Incorporação de um procedimento de biópsia hepática Survivable em ratos para avaliar a resolução esteatohepatite não-alcoólica (NASH)

Este procedimento de biópsia hepática sobrevivente em camundongos com esteatohepatite não alcoólica, ou NASH, permite tanto a exclusão de animais que não têm NASH quanto a medição precisa das respostas às intervenções. Este procedimento imita de perto o desenho do ensaio clínico para estudos nash que comparam a patologia pós-versus pré-tratamento do fígado e permite uma avaliação mais precisa da eficácia da droga. Expor o lobo hepático pode ser um desafio no início.

Pratique expor o tecido com o dedo ou um aplicador de ponta de algodão primeiro para encontrar o melhor ajuste para você. Depois de confirmar a falta de resposta ao beliscão do dedo do dedo do dedo do dedo, faça uma incisão de pele abdominal longitudinal de um a dois centímetros imediatamente caudal para o processo xifoide e ligeiramente para o lado esquerdo do rato anestesiado. Use fórceps e tesouras para dissecar a pele até que a parede abdominal seja exposta e o fígado possa ser visualizado sob o tecido muscular.

Usando uma lâmina de bisturi estéril, faça uma incisão de um a dois centímetros na parede abdominal para expor o lobo lateral esquerdo do fígado, e coloque um cotonete estéril sob o lobo lateral esquerdo para extrair suavemente a porção a ser exposta através da incisão. Coloque um pedaço de gaze estéril encharcado de soro fisiológico sob o lobo exposto, e use uma tesoura estéril para extirpor um pedaço de tecido em forma de cunha de 30 a 50 miligramas do fígado extraído. Corte um pedaço de gelatina absorvível comprimida esponja semelhante em tamanho ao pedaço de cunha do fígado, e use fórceps estéreis para inserir a esponja na porção cortada do fígado.

Mantenha a esponja no lugar com os fórceps até que a gelatina adere à superfície do fígado e a hemostasia seja alcançada antes de colocar a biópsia hepática em um recipiente apropriado para sua análise a jusante. Devolva suavemente o fígado para a cavidade abdominal, tomando cuidado para não perturbar a esponja, e, começando e terminando com um nó quadrado completo, suturar a parede abdominal com suturas absorvíveis revestidas 5-0. Em seguida, feche a pele com clipes de ferida de sete milímetros, confirmando um fechamento completo após a colocação, e devolva o mouse a uma gaiola limpa em uma superfície aquecida com monitoramento até a recuperação completa.

Neste experimento representativo, 118 camundongos foram biópsiados após 29 semanas em uma dieta personalizada rica em gordura, frutose e colesterol para induzir NASH. O nível de fibrose e esteatose foram então pontuados para cada biópsia. Os camundongos foram excluídos do estudo com base em baixa ou alta fibrose e perda de peso anormal ou cicatrização de feridas, e os ratos restantes foram tratados com veículo ou o receptor agonista agonista de glucagon-1 liraglutide por seis semanas.

Nos grupos tratados com veículos, um camundongo apresentou um aumento na fibrose e quatro camundongos demonstraram um aumento no escore de atividade nash. O tratamento com liraglutida esteve associado a uma melhora geral da fibrose, com 17% do grupo de tratamento melhorando e 83% permanecendo inalterado. Da mesma forma, o tratamento de liraglutida melhorou a pontuação geral do NASH, com 66% do grupo apresentando um melhor escore de atividade nash, e 33% permaneceram inalterados.

Além disso, o tratamento com liraglutida melhorou a inflamação, com 75% do grupo tendo menor escore de inflamação após o tratamento, enquanto os animais tratados com veículos experimentaram um aumento na inflamação. A esteatose não foi afetada pelo tratamento agonista, permanecendo inalterada em ambos os grupos antes e depois da intervenção. Tenha cuidado para não danificar excessivamente o pedaço de fígado excisado para garantir que ele possa ser adequadamente analisado para suas necessidades.

Este procedimento pode ser usado para imitar projetos de ensaios clínicos comparando efeitos pré e pós-tratamento de novas terapêuticas em fígados NASH.