Um protocolo de estresse de imobilização crônica para induzir o comportamento semelhante à depressão em camundongos
15 de maio de 2019
Este artigo fornece um protocolo simplificado e estandardizado para a indução do comportamento depressivo-como em ratos cronicamente imobilizados usando um restringidor. Além disso, explicam-se comportamentos e técnicas fisiológicas para verificar a indução da depressão.
Comece definindo a sala para acender em 200 lux usando um medidor lux digital. Coloque o mouse em uma gaiola separada pelo menos uma semana antes do teste, e coloque o mouse na sala de testes por pelo menos 30 minutos antes do experimento. Segure suavemente a cauda do mouse para evitar escorrante o mouse e, em seguida, coloque-o cuidadosamente em uma superfície áspera.
Cubra o conter com uma pequena toalha branca e, em seguida, coloque suavemente o mouse na abertura do conterrante, de modo que o mouse entre no conterrinosamente. Em seguida, coloque o fecho para conter o mouse o mais apertado possível, tomando cuidado para evitar danos ao corpo, como cauda, pés e testículos. Por fim, durante a exposição ao contidor, meça o peso corporal e a ingestão de alimentos a cada 48 horas.
Antes do teste, habituar os camundongos à presença de duas garrafas de bebida, uma contendo sacarose molar 0,1 e outra contendo água pura por 48 horas. Troque as posições das duas garrafas após 24 horas para reduzir qualquer confusão produzida por um viés lateral. No terceiro dia privar os ratos de água por 24 horas.
Então, no dia do experimento, exponha os ratos a duas garrafas de bebida por seis horas. Depois de três horas, troque a posição das garrafas de água. Registo o volume em mililitros de solução de sacarose e água consumida, e então calcule a afinidade do animal com a sacarose.
Por fim, calcule a preferência de sacarose como porcentagem do volume de consumo de sacarose sobre o consumo total de líquidos durante o teste. Comece trazendo o estresse de contenção crônica induzido camundongos para a sala de testes pelo menos 30 minutos antes de iniciar o teste de suspensão da cauda. Coloque a luz do quarto em condições fracas em 50 lux.
Em seguida, coloque a câmera a cerca de 40 centímetros do mouse. Suspenda o mouse firmemente da barra horizontal usando fita adesiva. Depois que o mouse estiver posicionado no meio da caixa de suspensão comece a gravar e observe as alterações comportamentais continuamente por seis minutos.
Se o mouse tentar subir sua cauda use uma vara ou rolha de escalada para evitar que ele faça isso. No final do experimento, mova o mouse para sua gaiola doméstica e remova cuidadosamente a fita de sua cauda. Finalmente, use o software de rastreamento de vídeo para analisar o tempo acumulado de períodos imóveis.
Os resultados indicam diminuição do peso corporal para o grupo CIS e significativamente menos ingestão de alimentos no quarto dia. Em comparação com os controles, mostrou-se uma diminuição para a preferência de sacarose no grupo CIS, enquanto houve um aumento significativo no tempo de imobilidade e corticosterona. Além disso, uma dieta suplementada de glutamina ameniza comportamentos depressivos como comportamentos, como mostrado para peso corporal, ingestão de alimentos, preferência de sacarose, imobilidade e corticosterona.
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos
Visão Geral
Este artigo fornece um protocolo padronizado para induzir comportamento semelhante à depressão em camundongos imobilizados cronicamente, utilizando um dispositivo de contenção. Detalha técnicas comportamentais e fisiológicas para verificar a indução da depressão.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Ciência Comportamental
- Modelos Animais de Depressão
Antecedentes
- A depressão é um problema significativo de saúde mental.
- Modelos animais são essenciais para o estudo dos mecanismos da depressão.
- A imobilização crônica é um método comum para induzir comportamento semelhante à depressão.
- Protocolos padronizados aumentam a reprodutibilidade e a confiabilidade dos resultados.
Objetivo do Estudo
- Fornecer um protocolo claro para induzir comportamento semelhante à depressão em camundongos.
- Descrever métodos para verificar a indução da depressão.
- Facilitar a pesquisa na área de depressão utilizando modelos animais.
Métodos Utilizados
- Configurar o ambiente de teste com iluminação de 200 lux.
- Manter os camundongos separados para aclimatação.
- Utilizar um contenção para induzir imobilização.
- Monitorar o peso corporal e a ingestão de alimento a cada 48 horas.
Resultados Principais
- Indução bem-sucedida de comportamento semelhante à depressão em camundongos.
- Alterações comportamentais observadas durante o período de imobilização.
- Medições fisiológicas correlacionadas com os resultados comportamentais.
- O protocolo demonstrou reprodutibilidade entre os ensaios.
Conclusões
- O protocolo é eficaz para induzir comportamento semelhante ao depressivo.
- Técnicas comportamentais e fisiológicas são validadas para a pesquisa de depressão.
- Este estudo contribui para a compreensão da depressão em modelos animais.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
O estresse crônico por imobilização (CIS) fornece um modelo escalonável e baseado em mecanismos para induzir fenótipos semelhantes à depressão em camundongos, apoiando a validação de alvos na descoberta de fármacos neuropsiquiátricos. Ao combinar leituras comportamentais (preferência por sacarose, suspensão pela cauda) com biomarcadores fisiológicos (corticosterona), o protocolo permite a redução de riscos mecanicistas de alvos do SNC por meio de triagem fenotípica em um sistema relevante para a doença. Essa abordagem aumenta a confiança preditiva na fase inicial da descoberta, vinculando intervenções moleculares a respostas comportamentais e neuroendócrinas validadas.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia e Farmacêutica
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Valor Científico: Permite a investigação de hipóteses terapêuticas relacionadas à modulação das vias de estresse e à sintomatologia depressiva.
- Valor Operacional: Apoia a validação funcional de alvos por meio de alterações quantificáveis na preferência por sacarose e no comportamento de imobilidade.
- Valor Preditivo: Facilita a triagem de portfólios ao correlacionar os efeitos do composto com a reversão dos déficits comportamentais e fisiológicos induzidos pelo CIS.
Desenvolvimento de Triagem e Ensaios
- Prontidão do Ensaio: Prepara sistemas biológicos validados para triagem de compostos em etapas subsequentes utilizando indução padronizada de estresse.
- Resultados Quantitativos: Gera leituras reprodutíveis e multimodais (comportamentais, hormonais) adequadas para padronização de ensaios.
- Escalabilidade: Permite a reutilização da plataforma em diversos programas de descoberta do SNC devido aos requisitos mínimos de equipamentos e pontos finais claros.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Relevância para a Doença: Modela constructos semelhantes à depressão com validade aparente por meio de anedonia (preferência reduzida por sacarose) e desespero comportamental (imobilidade aumentada).
- Continuidade Tradutiva: Conecta a modulação de alvos na fase de descoberta à validação pré-clínica por meio de biomarcadores conservados da resposta ao estresse.
- Decisões Ajustadas ao Risco: Permite critérios de prosseguir/não prosseguir com base na normalização de corticosterona e desfechos comportamentais.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
O protocolo CIS insere-se no continuum de descoberta, desde a testagem de hipóteses sobre alvos até a identificação de compostos líderes e a avaliação de eficácia pré-clínica, particularmente para compostos que modulam o SNC.
- Biologia da Descoberta: Apoia a verificação de hipóteses de compostos neuroativos mediante a indução de um fenótipo de estresse reprodutível.
- Triagem: Permite a preparação do ensaio por meio da imobilização padronizada e o estabelecimento de uma linha de base consistente.
- Análises: Fornece variáveis dependentes quantitativas (preferência por sacarose %, duração da imobilidade, corticosterona ng/mL) para comparação entre grupos.
- Pesquisa Translacional: Corresponde à validação pré-clínica por meio da reversão mensurável de biomarcadores e comportamentos induzidos pelo estresse.
- Reutilização Empresarial: Funciona como uma plataforma fenotípica reutilizável em diversas classes de alvos na pesquisa sobre depressão.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva ao reduzir a ambiguidade mecanicista no engajamento de alvos no SNC.
- Valor Operacional: Garante padronização e reprodutibilidade entre laboratórios por meio de intervalos definidos de exposição ao estresse e de medição.
- Valor Estratégico: Melhora a eficiência do capital ao permitir a eliminação precoce de riscos associados a alvos neuropsiquiátricos.
- Impacto na Carteira: Apoia a priorização ajustada ao risco com base em perfis de resgate comportamentais e fisiológicos.
Considerações sobre a Implementação
- Requer experiência em manejo de roedores, testes comportamentais e fisiologia do estresse.
- Depende de instrumentação para monitoramento de lux, rastreamento de vídeo e detecção de corticosterona por ELISA ou método equivalente.
- Necessita padronização entre equipes no uso de contenções, posicionamento de garrafas e cronometragem dos testes para reduzir a variabilidade.
- Envolve considerações de adaptação ao ser traduzido para diferentes linhagens de camundongos ou durações de estresse.
- As limitações práticas incluem a variabilidade na suscetibilidade ao estresse e a necessidade de controles de habituação para isolar os efeitos da imobilização.
