Análise de absorção endocítica e transporte retrógrado à rede Trans-Golgi usando funcionalizados Nanobodies em culturas de células

Este método permite a produção e a aplicação de nano corpos expressos e funcionalizados bacterianos para analisar o transporte de proteínas retrógradas da superfície celular para compartimentos intercelulares. Em particular a rede Trans-Golgi. A principal vantagem dessa técnica é o uso da sulfação. Uma modificação pós-tradução altamente específica, compartimentalizada e sensível para avaliar a chegada do complexo nano-corpo do repórter no compartimento DTN. Este método em combinação com outros nano-corpos derivados para imagem de células de vida e microscopia eletrônica também pode ser usado para estudar processos endociticos de receptores de superfície celular relacionados à doença. Nosso repertório de nano-corpos funcionalizados foi projetado para estudar o transporte retrógrado em células cultivadas. No entanto, essas ferramentas também podem ser aplicadas em organismos multicelulares. Para iniciar este procedimento, escolha uma colônia bacteriana contendo o vetor de interesse da placa e inocula um frasco contendo 20 mililitros de meio LB complementado com antibióticos. Incubar durante a noite aos 37