Name: Implante de uma Minibomba isoproterenol para induzir insuficiência cardíaca em camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 8 s
Description: Aprenda a implantar uma minibomba osmótica para administração crônica de isoproterenol em camundongos. Este método simples induz insuficiência cardíaca avançada e permite avaliação funcional por ecocardiografia.

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Os autores reconhecem a NIH K08 HL133491 para apoio ao financiamento.

Este protocolo adere às directrizes do cuidado animal da Universidade de Califórnia, Los Angeles (protocolo ARC #2010-075). Os leitores são aconselhados a aderir ao seu próprio protocolo IACUC-aprovado, como o cuidado do rato peri-procedimento e gestão de analgesia pode ser específico da instituição.
1. preparação da bomba osmótica isoproterenol
Nota: este procedimento foi aplicado com sucesso em ratos fêmeas 9 + week-old que pesam 18 + g de sobre 100 estirpes do rato linhagens, assim como, nos ratos masculinos em um subconjunto das tensões. Não há limite máximo de peso corporal para este procedimento. Inclua sempre controles pareados por idade, pois é desconhecido se a idade do tratamento afeta a suscetibilidade induzida por isoproterenol ao desenvolvimento de insuficiência cardíaca.
<ol><li>Pesar e gravar o peso corporal para cada rato.</li>
	<li>Calcule a quantidade e a concentração apropriadas de isoproterenol para cada rato (ver tabela 1 ; Arquivo suplementar). Nota: as bombas osmóticas utilizadas neste experimento (tabela de materiais) têm um volume de reservatório de 100 μl e são projetadas para entregar drogas em caudais contínuos por até 28 dias. Prepare um extra de 20 μL de solução de isoproterenol por bomba para dar conta da perda de volume no tubo de enchimento durante o carregamento da bomba.</li>
	<li>Pesar a quantidade apropriada de isoproterenol (tabela 1) usando um equilíbrio analítico e dissolvê-lo em 120 μL de solução estéril de nacl 0,9%. Pipetar vigorosamente ou Vortex por 1 min para solubilizar completamente isoproterenol. Nota: Prepare as bombas osmóticas num gabinete de biossegurança laboratorial. As bombas devem ser tratadas com luvas cirúrgicas. A técnica estéril é recomendada durante todo a preparação das bombas osmóticas e durante o procedimento cirúrgico da implantação.</li>
	<li>Pesar e gravar a bomba osmótica vazia juntamente com seu moderador de fluxo e, em seguida, remover o moderador do fluxo.</li>
	<li>Aspirar 120 μL de solução de isoproterenol para uma seringa de 1,0 mL e anexar o tubo de enchimento de ponta sem corte de 27 Gauge fornecido com as bombas osmóticas. Nota: Certifique-se de que a seringa e o tubo de enchimento estão livres de bolhas de ar.</li>
	<li>Enquanto segura a bomba na posição vertical, insira o tubo de enchimento através da abertura da bomba na parte superior até que a ponta do tubo de enchimento fica perto da parte inferior do reservatório da bomba.</li>
	<li>Carregue a bomba osmótica empurrando o êmbolo da seringa lentamente até que a solução de isoproterenol se encha até à abertura da bomba.</li>
	<li>Retire cuidadosamente o tubo de enchimento e limpe a solução em excesso.</li>
	<li>Insira de volta o moderador do fluxo para fechar a bomba e limpe qualquer solução em excesso.</li>
	<li>Confirme que mais de 90% do volume do reservatório foi preenchido repesando a bomba osmótica. Nota: as bombas de controle são preparadas da mesma maneira preenchendo o reservatório da bomba com solução estéril de NaCl de 0,9%.</li>
</ol>2. preparação de instrumentos cirúrgicos
<ol><li>Limpe todos os instrumentos cirúrgicos, incluindo O iluminador do microscópio da luz do O-anel da fibra óptica, 2 fórceps, suporte da agulha, Sterilizers quentes do grânulo, grânulos de vidro, e tesouras (tabela dos materiais).</li>
	<li>Autoclave instrumentos cirúrgicos em 121 ° C por 30 min para esterilizar instrumentos antes da cirurgia.</li>
</ol>3. implante cirúrgico da bomba osmótica de isoproterenol
<ol><li>Induzir a anestesia colocando o mouse em uma câmara de indução com isoflurano a 3% em 95% de O2 e 5% de CO2. Manter a anestesia com isoflurano 2% através de uma nosecona.</li>
	<li>Administrar 5 mg/kg de carprofeno s.c. ao Scruff do pescoço entre as omoplatas para analgesia.</li>
	<li>Coloc a pomada oftálmica nos olhos para impedir a desidratação córnea.</li>
	<li>Verifique a profundidade da anestesia, monitorando a taxa de respiração, reflexo de pinça do dedo do pé e cor da membrana mucosa.</li>
	<li>Coloque o mouse em uma posição supina em uma almofada aquecida. Retire o cabelo do abdômen inferior e desinfete a pele com Betadine ou clorexidina. Nota: para minimizar a infecção pós-operatória, assegure-se de que o campo cirúrgico esteja livre de pêlos incidentes.</li>
	<li>Use um par de tesouras cirúrgicas para cortar uma incisão de 1 cm-Long da pele do midline. Use um par de tesouras Blunt-ended para dissecar com cuidado a pele das paredes peritoneais subjacentes. Nota: uma entrega intraperitoneal é preferível para acomodar o tamanho da bomba.</li>
	<li>Puxe as paredes peritoneais para longe do intestino subjacente com fórceps e corte um furo de 0,8 cm nas paredes peritoneais usando tesouras cirúrgicas finas.</li>
	<li>Insira a bomba osmótica na cavidade peritoneal com a extremidade do fluxo moderador primeiro.</li>
	<li>Feche a preensão nas paredes peritoneais usando 5,0 Suturas absorvíveis em uma forma interrompida. Use 6,0 suturas não absorvíveis para fechar a incisão cutânea de forma interrompida.</li>
	<li>Coloque o mouse em uma incubadora dedicada para mantê-lo quente e seco durante a recuperação. Avalie a recuperação da anestesia monitorando o rato cada 30 minutos nas primeiras duas horas para o retorno da respiração e do movimento normais.</li>
	<li>Uma vez que o rato se recuperou completamente da anestesia, retorne-o à carcaça rotineira. Continuar a monitorizar o animal para complicações diárias até 3 dias e, em seguida, a cada 2 a 3 dias depois, até o final do experimento. Observação: os animais devem ser monitorados quanto à evidência de dor ou infecção pós-operatória, sinais de perda de peso, falta de mobilidade, postura anormal, falha no noivo e excesso de lamber ou morder a área da incisão.</li>
	<li>Administrar carprofeno 5mg/kg s.c. a cada 24 h para até 48 h e depois, conforme necessário.</li>
	<li>Administrar 0,25 mg/mL de amoxicilina em água potável durante 5 dias para prevenir infecções no local cirúrgico.</li>
	<li>Retire as suturas não absorvíveis após 7 a 10 dias.</li>
</ol>4. Avaliação ecocardiográfica anestesia
Nota: a Avaliação ecocardiográfica pode ser realizada repetidamente para monitorar o remodelamento cardíaco de série durante várias semanas. Realizamos medições ecocardiográficas em intervalos semanais ao longo de 3 semanas.
<ol><li>Induzir anestesia em câmara de indução em 1,25% a 1,5% de isoflurano. Uma vez devidamente sedado, prenda o mouse sobre a plataforma de ecocardiografia com fita permitindo que o mouse continue recebendo anestesia através de um cone de nariz.</li>
	<li>Diminua o isoflurano para uma dosagem de manutenção de 1% para minimizar os efeitos cronotrópicos e inotrópicos negativos da sedação excessiva. Tome nota das taxas respiratórias e cardíacas durante todo o estudo e ajuste a dosagem de isoflurano conforme necessário.</li>
	<li>Retire o cabelo do peito com uma loção depilatória e limpe o peito livre de pêlos.</li>
	<li>Coloque o gel de ultra-som no peito e posicione a sonda de ultra-som para a imagem do coração.</li>
	<li>No modo B, a imagem do ventrículo esquerdo (LV) na visão de eixo longo do paraesternal. Ajuste a plataforma de ecocardiografia para alinhar a valva aórtica e o ápice do ve no plano do feixe de ultra-som.</li>
	<li>Incline a plataforma da ecocardiografia para colocar o eixo longo do LV em 90 graus ao feixe do ultra-som e ao diâmetro máximo do LV no centro da imagem.</li>
	<li>Imagem do eixo curto LV girando a sonda de ultra-som 90 graus.</li>
	<li>Em M-modo medida LV espessura da parede e dimensões internas.</li>
	<li>Coloque o mouse de volta na gaiola. Monitor para o retorno da respiração normal e movimentos espontâneos do corpo.</li>
</ol>

<ol><li>Hartupee, J., Mann, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurohormonal+activation+in+heart+failure+with+reduced+ejection+fraction%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Review+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Neurohormonal activation in heart failure with reduced ejection fraction.</a> Nature Review Cardiology. 14 (1), 30-38 (2017).</li>
<li>Wang, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+Dissection+of+Cardiac+Remodeling+in+an+Isoproterenol-Induced+Heart+Failure+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic Dissection of Cardiac Remodeling in an Isoproterenol-Induced Heart Failure Mouse Model.</a> PLoS Genetics. 12 (7), 1006038(2016).</li>
<li>Balakumar, P., Singh, A. P., Singh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacological+and+Toxicological+Methods%22%5BJournal%5D)">Rodent models of heart failure.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 56 (1), 1-10 (2007).</li>
<li>Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+heart+failure%3A+development+of+novel+therapies%2C+past+and+present%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%3A+Heart+Failure%22%5BJournal%5D)">Small animal models of heart failure: development of novel therapies, past and present.</a> Circulation: Heart Failure. 2 (2), 138-144 (2009).</li>
<li>Huang, W. Y., Aramburu, J., Douglas, P. S., Izumo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+expression+of+green+fluorescence+protein+can+cause+dilated+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Transgenic expression of green fluorescence protein can cause dilated cardiomyopathy.</a> Nature Medicine. 6 (5), 482-483 (2000).</li>
<li>Breckenridge, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+failure+and+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Model+and+Mechanism%22%5BJournal%5D)">Heart failure and mouse models.</a> Disease Model and Mechanism. 3 (3-4), 138-143 (2010).</li>
<li>Wittstein, I. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurohumoral+features+of+myocardial+stunning+due+to+sudden+emotional+stress%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Neurohumoral features of myocardial stunning due to sudden emotional stress.</a> New England Journal of Medicine. 352 (6), 539-548 (2005).</li>
<li>Templin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Features+and+Outcomes+of+Takotsubo+%28Stress%29+Cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Clinical Features and Outcomes of Takotsubo (Stress) Cardiomyopathy.</a> New England Journal of Medicine. 373 (10), 929-938 (2015).</li>
<li>Shao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+reveals+an+important+role+for+catecholamine-induced+lipotoxicity+in+the+pathogenesis+of+stress-induced+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Heart+Failure%22%5BJournal%5D)">A mouse model reveals an important role for catecholamine-induced lipotoxicity in the pathogenesis of stress-induced cardiomyopathy.</a> European Journal of Heart Failure. 15 (1), 9-22 (2013).</li>
<li>Kudej, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+chronic+beta-adrenergic+receptor+stimulation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+Cell+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Effects of chronic beta-adrenergic receptor stimulation in mice.</a> Journal of Molecular Cell Cardiology. 29 (10), 2735-2746 (1997).</li>
<li>Zhuo, X. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoproterenol+instigates+cardiomyocyte+apoptosis+and+heart+failure+via+AMPK+inactivation-mediated+endoplasmic+reticulum+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Isoproterenol instigates cardiomyocyte apoptosis and heart failure via AMPK inactivation-mediated endoplasmic reticulum stress.</a> Apoptosis. 18 (7), 800-810 (2013).</li>
<li>El-Demerdash, E., Awad, A. S., Taha, R. M., El-Hady, A. M., Sayed-Ahmed, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probucol+attenuates+oxidative+stress+and+energy+decline+in+isoproterenol-induced+heart+failure+in+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+Research%22%5BJournal%5D)">Probucol attenuates oxidative stress and energy decline in isoproterenol-induced heart failure in rat.</a> Pharmacology Research. 51 (4), 311-318 (2005).</li>
<li>Rau, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+genetic+contributions+to+cardiac+pathology+induced+by+Beta-adrenergic+stimulation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Cardiovascular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Mapping genetic contributions to cardiac pathology induced by Beta-adrenergic stimulation in mice.</a> Circulation Cardiovascular Genetics. 8 (1), 40-49 (2015).</li>
<li>Berthonneche, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+response+to+beta-adrenergic+blockade+or+activation+in+23+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular response to beta-adrenergic blockade or activation in 23 inbred mouse strains.</a> PLoS One. 4 (8), 6610(2009).</li>
<li>Chang, S. C., Ren, S., Rau, C. D., Wang, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoproterenol-Induced+Heart+Failure+Mouse+Model+Using+Osmotic+Pump+Implantation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Isoproterenol-Induced Heart Failure Mouse Model Using Osmotic Pump Implantation.</a> Methods Molecular Biology. 1816, 207-220 (2018).</li>
<li>Shusterman, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+patterns+of+autonomic+nervous+system+activity+and+heart+failure+susceptibility+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+Circulation+Physiology%22%5BJournal%5D)">Strain-specific patterns of autonomic nervous system activity and heart failure susceptibility in mice.</a> American Journal of Physiology-Heart Circulation Physiology. 282 (6), 2076-2083 (2002).</li>
<li>Faulx, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-dependent+beta-adrenergic+receptor+function+influences+myocardial+responses+to+isoproterenol+stimulation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+Circulation+Physiology%22%5BJournal%5D)">Strain-dependent beta-adrenergic receptor function influences myocardial responses to isoproterenol stimulation in mice.</a> American Journal of Physiology-Heart Circulation Physiology. 289 (1), 30-36 (2005).</li>
<li>Zhang, G. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+oxidative+stress+in+acute+and+chronic+isoproterenol-infused+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Cardiac oxidative stress in acute and chronic isoproterenol-infused rats.</a> Cardiovascular Research. 65 (1), 230-238 (2005).</li>
<li>Boluyt, M. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoproterenol+infusion+induces+alterations+in+expression+of+hypertrophy-associated+genes+in+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Isoproterenol infusion induces alterations in expression of hypertrophy-associated genes in rat heart.</a> American Journal of Physiology. 269 (2), Pt 2 638-647 (1995).</li>
<li>Hohimer, A. R., Davis, L. E., Hatton, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+daily+injections+and+osmotic+pump+infusion+of+isoproterenol+cause+similar+increases+in+cardiac+mass+but+have+different+effects+on+blood+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Physiology+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Repeated daily injections and osmotic pump infusion of isoproterenol cause similar increases in cardiac mass but have different effects on blood pressure.</a> Canadian Journal of Physiology and Pharmacology. 83 (2), 191-197 (2005).</li>
<li>Cross, H. R., Murphy, E., Koch, W. J., Steenbergen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+and+female+mice+overexpressing+the+beta%282%29-adrenergic+receptor+exhibit+differences+in+ischemia%2Freperfusion+injury%3A+role+of+nitric+oxide%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Male and female mice overexpressing the beta(2)-adrenergic receptor exhibit differences in ischemia/reperfusion injury: role of nitric oxide.</a> Cardiovascular Research. 53 (2), 662-671 (2002).</li>
<li>Klingman, G. I., McKay, G., Ward, A., Morse, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+isoproterenol+treatment+of+mice%3A+effects+on+catecholamines+and+rectal+temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Chronic isoproterenol treatment of mice: effects on catecholamines and rectal temperature.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 62 (5), 798-801 (1973).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Aplicou-se este método a mais de 100 estirpes de camundongos incriados para avaliar os desfechos cardíacos devido à estimulação beta-adrenérgica crônica2,13. As diferenças significativas na susceptibilidade ao isoproterenol são sabidas para existir entre tensões do rato e podem ser personalizadas à tensão de interesse como necessário16. Isso pode ser devido à variação na função do receptor beta-adrenérgico entre as cepas de mouse<sup class...

A insuficiência cardíaca com fração de ejeção reduzida (HFrEF) é acompanhada por uma resposta compensatória bem reconhecida do sistema nervoso simpático para manter a homeostase cardiovascular1. O estresse hemodinâmico e os efeitos deletérios no coração e na circulação foram observados com a ativação crônica. Estes tornaram-se a pedra angular da farmacoterapia contemporânea para a insuficiência cardíaca e são mecanismos importantes na progressão da insuficiência cardíaca e antagonismo terapêutico de sistemas Neurohormonais1.
Vários modelos de mouse estão disponíveis para investigações básicas de insuficiência cardíaca. Os modelos genéticos são atrativos para explorar terapias moleculares e investigar vias de sinalização. No entanto, esses modelos podem não ser relevantes para formas comuns de insuficiência cardíaca. Outros modelos comuns incluem a ligadura da artéria descendente anterior (Lad), a constrição transaórtica (TAC) e o isoproterenol (ISO), cada um visando uma etiologia patológica diferente2,3,4,5 ,6. A ligadura da artéria de LAD induz um infarction miocárdico da parede anterior que cria assim um modelo específico para a cardiomiopatia isquêmica. O TAC induz a sobrecarga de pressão aguda para criar um modelo hipertensivo de insuficiência cardíaca. Embora o gradiente de pressão possa ser medido, permitindo a estratificação da hipertrofia, o início agudo da hipertensão carece de relevância clínica direta4. Ambos os modelos LAD e TAC requerem um alto nível de perícia cirúrgica para executar. O modelo ISO agudo de insuficiência cardíaca imita cardiomiopatia induzida por estresse, também conhecida como doença de Takotsubo, que é caracterizada por um aumento acentuado nas catecolaminas e atividade no ventrículo esquerdo que imita o infarto agudo do miocárdio7, a 8. Em contrapartida, os modelos ISO crônicos de insuficiência cardíaca apresentam características de sintomas de insuficiência cardíaca avançada, com níveis cronicamente elevados de catecolaminas1. As vantagens do modelo crônico do ISO são que fornece a estimulação adrenérgicos crônica que imita a falha de coração avançada e que é relativamente fácil de criar. O investigador deve escolher um modelo que melhor recapitula sua patologia de interesse.
O objetivo geral deste método é induzir a insuficiência cardíaca em camundongos usando uma mini bomba implantada que libera a ISO continuamente para imitar a ativação simpática crônica encontrada em pacientes com insuficiência cardíaca1. O método é simples e reprodutível. Embora haja uma variação clara entre as cepas de camundongo, a ISO administrada durante 3 a 4 semanas a 30 mg/kg/dia é suficiente para induzir o remodelamento cardíaco na maioria dos camundongos. Especificamente, a ISO leva a uma fase compensatória pró-hipertrófica durante a semana 1 seguida de desbaste da parede, dilatação ventricular e diminuição da função sistólica nas semanas 2 e 32. O sucesso para a criação do modelo ISO pode ser avaliado in vivo por ecocardiografia serial demonstrando hipertrofia, dilatação e disfunção ventricular, bem como ex vivo via avaliação histológica e molecular do tecido cardíaco colhido para acúmulo lipídico, fibrose, estresse er, apoptose e expressão gênica9,10,11,12.

<table><tbody><tr><td>Sistema de Bomba Micro-Osmótica com Moderador de Fluxo no Local</td><td>Alzet</td><td>Modelo 1004</td><td>Inclui tubo de enchimento, moderador de fluxo e corpo da bomba</td></tr><tr><td>(-)-Cloridrato de isoproterenol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>16504-1G</td><td>(-)-Cloridrato de isoproterenol é um pó que precisa ser armazenado a -20°C.</td></tr><tr><td>Seringa estéril de 1 ml</td><td>VWR</td><td>BD309602</td><td></td></tr><tr><td>30 W LED Fibra óptica O-ring luz microscópio iluminador</td><td>AmScope</td><td>SKU: LED-30WR</td><td></td></tr><tr><td>5-0 VICRYL REVESTIDO (poliglactina 910) Sutura</td><td>Ethicon</td><td>J303H</td><td>5-0, tesoura fina absorvível</td></tr><tr><td>- Sharp</td><td>FST</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>Contas de vidro</td><td>FST</td><td>18000-46</td><td></td></tr><tr><td>Conta quente esterilizadores</td><td>FST</td><td>18000-50</td><td></td></tr><tr><td>Pinça de íris</td><td>WPI</td><td>15915</td><td></td></tr><tr><td>Look Sharpoint 6-0, sutura de monofilamento de nylon preto de 18</td>" <td>LOOK</td><td>AA-2176</td><td>6-0, porta-agulha não absorvível</td></tr><tr><td></td><td>WPI</td><td>15926</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina normal, 0,9% NaCl</td><td>Fisher</td><td>89167-772</td><td></td></tr></tbody></table>

implante de uma minibomba isoproterenol para induzir insuficiência cardíaca em camundongos

Implantation of an Isoproterenol Mini-Pump to Induce Heart Failure in Mice

Isoproterenol (ISO), é um agonista beta-adrenérgico não seletivo, que é amplamente utilizado para induzir lesão cardíaca em camundongos. Quando o modelo agudo imita a cardiomiopatia stress-induzida, o modelo crônico, administrado através de uma bomba osmótica, imita a falha de coração avançada nos seres humanos. O objetivo do protocolo descrito é criar o modelo crônico de insuficiência cardíaca induzida por ISO em camundongos usando uma minibomba implantada. Este protocolo foi usado para induzir a insuficiência cardíaca em 100 + cepas de camundongos linhagens. Técnicas na implantação da bomba cirúrgica são descritas detalhadamente e podem ser relevantes para qualquer pessoa interessada em criar um modelo de insuficiência cardíaca em camundongos. Além disso, as mudanças semanais de remodelação cardíaca com base em parâmetros ecocardiográficos para cada cepa e tempo esperado para o desenvolvimento do modelo são apresentadas. Em resumo, o método é simples e reprodutível. O ISO contínuo administrado através da mini-bomba implantada sobre 3 a 4 semanas é suficiente para induzir o remodelamento cardíaco. Finalmente, o sucesso para a criação do modelo ISO pode ser avaliado in vivo por ecocardiografia serial demonstrando hipertrofia, dilatação ventricular e disfunção.

Em nosso estudo publicado previamente, nós administramos uma dosagem do ISO de 30 mg/kg/d sobre 21 dias através da bomba osmótica através das tensões híbridas do painel da diversidade do rato 105 (hmdp)2,13. Foram avaliados os desfechos por meio do ecocardiograma realizado na linha de base, semana 1, 2 e 3 do tratamento ISO (Figura 1). Semelhante a um estudo prévio em que os autores estudaram o impacto do isoproterenol entre 23 cepas...

A administração crônica de isoproterenol através de uma bomba osmótica implantada tem sido amplamente utilizada para imitar a insuficiência cardíaca avançada em camundongos. Aqui, nós descrevemos métodos detalhados no implante cirúrgico da mini-bomba para a administração contínua do isoproterenol sobre 3 semanas, assim como, Avaliação ecocardiográfica para a criação bem sucedida do modelo.

Implante de uma Minibomba isoproterenol para induzir insuficiência cardíaca em camundongos

Isoproterenol (ISO), is a non-selective beta-adrenergic agonist, that is used widely to induce cardiac injury in mice. While the acute model mimics ...

A administração crônica de isoproterenol através de uma bomba osmótica tem sido amplamente usada para recapitular alterações na insuficiência cardíaca avançada em camundongos. Este método é simples e requer menos conhecimento cirúrgico do que outros modelos, como LAD e TAC. Demonstrando o procedimento estará o Dr. Vincent Ren, um cientista do laboratório do Dr. Yibin Wang.Após a pesagem e o registro do peso corporal de cada camundongo, calcule a quantidade e concentração adequadas de isoproterenol para cada animal, e dissolva o isoproterenol em 120 microlitrais de cloreto de sódio estéril de 0,9%. Misture bem por um minuto para solubilizar completamente o isoproterenol, e pese e grave o peso de uma bomba osmótica vazia, juntamente com e sem seu moderador de fluxo, por mouse. Conecte um tubo de enchimento de 27 bitolas, com pontas cegas fornecido com as bombas osmóticas, e carregue uma seringa de um mililitro com 120 microlitres da solução isoproterenol por mouse.Segurando uma bomba na posição vertical, insira o tubo de enchimento através da abertura da bomba na parte superior até que a ponta do tubo de enchimento fique perto da parte inferior do reservatório da bomba, e pressione l

implantation-an-isoproterenol-mini-pump-to-induce-heart-failure

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O objectivo do presente protocolo é descrever passo a passo a técnica de constrição da aorta transversa minimamente invasiva (TAC) em camundongos. Pela eliminação de intubação e ventilação que são obrigatórios para o procedimento padrão comumente usado, TAC minimamente invasiva simplifica o procedimento operatório e reduz o esforço de colocar o animal.

Técnica de constrição da aorta minimamente invasiva transversal em camundongos para indução de Hipertrofia Ventricular Esquerda

Aqui, nós fornecemos uma aproximação útil para estudar o mecanismo da falha ventricular direita. Uma aproximação mais conveniente e mais eficiente à constrição da artéria pulmonaa é estabelecida usando instrumentos cirúrgicos feitos inhouse. Além disso, são fornecidos métodos para avaliar a qualidade dessa abordagem por ecocardiografia e cateterismo.

Indução de insuficiência ventricular direita por constrição da artéria pulmonar e avaliação da função ventricular direita em camundongos

Este protocolo visa transplantar um patch bioimpresso 3D no epicárdio de camundongos infartados modelando insuficiência cardíaca. Inclui detalhes sobre anestesia, abertura do tórax cirúrgico, ligadura permanente da artéria coronária descendente anterior esquerda (LAD) e aplicação de um patch bioimpresso na área infarto do coração.

Transplante de um Patch Bioimpresso 3D em um modelo murino de infarto do miocárdio

Um método refinado de limpeza tecidual foi desenvolvido e aplicado ao coração do rato adulto. Este método foi projetado para limpar tecido cardíaco denso e autofluorescente, mantendo a fluorescência do fibroblasto rotulada atribuída a uma estratégia de repórter genético.

Clareza refinada baseada em clareza para organização de fibroblasto tridimensional em corações de rato saudáveis e feridos

O presente protocolo descreve um procedimento passo a passo para estabelecer um modelo miniporco de insuficiência cardíaca com fração de ejeção preservada usando constrição da aorta descendente. Os métodos para avaliação da morfologia, histologia e função cardíaca desse modelo de doença também são apresentados.

Modelo Cirúrgico de Insuficiência Cardíaca com Fração de Ejeção Preservada em Miniporcos Tibetanos

A entrega celular guiada por ultrassom ao redor do local do infarto do miocárdio em camundongos é uma maneira segura, eficaz e conveniente de transplante de células.

Implante de Cardiomiócitos Derivados de Células-Tronco Pluripotentes Induzidos por Ultrassom em Camundongos Infartados do Miocárdio

O presente protocolo descreve métodos de expressão transgênica em corações de ratos e camundongos por injeção intramiocárdica direta do vírus sob orientação ecocardiográfica. Métodos para a avaliação da suscetibilidade de corações a arritmias ventriculares pela estimulação elétrica programada de corações isolados, perfundidos por Langendorff, também são explicados aqui.

Expressão Transgênica Viral em Corações de Roedores e Avaliação do Risco de Arritmia Cardíaca

O presente protocolo descreve três métodos de administração de agentes terapêuticos cardioativos em modelo suíno. Suínas crioulas receberam tratamento através de: (1) toracotomia e injeção transepicárdica, (2) injeção transendocárdica por cateter ou (3) infusão intravenosa via minibomba osmótica da veia jugular.

Aplicação da Terapêutica Cardioativa em Modelo de Infarto do Miocárdio Porcino

O presente protocolo descreve uma técnica modificada e simplificada com procedimento minimamente invasivo de constrição transversa da aorta (TAC) utilizando um afastador de fabricação própria. Esse procedimento pode ser realizado sem ventilador ou microscópio e introduz sobrecarga pressórica, eventualmente levando à hipertrofia cardíaca ou insuficiência cardíaca.

Técnica Modificada para Constrição Aórtica Transversa em Camundongos

O presente protocolo descreve a obtenção da relação pressão-volume por meio da estimulação transesofágica, que serve como uma ferramenta valiosa na avaliação da função diastólica em modelos murinos de insuficiência cardíaca.

Um procedimento de estimulação cardíaca controlada para avaliação das funções diastólicas dependentes da frequência cardíaca em modelos murinos de insuficiência cardíaca

Este protocolo apresenta uma abordagem detalhada para replicar um modelo murino de insuficiência cardíaca induzida por hiperlipidemia com fração de ejeção preservada (ICFEP). O projeto combina a administração do vírus adeno-associado 9-receptor de lipoproteína de baixa densidade T de troponina cardíaca (AAV9-cTnT-LDLR) e poloxâmero-407 (P-407).

Um modelo murino de insuficiência cardíaca induzida por hiperlipidemia com fração de ejeção preservada

Aprenda a implantar uma minibomba osmótica para administração crônica de isoproterenol em camundongos. Este método simples induz insuficiência cardíaca avançada e permite avaliação funcional por ecocardiografia.

Implante de uma Minibomba isoproterenol para induzir insuficiência cardíaca em camundongos

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