Name: Coleção de respiração das crianças para a descoberta de biomarcador de doença (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: Aprenda a coletar amostras de ar expirado de crianças de forma não invasiva usando tubos de sorvente. Este método padronizado facilita a descoberta de biomarcadores para infecções, distúrbios metabólicos e câncer em pediatria.

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Expressamos a nossa gratidão para as crianças e famílias de St. Louis Hospital das crianças que participaram neste estudo. Reconhecemos os esforços exclusivos da Sra. Stacy Postma e Sra. Janet Sokolich durante a coleta de respiração. Este trabalho é apoiado pela Fundação de Hospital de crianças St. Louis.

O estudo foi aprovado pelo institucional Review Board da Washington University School of Medicine (#201709030). Foi obtido o consentimento dos pais ou tutores legais antes da inclusão no estudo. Fotografias em Figura 2 reproduzida com o consentimento informado dos pais.
1. montagem de sampler respiração
<ol><li>Usar luvas descartáveis, anexe um bocal de papelão para o sampler de respiração, como mostrado na Figura 1de suplementar. Anexe um comprimento curto de tubos de grande diâmetro para o outro extremo do amostrador a respiração, como mostrado na Figura suplementar 1. Use a tubulação nova para cada paciente.</li>
	<li>Ligue o conector de respiração para a válvula do saco através da tubulação. Veja a Figura 1 para foto do amostrador de respiração e saco ligado.</li>
	<li>Gire o parafuso recartilhado do lado de ajuste no sentido anti-horário para destravar a válvula de entrada de e empurre a haste da válvula do saco, para abrir a entrada da montagem para amostragem.</li>
	<li>Fechar a válvula aberta, girando o parafuso recartilhado do lado da entrada de ajuste no sentido horário.</li>
	<li>Confirme que a válvula azul no sampler respiração está aberta (em paralelo com o conector).</li>
	<li>Escreva o paciente ID, data e hora no rótulo do saco do polímero.</li>
	<li>Tubo adsorvente de condição TD antes da respiração coleção usando recomendado procedimentos (disponíveis a partir de fabricantes individuais). Cap e armazenar tubos de desorção térmica 4 – 5 ° c antes da coleção de respiração para minimizar artefatos.</li>
</ol>2. coleção de respiração
<ol><li>Realizar uma demonstração de exalação da respiração para a criança usando um amostrador de respiração (sem um saco). Explica à criança que eles devem expirar como eles seriam quando "soprando um balão" e continuar respirando para fora tanto quanto eles podem confortavelmente. Coloque o bocal de papelão entre seus lábios e expire o mais longe puder.</li>
	<li>Fornecer a criança com um novo amostrador de respiração anexado a um saco e pedir-lhes para exalar como a demonstração, conforme ilustrado na Figura 2.</li>
	<li>Feche a válvula azul no dispositivo de amostrador de ar assim que a criança tenha terminado expirando. Reabra a válvula conforme necessário antes de exalações adicionais.</li>
	<li>Repita a etapa 2.2 e 2.3, até pelo menos 1 L de ar tenha sido coletado. Para uma criança saudável pode levar 2 exalações e para um exalações de criança doente ou mais jovem 2 – 4. 1 L de ar é o requisito mínimo de analítico. Observe no rótulo do saco quantas respirações foram coletadas do paciente. Consulte Supplemental Figura 2 para uma foto do saco contendo diferentes volumes de ar.</li>
	<li>Antes de retirar o saco do amostrador de ar, certifique-se de soltar o parafuso recartilhado no lado de entrada do encaixe girando-a no sentido anti-horário e empurre a haste da válvula até fechar o encaixe da entrada. Ver suplementar Figura 3 para a foto do saco a válvula na posição aberta e fechada.</li>
	<li>Feche a válvula do saco fechada girando o parafuso recartilhado do lado da entrada de ajuste no sentido horário.</li>
	<li>Retire o saco do amostrador a respiração.</li>
	<li>Alienar o bocal e pôr de lado o amostrador de ar para limpeza antes da sua utilização com um paciente diferente.</li>
</ol>3. transferência hálito para tubos de desorção térmica
<ol><li>Retire o tubo de TD da geladeira. Remova as tampas de armazenamento a longo prazo do tubo adsorvente, usando a ferramenta de nivelamento/desoperculação tubo fornecido pelo fabricante.</li>
	<li>Fixe a extremidade ranhurada do tubo adsorvente TD saco de recolha utilizando tubos. Note que a orientação do tubo é importante, como TD tubos são projetados para ter o ar flui em uma direção apenas, a partir do final de ranhurados. Observe que a transferência de ar do saco de TD deve ser feita dentro de 1 hora de coleção de respiração.</li>
	<li>Introduza a outra extremidade do tubo TD a tubulação, que é ligada a uma bomba.</li>
	<li>Ligue a bomba e definido para ser executado em 100 mL/min por 10 min.</li>
	<li>Abra a válvula do saco rodando no sentido anti-horário o parafuso recartilhado no lado do encaixe da entrada e empurre a haste da válvula para baixo para abrir o encaixe da entrada. Isso é ilustrado no Supplemental Figura 4, que demonstra a transferência de ar num tubo adsorvente TD usando uma bomba.</li>
	<li>Ligue a bomba, que vai parar após 10min de coleção.</li>
	<li>Remover o tubo adsorvente TD e aperte as tampas em ambas as extremidades, usando a ferramenta de nivelamento/desoperculação tubo. Tampões de armazenamento a longo prazo devem ser firmemente apertados para garantir uma vedação estanque.</li>
	<li>Coloca um adesivo na extremidade de um tampão para indicar que o tubo foi usado. No adesivo, indica a data e número de identificação (ID) do paciente do estudo.</li>
	<li>Colocar o tubo em um pequeno saco de plástico re-selável. Tubo adsorvente de loja 4 e 5 ° c. Pressione o resto da respiração fora do saco e descartar o saco. Gravar o paciente estudo ID, TD tube número de série, dia de coleta, da coleção de respiração, tempo de transferência de respiração e ingestão de alimentos (tempo de ingestão de alimentos antes da coleção de respiração e as refeições consumidas).</li>
</ol>4. coleção de ar ambiente
<ol><li>Colete as amostras de ar ambiente no ambiente do paciente imediatamente após a colheita de respiração.<ol>
<li>Prenda o saco à porta de saída da bomba por meio de tubulação, conforme ilustrado na Figura suplementar 5.</li>
		<li>Empurre a haste da válvula do saco até abrir o encaixe da entrada para a amostragem.</li>
		<li>Trave a válvula aberta, girando no sentido horário o parafuso recartilhado no lado do encaixe da entrada.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ligue a bomba e definido para ser executado em 100 mL/min por 12 min. A bomba irá recolher 1.200 mL de ar ambiente.</li>
	<li>Depois que o volume solicitado foram coletado, afrouxe o parafuso recartilhado no lado de entrada do encaixe girando-a no sentido anti-horário e empurre a haste da válvula até fechar o encaixe da entrada.</li>
	<li>Feche a válvula do saco fechada girando no sentido horário o parafuso recartilhado no lado do encaixe da entrada.</li>
	<li>Retire o saco da bomba.</li>
	<li>Siga os mesmos passos como na seção 3. A única diferença é que ar ambiente que COV vai ser transferido, não aqueles de respiração.</li>
</ol>5. a amostra e análise de dados
Nota: As condições para análise de amostras de ar e respiração foram descritos anteriormente9.
<ol><li>Analisar dados coletados e detectar compostos nos cromatogramas. Use programas de software típico para encontrar e identificar todos os compostos detectados pelo instrumento (Figura 3A). Por exemplo, use um recurso de deconvolução para identificar compostos. Filtrar dados usando fator de tamanho de janela de retenção de 80, alturas em massa filtros ≥100 conta, e composto de área absoluta filtro ≥500 conta.</li>
	<li>Use padrões químicos para compostos de identidade em amostras de ar e respiração. Extrair a área do pico íon base de compostos de interesse, tais como isopreno e β-pineno (Figura 4) e comparar os níveis de compostos voláteis em respiração e ar.</li>
</ol>

<ol><li>Ahmed, W. M., Lawal, O., Nilsen, T. M., Goodacre, R., Fowler, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exhaled+volatile+organic+compounds+of+infection%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Exhaled volatile organic compounds of infection: a systematic review.</a> ACS Infectious Diseases. 3 (10), 695-710 (2017).</li>
<li>Berna, A. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+breath+specimens+for+biomarkers+of+Plasmodium+falciparum+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Analysis of breath specimens for biomarkers of Plasmodium falciparum infection.</a> Journal of Infectious Diseases. 212 (7), 1120-1128 (2015).</li>
<li>Lawal, O., Ahmed, W. M., Nijsen, T. M. E., Goodacre, R., Fowler, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exhaled+breath+analysis%3A+a+review+of+%27breath-taking%27+methods+for+off-line+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolomics%22%5BJournal%5D)">Exhaled breath analysis: a review of 'breath-taking' methods for off-line analysis.</a> Metabolomics. 13 (10), (2017).</li>
<li>Kang, S., Thomas, C. L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+long+may+a+breath+sample+be+stored+for+at-80+degrees+C%3F+A+study+of+the+stability+of+volatile+organic+compounds+trapped+onto+a+mixed+Tenax%3ACarbograph+trap+adsorbent+bed+from+exhaled+breath%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Breath+Research%22%5BJournal%5D)">How long may a breath sample be stored for at-80 degrees C? A study of the stability of volatile organic compounds trapped onto a mixed Tenax:Carbograph trap adsorbent bed from exhaled breath.</a> Journal of Breath Research. 10 (2), (2016).</li>
<li>Basanta, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+metabolomic+analysis+of+breath+using+differential+mobility+spectrometry+in+patients+with+chronic+obstructive+pulmonary+disease+and+healthy+smokers%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">Non-invasive metabolomic analysis of breath using differential mobility spectrometry in patients with chronic obstructive pulmonary disease and healthy smokers.</a> Analyst. 135 (2), 315-320 (2010).</li>
<li>Mochalski, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+and+breath+levels+of+selected+volatile+organic+compounds+in+healthy+volunteers%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">Blood and breath levels of selected volatile organic compounds in healthy volunteers.</a> Analyst. 138 (7), 2134-2145 (2013).</li>
<li>Mochalski, P., Wzorek, B., Sliwka, I., Amann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suitability+of+different+polymer+bags+for+storage+of+volatile+sulphur+compounds+relevant+to+breath+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B-Analytical+Technologies+in+the+Biomedical+and+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Suitability of different polymer bags for storage of volatile sulphur compounds relevant to breath analysis.</a> Journal of Chromatography B-Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences. 877 (3), 189-196 (2009).</li>
<li>Mochalski, P., King, J., Unterkofler, K., Amann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability+of+selected+volatile+breath+constituents+in+Tedlar%2C+Kynar+and+Flexfilm+sampling+bags%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">Stability of selected volatile breath constituents in Tedlar, Kynar and Flexfilm sampling bags.</a> Analyst. 138 (5), 1405-1418 (2013).</li>
<li>Schaber, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breathprinting+reveals+malaria-associated+biomarkers+and+mosquito+attractants%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Breathprinting reveals malaria-associated biomarkers and mosquito attractants.</a> Journal of Infectious Diseases. 217 (10), 1553-1560 (2018).</li>
<li>Herbig, J., Beauchamp, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+standardization+in+the+analysis+of+breath+gas+volatiles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Breath+Research%22%5BJournal%5D)">Towards standardization in the analysis of breath gas volatiles.</a> Journal of Breath Research. 8 (3), (2014).</li>
<li>Phillips, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variation+in+volatile+organic+compounds+in+the+breath+of+normal+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%22%5BJournal%5D)">Variation in volatile organic compounds in the breath of normal humans.</a> Journal of Chromatography B. 729 (1-2), 75-88 (1999).</li>
<li>Eckel, S. P., Baumbach, J., Hauschild, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+importance+of+statistics+in+breath+analysis-hope+or+curse%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Breath+Research%22%5BJournal%5D)">On the importance of statistics in breath analysis-hope or curse?</a> Journal of Breath Research. 8 (1), (2014).</li>
</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Apesar dos progressos consideráveis em pesquisa de fôlego na última década, práticas padronizadas para a amostragem e análise de compostos voláteis de gás de respiração permanecem indefinidos10. A principal razão para essa falta de padronização tem sido a diversidade de métodos de recolha de respiração, que têm impacto direto sobre a diversidade química resultante presente em qualquer amostra de determinado ar exalado. Respiração exhalate contém uma extensa gama de compostos orgânicos voláteis em ...

Biomarcadores podem render informações valiosas sobre os processos biológicos normais e patológicos que podem contribuir para a doença clinicamente identificável. Recentemente, tem havido um interesse crescente na avaliação de compostos voláteis de respiração como biomarcadores para uma variedade de doenças, incluindo câncer 1, distúrbios metabólicos e infecção. Ar exalado contém níveis quantificáveis de compostos orgânicos voláteis (COV), compostos orgânicos semivoláteis e amostras com derivada material (por exemplo, os ácidos nucleicos de bactérias e vírus). O objetivo central de análise do ar exalado é obter conhecimento sobre o status de uma condição médica e/ou exposições ambientais não invasiva. Existem vários métodos de coleta e análise de ar exalado, dependendo dos componentes de interesse. Atualmente não há nenhum método de coleta de ar exalado padronizada, que dificulta a análise comparativa dos resultados através de estudos. Padronização de procedimentos de coleta de respiração é essencial, como o próprio procedimento de amostragem tem um efeito considerável sobre os resultados a jusante das análises de respiração.
Em muitos estudos, tarde amostragem respiratória respiração é empregada2,3. Esta amostragem envolve rejeitando a porção inicial do ar exalado ("dead space"), a fim de capturar preferencialmente o ar no final do ciclo de respiração. A vantagem desta estratégia é que minimiza os níveis de COV exógeno (por exemplo, VOCs ambientais), enquanto enriquece para VOCs endógenas, específicos do paciente. Este método exclui os primeiros segundos da expiração de um indivíduo antes de coletar a amostra de respiração. Outros pesquisadores têm utilizado um sensor de pressão para ativar a amostragem durante uma fase predefinida de expiração4,5. Sensores de pressão requer engenharia complexa, este método alternativo requer um dispositivo de amostragem relativamente caro e dedicado.
Amostragem de respiração pediátrica pode ser especialmente desafiador. Uma preocupação-chave é que as crianças podem ser incapazes de cooperar com protocolos para voluntária exalação de ar de "dead space". Por esta razão, é mais fácil obter a respiração respiratória mista de crianças. No entanto, uma ressalva importante com amostras de respiração respiratória mista é o risco de contaminação ambiental e material. Portanto, a viabilidade de coleta pediátrica é uma preocupação de condução no campo.
Além disso, métodos de coleta, armazenamento de amostras de hálito também pode influenciar a qualidade da amostra. A alta umidade no ar exhalate e as ultra baixas concentrações (partes por trilhão) de respiração orgânicos voláteis compostos fazer respiração amostras particularmente suscetível a problemas relacionados a armazenamento6,7. Apesar do grande potencial das técnicas em tempo real como espectrometria de massa-reação de transferência de próton (PTR-MS), GC-MS continua a ser o padrão-ouro para a análise de amostras de respiração. Desde que a análise por CG-em de amostras de respiração é uma técnica de off-line, está acoplada com métodos de pré-concentração tais como tubos de desorção térmica (TD), microextração de fase sólida e dispositivos de armadilha de agulha. Antes da pré-concentração, amostras de hálito precisam ser armazenados temporariamente em polímero sacos8. Sacos de polímero são populares por causa de seu preço moderado, relativamente boa durabilidade e capacidade de reutilização. Enquanto sacos podem ser reutilizados, tempo e esforço são necessários para garantir a eficiente limpeza7,8. Cada tipo de saco específico também requer procedimentos empiricamente determinados e padronizados para controle de qualidade, reutilização e recuperação.
Tubos de TD são amplamente utilizados para pré-concentração de respiração porque eles capturar um grande número de compostos voláteis e podem ser personalizados. Os materiais absorventes usados para embalar os tubos TD podem ser adaptados para aplicações particulares e voláteis de destino específico de interesse. Tubos de TD substancialmente melhorar a conveniência de estudos de biomarcador de respiração, especialmente em locais de campo remoto, porque TD tubos com segurança loja voláteis de respiração pelo menos duas semanas e são fáceis de transporte3.
Em um esforço para padronizar a coleção de respiração pediátrica para descoberta de biomarker, aqui nós descrevemos um método simples para coletar o hálito de crianças pequenas. Para ilustrar os resultados representativos dos protocolos implementados, dados de identificados são apresentados de uma coorte em curso das crianças (8-17 anos) submetidos à avaliação para doença hepática não-alcoólica de ácido graxo (NAFLD). Os resultados completos e a análise deste estudo serão relatados em uma publicação posterior. Neste trabalho, relatamos um subconjunto de dados que demonstrem a aplicação do nosso protocolo. Em breve, as crianças são instruídas a Expire normalmente através do bocal em um saco de polímero, como se "soprando um balão." O processo é repetido 2 - 4 vezes até 1 L de ar é coletada. A amostra é então transferida para um tubo de TD e armazenada a 5 ° C, antes da análise por GC-MS.

<table><tbody><tr><td>Bolsa de respiração</td><td>SKC</td><td>237-03</td><td>Estes são sacos de 3 L</td></tr><tr><td>Bocal de papelão&nbsp;</td><td>A-M systems</td><td>161902</td><td>0.86" OD, 2.00" L</td></tr><tr><td>Tubulação de grande diâmetro</td><td>Cole Parmer</td><td>95802-11</td><td>Tubulação de Silicone, 1/4"ID x 5/16"OD,</td></tr> <tr><td>Tampas de armazenamento de longo prazo&nbsp;</td>Tampa de armazenamento de latão <td>Markes International</td><td>C-CF010</td><td>&frac14; " & Virola de PTFE, pk 10</td></tr><tr><td>Adaptador macho</td><td>Charlotte Pipe</td><td>2109</td><td>Parte 1/3 do conector de respiração (1/2" Universal part No. 436-005)</td></tr><tr><td>Adaptador macho (feito de Teflon)</td><td>Parte</td> 3/3 do conector de respiração construído <td></td> internamente <td>(1/4" ID x 1/2" MIP). Esta peça foi especialmente usinada a partir de hastes feitas de Bomba de Teflon virgem</td></tr><tr><td></td><td>SKC</td><td>220-1000TC-C</td><td>Pocket PumpTouch com Carregador</td></tr><tr><td>Tubulação de pequeno diâmetro&nbsp;</td>Tubulação de Teflon <td>Supelco</td><td>20533</td><td>&nbsp; L &vezes; OD &vezes; ID 25 pés e vezes; 1/4 pol. (6,35 mm) e vezes; 0,228 pol. (5,8 mm)&nbsp;</td></tr><tr><td>Tubos de dessorção térmica&nbsp;</td><td>Tubo Markes International</td><td>C2-CAXX-5314</td><td>, inerte, TnxTA/Sulficarb, cond/cap, pk 10</td></tr><tr><td>Ferramenta de tampar/destampar tubo</td><td>Markes International</td><td>C-CPLOK</td><td></td></tr><tr><td>Conector de válvula de esfera bidirecional&nbsp;</td><td>Homewerks Worldwide</td><td>VBV-P40-E3B</td><td>Parte 2/3 do conector de respiração (1/2")</td></tr></tbody></table>

coleção de respiração das crianças para a descoberta de biomarcador de doença

Breath Collection from Children for Disease Biomarker Discovery

Análise e coleta de respiração podem ser usados para descobrir biomarcadores voláteis em um número de doenças infecciosas e não infecciosas, como malária, tuberculose, câncer de pulmão e doença hepática. Este protocolo descreve um método reprodutível para amostragem de respiração em crianças e depois estabilizar amostras de respiração para uma análise mais aprofundada com cromatografia gasosa / espectrometria de massa (GC-MS). O objetivo desse método é estabelecer um protocolo padronizado para a aquisição de amostras de hálito para posterior análise química, de crianças com idades entre 4 a 15 anos. Primeiro, respiração é amostrada utilizando um papelão bocal conectado a uma válvula de 2 vias, que é conectada a uma bolsa de 3 L. Respiração analitos são então transferidos para um tubo de desorção térmica e armazenados a 4-5 ° C até análise. Esta técnica tem sido usada anteriormente para capturar o fôlego das crianças com malária para identificação de biomarcador de respiração bem sucedida. Posteriormente, nós tem aplicado com sucesso esta técnica de coortes pediátricas adicionais. A vantagem deste método é que ele exige cooperação mínima por parte do paciente (de determinado valor em populações pediátricas), tem um período curto da coleção, não requer pessoal treinado e pode ser realizado com equipamento portátil em configurações de campo de recursos limitados.

Em nosso estudo, respiração, as amostras foram coletadas de 10 crianças (8-17 anos) passando por avaliação no Hospital de crianças St. Louis. Amostras de hálito e amostras de ar ambiente (n = 10) foram coletadas conforme descrito acima. As amostras foram analisadas utilizando cromatografia gasosa quadrupolo tempo-de-voo espectrometria de massa (GC-MS QToF) e dessorção térmica, como descrito anteriormente9. Após a remoção de contaminantes de fundo, os proto...

Este protocolo descreve um método simples para a aquisição das amostras de respiração dos filhos. Brevemente, amostras de ar misto pré-concentram-se em tubos de adsorvente antes da análise por cromatografia gasosa / espectrometria de massa. Biomarcadores de respiração de doenças infecciosas e não-infecciosa podem ser identificados usando este método de coleta de respiração.

Coleção de respiração das crianças para a descoberta de biomarcador de doença

Breath collection and analysis can be used to discover volatile biomarkers in a number of infectious and non-infectious diseases, such as malaria, ...

Um método padronizado de coleta de respiração em crianças poderia ser usado para responder a perguntas-chave sobre o estado das condições médicas pediátricas de forma não invasiva e comparar resultados entre os estudos. A principal vantagem dessa técnica é que permite a coleta de amostras de respiração de crianças de forma simples, não invasiva e reprodutível. As implicações dessas técnicas se estendem ao diagnóstico de uma ampla gama de estados da doença, incluindo infecções, distúrbios metabólicos e câncer e para o ponto de atenção ao uso clínico.A instrução visual é muito útil porque há tantas peças em nossos equipamentos de coleta de respiração e porque a instalação do equipamento pode ser complicada. Para montar o equipamento de amostra de respiração, conecte um bocal de papelão ao amostrador de respiração e conecte um curto comprimento de tubo de grande diâmetro à outra extremidade do amostrador. Conecte o conector da respiração à válvula do saco através da tubulação.Gire o parafuso do polegar amassado na lateral da entrada no sentido anti-horário para desbloquear a válvula na posição aberta e empurre a haste da válvula do saco para baixo para abrir o encaixe da entrada para

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Química

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Secas Coleta de Sangue Mancha de Biomarcadores de saúde para maximizar a participação em Estudos Populacionais

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testes de alto rendimento de DNA e RNA patógenos base por nanoescala PCR é descrito usando um canino sindrômica e painel de PCR respiratória equina.

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Amostragem não-invasiva de mucosa líquido para a quantificação dos níveis de imune-mediador na Vivo das vias aéreas superiores

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