Modelo Osteomyocutaneous Heterotopic modificado da aleta do Hindmembro no rato para a pesquisa de Allotransplante composta Vascularized translacional

O pequeno número de aotransplantas compostas vascularizadas realizadas clinicamente necessitam de um modelo animal confiável e reprodutível para estudar as causas subjacentes da rejeição do enxerto. Tecidos clinicamente relevantes, como pele, músculo e osso estão todos presentes no modelo. Além disso, a natureza não funcional do nosso modelo permite uma cirurgia mais rápida, menos tempo isquêmico para a aba e menor morbidade em comparação com modelos ortotópicos de VCA.

Em receptores de transplante de mão, a vasculopatia dos vasos doadores pode levar a um fechamento completo dos vasos, e danos isquêmicos na mão enxertado. Este modelo é uma ferramenta para estudar o desenvolvimento desses eventos vasculopáticos. Antes de tentar este modelo cirúrgico, o cirurgião primário deve estar familiarizado e proficiente em técnicas cirúrgicas macrovasculares.

Este é um procedimento complicado e longo. A demonstração visual ajudará outros laboratórios a se preparar em conformidade, e entender os passos da cirurgia. Para começar, primeiro colher o membro traseiro de um rato doador fazendo uma incisão de pele na concavidade da virilha, expondo os vasos femorais.

Faça uma incisão de pele ventral, que ajudará na dissecação do pedículo. Após a desarticulação do joelho e do tornozelo, faça cortes na pele dorsal, transecte o pedículo para liberar o enxerto e transporte o enxerto imediatamente para a mesa cirúrgica do receptor, onde o local cirúrgico do animal receptor é preparado com antecedência para minimizar o tempo isquêmico do enxerto. No animal receptor, exponha e disseque os vasos femorais como antes, e depois anastomose o enxerto, veia de ponta a ponta, artéria de ponta a ponta.

Insera o enxerto no bolso inguinal e oriente-o de cabeça para baixo. Finalmente, suturar a pele. Para iniciar o procedimento, raspe um rato doador anestesiado e use creme depilatório.

Injete 30 unidades de heparina subcutânea na área de scruff. Coloque o supino animal em uma almofada de aquecimento e produza um campo cirúrgico estéril preparando, esfregando e arrastando a área cirúrgica, incluindo o aspecto dorsal da perna. Use a lâmina de bisturi número 15 para fazer uma incisão de pele de 3 centímetros na concavidade da virilha do rato doador.

Use a tesoura Iris para refletir lateralmente a almofada de gordura inguinal. Usando dissecção sem corte com um cotonete, exponha os vasos femorais comuns e, em seguida, coloque um gancho de arame com uma faixa elástica para retrair os músculos abdominais. Sob um microscópio dissecando com ampliação de até 40X, use micro-tesouras, fórceps de joalheiros em linha três, e o número cinco fórceps angulares de 45 graus para dissecar o pedículo proximicamente do surgimento dos vasos femorais comuns sob o ligamento inguinal, e distally à confluência de vasos popliteais no enxerto.

Usando micro-clipes e joalheiros bipolares fórceps, ligante e divide os grandes ramos arteriais e venosos para mobilizar os principais vasos femorais. Use fórceps bipolares finos para cauterizar quaisquer galhos pequenos. Use a tesoura Iris para fazer uma incisão da pele do centro da pele anterior cortada ao longo do lado ventral da mola traseira para a área do tornozelo.

Corte o músculo gracilis e os outros músculos adutores por baixo dele de forma vertical para expor e ligar os vasos geniculares proximais medial, pequenos vasos de ramificação profunda e o nervo ciático. Neste ponto, em uma mesa cirúrgica separada, o outro cirurgião deve entubar e anestesiar o animal receptor para preparar o local cirúrgico do receptor a tempo de colocação do enxerto, e minimizar o tempo isquêmico do enxerto. Faça incisões circunferenciais de pele ao nível do joelho e tornozelo, desarticular o joelho e o tornozelo e remover músculos e tecidos extrainosos.

Faça uma incisão vertical da pele no lado dorsal da retalho traseiro para liberar o enxerto, composto de fíbula e tíbia, e agora conectado apenas pelo pedículo. Coloque pequenos grampos o mais proximicamente possível na artéria femoral e na veia e corte o pedículo o mais próximo possível do ligamento inguinal. Use uma cânula de descarga de 27 calibres para injetar soro fisiológico heparinizado na artéria femoral para lavar o enxerto de sangue.

Enrole o enxerto isolado em gaze salina quente e transporte-o imediatamente para a mesa com o animal receptor, com o local cirúrgico já preparado para anastomose vascular. Entubar o rato receptor, e anestesiar profundamente com isoflurane vaporizado de 2,5 a 3%, equilibrado com um litro por minuto de oxigênio. Coloque o supino animal em uma almofada de aquecimento, e esfregue e drapee o local cirúrgico.

Enquanto o primeiro cirurgião está trabalhando na liberação do enxerto do animal doador, use a lâmina de bisturi número 15 para fazer uma incisão de pele de três centímetros na concavidade da virilha do rato receptor anestesiado. Use a tesoura Iris para refletir lateralmente a almofada de gordura inguinal. Depois de expor os vasos femorais comuns da mesma forma que com o animal doador, coloque um gancho de arame com uma faixa elástica para retrair os músculos abdominais.

Em seguida, ligar e dividir ramos Murphy. Usando suturas interrompidas de nylon 10-0, vasos doadores de anastomose. Para recipientes receptores através da técnica venosa de ponta a lado.

Em seguida, realize a anastomose arterial através da técnica de ponta a ponta. Depois de liberar gradualmente os grampos, monitore os locais anastomóticos para sangramento e adicione suturas adicionais, se necessário. Para garantir uma reperfusão eficaz do enxerto, avalie visualmente a anastomose vascular.

Em seguida, insira o enxerto no bolso inguinal, e oriente-o de cabeça para baixo, com a articulação do tornozelo superior, e a articulação do joelho inferior. Use suturas de dobra para fixar o enxerto aos músculos adjacentes. Finalmente, feche a pele através de suturas absorvíveis 4-0 de colchão horizontais interrompidos, e continue com os cuidados pós-operatórios, conforme descrito no manuscrito.

O modelo de retalho de efeito de pelo uterópica de ratos VCA permite a sobrevivência de aloenxerto a longo prazo sob imunossupressão. O retalho está bem escondido na região da virilha, e constitui mínima morbidade e desconforto para o animal. Quando o tratamento de imunossupressão foi interrompido, o enxerto foi rejeitado.

As imagens doppler do aloenxerto mostram uma mudança de profusão de sangue mínima imediatamente pós-VCA, para revascularização total da aba no dia 64. A biópsia da pele de um aloenxerto sintérico no dia 45 mostra morfologia normal dos componentes da pele, enquanto há atrofia e infiltração de células mononucleares em um aloenxerto alogênico em rejeição no dia 75 tratado diariamente com uma dose menor de um imunossupressor. A biópsia muscular de um aloenxerto sintérico no dia 45 mostra morfologia normal, enquanto atrofia muscular e infiltração de células mononucleares são aparentes em um aloenxerto alogênico em rejeição no dia 98, tratado diariamente com uma dose menor de um imunossupressor.

A biópsia femoral da artéria de um aoenerxerto sintérico no dia 45 mostra morfologia normal da artéria, em contraste com a artéria femoral de uma alusão aogenutérica em rejeição no dia 98, tratada diariamente com uma dose menor de um imunossupressor. Este modelo fornece uma ferramenta para testar os efeitos da rejeição aguda, rejeição crônica e fatores ambientais, como infecção e insultos cirúrgicos no desenvolvimento da vasculopatia. Drogas imunossupressivas são necessárias para a sobrevivência a longo prazo do enxerto.

Estas drogas são quimicamente perigosas, e devem ser tratadas com cautela e equipamento de proteção de pessoal adequado.