Name: Coleção rápida de voláteis florais da fragrância usando uma técnica da coleção do volatile do Headspace para a amostragem térmica da desorção de GC-MS (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-10T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 22 s
Description: Aprenda a coletar voláteis florais rapidamente usando headspace GC-MS não destrutivo. Este método reduz o tempo de amostragem de horas para dez minutos, facilitando estudos de polinização e interações planta-inseto.

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USDA-ARS Research Project número 6036-22000-028-00D. O uso de nomes de comércio, empresa ou corporação nesta publicação é para a informação e conveniência do leitor. Tal uso não constitui um endosso oficial ou aprovação pelo Departamento de Agricultura dos Estados Unidos ou pelo Serviço de Pesquisa em Agricultura de qualquer produto ou serviço com exclusão de outros que possam ser adequados. Além disso, o Departamento de Biologia da Universidade da Flórida,Lewis e a Varina Vaughn Fellowship em Orchid Biology (2017) e uma Bolsa de Pesquisa de Pós-Graduação da Universidade da Flórida (2014-2018) também forneceram financiamento. Agradecemos também Cindy Bennington da Universidade de Stetson para a planta de orquídea usada durante as filmagens deste vídeo.

NOTA: Perfumes ou loções perfumadas e produtos não devem ser usados durante qualquer um desses procedimentos.
1. Seleção de flores
NOTA: As flores usadas podem naturalmente crescer no ambiente ou mantidas condições ambientais artificiais. Temperatura, umidade e nível de luz durante a coleta podem variar com base nas espécies de flores específicas usadas e que tipo de dados está sendo coletado. Por exemplo, os dados foram coletados durante o dia e à noite para a mesma flor para determinar se a fragrância varia ao longo da hora do dia, e coletados a partir de flores in situ e estufa.
<ol><li>Selecione uma flor que é inicialmente fechada, para padronizar o tempo de coleta de amostras. Isto controla para uma fragrância em mudança da flor sobre o tempo.</li>
	<li>Dependendo da duração do tempo de floração, se possível, espere pelo menos 24 horas após a floração para coletar a amostra, estabelecendo um horário padrão para todas as amostras.</li>
	<li>Se há umas flores de flores de flores de florescência múltiplas em uma planta, marque essa que será usada com fita de sinalização ou algo similar para assegurar a amostragem repetida da mesma flor.</li>
</ol>2. Preparação de material
<ol><li>Use sacos de forno (aproximadamente 40,5 cm × 44,5 cm) e tubos de PTFE ondulados.</li>
	<li>Inicialmente, ferva sacos de forno em água por ~ 30 min para remover compostos plásticos residuais. Para secar, leve ao forno a 175 °C.</li>
	<li>Uma vez que os sacos secaram, adicione uma união do antetentino do polipropileno a cada canto da extremidade fechado dos sacos do forno. Estes acessórios permitem a conexão dos tubos empurrar o ar filtrado carvão vegetal dentro e puxar a fragrância fora do headspace.</li>
	<li>Lave todos os sacos e tubos com 75% de etanol. Deixe o ar seco após a lavagem.</li>
	<li>Depois que os sacos do forno secarem, coza sacos e tubos em um forno no calor baixo, aproximadamente 74-85 °C para 30 min.</li>
</ol>3. Coleta volátil
NOTA: Luvas de neoprene estéreis precisam ser usadas durante todo este processo, pois entrar em contato com o saco ou cartuchos de filtro pode contaminar as amostras.
<ol><li>Cubra a flor selecionada com um saco de forno cozido. Cinch o saco junto firmemente com um laço plástico do zip abaixo da flor para impedir o fluxo de ar não desejado no saco.</li>
	<li>Anexar um tubo da saída de ar do equipamento de coleta e conectá-lo a um dos sindicatos antepara no saco do forno.</li>
	<li>Na outra união do antepara, una um cartucho de filtro de vidro que contem o adsorbent porous do polímero.</li>
	<li>Anexe um segundo tubo para o equipamento de coleta na entrada de vácuo. Conecte a extremidade do segundo tubo no cartucho de filtro de coleta volátil de vidro.</li>
	<li>Ligue tanto a bomba de ar e vácuo ao mesmo tempo definido em ~ 0,05 L / min. O headspace em torno da flor encher-se-á com ar, mas não se tornará overinflated. O sistema puxará o ar do saco através do filtro, prendendo os temporários florais.</li>
	<li>Permita que a máquina funcione por 10 min e desligue então a bomba de ar e o vácuo. NOTA: Espécies de flores que produzem/emitem uma quantidade menor de fragrância podem precisar ser amostradas por um longo período de tempo.</li>
	<li>Desmontar os tubos e o cartucho de filtro de vidro. Coloque o filtro em um frasco de vidro com uma tampa de parafuso. Uma vez que a tampa está sobre, selar o frasco com fita da linha da tubulação de PTFE.</li>
	<li>Guarde amostras em um freezer até ser analisada usando GC-MS.</li>
	<li>Repita este processo com um saco de forno limpo e filtro de vidro, desta vez com um saco de forno vazio, para coletar uma amostra de ar em branco como um controle. Isso permite que quaisquer voláteis de fundo coletados sejam identificados. NOTA: Repetir a coleta de amostras precisa ser feita aproximadamente ao mesmo tempo todos os dias, já que algumas flores produzem níveis variados de fragrânciaao longo de um dia.</li>
</ol>4. GC-MS 4. GC-MS
<ol><li>Retire o cartucho de filtro de vidro do congelador e coloque em um GC-MS na porta injetor.</li>
	<li>Libere os voláteis headspace coletados em adsorbent de polímero poroso do adsorvente pelo aquecimento na armadilha de coleta térmica (TCT) a 220 °C por 8 min dentro de um fluxo de gás hélio (taxa: 1,2 mL/min).</li>
	<li>Coletar compostos desorbed na unidade de armadilha fria TCT em -130 °C. A temperatura da armadilha fria é regulada pelo programa GC-MS.</li>
	<li>Calor flash da unidade de armadilha fria TCT para injetar os compostos na coluna capilar do cromatógrafo gasoso ao qual a unidade de armadilha fria TCT estava conectada. O método para o TCT começa em -20 °C e termina em 150 °C.</li>
	<li>Programe o GC-MS a subir de 40 °C para 280 °C a 15 °C/min, com uma retenção de 5 min a 40 °C.</li>
</ol>5. Análise de dados
<ol><li>Para identificação, compare os espectros de massa da amostra com os de bibliotecas de espectros de massa (NIST e Departamento de Ecologia Química, Universidade de Goteborg, Suécia11),bem como tempos de retenção dos voláteis com os tempos de padrões compostos autênticos12.</li>
	<li>Compare cromatogramas de voláteis coletados para identificar picos recorrentes comuns.</li>
	<li>Depois de identificar os voláteis de pico, use Pherobase (banco de dados on-line de semioquímicos e feromônios) para determinar se eles foram descritos anteriormente em fragrâncias florais10.</li>
</ol>

<ol><li>Knudsen, J. T., Tollsten, L., Bergstrom, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Floral+scents-+A+checklist+of+volatile+compounds+isolated+by+head-space+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemistry%22%5BJournal%5D)">Floral scents- A checklist of volatile compounds isolated by head-space techniques.</a> Phytochemistry. 33, 253-280 (1993).</li>
<li>Dudareva, N. A., Pichersky, E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDudareva%2C+NA+%22Biology+of+floral+scent%22">Biology of floral scent</a>. , CRC Taylor and Francis. Boca Raton, FL. (2006).</li>
<li>Altenburger, R., Matile, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rhythms+of+fragrance+emission+in+flowers%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">Rhythms of fragrance emission in flowers.</a> Planta. 174, 242-247 (1988).</li>
<li>Dodson, C. H., Dressler, R. L., Hills, H. G., Adams, R. M., Williams, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biologically+active+compounds+in+orchid+fragrances%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Biologically active compounds in orchid fragrances.</a> Science. 164, 1243-1249 (1969).</li>
<li>Theis, N., Raguso, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+pollination+on+floral+fragrance+in+thistles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Ecology%22%5BJournal%5D)">The effect of pollination on floral fragrance in thistles.</a> Journal of Chemical Ecology. 31 (11), 2581-2600 (2005).</li>
<li>Heath, R. R., Manukian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+evaluation+of+systems+to+collect+volatile+semiochemicals+from+insects+and+plants+using+a+charcoal-infused+medium+for+air+purification%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Ecology%22%5BJournal%5D)">Development and evaluation of systems to collect volatile semiochemicals from insects and plants using a charcoal-infused medium for air purification.</a> Journal of Chemical Ecology. 18, 1209-1226 (1992).</li>
<li>Cancino, A., Damon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+floral+fragrance+components+of+species+of+Encyclia+and+Prosthechea+%28Orchidaceae%29+from+Soconusco%2C+southeast+Mexico%5BTitle%5D)+AND+%22Lankesteriana%22%5BJournal%5D)">Comparison of floral fragrance components of species of Encyclia and Prosthechea (Orchidaceae) from Soconusco, southeast Mexico.</a> Lankesteriana. 6, 83-139 (2006).</li>
<li>Cancino, A., Damon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fragrance+analysis+of+euglossine+bee+pollinated+orchids+from+Soconusco%2C+south-east+Mexico%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Species+Biology%22%5BJournal%5D)">Fragrance analysis of euglossine bee pollinated orchids from Soconusco, south-east Mexico.</a> Plant Species Biology. 22, 129-134 (2007).</li>
<li>Sadler, J. J., Smith, J. M., Zettler, L. W., Alborn, H. T., Richardson, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fragrance+composition+of+Dendrophylax+lindenii+%28Orchidaceae%29+using+a+novel+technique+applied+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Environmental+Science%22%5BJournal%5D)">Fragrance composition of Dendrophylax lindenii (Orchidaceae) using a novel technique applied in situ.</a> European Journal of Environmental Science. 1, 137-141 (2011).</li>
<li>Ray, H. A., Stuhl, C. J., Gillett-Kaufman, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Floral+fragrance+analysis+of+Prosthechea+cochleata+%28Orchidaceae%29%2C+an+endangered+native%2C+epiphytic+orchid%2C+in+Florida%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Signaling+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Floral fragrance analysis of Prosthechea cochleata (Orchidaceae), an endangered native, epiphytic orchid, in Florida.</a> Plant Signaling and Behavior. , (2018).</li>
<li>National Institute of Standards and Technology. U.S. Department of Commerce. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.nist.gov/">https://www.nist.gov/</a> (2019).</li>
<li>The Pherobase: Databse of Pheromones and Semiochemicals. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.pherobase.com/">http://www.pherobase.com/</a> (2019).</li>
</ol>

Os autores declaram nenhum conflito de interesses.

Embora esta técnica seja incrivelmente valiosa para sua velocidade de amostragem e portabilidade, uma limitação é usá-la para espécies epifíticas, ou aquelas que crescem em árvores e não do solo. No estudo original10,uma das flores amostradas foi epifífita. Porque a máquina é demasiado pesada pendurar livremente, uma base estável, elevada deve ser feita para a amostragem. Além disso, a máquina pode ser conectada a uma tomada elétrica ou a bateria, por isso, se houver amostragem de campo prolongada...

As flores produzem tipicamente uma fragrância usada para atrair polinizadores. Estas fragrâncias são compostas de muitos compostos químicos todos agindo juntos como uma mistura floral1,2,3. Sem estas fragrâncias, as flores seriam menos prováveis passar sobre sua informação genética usando polinizadores. A fragrância floral foi documentada em muitas famílias de plantas com flores, com orchidaceae sendo uma das famílias mais comuns estudadas4. Para compreender o papel da fragrância floral na polinização, é importante coletar e analisar nondestructively os compostos químicos que estão sendo emitidos das flores em horas diferentes do dia e durante os diversos dias às semanas as flores da flor estão abertas, porque a fragrância pode variar sobre o tempo5.
Um protocolo inicial para este tipo de amostragem foi desenvolvido por Heath e Manukian6. O objetivo de seus métodos de amostragem era reduzir o estresse no espécime (por exemplo, plantas, insetos) sendo estudados. Papéis anteriores documentaram que eram necessários procedimentos destrutivos para a planta, como a remoção de flores florescendo, a fim de coletar a fragrância. Mais recentes publicações de fragrâncias florais por Cancino e Damon7,8 usaram métodos semelhantes. Este estudo colocou as flores em câmaras de vidro e passou o ar purificado sobre eles; em seguida, compostos de fragrâncias da câmara foram absorvidos em adsorventes de polímero porosos em pipettes Pasteur claras. As fragrâncias foram coletadas por pelo menos duas horas durante este estudo. Sadler et al.9 realizado estudos de fragrâncias florais sobre uma orquídea epifífila no sul da Flórida, bem como o estudo original10. Mais uma vez, este estudo exigiu que as flores fossem amostradas por mais de duas horas para coletar os voláteis da fragrância, com fragrância coletada no adsorbent de polímero poroso. O artigo aqui apresenta um método não destrutivo que permite uma amostragem muito mais rápida, com duração de apenas 10 minutos. Também, em vez de usar sacos de cozimento do forno de câmara de vidro são usados, que permitem um movimento mais flexível da câmara e reduzem as possibilidades de dano às flores. Estes sacos vêm em diversos tamanhos permitindo a opção selecionar o tamanho do saco que caberá facilmente amostras individuais sem danificar a amostra ou o material circunvizinho. O adsorventusado neste estudo foi Tenax Porous Polymer Adsorbent. Isso difere de Porapak, porque a amostra pode ser desorcada termicamente na coluna GC-MS para análise, eliminando o uso de um solvente químico.
Os métodos deste estudo fornecem uma maneira de amostra ràpida dos volatiles da fragrância produzidos por flores e poderiam ser usados para provar volatiles de outros espécimes também, tais como pheromones do inseto, ou volatiles do cogumelo. O tempo reduzido para amostragem significa que há menos estresse na amostra e a capacidade de coletar muitas amostras em um curto período de tempo. Por exemplo, em Sadler et al.9, a flor só era perfumada à noite, então apenas duas ou três amostras podiam ser coletadas a cada noite. Com o método aqui, as amostras poderiam ser tomadas toda a noite em intervalos de 15-20 minutos da mesma flor. Além disso, usando sacos em vez de câmaras de vidro, o headspace pode ser suspenso mais fácil para amostragem no campo para a coleta in situ em espécies de plantas ameaçadas ou ameaçadas. Usando o método apresentado aqui, pudemos provar flores 1,5 a 2 metros acima do solo. Estes métodos são incrivelmente úteis para a recolha de fragrâncias em laboratório e no campo, e proporciona aos investigadores uma técnica de amostragem que é rápida e não destrutiva para a amostra.

<table><tbody><tr><td>União de anteparo</td><td>Cole-Palmer</td><td>UX-06390-10</td><td></td></tr><tr><td>FEP tubulação</td><td>Cole-Palmer</td><td>UX-06407-60</td><td></td></tr><tr><td>Cromatografia gasosa</td><td>Hewlett Packard</td><td>6890</td><td></td></tr><tr><td>Lã de vidro, Silanized</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>20411</td><td></td></tr><tr><td>Forro de entrada</td><td>Agilent</td><td>5062-3587</td><td></td></tr><tr><td>Espectrômetro de massa</td><td>Hewlett Packard</td><td>5973</td><td></td></tr><tr><td>Saco de forno Reynolds Reynolds</td><td>Consumer Products</td><td>Tamanho Turquia Tenax</td><td></td></tr><tr><td>Adsorvente de polímero poroso</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11982</td><td></td></tr></tbody></table>

coleção rápida de voláteis florais da fragrância usando uma técnica da coleção do volatile do headspace para a amostragem térmica da desorção de gc-ms

Rapid Collection of Floral Fragrance Volatiles using a Headspace Volatile Collection Technique for GC-MS Thermal Desorption Sampling

As fragrâncias de muitas famílias da flor foram amostradas e os temporários analisados. Conhecer os compostos que compõem as fragrâncias pode ser um passo importante para a conservação de flores que estão ameaçadas ou ameaçadas de extinção. Porque a fragrância floral é crítica para atrair polinizadores, este método poderia ser usado para compreender melhor ou realçar a polinização. Apresentamos um protocolo usando um filtro portátil de ar a carvão e vácuo para coletar voláteis de fragrâncias florais, que são então analisados por um GC-MS. Usando este método, os voláteis da fragrância podem ser amostrados usando um método não destrutivo com uma máquina que seja transportada facilmente. Esta metodologia utiliza um procedimento de amostragem rápida, reduzindo o tempo de amostragem de 2-3 horas para aproximadamente 10 minutos. Usando GC-MS, os compostos de fragrância saem podem ser identificados individualmente, com base em padrões autênticos. As etapas utilizadas para a coleta de dados de fragrâncias e controle são apresentadas, desde a configuração de material até a coleta da saída de dados.

Os dados representativos do GC-MS são mostrados como um cromatograma na Figura 1. Além do cromatograma, também é fornecido um arquivo de dados de resultados(Arquivo Suplementar 1). Este arquivo de dados fornece o tempo de retenção para cada pico (RT), e uma identificação do composto que é composto (Biblioteca / ID). Picos entre 10:00 e 15:00 minutos são voláteis florais, devido ao peso molecular dos compostos10. Os números acima dos picos significam o...

Aqui, apresentamos um protocolo para coletar os voláteis de fragrâncias florais de flores florescendo, usando um procedimento de amostragem não destrutivo.

Coleção rápida de voláteis florais da fragrância usando uma técnica da coleção do volatile do Headspace para a amostragem térmica da desorção de GC-MS

Fragrances of many flower families have been sampled and the volatiles analyzed. Knowing the compounds that make up the fragrances can be an important ...

Como a fragrância floral é fundamental para atrair polinizadores, este método poderia ser usado para entender melhor ou até mesmo melhorar a polinização de espécies de flores nativas. Com este método, os voláteis de fragrâncias são amostrados usando um método não destrutivo com uma máquina facilmente transportada. Esta metodologia utiliza amostragem rápida, reduzindo o tempo de amostragem de duas a três horas para 10 minutos.Esses métodos fornecem uma maneira de amostrar rapidamente voláteis produzidos por flores e poderiam ser usados para amostrar voláteis de outros espécimes também, como feromônios de insetos. Para começar, selecione uma flor inicialmente não aberta, e marque a flor com fita adesiva para garantir a amostragem repetida da mesma flor. Ferva os sacos de forno em água por 30 minutos para remover compostos plásticos residuais.Para secar, leve ao forno a 175 graus Celsius por 60 minutos. Uma vez que os sacos tenham secado, adicione uma união de anteparo de polipropileno em cada canto da extremidade fechada dos sacos de forno. Enxágüe todos os sacos e tubos com 75% de etanol e deixe-os secar.Em seguida, asse os sacos e os tubos em um forno em fogo baixo, entre 74 a 85 g

rapid-collection-floral-fragrance-volatiles-using-headspace-volatile

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Um método simples é fornecida que permite a extração rápida e análise de hormônios vegetais múltiplos a partir de pequenas amostras de tecido. O procedimento utiliza extração em fase vapor como a etapa de purificação solene. As amostras são analisadas por íons GC / MS com ionização química que produz principalmente (M +1) +.

Monitoramento hormônios vegetais Durante Respostas ao Estresse

Um método rápido para análise composto volátil na fruta é descrito. Os compostos voláteis presentes no espaço de topo de um homogenato da amostra são rapidamente separados e detectados com ultra-rápida cromatografia gasosa (GC) acoplado com uma onda acústica de superfície (SAW) do sensor. Um procedimento para manipulação de dados e análise também é discutida.

Análise de Frutas volátil Usando um Nariz Eletrônico

Pistas olfativas mediar muitos comportamentos diferentes em insetos, e muitas vezes são misturas complexas compostas de dezenas a centenas de compostos voláteis. Utilizando cromatografia em fase gasosa com multi-canais de gravação no lobo antenal inseto, descreve-se um método para a identificação de compostos bioactivos.

Identificação de voláteis olfativas utilizando cromatografia gasosa-Multi-unidade Gravações (GCMR) no lobo antenal Inseto

Rastreamento de vapores explosivos TNT e RDX coletados em tubos de dessorção térmica cheia de absorventes foram analisados ​​por meio de um sistema de dessorção a temperatura programada acoplado a GC com um detector de captura de elétrons. A análise instrumental é combinada com o método de deposição líquido direto para reduzir a variabilidade da amostra e conta para a instrumentação deriva e perdas.

Detecção quantitativa de rastreamento vapores explosivos por temperatura programada Desorption Gas Chromatography-Electron Captura Detector

Trabalhadores menores da espécie formiga Colobopsis explodens são dissecados para isolar o conteúdo como cera armazenado em seus reservatórios hipertrofiado glândula mandibular para posterior extração por solvente- e análise por cromatografia gasosa / espectrometria de massa. É também descrita a anotação e identificação de substâncias voláteis, usando o software open-source MetaboliteDetector.

Isolamento do conteúdo do reservatório glândula Mandibular de Bornean ' explodindo das formigas (Formicidae) para Volatilome análise por GC-MS e MetaboliteDetector

Desenvolvemos uma metodologia eficaz para amostragem e análise de sinais de odor, a fim de entender como eles podem ser usados na comunicação animal. Particularmente, usamos microextração de fase sólida do headspace, juntamente com espectrometria de massa cromatografia gasosa para analisar os componentes voláteis de odores animais e marcas de odor.

Amostragem e Análise de Sinais de Aroma Animal

A Microextração de Fase Sólida de Vaporização Total (TV-SPME) vaporiza completamente uma amostra líquida enquanto os analitos são sorbados em uma fibra SPME. Isso permite a particionamento do analito entre apenas o vapor solvente e o revestimento de fibra SPME.

Espectrometria de massa de cromatografia a gás emparelhada com microextração de fase sólida de vaporização total como ferramenta forense

Uma plataforma de microextração-gás-cromatografia em fase sólida do headspace é descrita aqui para identificação e quantificação volátil rápida, confiável e semi-automatizada em frutas de groselha madura. Essa técnica pode ser usada para aumentar o conhecimento sobre o aroma de frutas e selecionar cultivares com sabor aprimorado para fins de reprodução.

Perfil de compostos voláteis em frutas groselha usando microextração de fase sólida do headspace acoplado à espectrometria de massa de cromatografia gasosa

Este protocolo descreve a extração de compostos orgânicos voláteis de uma amostra biológica com o método de extração sorbent assistido a vácuo, cromatografia gasosa juntamente com espectrometria de massa usando o Entech Sample Preparation Rail e análise de dados. Também descreve a cultura de amostras biológicas e sondagem de isótopos estáveis.

Capturando compostos orgânicos voláteis microbianos produzidos ativamente a partir de amostras associadas ao homem com extração sorbent assistida a vácuo

Apresenta-se aqui um método para enriquecimento e análise dos componentes voláteis de extratos de chá usando evaporação de sabor assistida por solvente e extração por solvente seguida de cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas, que pode ser aplicado a todos os tipos de amostras de chá.

Análise de aroma de chá baseada no enriquecimento por evaporação de sabor assistido por solvente

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