Name: Avaliação da reserva de fluxo coronariano após reperfusão de isquemia miocárdica em ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-28T13:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: Aprenda a avaliar a reserva de fluxo coronariano em ratos após isquemia-reperfusão miocárdica usando ecocardiografia Doppler transtorácica. Este método permite diagnosticar disfunção microvascular coronariana e testar intervenções terapêuticas em modelos animais de doença cardíaca.

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Gostaríamos de agradecer à Fundação Helmsley por fornecer equipamentos de ultra-som para realizar nossos experimentos. Este trabalho foi apoiado por NIA R01 053585 subvenção.

Todos os procedimentos foram realizados de acordo com protocolos aprovados pelo Comitê institucional de cuidados e uso de animais da Universidade de Louisville (IACUC-protocolo aprovado 18223) e o guia NIH para o cuidado e uso de animais de laboratório11.
1. os animais
<ol><li>Use 4-month-old fêmeas Fisher 344 ratos (BW ~ 150-180 g) para o estudo.</li>
</ol>2. imagem latente do ultra-som antes da cirurgia do IR
<ol><li>Anestesie o rato com câmara de indução de isoflurano a 5% com 1,5 – 2,0 L/min O2 fluxo seguido de 1,5 – 2,0% com 1,5 – 2,0 L/min o2 Flow. Esta anestesia é mantida durante todo o experimento, durante os estágios de repouso e estresse.</li>
	<li>Coloque o animal em uma posição supina e raspar o tórax. Mantenha a temperatura do corpo a 37-38 ° c usando a plataforma de aquecimento incorporada. Monitore a frequência cardíaca usando o software. Nota: a anestesia adequada é crucial para manter a frequência cardíaca a taxas fisiológicas normais (entre 295-350 batimentos/min).</li>
	<li>Aplique a pomada do veterinário oftálmica para impedir o secura dos olhos antes da imagem latente.</li>
	<li>Realize ecocardiografia usando sonda linear de 13 – 24 MHz (por exemplo, MS250) (Figura 1a).</li>
	<li>Coloque o animal na posição supina na plataforma aquecida. Assegure-se de que a anestesia é controlada através do cone do nariz. Em seguida, posicione a sonda para obter a visão de eixo curto paraesternal (PSAX) usando o sistema ferroviário (Figura 1b).</li>
	<li>Movendo a sonda na direção rostral do PSAX, localize a artéria pulmonar (Figura 1b).</li>
	<li>Mova a sonda levemente na direção caudal da artéria pulmonar para ver o LAD e armazene a imagem. Nota: o LAD é difícil de encontrar sem Doppler de cor, assim que as imagens do B-modo do LAD não são sempre possíveis.</li>
	<li>Quando as diferenças individuais dificultam a localização da artéria coronária LAD, siga a técnica mencionada abaixo:<ol>
<li>Mova a sonda lateral para a artéria pulmonar.</li>
		<li>Ângulo da plataforma de modo que o animal é inclinado, invertido, ou ligeiramente para o lado direito para que o ventrículo esquerdo é mais prontamente visível com a sonda.</li>
	</ol></li>
	<li>Uma vez que a imagem no modo B é capturada ou Cine-armazenada, clique no Doppler colorido na tela sensível ao toque (Figura 1C). Visualize a artéria coronária (seta branca indica LAD) no eixo curto (Figura 1C). A cor vermelha, como visto em tempo real, é indicativa da direção do fluxo (ou seja, o fluxo sanguíneo é para a sonda).</li>
	<li>Depois de Visualizar LAD em um modo Color-Doppler, mude o modo para o modo de onda de pulso (PW). Procure a presença de uma linha indicadora amarela na artéria coronária (Figura 2a).</li>
	<li>Coloque a linha PW amarela no meio da artéria coronária. Assegure-se de que o ângulo esteja paralelo à direção do fluxo. Nota: a velocidade do fluxo é altamente dependente do ângulo da linha PW, por isso não se esqueça de corresponder ao ângulo da sonda na tela com o ângulo do LAD. Use a tela sensível ao toque para ajustar o ângulo; O ângulo PW deve ser inferior a 60 °.</li>
	<li>Use a loja Cine para captar a velocidade do fluxo coronariano de repouso do Lad na diástole de pico como formas de onda (Figura 2b).</li>
	<li>Após a obtenção da velocidade de fluxo do LAD do descanso, meça a velocidade máxima do fluxo de LAD durante o esforço para calcular o CFR. Para medir a velocidade máxima de fluxo durante o estresse, inutilizar dobutamina em uma dose de 20 μg/kg/min via veia cauda8 (Figura 2C). Nota: a perfusão de dobutamina não deve ser superior a 8 min. Use uma bomba de infusão e ajuste o diâmetro da bomba de infusão para 14,43 para a seringa de BD 10 mL.<ol>
<li>Use a borboleta da infusão de 25 G ajustada para o cannulation da veia de cauda. Para colocar a agulha de infusão, coloque uma pequena faixa de gaze em torno da base da cauda do rato, em seguida, agarrar com hemostats e torcer o torniquete para aplicar a pressão e fazer com que a veia para ampliar.</li>
		<li>Coloque a agulha enquanto estiver directamente ligada à seringa de dobutamina. Nota: Tome o cuidado extra para não introduzir acidentalmente a medicina ao elaborar o sangue para assegurar a colocação apropriada da agulha na veia de cauda. Além disso, certifique-se de evitar a introdução de uma bolha de ar na veia, como uma embolia pode ser fatal para o animal.</li>
		<li>Uma vez que a agulha é colocada, estabilizá-lo com uma cola e um pedaço de fita cirúrgica, fixando a linha de infusão para a cauda.</li>
		<li>Remova os hemostats e o torniquete para recuperar o fluxo.</li>
		<li>Coloque a seringa de dobutamina na bomba de perfusão e coloque-a para injetar 20 μg/kg/min.</li>
		<li>Durante a infusão de dobutamina, monitore cuidadosamente o pico do LAD e a frequência cardíaca. Registre periodicamente os picos de LAD PW no modo Doppler, especialmente quando ele aumenta em resposta à dobutamina. Nota: o desafio de stress induzido pela Dobutamina provoca o coração a trabalhar mais; isso muitas vezes resulta no movimento do coração e do LAD. Esteja preparado para mover o animal, a sonda, ou ambos, a fim de manter o LAD em vista.</li>
		<li>Depois que os picos de LAD e a freqüência cardíaca plateaued durante o desafio, param a infusão do dobutamine, removem o jogo da infusão da veia de cauda e removem o animal da plataforma. Permita que o animal recupere em sua gaiola Home.</li>
	</ol></li>
	<li>Selecione a ferramenta Peak vel para obter as velocidades diastólicas máximas das imagens mostradas na Figura 2b e C.</li>
	<li>Calcule o índice de CFR como a razão da velocidade de fluxo diastólico de pico de estresse do LAD (dobutamina) para a velocidade de fluxo diastólico de pico do LAD em repouso (Figura 2a).</li>
</ol>3. lesão de reperfusão de isquemia
<ol><li>Anestesiado rato com câmara de indução isoflurano a 5% com 1,5 – 2,0 L/min O2 fluxo seguido de 1,5 – 2,0% com 1,5 – 2,0 L/min o2 Flow.</li>
	<li>Confirme a profundidade da anestesia pela falta do reflexo de retirada do pedal. Use pomada veterinária oftalfólica sobre os olhos para evitar a secura. Mantenha a temperatura corporal adequada de 37-38 ° c usando uma almofada de aquecimento ou um controlador de temperatura animal.</li>
	<li>Administrar o Meloxicam pré-cirúrgico, 5 mg/kg por via intramuscular, 15 min antes da cirurgia, seguido de 2 mL de bolus subcutâneo de 0,9% de soro fisiológico para prevenir a desidratação durante a cirurgia. Foram utilizadas luvas e instrumentos estéreis e empregadas técnicas assépticas. Usando a fonte luminosa da fibra óptica, o rato do entubar usando o cateter do calibre 18 IV e conecta ao ventilador.</li>
	<li>Ligate LAD usando 8-0 sutura do monofilamento com a abertura de 15 milímetros no 5th espaço intercostal. Amarre um nó liso e deixe por 30 min. Confirme visualmente a isquemia em todos os ratos através da descoloração da superfície do coração12. Libere a ligadura após 30 min e verifique a reperfusão pelo avermelhamento da área previamente descolorida do músculo cardíaco por 1-2 min12.</li>
	<li>Feche a caixa torácica usando 4-0 sutura absorvível com um padrão de sutura interrompida, em seguida, feche a pele usando 5-0 sutura de seda não absorvível com padrão de sutura contínua.</li>
	<li>Retire o animal da anestesia. Permita que o animal recupere na gaiola Home. 5mg/kg o Meloxicam foi injetado por via intramuscular a cada 24 horas antes da eutanização do animal (72horas após a cirurgia).</li>
</ol>4. imagem latente do ultra-som após a cirurgia do IR
<ol><li>72 h após a cirurgia de IR, medir o fluxo coronariano e CFR novamente. Compare as medições antes das medições do IR. Repita as etapas 2,1 a 2,15 conforme descrito acima.</li>
</ol>

<ol><li>Eltzschig, H. K., Eckle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia+and+reperfusion--from+mechanism+to+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation.</a> Nature medicine. 17 (11), 1391-1401 (2011).</li>
<li>French, C. J., Zaman, A. K., Sobel, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+of+erythropoietin+to+render+jeopardized+ischemic+myocardium+amenable+to+incremental+salvage+by+early+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Coronary+Artery+Disease%22%5BJournal%5D)">Failure of erythropoietin to render jeopardized ischemic myocardium amenable to incremental salvage by early reperfusion.</a> Coronary Artery Disease. 20 (4), 295-299 (2009).</li>
<li>Marzilli, M., Mariani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia-reperfusion+and+microvascular+dysfunction%3A+implications+for+salvage+of+jeopardized+myocardium+and+reduction+of+infarct+size%5BTitle%5D)+AND+%22Italian+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Ischemia-reperfusion and microvascular dysfunction: implications for salvage of jeopardized myocardium and reduction of infarct size.</a> Italian Heart Journal. 2 Suppl 3, 40s-42s (2001).</li>
<li>Prasad, A., Gersh, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+microvascular+dysfunction+and+reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+%28British+Cardiac+Society%29%22%5BJournal%5D)">Management of microvascular dysfunction and reperfusion injury.</a> Heart (British Cardiac Society). 91 (12), 1530-1532 (2005).</li>
<li>Ishihara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+coronary+flow+reserve+immediately+after+coronary+angioplasty+in+patients+with+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22British+heart+journal%22%5BJournal%5D)">Impaired coronary flow reserve immediately after coronary angioplasty in patients with acute myocardial infarction.</a> British heart journal. 69 (4), 288-292 (1993).</li>
<li>Camici, P. G., d'Amati, G., Rimoldi, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+microvascular+dysfunction%3A+mechanisms+and+functional+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Coronary microvascular dysfunction: mechanisms and functional assessment.</a> Nature Reviews Cardiology. 12 (1), 48-62 (2015).</li>
<li>Chung, K. S., Nguyen, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+measures+of+coronary+microcirculation%3A+Taking+the+long+road+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Non-invasive measures of coronary microcirculation: Taking the long road to the clinic.</a> Journal of Nuclear Cardiology. , (2017).</li>
<li>Kelm, N. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+cells+improve+left+ventricular+diastolic+function+and+increase+microvascular+perfusion+in+advanced+age%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived cells improve left ventricular diastolic function and increase microvascular perfusion in advanced age.</a> PLoS One. 13 (8), e0202934(2018).</li>
<li>Pan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+recovery+of+coronary+flow+reserve+in+patients+successfully+treated+with+a+percutaneous+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Revista+Espa%C3%B1ola+de+Cardiolog%C3%ADa%22%5BJournal%5D)">Late recovery of coronary flow reserve in patients successfully treated with a percutaneous procedure.</a> Revista Española de Cardiología. 56 (5), 459-464 (2003).</li>
<li>Samim, A., Nugent, L., Mehta, P. K., Shufelt, C., Bairey Merz, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+angina+and+microvascular+coronary+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Current+treatment+options+in+cardiovascular+medicine%22%5BJournal%5D)">Treatment of angina and microvascular coronary dysfunction.</a> Current treatment options in cardiovascular medicine. 12 (4), 355-364 (2010).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+Care+and+Use+of+Laboratory+Animals%22">Guide for the Care and Use of Laboratory Animals</a>. , 8th edition, The National Academies Collection: Reports funded by National Institutes of Health (2011).</li>
<li>Ciuffreda, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+experimental+model+of+myocardial+ischemia%2Freperfusion+injury%3A+an+ethical+approach+to+set+up+the+analgesic+management+of+acute+post-surgical+pain%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Rat experimental model of myocardial ischemia/reperfusion injury: an ethical approach to set up the analgesic management of acute post-surgical pain.</a> PloS one. 9 (4), e95913-e95913 (2014).</li>
<li>van de Hoef, T. P., Siebes, M., Spaan, J. A. E., Piek, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundamentals+in+clinical+coronary+physiology%3A+why+coronary+flow+is+more+important+than+coronary+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Fundamentals in clinical coronary physiology: why coronary flow is more important than coronary pressure.</a> European Heart Journal. 36 (47), 3312-3319 (2015).</li>
<li>Naya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preserved+coronary+flow+reserve+effectively+excludes+high-risk+coronary+artery+disease+on+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+nuclear+medicine+%3A+official+publication%2C+Society+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Preserved coronary flow reserve effectively excludes high-risk coronary artery disease on angiography.</a> Journal of nuclear medicine : official publication, Society of Nuclear Medicine. 55 (2), 248-255 (2014).</li>
<li>Cortigiani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+and+prognostic+value+of+Doppler+echocardiographic+coronary+flow+reserve+in+the+left+anterior+descending+artery%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+%28British+Cardiac+Society%29%22%5BJournal%5D)">Diagnostic and prognostic value of Doppler echocardiographic coronary flow reserve in the left anterior descending artery.</a> Heart (British Cardiac Society). 97 (21), 1758(2011).</li>
<li>Kawata, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+value+of+coronary+flow+reserve+assessed+by+transthoracic+Doppler+echocardiography+on+long-term+outcome+in+asymptomatic+patients+with+type+2+diabetes+without+overt+coronary+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+diabetology%22%5BJournal%5D)">Prognostic value of coronary flow reserve assessed by transthoracic Doppler echocardiography on long-term outcome in asymptomatic patients with type 2 diabetes without overt coronary artery disease.</a> Cardiovascular diabetology. 12, 121-121 (2013).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar

Os principais achados do presente estudo são que o IR aumenta a velocidade da artéria coronária em repouso e prejudica a CFR, mesmo na ausência de qualquer estenose angiográfica residual.
Compreender a fisiologia coronária é uma parte essencial da tomada de decisão clínica para que os cardiologistas tratem a doença arterial coronariana. O CFR é um dos importantes parâmetros funcionais na compreensão da fisiopatologia da microcirculação coronariana7<sup class=...

A reperfusão de isquemia miocárdica (IR) é uma condição em que o suprimento sanguíneo é restrito ao coração, seguido da restauração da perfusão e da reavaliação simultânea1. A oclusão das artérias coronárias pode ser causada por uma ruptura da placa do êmbolo ou do colesterol, que resulte em um desequilíbrio severo da fonte e da demanda metabólicas, causando a hipóxia do tecido. O salvamento do miocárdio comprometido, melhora a função ventricular esquerda, e aumenta a sobrevivência nos pacientes com infarction miocárdico agudo foram observados pela terapia do reperfusão. Entretanto, após a recanalização da artéria coronária, anormalidades funcionais de pequenos vasos coronarianos podem ocorrer2,3,4,5. Uma proporção significativa de pacientes, talvez até 40%, não recupera a perfusão microvascular e miocárdica, apesar da restauração do fluxo coronariano. A visualização e a avaliação da microvasculatura coronária podem ser difíceis in vivo, mas há um número de técnicas invasoras e não invasoras que podem ser usadas para avaliar diretamente parâmetros dependendo da função microvascular coronária6 ,7. Além disso, a função endotelial pode ser avaliada ao nível da circulação coronária através do CFR5.
A Ecocardiografia transtorácica Doppler é uma ferramenta não invasiva que nos permite estudar a velocidade de fluxo da artéria coronária e CFR5. O CFR representa a razão do fluxo sanguíneo coronariano máximo para o fluxo sanguíneo coronariano em repouso8. Durante o desafio de stress, um coração normal aumenta o fluxo sanguíneo coronariano até quatro vezes acima do valor de repouso. O risco cardiovascular aumenta quando o CFR é diminuído9. Ishihara et al mostraram que o CFR foi severamente prejudicado imediatamente após a angioplastia coronariana5. Na ausência de estenose da artéria coronária, o CFR diminui durante a disfunção microvascular coronariana e está presente em cerca de metade dos pacientes com doença arterial coronariana estável10.
O objetivo geral deste método é a visualização não invasiva da função da artéria coronária descendente anterior (LAD) em ratos via ecocardiografia, que pode ser utilizada para o cálculo do QCR. Isto oferece uma ferramenta importante da avaliação para diagnosticar a deficiência orgânica microvascular e avaliar tratamentos terapêuticos potenciais.

<table><tbody><tr><td>Seringa de 10 mL</td><td>BD Seringa</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>250S 13&ndash; Sonda linear de 24 MHz</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cloridrato de dobutamina</td><td>Sigma</td><td>D0676-10mg</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>RRC</td><td>27376</td><td></td></tr><tr><td>Legato 100 Bomba de seringa</td><td>KD Scientific</td><td>788100</td><td></td></tr><tr><td>Vevo 3100</td><td>FUJIFILM VisualSonics Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Conjunto de infusão com asas, 27G x 1/2",</td><td>Medline.com</td><td></td><td></td>TMOSV27ELZ</tr></tbody></table>

avaliação da reserva de fluxo coronariano após reperfusão de isquemia miocárdica em ratos

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

A doença arterial coronariana é a principal causa de morte em todo o mundo. Após infarto agudo do miocárdio, a intervenção miocárdica precoce e bem-sucedida via recanalização da artéria coronária é a estratégia mais efetiva para a redução do tamanho do miocárdio isquêmico. A microvasculatura coronária não pode ser visualizada e imaged in vivo, mas existem várias técnicas invasivas e não invasivas que podem ser utilizadas para avaliar parâmetros que dependem diretamente da função microvascular coronariana. A função endotelial após a reperfusão de isquemia pode ser avaliada também ao nível da circulação coronária através da reserva de fluxo coronariano (CFR). Neste estudo, a velocidade de pico das artérias coronárias de descida anterior esquerda (LAD) foi mensurada em ratos in vivo via ecocardiografia transtorácica Doppler durante o desafio de repouso e estresse (induzido pela Dobutamina). Um coração normal pode aumentar o seu fluxo sanguíneo coronariano até quatro vezes acima dos valores de repouso durante a indução do stress. Após a reperfusão da isquemia, nós encontramos um CFR significativamente diminuído, que possa ser usado como um marcador da deficiência orgânica microvascular coronária. O CFR abriu uma janela sobre a importância da disfunção microvascular e demonstrou prever o risco cardiovascular independentemente de a doença obstrutiva grave estar presente.

Para este estudo, foram utilizados 12 ratos fêmeas Fisher 344. Nós executamos um teste de esforço com dobutamine e medimos a velocidade da artéria coronária de LAD antes e 72 horas após a cirurgia do IR. Antes da cirurgia do IR, a velocidade de repouso da artéria coronária de LAD foi medida como 423 ± 59 milímetros/s, que foi aumentada após a infusão do dobutamine (1005 ± 77mm/s) (Figura 3a). Após 72 h de reperfusão de isquemia, a velocidade da artéria coroná...

A reserva de fluxo coronariano (CFR) é definida como a razão do fluxo sanguíneo coronariano máximo para o fluxo sanguíneo coronariano em repouso. Apresentamos um protocolo de avaliação do CFR em ratos via ultrassonografia, que oferece a oportunidade de prever fatores de risco cardiovasculares na ausência de doença coronariana obstrutiva.

Avaliação da reserva de fluxo coronariano após reperfusão de isquemia miocárdica em ratos

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

O objetivo geral deste método é a visualização da função da artéria coronária descendente anterior esquerda em ratos usando ecocardiografia para calcular a reserva de fluxo coronário. Este método oferece uma importante ferramenta de avaliação para o diagnóstico de disfunção microvascular em corações doentes e para avaliação de tratamentos potenciais ao longo do estudo. Embora a terapia de reperfusão tenha sido demonstrada para salvar o miocárdio comprometido e melhorar a função ventricular esquerda, anormalidades funcionais de pequenos vasos coronários podem ocorrer após a recanalização da artéria coronária.Este método pode fornecer informações sobre a microcirculação coronária de ratos, bem como em outros modelos, incluindo infarto do miocárdio, e sobrecarga de volume de pressão do ventrículo esquerdo. Antes da cirurgia de reperfusão pré-isquemia, confirme a falta de resposta ao aperto do dedo do pé em um rato Fischer 344 anestesiado. Raspe o cabelo do peito.Aplique pomada aos olhos do animal e coloque o animal na posição supina em uma plataforma de aquecimento incorporada de 37 a 38 graus Celsius. Conecte a sonda linear de 13 a 24 mega-hertz à máquina de ultrassom. Defina a pré-configuração do aplicativo para a configuração de imagem cardíaca e use o sistema ferroviário para posicionar a sonda para obter a visão do eixo curto parasternal.Use o micromanípulador do eixo XY para mover a sonda na direção rostral para localizar a artéria pulmonar. Mova a sonda, tornando o ventrículo esquerdo mais facilmente visível. Uma vez que a imagem do modo B tenha sido capturada e Cine Armazenada, clique na cor Doppler e visualize a artéria coronária no eixo curto.A cor vermelha, como observado em tempo real, é indicativa da direção do fluxo. Depois de visualizar a artéria coronária descendente anterior inferior no modo Doppler colorido, mude o modo para a onda de pulso e procure a presença de uma linha indicadora amarela na artéria coronária. Coloque a linha de onda de pulso amarela no meio da artéria coronária, tomando cuidado para que o ângulo seja paralelo à direção do fluxo e use a Cine Store para capturar a velocidade do fluxo coronário descendente anterior e a diástola de pico das formas de onda.Depois de obter a velocidade de fluxo descendente anterior, coloque uma pequena faixa de gaze ao redor da base da cauda e use hemostatas para agarrar e torcer o torniquete para aplicar pressão, fazendo com que a veia aumente. Coloque cuidadosamente uma agulha borboleta de infusão de 25 bitolas presa a uma seringa de 10 mililitros carregada com dobutamina na veia da cauda dilatada e estabilize a agulha com cola e um pedaço de fita cirúrgica. Quando a linha de infusão estiver fixada, remova os hemostatos e o torniquete para recuperar o fluxo e coloque a seringa em uma bomba de infusão definida para injetar 20 microgramas por quilograma por minuto.Durante a infusão, monitore cuidadosamente o pico da artéria descendente anterior esquerda e a frequência cardíaca, registrando periodicamente os picos de onda de pulso da artéria descendente anterior esquerdo no modo Doppler sob as condições de estresse induzidas por dobutamina. Após os picos de artéria coronária descendente anterior e a frequência cardíaca terem se estabilizado durante o desafio, pare a infusão, remova o conjunto de infusão da veia da cauda e remova o animal da plataforma. Em seguida, use a ferramenta de velocidade máxima para obter as velocidades diatólicas máximas das imagens e calcular o índice de reserva de fluxo coronariano como a razão da velocidade de fluxo diastólico de tensão da artéria descendente anterior anterior para a velocidade de fluxo diastólico de ressarcimento anterior da artéria descendente anterior.Utilizando uma fonte de luz de fibra óptica, entubar o rato com um cateter IV de calibre 18 e conectar-se ao cateter a um ventilador. Em seguida, use um 8-0 sutura monofilamento para ligar a artéria descendente anterior esquerda através de uma abertura de 15 milímetros no quinto espaço intercostal com um nó simples por 30 minutos. No final do período isquemia, confirme visualmente a isquemia através da descoloração da superfície do coração e libere a ligadura.A reperfusão pode ser verificada pelo vermelhidão da área anteriormente descolorida do músculo cardíaco. 72 horas após a cirurgia, meça o fluxo coronário e a reserva de fluxo coronário como demonstrado, e compare as medidas às obtidas antes da lesão. Neste experimento representativo, antes da cirurgia de reperfusão da isquemia, a velocidade da artéria coronária descendente anterior foi medida como aproximadamente 423 milímetros por segundo para mais do que o dobro da velocidade após a infusão de dobutamina.72 horas após a reperfusão da isquemia, a velocidade da artéria coronária descendente anterior foi significativamente maior em comparação com a velocidade da artéria coronária descendente anterior antes da cirurgia. A resposta ao estresse a um teste de dobutamina após a lesão foi significativamente reduzida em comparação com a resposta antes das respostas da cirurgia. A reserva de fluxo coronariano é calculada como a razão da velocidade de fluxo de pico durante o estresse para a velocidade de fluxo de repouso e foi aproximadamente 2,1 em ratos jovens antes da cirurgia, mas significativamente reduzida 72 horas após a lesão.Além disso, não houve alterações significativas na função sistólica do ventrículo esquerdo 72 horas após a lesão. Após seu desenvolvimento, essa técnica permitirá que os pesquisadores explorem e usem imagens de ultrassom de artérias coronárias em pequenos modelos animais que imitam com precisão as condições da doença humana. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma compreensão muito boa de como medir o fluxo sanguíneo coronário e avaliar a microcirculação coronariana em um modelo de doença cardíaca animal de pequeno porte.

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Medicina

O modelo do rato de infarto agudo do miocárdio (IAM) é útil para estudar as consequências do enfarte do miocárdio sobre a função fisiológica e fisiopatológica cardíaca.

Infarto Agudo do Miocárdio em Ratos

Este protocolo descreve o modelo suíno infarto do miocárdio (IM) usando um 90 min-peito fechado oclusão coronária balão da artéria descendente anterior esquerda (LAD), seguida de reperfusão. Além disso, o protocolo para vários parâmetros de resultados, tais como a função cardíaca, hemodinâmica, resistência microvascular e tamanho do infarto, também são apresentados.

Infarto do Miocárdio e Avaliação de Resultados Funcional em porcos

A reserva de fluxo coronariano (RFC) é útil para avaliação da demanda de oxigênio miocárdico e avaliação do risco cardiovascular. Este estudo estabelece um método ecocardiográfico transtorácico Doppler (TTDE) passo a passo para monitoramento longitudinal das alterações na RFC, medida a partir da artéria coronária em camundongos, sob a sobrecarga de pressão experimental da banda aórtica.

Avaliação ultra-som base de Artéria Coronária Flow e Fluxo Coronariano Reserve Usando o modelo de sobrecarga de pressão no Mice

O coração isolado de rato é um modelo duradouro para lesão de isquemia e reperfusão. Aqui, descrevemos o processo de coleta do coração batendo de um rato por meio de canulação aórtica in situ, perfusão de Langendorff do coração, lesão simulada de isquemia-reperfusão e coloração de infarto para confirmar a extensão do insulto isquêmico.

Indução e Avaliação de isquemia-reperfusão em Langendorff-perfundidos Rato Corações

O modelo de isperfusão de isquessões miocárdicas de coração de rato é melhorado usando um retrátil auto-fabricado, tubo de cloreto de polivinil e um método único de nó. Os resultados de eletrocardiograma, cloreto de tripheniltetrazolium e coloração histológica, e os resultados de análise de sobrevivência percentual mostraram que o grupo modelo melhorado tem maior sucesso e taxas de sobrevivência do que o grupo modelo já existente.

Modelo de roedor melhorado de Isquemia do Miocárdio e Lesão de Reperfusão

Neste trabalho, apresentamos um protocolo com foco no controle de qualidade da ligadura da artéria coronária descendente anterior, modificando tecnicamente o procedimento tradicional em ratos para pesquisa de isquemia-reperfusão miocárdica aguda.

Ligadura da Artéria Coronária Descendente Anterior para Pesquisa de Isquemia-Reperfusão: Aprimoramento do Modelo via Modificações Técnicas e Controle de Qualidade

O presente estudo demonstra um modelo animal altamente reprodutível de lesão aguda de isquemia e reperfusão miocárdica regional em coelhos, utilizando uma minitoracotomia esquerda para casos de sobrevida ou uma esternotomia mediana para casos de não sobrevida.

Modelo de Lesão de Isquemia e Reperfusão em Coelhos

O presente protocolo descreve uma visão paraesternal modificada do eixo longo para localização rápida e precisa da artéria descendente anterior. Essa abordagem foi projetada para ser mais simples e fácil de usar, facilitando o exame de mudanças dinâmicas na reserva de fluxo coronariano após isquemia-reperfusão miocárdica em camundongos.

Avaliações dinâmicas da reserva de fluxo coronariano após reperfusão de isquemia miocárdica em camundongos

O trauma cirúrgico induz uma resposta inflamatória. As citocinas e ligandos endógenos são conhecidos para modular o tamanho do enfarte do miocárdio após isquemia e reperfusão. Apresentamos um modelo modificado fechado de tórax murino de isquemia e reperfusão utilizando pesos pendurados para minimizar os efeitos de toracotomia.

Um modelo fechado de tórax murino de isquemia do miocárdio e reperfusão

Nós introduzimos um método cirúrgico para induzir experimental de isquemia / reperfusão (I / R) prejuízo para simular o infarto do miocárdio (MI) em modelos de mouse que permite uma maior clareza no posicionamento da ligadura na artéria descendente anterior esquerda (LAD) para aumentar a reprodutibilidade de experimentos MI em camundongos.

Um modelo murino de isquemia-reperfusão, através da ligadura da artéria Descendente Anterior Esquerda

Aprenda a avaliar a reserva de fluxo coronariano em ratos após isquemia-reperfusão miocárdica usando ecocardiografia Doppler transtorácica. Este método permite diagnosticar disfunção microvascular coronariana e testar intervenções terapêuticas em modelos animais de doença cardíaca.

Avaliação da reserva de fluxo coronariano após reperfusão de isquemia miocárdica em ratos

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