Name: In vivo intracerebral injeções Estereotaxicas para estimulação Optogenética de entradas de longo alcance em fatias de cérebro de rato (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-20T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 7 s
Description: Aprenda a realizar injeções estereotáxicas intracerebrais in vivo para estimulação optogenética de entradas de longo alcance em fatias de cérebro de rato. Este método permite investigar a conectividade funcional entre regiões cerebrais distantes.

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Agradecemos a Bertrand Mathon, Mérie Nassar, li-Wen Huang, e Jean Simonnet por sua ajuda no desenvolvimento de versões anteriores do protocolo de injeção estereotótaxica e Marin Manuel e Patrice Jegouzo para obter ajuda técnica. Este trabalho foi apoiado pelo Ministério francês da educação e investigação (L. R., L. S.), Centre National des Etudes Spatiales (M. B.), e Agence Nationale de la Recherche Grant <span lang="FR" style="font-size: 11pt; line-height: 115%; font-family: Arial, sans-serif; color: rgb(41, 43, 49); background-image: initial; background-position: initial; background-size: initial; background-repeat: initial; background-attachment: initial; background-origin: initial; background-clip: initial;">ANR-18-CE92-0051-01 (D. F.).

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<li>Mathon, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+the+effectiveness+of+intracerebral+injections+in+adult+and+neonatal+mice%3A+a+neurosurgical+point+of+view%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Increasing the effectiveness of intracerebral injections in adult and neonatal mice: a neurosurgical point of view.</a> Neuroscience Bulletin. 31 (6), 685-696 (2015).</li>
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</ol>

Os autores não declaram interesses financeiros concorrentes.

A injeção viral in vivo para expressar opsinas sensíveis à luz em uma área cerebral definida é um método de escolha para a análise optogenética da conectividade funcional de longo alcance10,11,17,18. As injeções Stereotaxic oferecem a possibilidade para alvejar precisamente uma área específica do cérebro. A coexpressão de um opsina com um repórter fluorescente permite convenientemente a avaliaç...

A definição de conectividade entre regiões cerebrais é necessária para compreender os circuitos neurais. Os métodos anatômicos de traçado clássicos permitem estabelecer a conectividade inter-regional, e os estudos da lesão ajudam a compreender a organização hierárquica do fluxo de informação. Por exemplo, os circuitos cerebrais para a orientação espacial e a sinalização do sentido da cabeça envolvem o fluxo direcional da informação do tálamo ao presubiculum. Isto foi demonstrado por estudos de lesão de núcleos talâmicos Antero-dorsais (ADN) que degradam o sinal de direção da cabeça no presubiculum dorsal a jusante, bem como osinal de célulade grade hipocampal1,2.
A conectividade funcional entre as áreas cerebrais é mais difícil de estabelecer a nível celular e subcelular. No hipocampo, uma anatomia altamente organizada permite investigar conexões sinápticas via-específicas usando simulação elétrica na preparação da fatia. Eletrodos de estimulação colocados no radiatum de estrato de CA1 podem ser usados para estimular especificamente a entrada colateral de Schaffer de3a. Estimular eletrodos colocados em estrato lacunosum moleculare de CA1 ativará a entrada derivação caminho para CA14,5. A estimulação elétrica ativa a liberação do neurotransmissor dos terminais do AXON; no entanto, ele ativa os neurônios com SOMATA perto do local de estimulação, bem como axônios de passagem. É, portanto, de uso limitado para estudar aferentes de regiões cerebrais definidas quando fibras de diferentes regiões de origem se misturam na estrutura-alvo, como é tipicamente o caso no neocórtex.
Os neurônios também podem ser estimulados com a luz. Os métodos ópticos incluem a fotoativação do glutamato enjaulado, que pode ser combinada com a digitalização a laser de um ou dois fótons. Vários locais com espaçamento próximo podem ser estimulados sequencialmente, sem danos mecânicos ao tecido6. Isso foi usado com sucesso para mapear os receptores sinápticos, bem como ativar os neurônios individuais7. Quando o glutamato que uncaging puder ser usado para a análise de circuito local, não permite a ativação específica de entradas de longo alcance.
Um método de escolha para a investigação da conectividade de longo alcance em circuitos neuronais é o uso da expressão de channelrhodopsina mediada por vírus. Usando injeções estereotaxicas in vivo como descrito aqui, a expressão de canais iônicos leves pode ser direcionada e espacialmente restrita a uma região cerebral desejada. Desta forma, channelrhodopsins são eficazes para mapear a conectividade excitatória ou inibitório de uma região para o seu alvo. Os terminais dos axônios transfected podem ser estimulados com luz em uma preparação da fatia do cérebro, e as gravações da remendo-braçadeira como uma leitura-para fora permitem o exame das funções e dos pontos fortes de componentes específicos do circuito no cérebro8. A aproximação optogenética combinada com a injeção Stereotaxic de um vírus oferece a especificidade sem precedentes e o controle genético9. Estimular com luz Adicionalmente permite a precisão temporal e espacial elevada10,11.
O presrubiculum é uma estrutura cortical de seis camadas na transição do hipocampo e a formação para-hippocampal12,13. Recebe a entrada sináptica importante do ADN11 mas também de diversas outras regiões corticais e subcortical14. Assim, a estimulação seletiva de terminais thalamic dos axônios dentro de uma fatia presubicular não é possível com estimulação elétrica nem glutamato uncaging. Descritos neste protocolo são métodos para determinar a conectividade funcional entre as regiões cerebrais (ADN e presubiculum) usando injeções estereotaxicas precisas de vetores virais expressando canais de luz bloqueada. Também descrito é a fotoestimulação dos terminais de axônios de projetar neurônios em sua região-alvo, juntamente com gravações de patch-Clamp de células inteiras de neurônios pós-sinápticos na preparação da fatia cerebral.

<table><tbody><tr><td>Diâmetro de 0,5 mm&nbsp;</td><td>Aparelho Harvard 724962</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 &micro; Seringa L Hamilton</td><td></td><td>1701 RN - 7653-01</td><td></td></tr><tr><td>Solução PBS 10X</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>AM9624</td><td>&nbsp; texto</td></tr><tr><td>36% PFA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F8775</td><td></td></tr><tr><td>470 nm LED&nbsp;</td><td>Cairn Research</td><td>P1105/470/LED&nbsp; Uso DC/59022m</td><td>com filtro de excitação correspondente 470/40x&nbsp; e filtro de emissão para GFP&nbsp;</td></tr><tr><td>AAV5. Syn.Chronos-GFP.WPRE.bGH</td><td>Penn Vector Core</td><td>AV-5-PV3446</td><td>lote V6026R, qTiter GC/ml 4.912e12, ddTiter GC/ml 2.456e13&nbsp;</td></tr><tr><td>Todos os produtos químicos</td><td>Sigma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bath temperature controler</td><td>Luigs & Neumann</td><td>SM7</td><td>fixado em 34&deg; C&nbsp;</td></tr><tr><td>agulha de metal chanfrada</td><td>Hamilton</td><td>7803-05</td><td>calibre 33, 13mm, estilo de ponta 4-20&deg;</td></tr><tr><td>Tesoura grande</td><td>Dahle Allround</td><td>50038</td><td></td></tr><tr><td>Biocytin</td><td>Sigma</td><td>B4261</td><td>final 1-3 mg/ml</td></tr><tr><td>Borosilicate Capilares</td><td>Havard Apparatus</td><td>GC150-10</td><td>1,5 mm externo, 0,86 diâmetro interno</td></tr><tr><td>Marrom Flaming extrator de eletrodo</td><td>Sutter Instruments</td><td>P-87</td><td></td></tr><tr><td>BupH Phosphate Buffered Saline pack</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>28372</td><td></td></tr><tr><td>agulha borboleta para perfusão</td><td>Braun&nbsp;</td><td>Câmera CCD Venofix A</td><td>24G</td></tr><tr><td></td><td>Andor&nbsp;</td>Microscópio Confocal <td>DL-604M</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Zeiss</td><td>LSM710</td><td>20X</td></tr><tr><td>fórceps curvo</td><td>FST&nbsp;</td><td>11011-17</td><td></td></tr><tr><td>configuração CY5 (confocal)</td><td></td><td></td><td>Hélio-Néon 633nm (5,0 mW) laser; Espelho: MBS 488/561/633&nbsp;</td></tr><tr><td>Configuração CY5 (epifluo)</td><td>Nikon/Chroma</td><td></td><td>Luz fluorescente (Intensilight); Filtro de excitação: BP645/30; Espelho dicróico: 89100 BS; Filtro de emissão: BP705/72</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>Configuração DAPI (epifluo)</td><td>Nikon/Chroma</td><td></td><td>Luz fluorescente (Intensilight); Cubo: Conjunto Semrock DAPI-5060C-000-ZERO (Excitação: BP 377/50; Espelho: BS 409; Emissão: BP 447/60)</td></tr><tr><td>Digidata 1440A</td><td>Axon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medidor óptico digital portátil</td><td>ThorLabs</td><td>PM100D</td><td>Parametrizado em lâminas</td></tr><tr><td>de barbear de aço inoxidável de 475 nm Duplo egde</td><td>Microscopia Eletrônica Ciências</td><td>72000</td><td>Use metade da lâmina no fatiador Lanterna</td></tr> de <tr><td>Proteína Fluorescente Dupla Nightsea</td><td></td><td>DFP-1</td><td>excitação, 440-460 nm; filtro de emissão em vidros, passagem longa de 500 nm.</td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma</td><td>E4368</td><td>final 0,2 mM</td></tr><tr><td>Microscópio de Epifluorescência</td><td>Nikon</td><td>Eclipse TE-2000E</td><td>10 ou 20X</td></tr><tr><td>Papel de filtro</td><td>Whatman</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fluoro-Ruby 10%</td><td>Millipore</td><td>AG335</td><td>dissolve 10 mg em 100 &micro; l de água destilada ; injetar 150 a 300 nl</td></tr><tr><td>Configuração GFP (epifluo)</td><td>Nikon/Chroma</td><td></td><td>Luz fluorescente (Intensilight); Cubo: Conjunto de filtros Nikon B-2E/C FITC (Excitação: BP 465-495; Espelho: BS 505; Emissão: BP 515-555)</td></tr><tr><td>Placa de aquecimento</td><td>Physitemp</td><td>HP4M</td><td></td></tr><tr><td>Heparina choay 5000 UI/ml</td><td>Sanofi</td><td></td><td>frasco de 5 ml</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td>final 10 mM</td></tr><tr><td>Kit de micromotor rotativo de alta velocidade</td><td>Foredom</td><td>K.1070</td><td>velocidade máxima de perfuração 38.000 rpm</td></tr><tr><td><forte>Compostos de solução interna: </forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Estimulador de pulso isolado</td><td>A-M Systems</td><td>2100</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma</td><td>P4504</td><td>final 1,2 mM</td></tr><tr><td>Cetamina 1000</td><td>Virbac</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketofen 10%</td><td>Merial</td><td></td><td>100 mg/ml: diluir 1 &micro; l em 1ml total (0,1%)</td></tr><tr><td>Laocaína (lidocaína)</td><td>MSD</td><td></td><td>16,22 mg/ml: diluir 1 ml em 4 ml total (cerca de 4%)</td></tr><tr><td>LED oi power spot para cirurgia</td><td>Fotônica (via Phymep)</td><td>10044</td><td></td></tr><tr><td>Fonte de alimentação LED</td><td>Cairn Research</td><td>OptoLED Manipuladores de fonte</td><td></td></tr><tr><td></td><td>de luz Luigs & Neumann</td><td>SM-7</td><td></td></tr><tr><td>Mg-ATP 2H20</td><td>Sigma</td><td>A9187</td><td>final 4 mM</td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Sigma</td><td>63069</td><td>final 2 mM</td></tr><tr><td>Micro controlador de temperatura</td><td>Physitemp</td><td>MTC-1</td><td></td></tr><tr><td>Leite em pó</td><td>Cravo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MultiClamp 700B</td><td>Axon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Na Fosfocreatina</td><td>Sigma</td><td>P7936</td><td>final 10 mM</td></tr><tr><td>Na3-GTP 2H20</td><td>Sigma</td><td>G9002</td><td>final 0,4 mM</td></tr><tr><td>porta-agulhas/hemostático</td><td>FST</td><td>13005-14</td><td></td></tr><tr><td>software de aquisição pClamp</td><td>Axon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bomba peristáltica</td><td>Gilson</td><td>Minipuls 3</td><td>14-16 no display para 2-3 ml/min&nbsp;</td></tr><tr><td>Gluconato de potássio (K-gluconato)</td><td>Sigma</td><td>G4500</td><td>Final 135 mM</td></tr><tr><td>ProLong Gold antifade meio de montagem</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>P36390</td><td></td></tr><tr><td>Rompun 2% (xilazina)</td><td>Tesoura pequena Bayer</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>FST</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de sódio 0,9%&nbsp;</td><td>Diluir Virbac</td><td></td><td>8,5 mL em 10 ml de</td></tr><tr><td>estereomicroscópio total VISISCOPE SZT</td><td>VWR</td><td>630-1584</td><td></td></tr><tr><td>Moldura estereotáxica com display digital</td><td>Kopf</td><td>Modelo 940</td><td>Instrumento estereotáxico para pequenos animais</td></tr><tr><td>Conjugado Streptavidin-Cy3</td><td>Life technologies&nbsp;</td><td></td><td></td>434315</tr><tr><td>Conjugado Streptavidin-Cy5</td><td>Thermofisher</td><td>Scientific S32357</td><td></td></tr><tr><td>Superglue3 Loctite</td><td>Dutscher</td><td>999227</td><td>tubo de 1g</td></tr><tr><td>Filamento de sutura Ethilon II 4-0 poliamida</td><td>Ethicon</td><td>F3210</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de seringa</td><td>kdScientific</td><td>Legato 130 - 788130</td><td>Use os modos Infusar e Retirar</td></tr><tr><td>Fatiador de tecidos</td><td>Leica</td><td>VT1200S</td><td>velocidade 0,07, amplitude 1.</td></tr><tr><td>tubos</td><td>Gilson</td><td>F117942, F117946</td> Microscópio vertical amarelo<td>/preto, roxo/preto</td></tr><tr><td></td><td>Olympus</td><td>BX51W1</td><td></td></tr><tr><td>Papel absorvente de bancada Versi-dry</td><td>Nalgene</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo intracerebral injeções estereotaxicas para estimulação optogenética de entradas de longo alcance em fatias de cérebro de rato

In Vivo Intracerebral Stereotaxic Injections for Optogenetic Stimulation of Long-Range Inputs in Mouse Brain Slices

O conhecimento da conectividade sináptica específica do tipo celular é um pré-requisito crucial para a compreensão de circuitos neuronais cerebrais. A investigação funcional de conexões de longo alcance requer gravações direcionadas de neurônios únicos combinados com a estimulação específica de entradas distantes identificadas. Isto é frequentemente difícil de conseguir com técnicas convencionais e elétricas da estimulação, porque os axônios das áreas ascendentes convergentes do cérebro podem misturar-se na região de alvo. A segmentação estereotaxica de uma região cerebral específica para a expressão mediada por vírus de canais iônicos sensíveis à luz permite a estimulação seletiva de axônios originários daquela região com luz. As injeções Stereotaxic intracerebral podem ser usadas em estruturas bem delimitadas, tais como os núcleos thalamic anteriores, além do que outras áreas subcortical ou corticais durante todo o cérebro.
Descrito aqui é um conjunto de técnicas para a injeção estereotaxica precisa de vetores virais expressando channelrhodopsina no cérebro do rato, seguido por fotoestimulação de terminais AXON na preparação fatia do cérebro. Esses protocolos são simples e amplamente aplicáveis. Em combinação com a gravação da braçadeira de remendo da todo-pilha de um Neuron pós-sinapticamente conectado, o photoestimulação dos axônios permite a deteção de conexões sináptica funcionais, de caracterização farmacológica, e de avaliação de sua força. Além, o enchimento do biocytin do neurônio gravado pode ser usado para a identificação morfológica post-hoc do neurônio pós-sináptica.

O procedimento aqui apresentado foi utilizado para expressar uma channelrhodopsina sensível à luz azul (Chronos) fundida ao GFP no núcleo Antero-dorsal do tálamo (ADN), por injeção estereotóica de vírus anterógrado adeno-associado. As coordenadas Stereotaxic foram determinadas de acordo com um Atlas do cérebro do rato e testadas injetando 200 nL do fluoro-rubi fluorescente do Tracer. O animal foi sacrificado 10 min após a injeção, e o cérebro foi extraído e fixado durante a noite. As seções do cérebro coronal foram prepa...

Este protocolo descreve um conjunto de métodos para identificar a conectividade funcional específica do tipo de célula de entradas de longo alcance de regiões cerebrais distantes usando estimulações optogenéticas em fatias de cérebro ex vivo.

In vivo intracerebral injeções Estereotaxicas para estimulação Optogenética de entradas de longo alcance em fatias de cérebro de rato

Knowledge of cell-type specific synaptic connectivity is a crucial prerequisite for understanding brain-wide neuronal circuits. The functional ...

O objetivo deste método é identificar a conectividade funcional de entradas de longo alcance de regiões cerebrais distantes usando fotostimulação em fatias cerebrais. O direcionamento estereotipado de uma região cerebral específica para várias expressões mediadas de canais de íons sensíveis à luz permite a estimulação seletiva de axônios provenientes daquela região com luz. Demonstrando o procedimento estará Louis Richevaux, um estudante de doutorado do meu grupo.Antes da cirurgia, verifique se o animal está bem anestesiado com uma pitada de dedo do pé. Puxe suavemente a língua para facilitar a respiração. Então, raspe o cabelo craniano.Injete 20 microlitres de cloridrato de lidocaína sob a pele da cabeça para anestesia local e espere cinco minutos. Para expor o crânio, faça um corte no couro cabeludo. Em seguida, coloque o animal em uma moldura estereotaxa.Insira as barras de ouvido e coloque-as sobre os ossos ligeiramente rostral para as orelhas e puxe a pele para criar um bom acesso ao crânio. Aperte as barras de ouvido e instale a peça do nariz. Mantenha o corpo do animal horizontalmente e ao nível da cabeça usando um suporte ajustado à altura.Coloque uma almofada de aqueciment

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

O vídeo demonstra um protocolo para estudar interações sinápticas e respostas neuronais em uma fatia de cérebro de hipocampo de camundongo transfectado. Envolve iluminar neurônios sensoriais de longo alcance para desencadear potenciais de ação e registrar os potenciais pós-sinápticos excitatórios resultantes no neurônio registrado usando a técnica de patch-clamp de célula inteira.

Fotoestimulação e gravações de grampo de remendo de células inteiras de neurônios em fatias de hipocampo de camundongos

Este vídeo demonstra a inibição mediada por microRNA de correntes sinápticas excitatórias em fatias de cérebro de hipocampo de camundongos. Os neurônios CA3 foram infectados com um vetor viral recombinante que abriga uma construção para expressar um repórter fluorescente, um canal de membrana ativado por luz e um microRNA que regula negativamente a expressão de canais de cálcio dependentes de voltagem. Ao colocar uma fatia em uma câmara de gravação e remendar um neurônio CA1 com uma pipeta de...

Inibição de correntes pós-sinápticas excitatórias mediada por microRNA em fatias de hipocampo de camundongo

Este vídeo demonstra o procedimento para estudar a eficiência sináptica no córtex entorrinal lateral (LEC) estimulando optogeneticamente os axônios do córtex pré-frontal medial (mPFC) e registrando as respostas dos neurônios piramidais no LEC. Este método combina gravações de patch-clamp com ativação sináptica por estimulação de luz para estudar a plasticidade sináptica.

Estimulação optogenética e registro eletrofisiológico de eventos sinápticos em fatias de cérebro de rato

Fonte: Fricano-Kugler, C. J., et al. Projeto, embalagem e entrega de CRISPR retro e lentivírus de alto título por meio de injeção estereotáxica. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra a injeção viral estereotáxica para edição precisa de genes neuronais no cérebro de camundongos. O protocolo garante a entrega precisa do vírus ao giro denteado, permitindo a marcação fluorescente e o nocaute genético mediado por CRISPR para estudar circuitos neurais, função gênica e mecanismos de doenças in vivo.

Injeção viral estereotáxica para edição de genes neuronais direcionados no cérebro de camundongos

Descrevemos um método para caracterizar a topografia funcional e as propriedades sinápticas dos circuitos do prosencéfalo usando uma abordagem optogenética para fotoestimular populações neuronais in vitro.

Fotoestimulação de varredura a laser de circuitos de prosencéfalo optogeneticamente direcionados

Este vídeo mostra o procedimento de craniotomia que permite imagens crônicas de neurônios no córtex retroesplenial de camundongos usando microscopia in vivo de dois fótons na linha transgênica Thy1-GFP. Essa abordagem é combinada com a injeção de vírus adeno-associado que expressa mCherry no hipocampo dorsal. Essas técnicas permitem o monitoramento de longo prazo da plasticidade estrutural dependente da experiência em RSC.

Simultânea de dois fótons<em&gt; In Vivo</em&gt; Imagem de Synaptic Entradas e metas pós-sinápticos no córtex do rato retrosplï¿½ico

As fatias cerebrais ex vivo podem ser usadas para estudar os efeitos de anestésicos voláteis em respostas evocadas a diferentes entradas. A optogenética é empregada para ativar independentemente os afferents thalamocortical e corticocortical ao neocórtex não primário, e as respostas sinápticas e de rede são moduladas com isoflurano.

Ativação optogenética de caminhos diferentes em fatias cerebrais e modulação de respostas por anestésicos voláteis

Miniscópio em imagem de cálcio vivo é uma técnica poderosa para estudar dinâmica neuronal e microcircuitos em camundongos que se comportam livremente. Este protocolo descreve a realização de cirurgias cerebrais para obter uma boa imagem in vivo de cálcio usando um miniscópio.

Injeção viral esteretaxica e implantação de lente de índice de gradiente para imagem de cálcio no cérebro profundo em vivo

Aqui apresentamos um protocolo descrevendo a transdução viral de regiões cerebrais discretas com construtos optogenéticos para permitir a caracterização eletrofisiológica específica da sinapse em cortes cerebrais agudos de roedores.

Ex Vivo Interrogação Optogenética da Transmissão Sináptica de Longo Alcance e Plasticidade do Córtex Pré-frontal Medial para o Córtex Entorrinal Lateral

Aqui, apresentamos o método de fabricação de um sistema optrode com fibras ópticas para entrega de luz e uma matriz de eletrodos para gravação neural. Experimentos in vivo com camundongos transgênicos expressando channelrhodopsin-2 mostram a viabilidade do sistema para estimulação optogenética simultânea e gravação eletrofisiológica.

Oprode Array para modulação optogenética simultânea e gravação neural elétrica

Esse protocolo oferece um método integrado que inclui entrega viral, implantação de optrodo, indução fototrombótica, registro simultâneo da atividade de astrócitos e neurais, e estimulação optogenética de astrócitos. Esse método integrado visa fornecer investigação simultânea da relação astrócito-neurônio nos estágios agudo a crônico do AVC isquêmico.

Um Método Integrado para Modelagem de AVC Fototrombótico e Registro In Vivo de Optrode da Atividade Neuronal e Astrocítica em Ratos Comportando-se

Aprenda a realizar injeções estereotáxicas intracerebrais in vivo para estimulação optogenética de entradas de longo alcance em fatias de cérebro de rato. Este método permite investigar a conectividade funcional entre regiões cerebrais distantes.

In vivo intracerebral injeções Estereotaxicas para estimulação Optogenética de entradas de longo alcance em fatias de cérebro de rato (Vídeo) | JoVE Journal

In vivo intracerebral injeções Estereotaxicas para estimulação Optogenética de entradas de longo alcance em fatias de cérebro de rato

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