A longo prazo conflito sensorial em livremente, comportando-se ratos

O objetivo geral deste protocolo é produzir um conflito sensorial persistente para o estudo da aprendizagem de longo prazo em camundongos que se comportam livremente. Diminuindo o custo experimental e o tempo de aprendizado sensorial, essa abordagem acomoda a combinação de experimentos in vivo e in vitro. Depois de confirmar a falta de resposta ao beliscão do dedo do dedo em um rato sedado, use um par de fórceps contundentes para agarrar a pele na parte de trás da cabeça e usar uma tesoura para fazer uma incisão longitudinal de um cm e meio para expor o crânio.

Coce suavemente o periosteum com um bisturi e aplique uma gota de ativador verde no meio do crânio para aumentar a permeabilidade óssea. Em seguida, misture uma colher cheia de polímero do kit de implantação com cinco gotas de monômero e uma gota de catalisador e escove uma generosa mistura de cimento entre os marcos do crânio de lambda e bregma. Usando um movimento de deslizar de lambda para bregma, coloque rapidamente o headpost sobre o cimento e reaplique cimento adicional ao redor da parte inferior do poste para garantir que o poste grude firmemente no crânio.

Enquanto o cimento estiver secando, misture o pó de resina com líquido de resina a uma consistência suave e aplique a mistura de resina resultante no cimento seco e ao redor do poste. Depois de permitir que a resina seque por três minutos, use uma sutura Vicryl 4-0 para fechar a pele na parte de trás das orelhas e use um cotonete para aplicar uma solução de 10 a 20% de iodo à incisão. Em seguida, coloque o animal sob uma luz vermelha com monitoramento até a recuperação completa.

Quarenta e oito horas após a cirurgia alinham os orifícios no dispositivo listrado com os orifícios no poste e usam uma chave de fenda hexais de 1,3 mm e dois parafusos de 1,2 mm para fixar o dispositivo no poste. Recomendamos fixar o dispositivo no poste com a ajuda de um segundo operador para evitar o risco de arrancar o poste ou ferir o animal com a chave de fenda. Para corrigir a condição falsa, gire o dispositivo de cabeça para baixo e com a parte traseira do dispositivo voltada para a direção rostral alinhe os orifícios no dispositivo com os orifícios no poste.

Confirme que o dispositivo está bem protegido e não pode ser removido pelo animal e que o dispositivo não aplica pressão diretamente no nariz, o que pode causar dor, dificuldades respiratórias ou lesões na pele. Como os camundongos podem apresentar algumas anormalidades comportamentais durante as primeiras 48 horas de uso do dispositivo, monitore os animais de perto durante este tempo e forneça fácil acesso à comida e água até que os animais se aclimatem. Pesar os camundongos imediatamente após a implantação e novamente a cada 24 horas depois até o final do experimento, dando atenção especial aos ratos que usam o dispositivo listrado.

Para registrar a resposta sensorial dos animais adaptados ao dispositivo, fixe o primeiro mouse na mesa giratória com os parafusos inseridos no poste e coloque uma cúpula de tela ao redor do animal. Desligue todas as luzes da sala, exceto o projetor optokinetic e inicie a gravação de estimulação de campo completa do reflexo optokinetic em várias velocidades diferentes nas direções no sentido horário e anti-horário. Assim que as gravações acabarem, remova a cúpula e acenda as luzes.

Para registrar o reflexo vestibulo-ocular no escuro do tom, aplique uma gota de 2% de pilocarpina nos olhos do animal e espere pelo menos cinco minutos antes de remover suavemente a pomada com um cotonete. Desligue todas as luzes novamente e coloque uma caixa sobre o toca-discos para manter o animal no escuro. Antes de iniciar o teste de reflexo vestibulo-ocular horizontal usando rotações angulares sinusoidais em torno de um eixo vertical com diferentes frequências e/ou velocidades diferentes.

Quando a segunda sessão de gravação estiver concluída, devolva o rato à sua gaiola sob uma lâmpada infravermelha com monitoramento até que o animal seja totalmente recuperado dos efeitos vasodilatadores secundários da pilocarpina. Depois de duas semanas usando uma farsa ou um dispositivo listrado, as respostas reflexais vestibulo-oculares dos ratos falsos permanecem sem mudança após a adaptação, enquanto os animais listrados adaptados ao dispositivo demonstram uma resposta reflexo drasticamente comprometida. A quantificação do reflexo vestibulo-ocular médio ganha em uma frequência fixa de 0,5 hertz e a 40 graus por segundo antes e depois do protocolo de incompatibilidade visual-vestibular revela uma forte diminuição do ganho nos camundongos que usavam o dispositivo listrado, enquanto os ratos falsos não apresentaram mudanças significativas de ganho.

No entanto, o reflexo optokinetic de camundongos usando o dispositivo listrado é comparável ao observado para o período anterior ao protocolo visual-vestibular e ao demonstrado pelos animais falsos. Certifique-se de monitorar os ratos diariamente e garantir que o dispositivo esteja corretamente posicionado nos ratos e que isso não impeça suas rotinas. Seguindo este procedimento, pode-se realizar eletrofisiologia in vitro ou imagem neuronal para identificação de mecanismos de adaptação sellar ou ensaios comportamentais para o estudo de diferentes saídas de reflexo.