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Avançado de imagem do pulmão Homing linfócitos humanos em um Experimental em modelo Vivo de infla...
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JoVE Journal Medicine
Advanced Imaging of Lung Homing Human Lymphocytes in an Experimental In Vivo Model of Allergic Inflammation Based on Light-sheet Microscopy

Avançado de imagem do pulmão Homing linfócitos humanos em um Experimental em modelo Vivo de inflamação alérgica baseada em microscopia de luz-folha

Full Text
8,228 Views
10:39 min
April 16, 2019

DOI: 10.3791/59043-v

Anja Schulz-Kuhnt1, Sebastian Zundler1, Anika Grüneboom2, Clemens Neufert1, Stefan Wirtz1, Markus F. Neurath1, Imke Atreya1

1Department of Medicine 1,University Hospital of Erlangen, 2Department of Medicine 3,University Hospital of Erlangen

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol enables the imaging and quantification of lung-homing human immune cells in a mouse model of allergic inflammation. It provides insights into T cell lung homing under in vivo inflammatory conditions.

Key Study Components

Area of Science

  • Immunology
  • Inflammatory Diseases
  • Translational Research

Background

  • Understanding T cell lung homing is crucial for developing therapies for pulmonary diseases.
  • Activated immune cells accumulate in lung tissue during chronic inflammation.
  • Current methods lack precision in imaging these processes.
  • This protocol addresses these gaps by utilizing light-sheet fluorescence microscopy.

Purpose of Study

  • To characterize the lung homing capacity of primary human lymphocytes.
  • To provide a method for imaging immune cell infiltration in lung tissue.
  • To support research in identifying new therapeutic targets for allergic and inflammatory lung diseases.

Methods Used

  • Use of a micropipet to deliver papain solution into the nostril of anesthetized mice.
  • Density gradient separation of human peripheral blood using Ficoll medium.
  • Light-sheet fluorescence microscopy for imaging cleared lung tissue.
  • Quantification of immune cell accumulation in the lungs.

Main Results

  • Successful imaging of human immune cells in the lungs of mice.
  • Demonstrated the influence of inflammatory conditions on T cell homing.
  • Provided a reliable method for studying immune cell behavior in vivo.
  • Highlighted the potential for identifying new therapeutic targets.

Conclusions

  • This technique is valuable for immunological research in chronic lung diseases.
  • It allows for a better understanding of T cell dynamics in inflammatory environments.
  • The protocol can aid in the development of optimized therapies for pulmonary conditions.

Frequently Asked Questions

What is the significance of T cell lung homing?
T cell lung homing is crucial for understanding immune responses in pulmonary diseases and developing targeted therapies.
How does this protocol improve upon existing methods?
This protocol utilizes light-sheet fluorescence microscopy for precise imaging of immune cells in the lung, which is more effective than traditional methods.
What type of mice are used in this study?
C57 black 6J mice are used for the experiments.
What is the role of papain in this protocol?
Papain is used to induce inflammation in the mouse model, facilitating the study of immune cell behavior.
Can this method be applied to other types of immune cells?
Yes, this method can potentially be adapted to study various immune cell types in different inflammatory contexts.
What are the implications of this research?
The findings may lead to new therapeutic strategies for managing allergic and inflammatory lung diseases.

O protocolo introduzido aqui permite a caracterização da capacidade pulmonar localizador de linfócitos humanos primários sob condições inflamatórias em vivo. Infiltração pulmonar de enviaram transferidas células imunes humanas em um modelo do rato da inflamação alérgica pode ser fotografada e quantificada por microscopia de fluorescência de luz-folha de tecido pulmonar quimicamente limpo.

Nossa técnica permite a imagem precisa de células imunes humanas acumuladas pelo pulmão em condições inflamatórias in vivo fornecendo insights emocionantes sobre o processo de localização pulmonar das células T. Este protocolo apoia pesquisas translacionais sobre o homing pulmonar de células T e pode, assim, ajudar na identificação de novos alvos para uma terapia otimizada de doenças pulmonares inflamatórias ou alérgicas. Em particular, a capacidade de considerar a influência de propriedades de células imunes específicas da doença, organização de tecidos pulmonares e meio inflamatório na espirro pulmonar das células T torna este método altamente vantajoso.

No geral, nossa técnica é de alto valor para pesquisas imunológicas no campo de doenças pulmonares inflamatórias crônicas, que muitas vezes são impulsionadas por um acúmulo de tecido avassalador de células imunes ativadas. Depois de confirmar a falta de resposta ao beliscão do dedo do dedo em um rato C57 preto 6J de pelo menos 16 gramas, de seis semanas de idade, anestoizado, use um micropipet para entregar lentamente 10 microliters de solução papain recém-preparada em uma narina do mouse uma vez por dia por três dias consecutivos. No dia seguinte à última administração do papain, a camada 10 mililitros de Ficoll médio sob sangue periférico humano de um voluntário saudável pré-diluído em uma proporção de um a dois na PBS para separação gradiente de densidade por centrifugação.

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