Name: Coloração fluorescente de prata das proteínas em gel de poliacrilamida (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 24 s
Description: Aprenda a técnica de coloração fluorescente de prata para detecção de proteínas em géis de poliacrilamida. Este método utiliza uma sonda fluorogénica específica para iões de prata, oferecendo maior sensibilidade e especificidade do que as colorações cromogénicas tradicionais.

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Os autores gostaria agradecer Patrick Chan no centro de Lau Wai Ming para medicina reparativa, Karolinska Institutet, seu suporte técnico. S. X. é grato pelo apoio do Conselho de pesquisas sueco (Grant No. 2017-06344).

1. preparação do Gel
Nota: A demonstração segue um protocolo padrão para preparar o gel para coloração pouco depois de SDS-PAGE12. Em resumo, as etapas a seguir descrevem a preparação das amostras e electroforese do gel.
<ol><li>Executar SDS-PAGE com géis de proteína de Bis-Tris 4% - 12% (1 mm, 15-bem) usando um gel de mini tanque cheio de 2-(N -Morpholinos) etanesulfónico tampão de ácido (MES).</li>
	<li>Dilua as amostras com uma mistura de água destilada, lítio Dodecil sulfato de sódio (LDS) buffer e um agente de redução de amostra.</li>
	<li>Carrega a primeira pista com o dobro da quantidade de ações (10 µ l), seguida a quantidade normal de estoque (5 µ l) e uma série de diluições do estoque posteriormente (13 diluições, de 2x para 8192 x).</li>
	<li>Funcione o gel em uma constante tensão de 200 V para 30 min.</li>
</ol>2. fixação do Gel
<ol><li>Após a electroforese, mergulhe o gel em uma solução de 100 mL de ácido acético a ethanol/10% 40% em um agitador orbital a 50 rpm em temperatura ambiente 2 x (cada um por 30 min), ou durante a noite a 4 ° C.</li>
	<li>Lave o gel 3 x 10 min cada em água ultrapura em um recipiente limpo. A etapa de lavagem é crítica. Se o ácido da solução fixação não for devidamente removido na etapa de desenvolvimento fluorogenic, a excessiva TPE-4TA será ativado pelo ácido e levar a fluorescência de fundo forte no gel.</li>
</ol>3. preparação do AgNO3solução e impregnação de prata do Gel
<ol><li>Tornar a solução de3 AgNO (0,0001%) para a impregnação, em primeiro lugar, dissolva 0,01 g de AgNO3 em 10 mL de água ultrapura para preparar uma solução a 0,1% AgNO3 ações. Em seguida, adicione 100 µ l da solução estoque de 0.1% AgNO3 em 100 mL de água ultrapura para fazer a solução de trabalho. Nota: A solução de AgNO3 deve ser armazenada no escuro antes de usar.</li>
	<li>Impregnar o gel com 100 mL de solução para 1h de trabalho em um agitador orbital a 50 rpm em um recipiente de vidro fechado de prata. É fundamental para realizar a impregnação de prata sob uma coifa, protegida da luz com papel alumínio.</li>
	<li>Lave o gel com água ultrapura (cerca de 100 mL) em um recipiente limpo para 2 x 60 s.</li>
</ol>4. Fluorogenic desenvolvimento do Gel
<ol><li>Para preparar a solução de corante (0,1 mM), adicione 3,0 mg do TPE-4TA corante em 50 mL de água ultrapura. Proceda à sonicação a solução por alguns minutos e adicionar uma solução de NaOH (por exemplo, 1 M) para ajudar a dissolver o corante.</li>
	<li>Verifique se a fluorescência da solução sob uma lâmpada de nanômetro UV 365 para garantir que a molécula do corante é totalmente dissolvida. Só soluções fracas ou nonemissive indicam dissolução completa. Nota: A tintura que TPE-4TA foi sintetizada a seguir o protocolo recentemente relatado por Xie et al 10 a TPE-4TA solução é muito estável e pode ser mantida no escuro por meses.</li>
	<li>Para preparar 100 mL da solução em desenvolvimento fluorogenic (10 µM), adicione 10 mL da solução-mãe TPE-4TA em 90 mL de água ultrapura. Verificar o pH da solução usando um medidor de pH e ajustá-lo a 7-9 usando uma solução de hidróxido de sódio (1 µM).</li>
	<li>Transferi o gel para um recipiente limpo e selável com 100 mL da solução em desenvolvimento fluorogenic. Certifique-se que o gel está totalmente imerso na solução. Sele o contêiner. Cobri-lo de luz e agitá-lo durante a noite em um agitador orbital a 50 rpm, à temperatura ambiente. Alternativamente, a etapa de incubação também pode ser reduzida para cerca de ~ 2 h por pré-aquecimento a solução em desenvolvimento AIE a 80 ° C, para a coloração e em seguida, deixando-o à temperatura ambiente.</li>
</ol>5. descoloração e imagem
<ol><li>Transferir o gel para um recipiente limpo e destain-lo em 100 mL de etanol a 10% por 30 min. Nota: A água sozinha pode ser usada para lavar o gel. No entanto, é mais tempo-eficiente usar uma solução de etanol de 10% para a descoloração. Isto ajudará a reduzir o processo de descoloração de horas a 30 min.</li>
	<li>Lave o gel em água ultrapura por 5 min.</li>
	<li>Imagem do gel na 365 nm ou 302 nm canais, por uma máquina de documentação de gel.</li>
</ol>

<ol><li>Chevalier, F. <a target="_blank" href="https://proteomesci.biomedcentral.com/articles/10.1186/1477-5956-8-23">Highlights on the capacities of &#34;Gel-based&#34; proteomics.</a> Proteome Science. 8 (1), (2010).</li>
<li>Harris, L. R., Churchward, M. A., Butt, R. H., Coorssen, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+detection+methods+for+gel-based+proteomic+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Proteome+Research%22%5BJournal%5D)">Assessing detection methods for gel-based proteomic analyses.</a> Journal of Proteome Research. 6 (4), 1418-1425 (2007).</li>
<li>Gauci, V. J., Wright, E. P., Coorssen, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+proteomics%3A+assessing+the+spectrum+of+in-gel+protein+detection+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Quantitative proteomics: assessing the spectrum of in-gel protein detection methods.</a> Journal of Chemical Biology. 4 (1), 3-29 (2011).</li>
<li>Candiano, G., Bruschi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blue+silver%3A+A+very+sensitive+colloidal+Coomassie+G-250+staining+for+proteome+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Blue silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis.</a> Electrophoresis. 25 (9), 1327-1333 (2004).</li>
<li>Chevallet, M., Luche, S., Rabilloud, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silver+staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Silver staining of proteins in polyacrylamide gels.</a> Nature Protocols. 1 (4), 1852-1858 (2006).</li>
<li>Jin, L. T., Hwang, S. Y., Yoo, G. S., Choi, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+silver+staining+of+protein+in+sodium+dodecyl+sulfate-polyacrylamide+gels+using+an+azo+dye%2C+calconcarboxylic+acid%2C+as+a+silver-ion+sensitizer%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Sensitive silver staining of protein in sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gels using an azo dye, calconcarboxylic acid, as a silver-ion sensitizer.</a> Electrophoresis. 25 (15), 2494-2500 (2004).</li>
<li>Celis, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCelis%2C+JE+%22Cell+Biology%3A+A+Laboratory+Handbook%22">Cell Biology: A Laboratory Handbook</a>. , Elsevier Academic Press. Amsterdam, the Netherlands. (2006).</li>
<li>Bartsch, H., Arndt, C., Koristka, S., Cartellieri, M., Bachmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silver+Staining+Techniques+of+Polyacrylamide+Gels%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Silver Staining Techniques of Polyacrylamide Gels.</a> Methods in Molecular Biology. 869 (1), 481-486 (2012).</li>
<li>Rabilloud, T., Vuillard, L., Gilly, C., Lawrence, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silver-staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels%3A+a+general+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Silver-staining of proteins in polyacrylamide gels: a general overview.</a> Cellular and Molecular Biology. 40 (1), 57-75 (1994).</li>
<li>Zhou, M., Yu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+Analysis+by+Two-Dimensional+Polyacrylamide+Gel+Electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Protein+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Proteomic Analysis by Two-Dimensional Polyacrylamide Gel Electrophoresis.</a> Advances in Protein Chemistry. 65 (1), 57-84 (2003).</li>
<li>Xie, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorogenic+Ag%2B-Tetrazolate+Aggregation+Enables+Efficient+Fluorescent+Biological+Silver+Staining%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Fluorogenic Ag+-Tetrazolate Aggregation Enables Efficient Fluorescent Biological Silver Staining.</a> Angewandte Chemie International Edition. 57 (20), 5750-5753 (2018).</li>
<li>Protein gel electrophoresis technical handbook. , Thermo Fisher Scientific. Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/global/Forms/PDF/protein-gel-electrophoresis-technical-handbook.pdf">https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/global/Forms/PDF/protein-gel-electrophoresis-technical-handbook.pdf</a> (2015).</li>
</ol>

Tem sido apresentado um pedido de patente nesta coloração fluorescente de prata.

Apresentado aqui é uma romance prata fluorescente método de coloração para proteínas em gel de poliacrilamida. Essa estratégia integra convencionais prata manchas e manchas fluorescentes. As façanhas de coloração a ligação seletiva de íons de prata às proteínas como em outra prata manchas mas emprega uma prata fluorogenic altamente sensível sonda TPE-4TA para iluminar as proteínas prata acopladas. Desde que a sonda fluorogenic TPE-4TA pressentem-se íons de prata em concentrações bastante...

Muitos métodos de coloração têm sido usados para visualizar proteínas após eletroforese em gel, por exemplo, usando colorimétricos corantes como azul de Coomassie brilhante, mancha prateada, fluorescência, ou radioativo rotulagem1,2, 3 , 4. coloração prata é considerada uma das técnicas mais sensíveis para a deteção de proteínas que requerem reagentes simples e baratos. Pode ser classificado em duas grandes famílias: a mancha de prata amoniacal e o nitrato de prata mancham5,6. O método de prata amoniacal alcalino, o complexo de prata-diamina é produzido com amônia e hidróxido de sódio e reduzido a prata metálica durante o desenvolvimento usando uma solução de formaldeído ácido. A mancha acomoda eficientemente para proteínas básicas mas mostra um desempenho comprometido para proteínas ácidas e neutras e é, além disso, limitado a clássica glicina e taurinas sistemas eletroforético. Em comparação, as manchas de nitrato de prata exploram a bio-afinidade elevada de íons de prata à proteína, principalmente a sulfidrila e carboxila grupos de cadeias de lado e tendem a manchar as proteínas ácidas mais eficientemente7. Após o íon prateado vinculativo, uma solução em desenvolvimento (normalmente feita de uma solução de carbonato de metal contendo formaldeído e sódio tiossulfato) é aplicada para reduzir os íons de prata para grãos de prata metálicos, que construir uma cor marrom-escuro para visualizar o bandas de proteínas.
Embora a coloração prata bem conhecida por sua versatilidade e alta sensibilidade desde seu desenvolvimento na década de 19708, o método é frequentemente considerado tão complicado. Métodos de coloração de prata tem passos de tempo restrito e mostram baixa reprodutibilidade. Desde que a cor da mancha prateada geralmente não é uniforme e dependente a etapa de redução, que é difícil de controlar, a mancha de prata não é um método quantitativo e, assim, não é recomendado para gel de comparação estudo e proteína quantificação9. Métodos otimizados em sensibilidade podem utilizar aldeídos que podem também fornecer um uniforme mais10de coloração. No entanto, isto é à custa de uma análise mais aprofundada a jusante devido a reticulação de proteínas por aldeídos. Protocolos rápidos principalmente combinam ou encurtam etapas para reduzir o tempo, comprometer a reprodutibilidade e a uniformidade da mancha5. Como resultado, existem numerosas prata coloração variantes dentro do gel de proteína, coloração, cada um otimizado para atender a certos requisitos; por exemplo, simplicidade, sensibilidade ou peptídeo taxa de recuperação para análise a jusante. Esses atributos também podem ter impacto sobre os outros, e satisfazer todas as exigências em um protocolo pode ser difícil.
Neste trabalho, apresentamos uma nova prata fluorescente método para detecção de proteínas em gel de poliacrilamida de coloração. Neste método, usamos uma sonda fluorogenic para íons de prata, TPE-4TA (Figura 1), para visualizar as proteínas impregnado de prata11. TPE-4TA é projetado pelo princípio de emissão induzida por agregação (AIE). É não-emissivo quando dissolvido em solução aquosa, mas é altamente emissivo na presença de íons de prata. Substituindo o desenvolvimento cromogênico em manchas de prata tradicionais com um fluorogenic passo a desenvolver, o método fluorescente prateado permite a coloração robusto de proteínas totais com um fundo reduzida.
Além disso, a mancha de prata fluorescente mostrou uma boa faixa linear dinâmica para quantificação da proteína, que é comparável com a mancha de Ruby SYPRO amplamente utilizado e não realizáveis com manchas de prata tradicionais. O gel pode ser fotografado em sistemas de documentação comumente usados gel com uma lâmpada de ultravioleta (comprimento de onda de excitação: canal de 302/365 nm; emissão: ~ 490-530 nm) em muitos laboratórios biológicos.

<table><tbody><tr><td> Tampão de Amostra LDS (4X)</td><td>Reagente Thermo Fisher Scientific</td><td>NP0007</td><td></td></tr><tr><td> Géis de Proteína Bis-Tris 4-12%, 1,0 mm, 15 poços</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NP0323BOX</td> Agente Redutor de <td>Amostra de Gel Pré-moldado</td></tr><tr><td>(10X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NP0004</td><td>Reagente</td></tr><tr><td>MES SDS Running Buffer (20X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NP0002</td><td>Reagente</td></tr><tr><td>Mini Tanque de Gel</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A25977</td><td>Equipamento</td></tr><tr><td>300W Fonte de Alimentação (230 VAC)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PS0301</td><td></td></tr><tr><td>Equipamento Unstained Protein Ladder</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>26614</td><td>Amostra</td></tr><tr><td>Nitrato de prata</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>31630-25G-R</td><td>Reagente</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Bragg e co.</td><td>42520J</td><td>Reagente</td></tr><tr><td>Ácido acético</td><td>J.T. Baker</td><td>103201A</td><td>Reagente</td></tr><tr><td>Milli-Q Síntese A10</td><td>Merk-Fornece</td><td></td> <td>18,2 M&Omega;. sistema de documentação de gel de água</td></tr><tr><td>cm (modelo c600)</td><td>Azure biosystems-Equipment</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

coloração fluorescente de prata das proteínas em gel de poliacrilamida

Fluorescent Silver Staining of Proteins in Polyacrylamide Gels

Coloração prata é uma técnica colorimétrica amplamente usada para visualizar bandas de proteínas em gel de poliacrilamida após eletroforese em gel polyacrylamide do sulfato dodecyl de sódio (SDS-PAGE). As manchas de prata clássicas tem alguns inconvenientes, tais como o fundo elevado, coloração, recuperação de proteína pobre, baixa reprodutibilidade, uma estreita faixa dinâmica linear para quantificação e compatibilidade limitada com espectrometria de massa (MS). Agora, com o uso de uma sonda de fluorogenic Ag+ , TPE-4TA, desenvolvemos uma fluorescente prata coloração método para a visualização de proteínas totais em gel de poliacrilamida. Esta mancha nova evita a etapa de redução de prata problemático em manchas de prata tradicionais. Além disso, a mancha de prata fluorescente demonstra boa reprodutibilidade, sensibilidade e quantificação linear na detecção de proteínas, tornando-se uma mancha de gel de proteína útil e prático.

As bandas de proteínas coradas pela mancha prata fluorescente apresentam uma fluorescência verde intensa sob uma lâmpada de UV 365 nm. Todas as bandas de proteínas 14 (10-200 kDa), de cima para baixo, eram claramente visíveis, correlacionando-se bem com os 14 cor vermelha manchada com o Ruby SYPRO corante (Figura 2)10.
Em relação a deteção quantitativa de proteína, os géis fo...

Aqui, descrevemos um protocolo detalhado descrevendo uma fluorescente nova técnica para detecção de proteínas totais em gel de poliacrilamida de coloração. O protocolo utiliza uma sonda de excitante prata íon-específicos de fluorescência, que detecta Ag+-complexos de proteínas e elimina determinadas limitações de manchas de prata cromogênica tradicionais.

Coloração fluorescente de prata das proteínas em gel de poliacrilamida

Silver staining is a colorimetric technique widely used to visualize protein bands in polyacrylamide gels following sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide ...

Este é um novo método de coloração de gel que utiliza uma sonda de prata fluorogênica para converter a coloração tradicional de prata em uma coloração de prata fluorescente. Este método mostrou melhor desempenho em comparação com a coloração convencional de nitrato de prata e coloração de Rubi SYPRO enquanto usava um protocolo simples e simples sem aldeídos. Demonstrando o procedimento estará Alex Wong, um assistente de pesquisa do meu laboratório.Para iniciar este procedimento, diluir as amostras de proteína com uma solução contendo água destilada, tampão LDS e um agente redutor de amostras. Configure um mini tanque de gel cheio de buffer MES para executar o SDS-PAGE com um gel de proteína Bis-Tris de 4-12%. Carregue os poços com a amostra de proteína preparada e execute o gel a uma tensão constante de 200 volts por 30 minutos.Após a eletroforese, submergir o gel em uma solução de 100 mililitros contendo etanol e ácido acético em um agitador orbital e incubar duas vezes por 30 minutos cada um em temperatura ambiente enquanto treme a 50 rpm. Em seguida, lave o gel três vezes com água ultrauso em um recipiente limpo com cada lavagem com duração de 10 minutos. Primeiro, dissolver 0,01 gramas de nitrato de prata em 10 mililitros de água ultrapura para preparar uma solução de estoque com uma concentração de 0,1%Adicione 100 microliters da solução de estoque em 100 mililitros de água ultrapura para fazer a solução de trabalho de nitrato de prata.Em um capô de fumaça, submergir o gel em 100 mililitros da solução de trabalho de nitrato de prata em uma câmara de vidro selada. Use papel alumínio para proteger o gel da luz durante a impregnação e incubar por uma hora enquanto treme a 50 rpm em um agitador orbital. Depois disso, lave o gel duas vezes com água ultrauso em um recipiente limpo, com cada lavagem usando aproximadamente 100 mililitros de água e durando 60 segundos.É importante usar água ultrauso para limpar o gel após a etapa de impregnação de prata para minimizar a coloração de fundo. Primeiro, adicione 50 mililitros de água ultrapura a três miligramas de corante TPE-4TA. Sonicar a solução por três minutos e adicionar cinco microliters de solução de hidróxido de sódio de um molar entre cada sessão de sônica para ajudar a dissolver o corante, geralmente até três vezes.Em seguida, verifique a fluorescência da solução sob uma lâmpada UV de 365 nanômetros para garantir que o corante esteja totalmente dissolvido. Apenas soluções fracas ou não emissivas indicam dissolução total. Para preparar a solução de desenvolvimento fluorogênico, adicione 10 mililitros da solução de estoque TPE-4TA a 90 mililitros de água ultrauso.Use um medidor de pH para verificar o pH da solução. Sintonize a solução a um pH entre 7 e 9, usando solução diluída de hidróxido de sódio ou ácido acético se o pH estiver fora de alcance. Em seguida, transfira o gel para um recipiente limpo e vedável com 100 mililitros da solução fluorogênica em desenvolvimento e certifique-se de que o gel esteja completamente imerso.Sele o recipiente e cubra-o para protegê-lo da luz. Agite o recipiente durante a noite em um agitador orbital a 50 rpm e à temperatura ambiente. Transfira o gel para um recipiente limpo e desinto-lo em 100 mililitros de 10% de etanol por 30 minutos.Em seguida, enxágue o gel em água ultrauso por cinco minutos. O gel pode ser visualizado em um transilluminador de bancada ou imageado em uma máquina de documentação de gel no canal de 365 nanômetros ou no canal de 302 nanômetros. Neste estudo, um novo método de coloração de prata fluorescente é usado para manchar proteínas em géis de poliacrilamida.As faixas proteicas manchadas pela mancha de prata fluorescente exibem um verde intenso sob uma lâmpada UV de 365 nanômetros. Todas as 14 bandas de proteína são claramente visíveis e se correlacionam bem com as bandas de cor vermelha manchadas pelo corante SYPRO Ruby. Este método de coloração de prata fluorescente parece ter uma alta resolução.Para algumas bandas proteicas, a sensibilidade da mancha de prata fluorescente também é ligeiramente melhor do que a da mancha fluorescente SYPRO Ruby. Em particular, o desempenho desta mancha é melhorado para as faixas proteicas entre 10 e 40 kilodaltons, o que indica que o novo método é particularmente útil para a detecção de proteínas com baixo peso molecular. Como se pode ver, os dados também sugerem que a mancha de prata fluorescente dá uma boa e uniforme linearidade para todas as 14 proteínas em uma gama relativamente ampla de quantificação proteica.Enquanto a mancha de nitrato de prata deu um alto nível de sinal de fundo e picos distorcidos, a mancha de prata fluorescente detectou as bandas com bom contraste e distribuição de intensidade uniforme comparável à mancha de Rubi SYPRO em todas as 14 proteínas. As etapas de lavagem são importantes, pois limitam a solução de fixação residual de interromper a impregnação de prata ou o desenvolvimento fluorogênico. Ao usar nitrato de prata, evite o contato com a pele.Limpe qualquer derramamento imediatamente. Use roupas de proteção e luvas e descarte como resíduos químicos.

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Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

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Rotulagem seletiva de proteínas de superfície celular usando Dyes CyDye DIGE Fluor Minimal

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Rápido e sensível Colloidal Coomassie G-250 coloração para proteínas em gel de poliacrilamida

Neste vídeo, demonstramos um método de coloração de prata de géis de poliacrilamida para a visualização da proteína total usando sondas fluorogênicas.

Coloração fluorescente de prata: uma técnica para visualizar a proteína total em géis de poliacrilamida

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Coloração de prata de glicosaminoglicanos sulfatados: um método de coloração para visualização de glicosaminoglicanos sulfatados em géis de poliacrilamida

Este vídeo demonstra uma técnica de separação desnaturante baseada em poliacrilamida para proteínas. Essa técnica auxilia na identificação preliminar de proteínas com base em seus pesos moleculares.

Eletroforese em gel de poliacrilamida de dodecil sulfato de sódio para análise de proteínas: uma técnica para separar e visualizar proteínas com base no peso molecular

Neste vídeo, demonstramos um método de eletroforese em gel bidimensional que separa proteínas individuais de uma mistura complexa de proteínas obtida de tecidos tumorais de adenoma hipofisário humano não funcional (NFPA). As proteínas são separadas com base em sua carga elétrica na primeira dimensão e posteriormente separadas com base em pesos moleculares na segunda dimensão.

Eletroforese em gel de poliacrilamida bidimensional: uma técnica de separação para análise de proteínas em mistura de proteínas complexas com base na carga e no peso molecular

Aqui, nós relatamos uma prata simples e de baixo custo que mancha o protocolo que requer apenas três reagentes e 7 min de processamento e é apropriado para a geração rápida de dados do SSR de alta qualidade em análise genética.

Um rápido prata coloração protocolo permitindo simples e eficiente deteção de SSR marcadores usando um Gel de Polyacrylamide Non-desnaturação

Aqui nós apresentamos um método sensível, rápido, e discriminando da mancha do borne-gel aos RNAs da imagem etiquetados com os aptâmeros do RNA Mango mim, II, III, ou IV, usando géis nativos ou desnaturando do gel da electroforese do poliacrilamida (página). Depois de executar géis de página padrão, o RNA com a tag Mango pode ser facilmente manchado com TO1-biotina e depois analisado usando leitores de fluorescência comumente disponíveis.

Visualização fluorescente da Mango-Tagged RNA em géis de poliacrilamida através de um método de pós-coloração

Este relatório descreve técnicas para isolar e purificar glicosaminoglycanos sulfatos (GAGs) de amostras biológicas e uma abordagem de eletroforese de gel de poliacrilamida para aproximar seu tamanho. Os GAGs contribuem para a estrutura tecidual e influenciam os processos de sinalização através da interação eletrostática com proteínas. O comprimento do polímero GAG contribui para sua afinidade vinculante para ligantes cognatos.

Detecção de glicosaminoglicanos por Electrophoresis gel poliacrilamida e coloração de prata

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