Name: Investigando alterações na microbiota de caecum após traumatismo cranioencefálico em camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 29 s
Description: Aprenda a induzir lesão cerebral traumática difusa em camundongos usando dispositivo de percussão fluida lateral e analisar alterações na microbiota do ceco por sequenciamento 16S rDNA. Este método revela interações eixo intestino-cérebro após trauma neurológico.

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Os autores não têm nada a revelar.

Todos os procedimentos realizados foram aprovados pelo Comitê experimental de ética animal da Universidade de Zhejiang. Todos os instrumentos e materiais utilizados na cirurgia são estéreis. O armazenado de TBI toma aproximadamente 20 minutos.
1. cuidados com os animais
<ol><li>Use camundongos masculinos de 5 a 6 semanas de idade C57BL/6J (20-25 g de peso) neste experimento.</li>
	<li>Manter camundongos em um 12 h/12 h de luz/ciclo escuro, e certifique-se que recebem alimentos e água ad libitum. Forneça as mesmas quantidades de alimento e de água aos grupos do Sham e do TBI durante todo o estudo.</li>
	<li>Faça todos os esforços para minimizar a dor e o desconforto dos animais.</li>
</ol>2. indução de traumatismo cranioencefálico
<ol><li>Injetar cetamina (80-100 mg/kg)/xilazina (10 mg/kg) IP para anestesia. Teste a profundidade da anestesia usando um reflexo do olho ou reflexo da dor. Use lágrimas artificiais ou pomada de olho lubrificante para manter os olhos de secagem.</li>
	<li>Após a anestesia, coloque o mouse em posição prona. Use uma almofada de aquecimento temperatura-controlada para manter a temperatura em 37 ° c durante a cirurgia e por 30 minutos após TBI.</li>
	<li>Raspar o cabelo da área da incisão.</li>
	<li>Desinfecte o couro cabeludo com 70% de etanol usando três esfrega alternadas e, em seguida, incite o couro cabeludo em um plano sagital.</li>
	<li>Use fórceps para retrair a incisão em ambos os lados e separar o periósteo ligeiramente.</li>
	<li>Use um marcador para desenhar um círculo (3 mm de diâmetro) na área parietal direita do crânio, a 2 mm de distância da linha média.</li>
	<li>Perfure o crânio com uma broca elétrica. Assegure-se de que esta etapa esteja operada com cuidado para proteger o dura de ser danificado.</li>
	<li>Retire a aba óssea e exponha uma pequena janela óssea (3 mm de diâmetro).</li>
	<li>Coloque uma cânula de ferimento de plástico (diâmetro interno = 2,5 mm, comprimento = 8 mm) sobre a craniotomia e cimente a cânula para o crânio usando um acrílico dental.</li>
	<li>Encha a cânula com estéril 0,9% NaCl (soro fisiológico normal) usando uma seringa (5 mL) para garantir que não há bolhas na cânula.</li>
	<li>Gire sobre o osciloscópio e o amplificador e assegure-se de que o tubo de alta pressão do dispositivo da lesão de percussão do fluido lateral (LFPI) esteja livre de bolhas de ar. Teste o dispositivo entregando aproximadamente 10 pulsos até que dê um sinal constante. Ajuste o ângulo da posição inicial do pêndulo para atingir uma intensidade de pulso de cerca de 2,0 ATM.</li>
	<li>Ligue a cânula de ferimento ao dispositivo LFPI. Induzir lesão cerebral puxando o gatilho e liberando o pêndulo. Em seguida, obter um pulso e transmiti-lo para a dura através de todo o sistema fechado de tubos cheios de fluido.</li>
	<li>Opere os camundongos no grupo simulado com o mesmo procedimento cirúrgico. Não execute o LFPI.</li>
</ol>3. tratamento pós-cirúrgico
<ol><li>Depois de induzir a lesão cerebral, retire a cânula plástica e sutura a incisão. Durante a cirurgia administrar buprenorfina (2mg/kg) SQ ou IP e depois de cada 6-12 h durante três dias.</li>
	<li>Coloque o mouse sobre uma almofada de aquecimento até que seja ambulatorial. Ajuste a temperatura da almofada de aquecimento a 37 ° c para acelerar a ressuscitação anestésica.</li>
	<li>Coloque o mouse de volta na gaiola e administrar alimentos e água ad libitum.</li>
</ol>4. laparotomia e coleta de amostras do cécum
<ol><li>Eutanizar os camundongos por CO2 seguido de luxação cervical nos pontos temporais correspondentes. Nota: neste experimento, os pontos de tempo escolhidos foram de 1 h, 6 h, 1 d, 3 d e 7 d lesão cerebral pós-traumática para analisar a evolução dinâmica da microbiota intestinal.</li>
	<li>Retire o cabelo da superfície do abdômen. Desinfecte o abdômen com 70% de etanol.</li>
	<li>Coloque um drapejar estéril sobre o mouse. Faça uma incisão da linha média do abdômen inferior, logo acima do prepúcio nos camundongos machos.</li>
	<li>Depois que os intestinos são expostos, localize o ceco e gentilmente separou-o de outros tratos intestinais. Evite agarrar o cálio com o fórceps dentado ou afiado. Use fórceps Atraumatic, tal como o fórceps de Adson com serrações.</li>
	<li>Corte o cécum com tesouras afiadas.</li>
	<li>Extraia o conteúdo do cécum manualmente no curativo estéril e armazene o conteúdo em tubos de microcentrífuga de 1,5 ml.</li>
	<li>Armazene os índices do cécum em-80 ° c até a análise do microbioma.</li>
</ol>5. extração de DNA e sequenciamento 16S-rDNA e análise de dados
<ol><li>
Isolação do ADN das fezes Nota: um kit de isolamento de DNA disponível comercialmente (tabela de materiais) foi utilizado para este experimento.<ol>
<li>Use um bisturi para raspar 300 mg de fezes em um tubo de microcentrífuga de 2 mL e coloque o tubo no gelo.</li>
		<li>Adicione 1 mL de inibição de buffer para cada amostra. Vortex continuamente por 1 min ou até que a amostra de fezes seja completamente homogeneizada.</li>
		<li>Centrifugue a amostra na velocidade máxima por 1 minuto para pellet as partículas de fezes.</li>
		<li>Pipetar 2 μL de proteinase K para um novo tubo de microcentrífuga de 2 mL. Pipet 600 μL do sobrenadante do passo 5.1.3 para o tubo de microcentrífuga de 2 mL contendo proteinase K. Em seguida, adicione 600 μL de buffer 1 e Vortex por 15 s.</li>
		<li>Incubar a amostra a 70 ° c durante 10 min.</li>
		<li>Adicionar 600 μL de 100% de etanol ao lisado (1:1 ratio) e misturar por vortexing. Centrifugue na velocidade máxima brevemente para remover gotas do interior da tampa do tubo.</li>
		<li>Aplique 600 μL do lisado na coluna de rotação. Centrifugar à velocidade máxima durante 1 min. descarte o fluxo. Repita este passo mais uma vez. Em seguida, transfira a coluna para um novo tubo de recolha de 2 mL.</li>
		<li>Abra a coluna de rotação e adicione 500 μL de buffer 2. Centrifugar à velocidade máxima durante 1 min. Retire a coluna e coloque-a num novo tubo de recolha de 2 mL.</li>
		<li>Adicione 500 μL de buffer 3 na coluna. Centrifugar à velocidade máxima durante 3 min. descarte o fluxo. Repita o processo de centrifugação uma vez para garantir que o tampão 3 esteja completamente eluído.</li>
		<li>Coloque a coluna de centrifugação num novo tubo de recolha de 2 mL de tubo e pipetar 200 μL de tampão 4 directamente para a membrana. Incubar por 1 minuto em temperatura ambiente (RT), em seguida, centrifugar na velocidade máxima por 1 min para eluir DNA.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
sequenciamento 16S-rDNA e análise de dados
	<ol>
<li>Use 20-30 NG de DNA para gerar amplicons.</li>
		<li>Use os primers comercialmente disponíveis projetados para as regiões relativamente conservadas que limitam as regiões da hipervariável v3 e v4 das bactérias 16S rDNA. No presente estudo foram utilizados os primers Forward contendo a seqüência "CCTACGGRRBGCASCAGKVRVGAAT" e os primers reversos contendo a seqüência "GGACTACNVGGGTWTCTAATCC".</li>
		<li>Faça a mistura de reações de PCR adicionando 2,5 μL de tampão 1,2 μL de dNTPs, 1 μL de cada primer, 0,5 μL de DNA polimerase e 20 ng de DNA de modelo em um tubo. Use ddH2o para ajustar o sistema de reação a 25 μL.</li>
		<li>Ajuste os parâmetros da reação do PCR como segue: Realize a pré-desnaturação em 94 ° c por 3 minutos uma vez. Realize a desnaturação em 94 ° c por 5 s, recoze em 57 ° c para 90 s, estenda em 72 ° c por 10 s, e repita este 24X.</li>
		<li>Execute o sequenciamento de fim emparelhado PE250/300 de acordo com a instrução do fabricante e use o pacote de análise de dados QIIME para análise de dados 16S rRNA. Nota: neste experimento, o sequenciamento de DNA e a análise de dados foram feitos principalmente por uma empresa de sequenciamento profissional.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Cheng, P., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCheng%2C+P+%22Trends+in+traumatic+brain+injury+mortality+in+China%2C+2006-2013%3A+A+population-based+longitudinal+study%22">Trends in traumatic brain injury mortality in China, 2006-2013: A population-based longitudinal study</a>. 14, e1002332(2017).</li>
<li>Maas, A. I. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+brain+injury%3A+integrated+approaches+to+improve+prevention%2C+clinical+care%2C+and+research%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Traumatic brain injury: integrated approaches to improve prevention, clinical care, and research.</a> The Lancet Neurology. 16, 987-1048 (2017).</li>
<li>Gaddam, S. S., Buell, T., Robertson, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+manifestations+of+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Handbook+of+Clinical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Systemic manifestations of traumatic brain injury.</a> Handbook of Clinical Neurology. 127, 205-218 (2015).</li>
<li>Kabadi, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid-percussion-induced+traumatic+brain+injury+model+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Fluid-percussion-induced traumatic brain injury model in rats.</a> Nature Protocols. 5, 1552-1563 (2010).</li>
<li>Fung, T. C., Olson, C. A., Hsiao, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+the+microbiota%2C+immune+and+nervous+systems+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Interactions between the microbiota, immune and nervous systems in health and disease.</a> Nature Neuroscience. 20, 145-155 (2017).</li>
<li>Collins, S. M., Surette, M., Bercik, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interplay+between+the+intestinal+microbiota+and+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The interplay between the intestinal microbiota and the brain.</a> Nature Reviews Microbiology. 10, 735-742 (2012).</li>
<li>Cryan, J. F., Dinan, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mind-altering+microorganisms%3A+the+impact+of+the+gut+microbiota+on+brain+and+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mind-altering microorganisms: the impact of the gut microbiota on brain and behaviour.</a> Nature Reviews Neuroscience. 13, 701-712 (2012).</li>
<li>Nicholson, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moderate+Traumatic+Brain+Injury+Alters+the+Gastrointestinal+Microbiome+in+a+Time-Dependent%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Moderate Traumatic Brain Injury Alters the Gastrointestinal Microbiome in a Time-Dependent.</a> Shock. , (2018).</li>
<li>Houlden, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+injury+induces+specific+changes+in+the+caecal+microbiota+of+mice+via+altered+autonomic+activity+and+mucoprotein+production%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%2C+Behavior%2C+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Brain injury induces specific changes in the caecal microbiota of mice via altered autonomic activity and mucoprotein production.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 57, 10-20 (2016).</li>
<li>Treangen, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+Brain+Injury+in+Mice+Induces+Acute+Bacterial+Dysbiosis+Within+the+Fecal+Microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Traumatic Brain Injury in Mice Induces Acute Bacterial Dysbiosis Within the Fecal Microbiome.</a> Frontiers in Immunology. 9, 2757(2018).</li>
<li>Alder, J., Fujioka, W., Lifshitz, J., Crockett, D. P., Thakker-Varia, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lateral+fluid+percussion%3A+model+of+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Lateral fluid percussion: model of traumatic brain injury in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2011).</li>
<li>Thompson, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lateral+fluid+percussion+brain+injury%3A+a+15-year+review+and+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Lateral fluid percussion brain injury: a 15-year review and evaluation.</a> Journal of Neurotrauma. 22, 42-75 (2005).</li>
<li>Pang, W., Vogensen, F. K., Nielsen, D. S., Hansen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Faecal+and+caecal+microbiota+profiles+of+mice+do+not+cluster+in+the+same+way%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Faecal and caecal microbiota profiles of mice do not cluster in the same way.</a> Laboratory Animals. 46, 231-236 (2012).</li>
</ol>

Os autores agradecem sinceramente a Baohong Wang por sua orientação técnica.

Aqui apresentamos um protocolo simples e eficiente para determinar alterações na microbiota cecal após TCE em camundongos. A indução de lesão cerebral e a coleta de amostras de conteúdo de cécum são partes críticas do protocolo.
Apesar dos pesquisadores terem estudado as alterações da microbiota intestinal após TCE, a lesão cerebral utilizada nesses estudos foi CCI-8 e queda de peso/modelos induzidos por impacto9. No entanto, o modelo CCI Replica...

A lesão cerebral traumática (TCE) é um problema global de saúde pública e a principal causa de morte e incapacidade em adultos jovens1,2. O TBI causa muitas mortes a cada ano, e os sobreviventes experimentam uma variedade de deficiências físicas, psiquiátricas, emocionais e cognitivas. Portanto, o TBI é um fardo pesado para os recursos familiares e societais de um paciente. TBI envolve tanto a lesão cerebral primária que ocorre no momento do trauma e quaisquer lesões cerebrais secundárias que desenvolvem horas a meses após a lesão inicial. Lesão cerebral secundária é mediada por várias cascatas bioquímicas, que não são apenas prejudiciais para o cérebro, mas também têm efeitos negativos significativos em vários sistemas de órgãos, incluindo o sistema gastrointestinal3.
Atualmente, existem três modelos para induzir TBI em experimentos com animais: lesão de percussão fluida, controle do impacto cortical (CCI) e aceleração da queda de peso. A lesão de percussão de fluido lateral (LFPI) é o modelo mais comumente utilizado para estabelecer lesão cerebral difusa (DAI)4. O dispositivo produz ferimento de cérebro através de um craniectomy aplicando um pulso de pressão fluido breve à dura intacta. Este pulso é criado pela greve do pêndulo. O LFPI é um método de modelagem reprodutível e controlável para pesquisa de TBI.
O microbioma é definido como os genomas coletivos de todos os microrganismos que residem no corpo humano. Micróbios intestinais, em particular, não só desempenham um papel importante na homeostase intestinal e função, mas também regulam muitos aspectos da fisiologia do hospedeiro e do funcionamento de outros órgãos5. Nos últimos anos, há uma evidência crescente que indica que a microbiota intestinal regula o desenvolvimento cerebral e função através de eixos cerebrais-intestino6. A perturbação da microbiota intestinal tem sido associada a vários distúrbios da função cerebral, incluindo a doença de Parkinson, transtornos do humor e autismo7. Recentemente, estudos pré-clínicos também relataram que a lesão cerebral aguda pode induzir alterações na microbiota intestinal8,9.
Um estudo realizado por Treangen et al.10 encontrou reduções significativas em três espécies microbianas e aumentos em duas espécies microbianas após TCE induzida por ICC. Essa evidência indica que a modulação da microbiota intestinal pode ser um método terapêutico no manejo da TBI. No entanto, os mecanismos subjacentes às alterações da microbiota intestinal induzida por lesão cerebral permanecem desconhecidos. Por esta razão, um modelo relativamente simples e eficiente de estudar as mudanças na microbiota intestinal após TBI é necessária. Portanto, o presente estudo apresenta um protocolo para examinar alterações na microbiota intestinal após TCE em camundongos.

<table><tbody><tr><td>Kit de isolamento de DNA&nbsp;</td><td>QIAGEN</td><td>51604</td><td>Para purificação rápida do DNA genômico de amostras de fezes</td></tr><tr><td>Serviço de análise genética</td><td>GENEWIZ</td><td></td><td>Serviço de análise</td></tr><tr><td>genética Almofada de aquecimento</td><td>Shanghai SAFE Biotech Co.</td>Injetor de <td>almofada de aquecimento</td> <td>TR-200</td></tr><tr><td></td><td>O primeiro hospital afiliado, Escola de Medicina, Injetor da Universidade</td><td></td> de Zhejiang <td></td></tr><tr><td>Dispositivo LFPI</td><td>Virginia Dispositivo LFPI da Commonwealth University</td><td>FP302</td><td>Broca</td></tr><tr><td>microcraniana</td><td>RWD Ciências da vida</td><td>78061</td><td>Broca microcraniana</td></tr><tr><td>Iodopovidona</td><td>O primeiro hospital afiliado, Escola de Medicina, Iodo</td><td>de povidona</td> da Universidade <td></td> de Zhejiang</tr></tbody></table>

investigando alterações na microbiota de caecum após traumatismo cranioencefálico em camundongos

Investigating Alterations in Caecum Microbiota After Traumatic Brain Injury in Mice

O aumento da evidência mostra que o eixo microbiota-intestino-cérebro desempenha um papel importante na patogênese das doenças cerebrais. Vários estudos também demonstram que as lesões cerebrais traumáticas causam alterações na microbiota intestinal. No entanto, os mecanismos subjacentes à regulação bidirecional do eixo cérebro-intestino permanecem desconhecidos. Atualmente, existem poucos modelos para estudar as mudanças na microbiota intestinal após lesão cerebral traumática. Portanto, o estudo apresentado combina protocolos para induzir lesão cerebral traumática usando um dispositivo de percussão de fluido lateral e análise de amostras de cécum após lesão para investigar alterações no microbioma intestinal. Alterações da composição da microbiota intestinal após lesão cerebral traumática são determinadas usando o sequenciamento 16S-rDNA. Este protocolo fornece um método eficaz para estudar as relações entre micro-organismos enteric e ferimento de cérebro traumático.

O estabelecimento do TBI é mostrado na Figura 1. Após a anestesia e desinfecção, o couro cabeludo foi incisada sagital (Figura 1a). Uma craniotomia (3 mm de diâmetro) foi trefinado no crânio sobre o córtex parietal direito com uma broca elétrica, a dura foi mantida intacta (Figura 1b, C). Uma cânula de lesão plástica foi colocada sobre a janela óssea e cimentada ao crânio usando acrí...

É apresentado aqui um protocolo para induzir ferimento de cérebro traumático difuso usando um dispositivo de percussão fluido lateral seguido pela coleção do índice do cécum para a análise do microbioma do intestino.

Investigando alterações na microbiota de caecum após traumatismo cranioencefálico em camundongos

Increasing evidence shows that the microbiota-gut-brain axis plays an important role in the pathogenesis of brain diseases. Several studies also ...

A simultânea e as interações entre o cérebro e a microbiota intestinal permanecem desconhecidas. Use esta técnica, alterações na microbiota intestinal após lesão cerebral traumática em camundongos podem ser examinados. A principal vantagem dessa técnica é que ela é relativamente simples e eficiente.Demonstrando o procedimento será Wendong Você, um estudante de pós-graduação do meu laboratório. Para indução traumática de lesão cerebral, confirme a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé em um rato anestesiado, e aplique pomada nos olhos do animal. Após a barba, desinfete a pele exposta do couro cabeludo com 70% de etanol antes de incisar o couro cabeludo em um plano sagital.Usando fórceps, retraia a incisão em ambos os lados e separa ligeiramente o periósteo. Use um marcador para desenhar um círculo de três milímetros de diâmetro na área parietal direita do crânio a dois milímetros da linha média. Use uma broca elétrica para penetrar cuidadosamente o crânio sem danificar a dura.Remova a aba óssea para expor uma janela óssea de três milímetros e coloque uma cânula de lesão plástica sobre a craniotomia. Depois de cimentar a cânula no crânio com acrílico dental, use uma seringa de cinco mililitros para encher a cânula com soro fisiológico estéril de 0,9%, tomando cuidado para evitar bolhas. Ligue o osciloscópio e o amplificador.Confirme que o tubo de alta pressão do dispositivo de lesão de percussão de fluido lateral está livre de bolhas de ar, e entregue cerca de 10 pulsos de teste, até que o dispositivo dê um sinal constante. Ajuste o ângulo da posição inicial do pêndulo para atingir uma intensidade de pulso de cerca de duas atmosferas padrão e conecte a cânula da lesão ao dispositivo de lesão de percussão do fluido lateral. Puxe o gatilho para liberar o pêndulo, induzindo a lesão cerebral.Em seguida, obtenha e transmita um pulso para a dura dura através de todo o sistema de tubos fechado e cheio de fluidos. Após indução de lesão cerebral, remova a cânula e sutura a incisão. Em seguida, coloque o rato em uma almofada de aquecimento com monitoramento até que ele seja ambulatorial, antes de devolver o animal à sua gaiola de origem com acesso a ad libitum à comida e água.Nos pontos de tempo experimentais indicados, exponha os intestinos de acordo com os protocolos padrão e use fórceps atrauáticos para separar suavemente o caeco dos outros tratos intestinais. Quando o tecido estiver localizado, corte o caecum com uma tesoura afiada e extraia manualmente o conteúdo do caeco em um curativo estéril. Em seguida, transfira o conteúdo para um tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitro, para armazenamento de menos 80 graus Celsius até a análise do microbioma.Sequenciamento de DNA recombinante 16S demonstra uma diversidade reduzida na microbiota de caecum em camundongos três dias após lesão cerebral traumática, com a taxa mais abundante dentro do conteúdo de caecum dos grupos de lesão cerebral sham e traumática mostrados na figura. Além disso, o dimensionamento multidimensional não métrico revela alterações na composição da microbiota do caecum após lesão cerebral traumática. Lembre-se de manter a duraza intacta ao perfurar o crânio, e ser gentil ao localizar e separar o caeco de outros tratos intestinais.Após este procedimento, a coloração e análise de hematoxilina e eosina pode ser realizada para examinar a alteração histológica e a resposta inflamatória dentro dos tratos intestinais após lesão cerebral traumática.

investigating-alterations-caecum-microbiota-after-traumatic-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Uma abordagem multi-facetada para investigar alterações funcionais para circuitos do hipocampo é explicado. Técnicas electrofisiológicas são descritos em conjunto com o protocolo de lesão, testes comportamentais e método de dissecação regional. A combinação destas técnicas pode ser aplicada de forma semelhante para outras regiões do cérebro e perguntas científicas.

Investigações sobre alterações da função Circuito Hippocampal Após lesão cerebral traumática leve

O vídeo demonstra um método para gerar um modelo de camundongo de lesão cerebral traumática (TCE) usando um dispositivo de percussão de fluido lateral (LFPI). Ao anestesiar o mouse, o cérebro é exposto criando uma janela no crânio. Uma cânula cheia de solução salina é conectada à janela e então conectada ao LFPI. O pêndulo do dispositivo é liberado para criar um pulso de pressão que inflige uma lesão cerebral traumática.

Gerando um modelo de camundongo de lesão cerebral traumática usando um dispositivo de percussão de fluido lateral

Fonte: Macheda, T., et. al. Modelo de cabeça fechada controlado eletromagnética de lesão cerebral traumática leve em camundongos. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra o procedimento para induzir um traumatismo craniano fechado em um modelo de camundongo usando um quadro estereotáxico. O impacto controlado replica lesões cerebrais traumáticas leves, permitindo que os pesquisadores estudem os efeitos neurológicos e a recuperação medindo os reflexos e o comportamento pós-lesão.

Indução de Traumatismo Cranioencefálico Leve em Modelo de Camundongo

Source: Braeckman, K., et. al. Imagem de difusão avançada no hipocampo de ratos com lesão cerebral traumática leve. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra o uso de imagens ponderadas por difusão para avaliar alterações microestruturais no hipocampo de um rato após traumatismo cranioencefálico leve (mTBI), destacando a lesão axonal por meio de ressonância magnética precisa e análise de difusão.

Imagem ponderada por difusão do hipocampo de rato com lesão cerebral traumática leve

Trauma cerebral aguda é uma lesão grave que não tem tratamento adequado à data. Microscopia Multiphoton permite estudar longitudinalmente o processo de desenvolvimento agudo trauma cerebral e sondagem estratégias terapêuticas em roedores. Dois modelos de trauma cerebral aguda estudou com in vivo de dois fótons de imagem de cérebro são demonstrados neste protocolo.

Aguda Cérebro Trauma em camundongos seguiu por Longitudinal dois fótons de imagem

Lesões cerebrais traumáticas (TCEs) continuam sendo um sério problema de saúde. Utilizando o modelo de cirurgia de impacto cortical controlado, pesquisas sobre os efeitos do TCE e possíveis métodos de tratamento podem ser realizadas.

Controlado Modelo Impact Cortical para lesão cerebral traumática

O objetivo geral deste procedimento é obter informações microestruturais quantitativas do hipocampo em um rato com lesão cerebral traumática leve. Isto é feito usando um protocolo avançado difusão-tornado mais pesado da imagem latente de ressonância magnética e a análise baseada região--interesse de mapas paramétricos da difusão.

Imagem latente avançada da difusão no Hippocampus dos ratos com ferimento de cérebro traumático suave

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer o modelo de camundongo com colite induzida por sódio com sulfato de dextrano livre de germes induzido por antibióticos para investigar o papel da microbiota intestinal na regulação dos efeitos positivos do Bacillus cereus na colite.

Investigando os efeitos aliviadores da administração de Bacillus cereus na colite por meio da modulação da microbiota intestinal

Os metabólitos microbianos derivados do intestino têm efeitos multifacetados, levando a um comportamento complexo em animais. Nosso objetivo é fornecer um método passo-a-passo para delinear os efeitos dos metabólitos microbianos derivados do intestino no cérebro através  da entrega intracerebroventricular através de uma cânula guia.

Entrega intracerebroventricular de metabólitos microbianos derivados do intestino em camundongos em movimento livre

O protocolo descreve traumatismo cranioencefálico leve em modelo de camundongo. Em particular, um protocolo passo-a-passo para induzir um traumatismo cranioencefálico fechado na linha média leve e a caracterização do modelo animal são totalmente explicados.

Modelo de Lesão Cerebral Traumática Leve em Camundongos com Controle Eletromagnético

Este protocolo apresenta um modelo de camundongo modificado de lesão cerebral traumática leve repetitiva (rmTBI) induzida por um método de traumatismo cranioencefálico fechado (CHI). A abordagem apresenta uma janela de crânio afinado e percussão de fluido para reduzir a inflamação comumente causada pela exposição às meninges, juntamente com melhor reprodutibilidade e precisão na modelagem de rmTBI em roedores.

Modelo de camundongo modificado de lesão cerebral traumática leve repetitiva incorporando janela de crânio afinado e percussão fluida

Aprenda a induzir lesão cerebral traumática difusa em camundongos usando dispositivo de percussão fluida lateral e analisar alterações na microbiota do ceco por sequenciamento 16S rDNA. Este método revela interações eixo intestino-cérebro após trauma neurológico.

Investigando alterações na microbiota de caecum após traumatismo cranioencefálico em camundongos

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