Protocolo de baixo custo de análise da pegada e caixa de teste de suspensão para ratos aplicada o retenção crônica de estresse

Nosso protocolo usando a análise da marcha é muito útil para determinar se motores de motores de rato de distúrbios de movimento imitam o sintoma do paciente com perturbação da marcha. Assim, a análise da marcha no teste de carregamento de estresse pode ser realizada facilmente, e sem equipamentos caros, para detectar certos fenótipos motores em camundongos, sem efeitos espontâneos. Antes de iniciar o teste comportamental, regisse o peso de cada mouse e use uma caneta de marcação para rotular cada cauda.

Quando todos os animais tiverem sido pesados e marcados, coloque os ratos na sala experimental por pelo menos 30 minutos, e coloque uma caixa de suspensão clara, 25 por 25 por 40 centímetros, com uma tampa de malha rotativa, no banco do laboratório. Quando os ratos tiverem se aclimatado, coloque um rato no centro da tampa da malha e vire cuidadosamente a tampa de cabeça para baixo. Em seguida, meça a latência de queda do mouse da tampa da malha, antes de devolver o mouse para sua gaiola doméstica.

Quando todos os ratos tiverem sido testados, coloque um pedaço de papel branco de 9,9 por 42 centímetros no banco do laboratório, e coloque uma caixa de gol escura na extremidade distal do papel. Coloque outras caixas, aproximadamente o mesmo comprimento do papel, em ambos os lados da pista para evitar a fuga. E adicione tinta preta e vermelha para separar 35 pratos de Petri mililitros.

Para treinar os ratos para a análise, coloque um mouse na extremidade proximal do papel, de frente para a caixa de gol, e deixe o mouse andar da extremidade proximal do papel até a caixa de gol. Quando o rato chega à caixa, esmague suavemente o animal, enfiando as costas e a cauda entre a bola do polegar e os outros dedos, para limitar o movimento dos membros traseiros. E mergulhe os fundos dos membros dianteiros em tinta vermelha, e a parte inferior dos membros traseiros em tinta preta.

Em seguida, coloque imediatamente o mouse de volta na extremidade proximal do papel, de frente para a caixa de gol, e deixe o mouse andar da extremidade proximal para a caixa de gol. Após a secagem do ar do papel impresso do pé, use uma régua para obter três medidas do comprimento do passo, medindo as distâncias entre as mesmas partes das impressões da pata. Da largura da base dianteira, desenhando uma linha entre pegadas consecutivas, do mesmo lado, dianteiras, e medindo o comprimento da linha vertical da almofada da pegada frontal, até a linha traçada entre as pegadas.

E da largura da base traseira, desenhando uma linha entre pegadas traseiras direitas consecutivas, e medindo o comprimento da linha vertical da almofada da pegada traseira esquerda, até a linha traçada entre as outras pegadas direitas. Para se sobrepor, meça a distância entre as almofadas das pegadas dianteira e traseira. Para preparar um tubo de contenção, use uma broca quadrada para fazer 16 buracos de dois milímetros em um tubo de 50 mililitros ao longo das marcas de escala, e na parte traseira de cada marca de escala.

Corte a ponta do tubo para fazer um furo de cinco milímetros, para respirar, e faça um furo de quatro milímetros na tampa do tubo, para a cauda. Para o teste de carregamento de estresse, escrogue um rato e coloque o animal na cabeça do tubo de contenção primeiro, com os membros dianteiros suavemente confinados. Passe a cauda através do orifício na tampa antes de tampar o tubo.

E coloque o rato no banco por duas horas em temperatura ambiente. No final do período de carga de estresse, remova o rato do tubo e devolva o animal para sua gaiola doméstica. Como observado nessas figuras representativas, ratos modelo de parkinsonismo de distonia de início rápido heterozigous, demonstram comprimentos de passo dianteiros e passos traseiros significativamente mais curtos, do que seus companheiros de ninhada do tipo selvagem com quatro semanas de idade.

Os camundongos modelo de parkinsonismo de início rápido heterozigoso de estresse também exibem comprimentos de passo significativamente mais curtos de ambos os membros do que os de companheiros de ninhada do tipo selvagem estressados com oito semanas de idade. Assimetrias dos comprimentos de passo de ambos os membros não são significativamente diferentes, em qualquer grupo de camundongos, em qualquer idade. A base frontal e as sobreposições de ambos os membros também são semelhantes, em todos os grupos, em todas as idades.

A base traseira é significativamente mais ampla nestes camundongos modelo de parkinsonismo heterozigoso de início rápido estressados, do que o observado nos animais do tipo selvagem de estresse com 10 semanas de idade, indicando que o estresse causa déficits motores em camundongos modelo de parkinsonismo heterozigoso de início rápido. Não há diferenças significativas no tempo de enforcamento, entre o tipo selvagem e o mutante, são observadas em animais de quatro a 10 semanas de idade. Aos 12 semanas de idade, no entanto, o tempo de enforcamento de camundongos do tipo selvagem de estresse é significativamente maior do que o dos outros animais, sugerindo que o déficit motor em camundongos modelo de parkinsonismo heterozigoso de início rápido, é distinguido de ratos do tipo selvagem por teste de contenção em animais mais velhos.

Coloque o mouse sobre o papel imediatamente após o mouse pendurar as partes inferiores dos membros na tinta para evitar a secagem da tinta antes do teste de caminhada. Testes adicionais para características emocionais, como campo aberto, plus-maze elevado e teste de natação inteiro, podem ser realizados para responder se a anormalidade da marcha resulta apenas de déficit motor. Nosso protocolo pode ser usado para explorar a suscetibilidade ao estresse, alterando o número e a duração do carregamento de estresse, e comparando fenótipos motores entre várias condições de carregamento.

Nosso protocolo pode ser usado para explorar a suscetibilidade ao estresse alterando o número e a duração dos carregamentos de estresse, e comparando fenótipos motores entre várias condições de carregamento.