Gravar um vídeo de 5 min usando a câmera conectada ao computador.</li>
	<li>Analisar o vídeo usando ferramentas de software (por exemplo, MATLAB) para obter a figura de rastreamento de movimento, a distribuição de estática (velocidade < 1 cm/s), andando (velocidade 1-20 cm/s) e execução (velocidade > 20 cm/s) o tempo, o total percorrido distância e a média velocidade de cada rato testado. Nota: Quando se analisa o vídeo, acompanhamos todo o corpo do mouse. A velocidade média de um corpo significa o comprimento total do caminho coberto, dividido pelo tempo decorrido. Portanto, se um mouse não se move, sua velocidade instantânea seria considerada como zero.</li>
	<li>Limpe qualquer fezes na caixa de reação de campo aberto. Pulverizar o etanol a 70% na caixa e limpe-a.</li>
</ol>

<ol><li>Dehay, B., Bourdenx, M., Gorry, P., Przedborski, S., Vila, M., Hunot, S., Singleton, A., Olanow, C. W., Merchant, K. M., Bezard, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+-synuclein+for+treatment+of+Parkinson%27s+disease%3A+mechanistic+and+therapeutic+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Targeting -synuclein for treatment of Parkinson's disease: mechanistic and therapeutic considerations.</a> Lancet Neurology. 14, 855-866 (2015).</li>
<li>Weintraub, D., Comella, C., Horn, L., S, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease+-+Part+1%3A+Pathophysiology%2C+symptoms%2C+burden%2C+diagnosis%2C+and+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Managed+Care%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease - Part 1: Pathophysiology, symptoms, burden, diagnosis, and assessment.</a> American Journal of Managed Care. 14, 40-48 (2008).</li>
<li>Ismaiel, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metformin%2C+besides+exhibiting+strong+in+vivo+anti-inflammatory+properties%2C+increases+mptp-induced+damage+to+the+nigrostriatal+dopaminergic+system%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+and+Applied+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Metformin, besides exhibiting strong in vivo anti-inflammatory properties, increases mptp-induced damage to the nigrostriatal dopaminergic system.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. , 19-30 (2016).</li>
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<li>Chiba, K., Trevor, A., Castagnoli, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+the+neurotoxic+tertiary+amine%2C+MPTP%2C+by+brain+monoamine+oxidase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+%26+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Metabolism of the neurotoxic tertiary amine, MPTP, by brain monoamine oxidase.</a> Biochemical & Biophysical Research Communications. 120 (2), 574-578 (1984).</li>
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<li>Langston, J. W., Irwin, I., Langston, E. B., Forno, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1-methyl-4-phenylpyridinium+ion+%28MPP%2B%29%3A+identification+of+a+metabolite+of+MPTP%2C+a+toxin+selective+to+the+substantia+nigra%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">1-methyl-4-phenylpyridinium ion (MPP+): identification of a metabolite of MPTP, a toxin selective to the substantia nigra.</a> Neuroscience Letters. 48 (1), 87-92 (1984).</li>
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<li>Cassady, J. C., Johnson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+test+anxiety+and+academic+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Contemporary+Educational+Psychology%22%5BJournal%5D)">Cognitive test anxiety and academic performance.</a> Contemporary Educational Psychology. 27 (2), 270-295 (2002).</li>
<li>Rogalewski, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semaphorin+6A+improves+functional+recovery+in+conjunction+with+motor+training+after+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Semaphorin 6A improves functional recovery in conjunction with motor training after cerebral ischemia.</a> Plos One. 5 (5), 0010737(2010).</li>
<li>Chen, W., Qiao, D., Liu, X., Shi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treadmill+exercise+improves+motor+dysfunction+and+hyperactivity+of+the+corticostriatal+glutamatergic+pathway+in+rats+with+6-ohda-induced+parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Plasticity%22%5BJournal%5D)">Treadmill exercise improves motor dysfunction and hyperactivity of the corticostriatal glutamatergic pathway in rats with 6-ohda-induced parkinson's disease.</a> Neural Plasticity. 2017, 2583910(2018).</li>
<li>Colas-Zelin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+imposition+of%2C+but+not+the+propensity+for%2C+social+subordination+impairs+exploratory+behaviors+and+general+cognitive+abilities%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">The imposition of, but not the propensity for, social subordination impairs exploratory behaviors and general cognitive abilities.</a> Behavioural Brain Research. 232 (1), 294-305 (2012).</li>
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<li>Valle, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+strain%2C+sex%2C+and+illumination+on+open-field+behavior+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Psychology%22%5BJournal%5D)">Effects of strain, sex, and illumination on open-field behavior of rats.</a> American Journal of Psychology. 83, 103-111 (1970).</li>
<li>Tatem, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+Locomotor+Measurements+Using+an+Open+Field+Activity+Monitoring+System+for+Skeletal+Muscle+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Behavioral and Locomotor Measurements Using an Open Field Activity Monitoring System for Skeletal Muscle Diseases.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51785(2014).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Devido à destruição dos neurônios dopaminérgicos na substância negra do cérebro, MPTP causa sintomas de Parkinson em ratos7. L-dopa é a droga preferida para PD desde seu uso clínico, porque ele ajuda a manter as atividades diárias normais em pacientes com a polícia, com a supressão eficaz de anormalidades motor incluindo acinesia e rigidez15. Os ratos tratadocom com MPTP mostrou deficiências nos testes comportamentais como teste de cilindro e teste de campo aberto, o que po...

A doença de Parkinson (PD), uma das doenças mais comuns entre indivíduos mais velhos, é um longo prazo neurodegenerativas transtorno1. Pacientes sempre mostram o fenômeno de agitação, rigidez, lentidão de movimentos e demência que piorar com o tempo2. Outros sintomas, incluindo sensorial, sono e problemas emocionais são também comumente observados2. A causa da DP ainda é incerto, mas geralmente acredita-se que envolvem fatores genéticos e ambientais, que induzem a perda de neurônios dopaminérgicos na substância negra3e o desenvolvimento de corpos de Lewy e neuritos de Lewy, em várias regiões do cérebro4.
Entre os estudos de PD, 1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP)5 é adaptado amplamente em recriar alguns sintomas de PD em modelos experimentais. Em 1984, Langston et al primeiro descobriu que injeções de aminoácidos Excitatórios em macacos-esquilo resultaram em parkinsonismo6. Embora o modelo de roedores MPTP não mostra a presença de corpos de Lewy, que é o biomarcador de PD, MPTP causa sintomas de Parkinson, destruindo os neurônios dopaminérgicos na substância negra do cérebro7. Em comparação com outro modelo de drogas para a polícia como aquelas induzidas por 6-hydroxydopamine (6-OHDA)8 e9de 1-metil-4-phenylpyridinium (MPP +), injeção de MPTP é fácil de executar e o modelo do MPTP leva menos tempo. Os ratos recebem injeções de MPTP (20-30 mg/kg/dia) por sete dias e os testes comportamentais são executadas no oitavo dia10.
O teste de campo aberto11 foi desenvolvida pelo Calvin S. Hall, um americano de12. Em vários estudos, diferentes tipos de comportamentos são testados. Na pesquisa que incide sobre as doenças de Parkinson, comportamentos como atividades de locomoção e a velocidade de locomoção são testados para ver se a capacidade do animal para se movimentar é afectada. Em comparação com outros métodos usados para testar a criação de animais de PD, teste de campo aberto é fácil de realizar, porque o equipamento necessário é simples, e software de análise prototipagem e dados (por exemplo, MATLAB, Excel) pode ser usado para coletar e gráfico facilmente a dados. Além disso, o coeficiente de variação é relativamente pequena13, que significa que o resultado do teste de campo aberto é confiável. Outra vantagem sobre outros métodos é que os comportamentos incluídos neste experimento são fáceis de distinguir; os ratos podem ser correndo, andando ou parado. Geralmente o teste de campo aberto pode ser usado em roedores quando o pesquisador precisa avaliar a mobilidade do sujeito.
O teste de cilindro é também chamado o teste de utilização assimétrica dos membros dianteiros. Quando este teste foi inicialmente concebido, foi usado para testar o uso assimétrico de membros dianteiros14 o rato. Aqui, podemos usar este teste para analisar a capacidade do animal para esticar e usar os dois de seus membros dianteiros para explorar novos ambientes. Quando a substância negra e corpo estriado são danificados por aminoácidos Excitatórios no cérebro, o animal tende a arquear suas costas e se torna menos provável a esticar-se e explorar o ambiente desconhecido. Este teste é fácil de executar e pode dar um resultado preliminar. No entanto, este teste tem alta variabilidade interna, então ele é geralmente usado com juntamente com outras experiências de comportamento.
Tomar l-dopa, que também é conhecido como levodopa ou L-3,4-dihidroxifenilalanina, é uma forma comum de tratar a doença de Parkinson, uma vez que uma das causas da DP é a diminuição da dopamina na. L-dopa é o precursor da dopamina. Mas ao contrário da dopamina, pode atravessar a barreira sangue - cérebro, que significa que será mais eficiente em aumentar a concentração de dopamina na área do cérebro. Depois de cruzar a barreira sangue - cérebro, l-dopa é convertida em dopamina pela L-amino-descarboxilase ácida15.
Aqui descrevemos a medição e análise da função motora em camundongos de modelo MPTP-induzida-PD usando um teste de cilindro14 e um teste de campo aberto modificados. Podemos administrar l-dopa como um exemplo para mostrar como aplicar este modelo no estudo de drogas de PD. Nossos resultados indicam que o MPTP induz déficit motor que pode ser atenuado por l-dopa.

<table><tbody><tr><td>70% Etanol</td><td>Ruiboxing Company</td><td>RBX-64175</td><td></td></tr><tr><td>Câmera</td><td>BASLER</td><td>acA645-100gm</td><td></td></tr><tr><td>Teste de cilindro</td><td>Feito internamente na Universidade de Nankai</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>Levodopa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>72816</td><td></td></tr><tr><td>Matalb 2017a</td><td>Mathworks</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>Instituto de Zoologia de Camundongos</td><td>, Academia Chinesa de Ciências</td><td>Balb / c</td><td>Camundongos fêmeas adultas (10 semanas)</td></tr> <tr><td>MPTP</td><td>Yuanye Biological Technology Company Ltd., Xangai</td><td>S31504-500mg</td><td></td></tr><tr><td>Teste de campo aberto</td><td>Feito internamente na Universidade de Nankai</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>Seringa</td><td>Solelybio</td><td>S-xsgwz-w</td><td>Seringa de irrigação</td></tr><tr><td></td><td>Jiangxi Fenglin Medical Aplicação Co.</td><td>hc3824</td><td>Injeção intraperitoneal</td></tr></tbody></table>

avaliações comportamentais de locomoção espontânea em um modelo murino induzida por mptp a doença de parkinson

Behavioral Assessments of Spontaneous Locomotion in a Murine MPTP-induced Parkinson's Disease Model

A doença de Parkinson (PD) é uma doença comum da desordem neurodegenerativas, causando o fenômeno de agitação, rigidez, lentidão de movimentos e demência. 1-methyl-4-Phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) pode levar a alguns sintomas de Parkinson, destruindo os neurônios dopaminérgicos na substância negra do cérebro. Tem sido assim era estabelecer modelos de PD em vários estudos com animais. Aqui, os ratos recebem injeções de MPTP (20 mg/kg/dia) por sete dias e os testes comportamentais são executadas no oitavo dia. Este modelo é adaptado com eficiência no estudo de PD. Os testes comportamentais aqui incluem o teste de cilindro e o teste de campo aberto. O experimento de cilindro é usado para detectar a capacidade dos animais para levantar suas patas da frente quando colocadas em um ambiente diferente. Como o PD ratos modelo mostram arqueando — o mouse arcos suas costas — o número de diminuição de carregamentos de pata. Este teste é fácil de executar. O teste de campo aberto é usado para detectar a quantidade de tempo que os ratos passam correndo, andando, e permanecendo imóvel. Podemos analisar os movimentos dos animais em campo aberto, utilizando o software e obter dados. Por último, nós usamos o l-dopa, um dos mais comumente usado drogas PD, como um exemplo para mostrar como aplicar este modelo para o estudo de drogas de PD. Nossos resultados indicam que a neurotoxicidade MPTP induz déficit motor, que pode ser atenuado por l-dopa.

No teste de cilindro, a diminuição de fundos contra a parede foi observada em camundongos (grupo 2) tratados com aminoácidos Excitatórios do dia 1 ao dia 7 e solução salino no dia 8, em comparação com os ratos tratados com solução salina (grupo 1), enquanto observou-se um aumento de traseiros nos ratos (grupo 3) tratados com MP TP do dia 1 ao dia 7 e a l-dopa no dia 8, em comparação com os ratos (grupo 2) tratadocom com aminoácidos Excitatórios do dia 1 ao dia 7 e solução salino no dia 8 ...

Descrevemos o estabelecimento de um modelo murino para a doença de Parkinson usando MPTP e avaliações comportamentais usando o cilindro e testes de campo aberto para medir a função motora. Então usamos l-dopa como um exemplo para mostrar como aplicar este modelo no estudo de drogas de PD.

Avaliações comportamentais de locomoção espontânea em um modelo murino induzida por MPTP a doença de Parkinson

Parkinson&#8217;s disease (PD) is a common neurodegenerative disorder disease, causing the phenomenon of shaking, rigidity, slowness of movement and ...

Neste vídeo, introduzimos como usar um cilindro e teste de campo aberto para estreitar a função motora no modelo MPTP da doença de Parkinson. A principal vantagem é que os ratos não precisam ser treinados antes do teste comportamental. Além disso, esse método é eficiente e o custo do equipamento é baixo.Indivíduos novos em testes comportamentais podem subestimar o efeito da interferência ambiental. Manter-se quieto e evitar mudanças no forro ajudará. Aqui, o teste comportamental é realizado 24 horas após a injeção final de um regime de sete dias de injeções de MPTP ou soro fisiológico e 40 minutos após a administração intragástrica do L-DOPA a um subconjunto dos animais.Se os testes comportamentais não forem realizados na mesma sala onde os animais estão alojados, aclimatar os ratos à nova sala por 30 a 60 minutos antes do teste. Comece colocando um cilindro de vidro transparente no centro de uma mesa. Cerque o cilindro em três lados com papelão preto, colocado de quatro a oito centímetros de distância do cilindro para reduzir o efeito da iluminação ambiental.Deixe um lado do cilindro voltado para a câmera para gravação de vídeo. Conecte uma câmera capaz de pelo menos um milhão de pixels de resolução de 40 a 60 centímetros de distância do cilindro para garantir que todo o cilindro esteja contido no campo de visão. Coloque um rato no cilindro de cada vez e comece a filmar de uma vez.Durante este processo tente evitar alterações de ruído ou luz, a fim de evitar influenciar o comportamento do mouse. As elevações das patas ocorrem quando o rato se levanta sobre seus membros traseiros, levanta os dois membros dianteiros acima do nível do ombro e pousa. Pare de filmar depois de três minutos e coloque o rato de volta na gaiola.Limpe o cilindro com água e depois pulverize 70% de etnol sobre a parede interna para higienizá-lo e remover os cheiros do rato. Limpe o cilindro antes de testar o próximo mouse. Uma vez concluído o teste, reprodumente o vídeo a uma taxa de 0,5 vezes a velocidade regular e conte o número de elevações de patas contra a parede de cada mouse.Se o mouse levantar seus membros dianteiros acima do nível do ombro várias vezes continuamente sem aterrissagem, ele deve ser contado apenas uma vez. Realize testes de campo aberto durante a mesma sessão do teste do cilindro. Prepare uma caixa de reação de campo aberto transparente com uma placa de madeira, coberta por um pano preto ou branco contrastante, dependendo da cor do mouse.Conserte uma câmera sobre o campo a uma altura de um metro. Ajuste a câmera para ter certeza de que a caixa de reação de campo aberto está bem no centro do vídeo. Coloque um mouse de teste na caixa e deixe o mouse se familiarizar com o ambiente por cerca de um minuto.Grave um vídeo de cinco minutos usando a câmera conectada ao computador. Finalmente, limpe as fezes na caixa de reação do campo aberto, pulverize 70% de etanol na caixa e limpe-a. No teste do cilindro, observou-se diminuição do número de traseiras contra a parede em camundongos tratados com MPTP em comparação com camundongos tratados com soro fisiológico.O aumento das traseiras foi observado nos camundongos tratados com MTPT, dado l-dopamina no dia do teste, em comparação com os camundongos tratados com MPTP que recebem soro fisiológico. Esta imagem mostra o traço de movimento representativo e a distribuição de tempo estático, tempo de caminhada e tempo de execução em ratos de controle não tratados com MPTP. Camundongos tratados com MTPT demonstraram menor velocidade de movimento, menor distância de movimento, maior tempo estático e menor tempo de execução do que camundongos tratados com soro fisiológico, demonstrando um déficit motor induzido pelo MTPT.Os camundongos tratados com MPTP que recebem L-Dopamina apresentaram maior velocidade de movimento, maior distância de movimento, menor tempo estático e maior tempo de funcionamento do que os camundongos tratados apenas com MPTP, indicando que a L-Dopamina mitiga o déficit motor induzido pelo MPTP. Ao mudar os camundongos sendo testados limpe completamente a área e pulverize o etanol para eliminar o efeito do perfume dos antigos camundongos. Após este procedimento, outras medidas como o teste de caminhada do feixe, teste de polo podem ser realizadas.Dados relacionados à capacidade de equilíbrio e capacidade motora podem ser obtidos através desses métodos. O MPTP é neurotóxico para camundongos e humanos e, portanto, precauções rigorosas devem ser tomadas para evitar a exposição. Epi extra, como uma máscara ou respirador deve ser usado.

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Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Doença de Parkinson é causada pela perda da inervação dopaminérgica para o estriado, que pode ser induzida experimentalmente por 6-OH-dopamina. Descrevemos como executar uma lesão estereotáxica e monitorar induzida por apomorfina comportamento rotacional em camundongos. Este modelo é útil e confiável para testes de novas terapias para a doença de Parkinson.

Modelo murino para a doença de Parkinson: a partir de 6-OH lesão dopamina para teste comportamental

Nos distúrbios da doença de Parkinson e de movimento, em geral, os ensaios comportamentais sensíveis e fiáveis ​​são essenciais para testar novas terapêuticas potenciais. Aqui, descrevemos uma bateria gerenciável de testes sensório-motores para os ratos que são sensíveis a diferentes graus de lesão no sistema nigroestriatal e útil para estudos pré-clínicos.

Avaliação da função sensório-motora em rato modelos de doença de Parkinson

Análise cinemática da marcha no plano sagital produz informações altamente precisas sobre como o movimento é executado. Descrevemos a aplicação destas técnicas para identificar déficits da marcha de ratos submetidos a desmielinização mediada por doença auto-imune. Esses métodos também podem ser usados para caracterizar os déficits da marcha para outros modelos de rato com locomoção prejudicada.

Análise cinemática da marcha de sagital em camundongos C57BL/6 sujeitado a MOG35-55 induzido encefalomielite auto-imune Experimental

Neste estudo, vamos mostrar o uso da análise cinemática da marcha com base no plano ventral da imagem latente para monitorar as mudanças sutis na coordenação motora, bem como a progressão de neurodegeneração com o avançar da idade em modelos do rato (por exemplo, endophilin mutante linhas de rato).

Análise de marcha de idade-dependente de perturbações Motor em camundongos com neurodegeneração

A análise de pegada é uma alternativa de baixo custo para programas digitalizados de análise da marcha para pesquisadores que quantifiquem anormalidades de movimento em camundongos. Devido à sua velocidade, simplicidade e potencial longitudinal, é ideal para a fenotipagem comportamental de modelos de mouse.

Análise de marcha de baixo custo para fenotipagem comportamental de modelos de camundongo de doença neuromuscular

Aqui descrevemos o sistema RatWalker, construído redesenhando o aparelho MouseWalker para acomodar o aumento do tamanho e peso dos ratos. Este sistema usa reflexão interna total frustrada (FTIR), captura de vídeo de alta velocidade e software de análise de acesso aberto para rastrear e quantificar os parâmetros da marcha.

Aplicando o Sistema RatWalker para Análise de Marcha em um Modelo de Rato Genético da Doença de Parkinson

Este manuscrito apresenta um conjunto de testes comportamentais altamente reprodutíveis para validar um modelo de camundongo com síndrome de Angelman.

Caracterização comportamental de um modelo de camundongo com síndrome de Angelman

Um pipeline experimental para descrever quantitativamente o padrão locomotor de camundongos que caminham livremente usando a caixa de ferramentas MouseWalker (MW) é fornecido, variando de gravações de vídeo iniciais e rastreamento até análise pós-quantificação. Um modelo de lesão por contusão medular em camundongos é empregado para demonstrar a utilidade do sistema MW.

Uso do MouseWalker para Quantificar a Disfunção Locomotora em um Modelo de Lesão Medular em Camundongos

Esse protocolo estabelece um paradigma de fenotipagem comportamental em larvas de peixe-zebra tratadas com MPTP para avaliar déficits motores e não motores, semelhantes à doença de Parkinson.

Perfilamento fenotípico de fenótipos comportamentais semelhantes ao parkinsoniano induzidos por MPTP em larvas de peixe-zebra com base em experimento comportamental

Demonstramos como uma medida objectiva pode ser empregue no paradigma ilusão da mão de borracha largamente utilizado. Esta medida é obtida por modificação da tarefa bem estabelecida congruência crossmodal. Esta tarefa permite a investigação de processos multissensoriais que são críticos para modulações de representações do corpo, como na ilusão da mão de borracha.

A Task Congruência Crossmodal como um meio para se obter uma medida comportamental Objetivo no Rubber Mão Illusion Paradigm

Aprenda a avaliar a função motora em modelo murino de Parkinson com MPTP usando testes de cilindro e campo aberto sem treinamento prévio. Este método eficiente auxilia pesquisadores a estudar a eficácia de fármacos como L-DOPA.

Avaliações comportamentais de locomoção espontânea em um modelo murino induzida por MPTP a doença de Parkinson

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