Indução e pontuação da doença do enxerto versus hospedeiro em modelo murino Xenogeneico e quantificação de células T humanas em tecidos de camundongo utilizando PCR digital

Este protocolo descreve como induzir a doença xenoenxerto versus hospedeiro, ou xenoGVHD, e como cegar e padronizar a pontuação clínica para garantir resultados consistentes. O modelo xenoGVHD fornece um método in vivo para testar terapias imunossupressores contra células humanas e não murinas T, melhorando a tradução desses estudos para a clínica. Demonstrando o procedimento será Amara Seng, uma estudante de pós-graduação do meu laboratório.

Um dia antes da injeção, coloque a scid gama diabética não obesa de oito a 12 semanas de idade, ou NSG, camundongos em uma gaiola de torta esterilizada, e irradie os camundongos em uma fonte de césio-137 com uma dose total de 150 centigrays, com uma rotação lenta para garantir uma irradiação uniforme. Em seguida, coloque os ratos em gaiolas limpas em um armário de biossegurança estéril durante a noite. Na manhã seguinte, coletar sangue humano saudável suficiente para isolar 1,1 vezes 10 para as sete células mononucleares de sangue periféricos, ou PBMCs, por rato, e diluir o sangue heparinizado em um volume igual de 2% de soro bovino fetal, ou FBS, em PBS.