Um protocolo otimizado de Rhizobox para visualizar o crescimento da raiz e receptividade aos nutrientes localizadas

Este método pode ajudar a responder perguntas-chave no campo da Ciência raiz e rizofera, como como as raízes respondem a manchas localizadas de nutrientes. As principais vantagens desta técnica são que ela permite medições repetidas e não invasivas de um único sistema radicular no solo, mas não requer equipamento especializado e é relativamente barato. Reúna as peças para a Caixa de Rhizobox para montagem.

Estes incluem painéis frontais e traseiros feitos de acrílico claro cerca de 40 centímetros por 61 centímetros. Neste ponto, há espaçadores laterais e inferiores na parte superior do painel traseiro. Os espaçadores estão alinhados com furos perfurados anteriormente nos painéis.

Corte um comprimento de estofamento de poliéster para ir ao longo da parte inferior da Rizobox. Coloque o estofamento no painel traseiro diretamente acima do espaçador inferior para ajudar a evitar vazamentos. Coloque o painel superior em posição sobre os espaçadores para manter o estofamento no lugar.

Agora pegue hardware para montar o Rhizobox. Use um parafuso, duas arruelas e porca de hexa para cada um dos furos perfurados. Coloque uma arruela no painel frontal e aperte o parafuso através dele para o painel traseiro.

Outra lavadora e a porca hexa. Para evitar a perda de solo, certifique-se de que todos os parafusos estão muito apertados. Além disso, crie dois espaçadores para formar as manchas de tratamento e controle.

Faça-os com folhas de polietileno de alta densidade e fixe um parafuso na parte superior para permitir apenas a inserção parcial. Para privação de luz e redução de calor, prepare uma caixa protetora que possa incluir a caixa. Finalmente, construa um quadro para incentivar as raízes a crescer em relação ao painel traseiro.

Este quadro de PVC mantém a caixa em um ângulo de aproximadamente 55 graus. Prepare uma mistura homogeneizada de solo de campo e areia. Comece com um saco grande contendo a mistura de substrato para cada Rizobox.

Rotule dois pequenos sacos ziptop por caixa para o tratamento e as manchas de controle. Use uma balança e pese 30 gramas do substrato de areia do solo. Transfira o substrato para o saco de controle.

Da mesma forma, adicione 30 gramas de substrato ao saco de tratamento. Em seguida, pese um grama de nitrogênio 15 fonte de nitrogênio rotulado e adicione-o ao saco de tratamento. Misture bem a fonte do substrato e nitrogênio.

Trabalhe com uma Caixa De Rhizobox e seus espaçadores de remendo. Insira os dois espaçadores na caixa de rizoque até que o parafuso impeça mais movimentos. Marque a profundidade da borda inferior dos espaçadores na lateral da Caixa de Rhizobox.

Em seguida, remova os espaçadores para os próximos passos. Usando um funil, encha a Caixa de Rizos do grande saco de substrato até a profundidade marcada. Mova o funil para frente e para trás lentamente e uniformemente para encher a Rizobox uniformemente.

Quando o substrato estiver na profundidade marcada, coloque os espaçadores na caixa. Eles devem estar a cinco centímetros dos lados esquerdo e direito da caixa. Continue enchendo a caixa até que o substrato esteja a cerca de cinco centímetros do topo da caixa.

Em seguida, providencie uma irrigação lenta do substrato na caixa com 150 mililitros de água com emissores de gotejamento ou à mão. Deixe descansar várias horas ou durante a noite para que a água se difunde e a área ao redor de cada espaçador esteja completamente molhada. Neste ponto, remova os espaçadores para deixar uma cavidade vazia para as manchas.

Agora, filme de transparência de fita para o lado de fora da caixa. Use a transparência para rotular um patch como tratamento e o outro como controle. Em seguida, use o funil e o substrato de controle preparado para preencher o patch de controle.

Este é o patch de controle rotulado depois de ter sido preenchido. Passe para preencher o patch de tratamento com o substrato de tratamento preparado da mesma forma. Quando terminar, use um marcador permanente para traçar o limite de cada patch na película de transparência.

Em seguida, encha a Caixa de Rhizo com o substrato restante do saco grande. Finalize traçando a parte superior do substrato sobre a transparência. Quando a caixa estiver pronta, transplante uma semente germinada.

Primeiro, use uma espátula estreita para cavar um buraco no centro da Caixa de Rhizobox. O buraco deve ter 2,5 centímetros de profundidade. Coloque a semente germinada dentro garantindo que o radical seja orientado diretamente para baixo.

Rastreie a localização da semente na transparência anexada à caixa. Cubra a semente e depois rega-a com até 50 mililitros de água deionizada. Em seguida, inclua a caixa em seu caso para evitar que a luz interaja com as raízes durante o crescimento.

Leve a caixa para o quadro preparado para ele. Coloque a Caixa de Rhizo no quadro para incentivar o crescimento em direção ao quadro traseiro. Recupere a caixa depois de cada três a quatro dias de crescimento da planta.

Com a caixa removida, rastreie as raízes visíveis das plantas usando uma caneta de cor diferente cada vez. Como neste exemplo, seja consistente e sistemático para esta etapa. Devolva a caixa coberta ao seu suporte e garantindo que ela esteja em sua orientação original.

Aqui, os comprimentos de raiz totais das raízes traçadas na parte traseira de 24 Rhizoboxes são plotados contra comprimentos radiculares medidos usando um scanner e software de computador. Um enredo semelhante para padrões de raiz traçados na frente da caixa demonstra que as raízes cresceram preferencialmente contra a parte de trás da caixa. As inclinações consistentes nesta parcela do logaritmo do comprimento total da raiz em função dos dias de crescimento sugerem que as taxas de crescimento foram semelhantes entre as diferentes caixas.

Aqui estão os dados para densidade de comprimento radicular para um genótipo de milho. A densidade para o patch de controle é menor do que a densidade para o patch tratado de nitrogênio. O experimento comparou a densidade de comprimento da raiz para seis genótipos separados de milho.

Em todos os casos, a densidade de comprimento da raiz foi maior no patch de tratamento rotulado com nitrogênio 15 versus o patch de controle. Este protocolo pode ser combinado com outros métodos como esfilmografia ou florescence in situ hibridização, a fim de visualizar a distribuição espacial da atividade enzimada ou micróbios.