Purificação de etapa única de complexos macromoleculares usando RNA ligado à biotina e um foto-cleavable vinculador

Esse método deve ser de interesse para pesquisadores que estão tentando isolar complexos proteicos de RNA e identificar sua composição por espectrometria de massa. Acreditamos que nosso protocolo será especialmente útil para purificar complexos que existem em células em quantidades limitadas e tendem a dissociar durante longos procedimentos de purificação em várias etapas. A principal vantagem deste método é que ele envolve apenas uma única etapa de purificação e poderia ser usado com locais de ligação de RNA de qualquer comprimento e sequência.

Demonstrando alguns dos passos será Xiao-cui Yang, que é um técnico sênior de pesquisa em nosso grupo. Para sites de vinculação significativamente maiores que 65 nucleotídeos, obtenha RNA gerado por T7 e um oligonucleotídeo pcb adaptador conforme descrito no protocolo de texto. Misture 20 picomoles do RNA com 100 picomoles do oligonucleotídeo adaptador em um tubo de 1,5 mililitro contendo 100 microliters de tampão de ligação.