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Índice competitivo baseado em PCR digital para análise de alta produtividade de aptidão em Sa...
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JoVE Journal Genetics
Digital PCR-based Competitive Index for High-throughput Analysis of Fitness in Salmonella

Índice competitivo baseado em PCR digital para análise de alta produtividade de aptidão em Salmonella

Full Text
10,184 Views
07:11 min
May 13, 2019

DOI: 10.3791/59630-v

Jeff A. Shaw1, Travis J. Bourret1

1Department of Medical Microbiology and Immunology,Creighton University School of Medicine

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Esta aproximação molecular-baseada para determinar a aptidão bacteriana facilita a deteção exata e exata dos micro-organismos usando os códigos de barras genomic originais do ADN que são quantificados através do PCR digital. O protocolo descreve o cálculo do índice competitivo para cepas de Salmonella ; Entretanto, a tecnologia é prontamente adaptável aos protocolos que exigem a quantificação absoluta de todo o organismo genetically-maleável.

Esta técnica permite quantificação precisa e precisa de microrganismos de uma população mista de cepas altamente semelhantes usando técnicas de base molecular rápida e de alto rendimento. Em última análise, ao permitir comparações de aptidão a ser feitas entre as cepas. A capacidade de avaliar simultaneamente muitas cepas em uma única piscina reduz substancialmente a variabilidade bem-para-bem ou organismo-organismo-organismo porque todas as cepas estão expostas precisamente às mesmas condições.

A adaptabilidade desta técnica permite que ela seja usada para quase qualquer organismo geneticamente maleável e quase qualquer design experimental que exija quantificação precisa de micróbios. Inicie este procedimento com a engenharia de marcadores genéticos em cromossomos bacterianos, conforme descrito no protocolo de texto. Crie um pool de DNA genômico que contenha todos os códigos de barras, exceto um.

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Genética edição 147 índice competitivo fatores de virulência condicionamento físico quantificação bacteriana ddPCR PCR digital índice competitivo cancelado Salmonella código de barras de DNA quantificação molecular interações genéticas

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