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Estudando o RNA interactianos de proteína quinase RNA-ativado durante o ciclo celular dos mamíferos
Estudando o RNA interactianos de proteína quinase RNA-ativado durante o ciclo celular dos mamíferos
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Biochemistry
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JoVE Journal Biochemistry
Studying RNA Interactors of Protein Kinase RNA-Activated during the Mammalian Cell Cycle

Estudando o RNA interactianos de proteína quinase RNA-ativado durante o ciclo celular dos mamíferos

Full Text
6,909 Views
10:05 min
March 5, 2019

DOI: 10.3791/59215-v

Sujin Kim1, Minjeong Kang1, Yoosik Kim1

1Department of Chemical and Biomolecular Engineering and KI for Health Science and Technology (KIHST),Korea Advanced Institute of Science and Technology (KAIST)

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Nós apresentamos abordagens experimentais para estudar RNA-interactianos de double-stranded RNA ligação proteína quinase RNA-ativado (PKR) durante o ciclo de pilha mamífero usando células HeLa. Este método utiliza o formaldeído para complexos de crosslink RNA-PKR e imunoprecipitação para enriquecer RNAs ligados a PKR. Estes RNAs podem ser analisados ainda mais através de sequenciamento de alto rendimento ou qRT-PCR.

Este protocolo fornece um método para identificar os interagedores de RNA de uma proteína de ligação de RNA PKR de forma genoma. Isso nos ajuda a entender melhor a regulação pós-transcricional da expressão genética pela proteína de ligação de RNA. A principal vantagem desta técnica é que ela utiliza uma ligação cruzada eficiente de formaldeído para corrigir rnase vinculado a proteínas de ligação de RNA e enriquecê-las através da imunoprecipitação.

PKR ativado é observado em pacientes com doença neurodegenerativa, como Parkinson e Doença de Alzheimer. Identificar RNase de dupla-encalha interagindo com PKR nos ajudará a entender melhor a patogênese dessas doenças degenerativas. Este método pode ser usado para estudar os interagedores de RNA de quaisquer proteínas de ligação de RNA.

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Bioquímica edição 145 Double-stranded do RNA do RNA mitocondrial RNA ligação proteína interação RNA-RBP proteína quinase RNA-ativado reticulação de formaldeído ciclo celular vertente específica qRT-PCR

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