Coleção rápida de voláteis florais da fragrância usando uma técnica da coleção do volatile do Headspace para a amostragem térmica da desorção de GC-MS

Aqui, apresentamos um protocolo para coletar os voláteis de fragrâncias florais de flores florescendo, usando um procedimento de amostragem não destrutivo.

Como a fragrância floral é fundamental para atrair polinizadores, este método poderia ser usado para entender melhor ou até mesmo melhorar a polinização de espécies de flores nativas. Com este método, os voláteis de fragrâncias são amostrados usando um método não destrutivo com uma máquina facilmente transportada. Esta metodologia utiliza amostragem rápida, reduzindo o tempo de amostragem de duas a três horas para 10 minutos.

Esses métodos fornecem uma maneira de amostrar rapidamente voláteis produzidos por flores e poderiam ser usados para amostrar voláteis de outros espécimes também, como feromônios de insetos. Para começar, selecione uma flor inicialmente não aberta, e marque a flor com fita adesiva para garantir a amostragem repetida da mesma flor. Ferva os sacos de forno em água por 30 minutos para remover compostos plásticos residuais.

Para secar, leve ao forno a 175 graus Celsius por 60 minutos. Uma vez que os sacos tenham secado, adicione uma união de anteparo de polipropileno em cada canto da extremidade fechada dos sacos de forno. Enxágüe todos os sacos e tubos com 75% de etanol e deixe-os secar.

Em seguida, asse os sacos e os tubos em um forno em fogo baixo, entre 74 a 85 graus Celsius por 30 minutos. Dependendo da duração do tempo de floração, se possível, espere pelo menos 24 horas após florescer para coletar a amostra. Cubra a flor selecionada com um saco de forno assado.

Aperte o saco firmemente com uma gravata de plástico abaixo da flor para evitar o fluxo de ar indesejado no saco. Usando luvas de neoprene estéreis, conecte um tubo da saída de ar do equipamento de coleta e conecte-o a uma das uniões de anteparo no saco de forno. Na outra união de anteparo, conecte um cartucho de filtro de vidro contendo adsorbent poroso de polímero.

Conecte um segundo tubo ao equipamento de coleta na entrada de vácuo. Conecte a extremidade do segundo tubo ao cartucho do filtro de coleta volátil de vidro. Ligue a bomba de ar e o vácuo ao mesmo tempo e coloque em 0,05 litros por minuto.

O espaço da cabeça ao redor da flor está cheio de ar, mas não inflado demais. O sistema puxa o ar do saco através do filtro, prendendo os voláteis florais. Deixe a máquina funcionar por 10 minutos.

E então desligue a bomba de ar e o vácuo. Desmonte os tubos e o cartucho do filtro de vidro. Coloque o filtro em um frasco de vidro e enrosque em uma tampa.

Sele o frasco com fita de rosca de tubo PTFE. Armazene a amostra em um congelador até a análise da GCMS. Repita este processo com um saco de forno vazio para coletar uma amostra de ar em branco como controle.

Para replicações consistentes dos mesmos voláteis, repita a coleta de amostras ao mesmo tempo todos os dias, pois algumas flores produzem diferentes níveis de fragrância ao longo do dia. Primeiro, remova o cartucho do filtro de vidro do congelador e coloque-o em um GCMS na porta do injetor. Para liberar os voláteis do espaço da cabeça coletados em adsorbent poroso de polímero do adsorbent, aqueça a armadilha de coleta térmica a 220 graus Celsius por oito minutos dentro de um fluxo de gás hélio a 1,2 mililitros por minuto.

Compare cromatogramas de voláteis coletados para identificar picos recorrentes comuns. Depois de identificar os voláteis de pico, use Pherobase para determinar se eles foram descritos anteriormente em fragrâncias florais. Neste estudo, dados representativos da GCMS são mostrados como um cromatógrafo.

Picos entre 10 e 15 minutos são voláteis florais. Os voláteis coletados foram referenciados em Pherobase para determinar se foram descritos anteriormente em uma fragrância floral. Por exemplo, o composto número 21, com um tempo de retenção de 10.311 foi identificado como benzaldeído.

Benzaldeído é pesquisado em Pherobase com uma lista de todas as espécies de flores, organizadas pela família vegetal, a partir da qual esse composto de fragrâncias foi identificado. As espécies de orquídeas são mostradas aqui, das quais o benzaldeído foi determinado a estar presente na fragrância floral. Os métodos anteriores levavam de duas a quatro horas por amostra.

O uso de um solvente para remover a amostra do filtro resultaria em um pico de solvente no GCMS. Isso esconderia os compostos de zero a 3,5 minutos. Este método permite que todos os compostos sejam vistos.