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DOI: 10.3791/58711-v
Guo Hong*1,2, Shuangyi Fan*3, The Phyu3, Priyanka Maheshwari2, Michal Marek Hoppe2, Hoang Mai Phuong2, Sanjay de Mel4, Michelle Poon4, Siok-Bian Ng2,3, Anand D. Jeyasekharan2,4
1Department of Laboratory Medicine,AnSteel Group General Hospital, 2Cancer Science Institute of Singapore,National University of Singapore, 3Department of Pathology, Yong Loo Lin School of Medicine,National University of Singapore, 4Department of Haematology-Oncology,National University Health System
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a protocol for multiplex fluorescent immunohistochemical staining and imaging to localize multiple cancer-associated antigens in lymphoma. The method allows for the colocalization analysis of biomarkers within tissue sections.
Aqui descrevemos um protocolo para multiplex immunohistochemical fluorescente de coloração e de imagem para localização simultânea de múltiplos antígenos associada a câncer de linfoma. Este protocolo pode ser estendido para a análise de colocalization de biomarcadores dentro de todas as secções de tecido.
Linfomas são tumores histologicamente complexos. Portanto, a imunohistoquímica fluorescente multiplexada oferece vantagens sobre a imunohistoquímica cromogênica convencional para estudar marcadores de interesse nas células tumorais e no microambiente. Essa técnica tem o potencial de padronizar a pontuação de manchas à base de anticorpos em amostras de linfoma histológico, processo historicamente desafiador devido à complexidade do microambiente tumoral.
Especificamente, a imunohistoquímica fluorescente multiplexada e a imagem espectral permitem a medição quantitativa de múltiplas manchas dentro de um único slide, permitindo assim a avaliação da co expressão do antígeno e da relação espacial dentro do material clínico. Comece imergindo os slides depilados e rehidratados em um tampão de recuperação de antígeno padrão em um frasco de vidro de micro-ondas e realizando recuperação de epítope induzida pelo calor em um micro-ondas adequado. Realize rodadas adicionais de descascamento de micro-ondas com base na posição do anticorpo na sequência multiplex final.
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