Name: Transplantação subcapsular renal do Thymus Embryonic murine 2 -Deoxyguanosine-Tratado em ratos nus (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 39 s
Description: Aprenda a transplantar timo murino E18.5 tratado com 2'-deoxiguanosina na cápsula renal de camundongos nus. Este método eficiente permite estudar a função das células epiteliais timicas e a maturação de células T in vivo.

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Este trabalho foi apoiado pelo pacote de início da Universidade de Jinan para S.J. e pelo programa de ciência e tecnologia de Guangzhou China (Grant no. 201704020209 a S.J.). Agradecemos a Amy Botta (departamento de biologia, York University, Toronto, ON M3J 1P3, Canadá) para revisão e edição do manuscrito.

O protocolo apresentado adere às diretrizes do Comitê de ética da Universidade de Jinan em relação aos cuidados com os animais.
Nota: os materiais utilizados estão listados na tabela de materiais.
1. isolação do Timo embrionário
<ol><li>Autoclave todos os instrumentos cirúrgicos antes do experimento, e esterilizar o banco/capuz com 70% etanol.</li>
	<li>Usando o dióxido de carbono, anestesiar e eutanizar o rato fêmea grávido (18,5 dias de acoplamento bem sucedido do borne). Em seguida, limpe a região abdominal com 70% de etanol. Nota: aqui nós acasalamos Insm1+/lacZ fêmeas e Insm1+/lacZ machos. A injeção intraplacental do pentobarbital foi executada antes que o isolamento dos embriões do útero e a decapitação fossem executados para cada embrião.</li>
	<li>Usando tesouras, faça um corte em forma de "V" no abdômen a partir da bexiga e correndo até cada chifre do útero.</li>
	<li>Usando a tesoura, corte o mesométrio e colo/vagina, e recolher o útero. Coloque o útero em uma placa de Petri contendo soro de fosfato frio-tamponado (PBS) no gelo. Em seguida, expor os embriões que estão na decidua envelopada, cortando a parede uterina anterior de um chifre uterino para o outro. Usando tweezers finos, descasque para trás os tecidos envelopadas do decídua e corte o cabo de cordão umbilical para liberar os embriões. Coloque todos os embriões em um novo prato de Petri no gelo até o isolamento do timo.</li>
	<li>Limpe um embrião com 70% de álcool e coloque-o em um novo prato de Petri. Desta etapa sobre, assegure-se de que as circunstâncias estéreis sejam mantidas.</li>
	<li>Cortando perto da mandíbula inferior com uma tesoura, retire a cabeça do embrião e escorra o sangue com uma toalha de papel. Em seguida, fixar o embrião no mesmo prato de Petri em posição supina. Nota: nós cortamos um pedaço da cauda de cada embrião para Insm1 e lacZ Genotyping.</li>
	<li>Usando tesouras, corte a parede torácica lateral horizontalmente ao longo da frente axilar e, em seguida, corte o diafragma para abrir o tórax. O Timo deve agora ser visível como dois lóbulos brancos localizados na frente da traquéia e adjacente ao coração.</li>
	<li>Coloque fórceps de ponta dobrada atrás do Timo e, em seguida, retire o Timo suavemente. Certifique-se de verificar a integridade do timo para confirmar que ele contém dois lóbulos articulados.</li>
	<li>Lave o Timo com 1X PBS e aparar os tecidos conjuntivos e vasos sanguíneos um estereomicroscópio.</li>
</ol>2. cultura do Timo embrionário isolado
<ol><li>Adicionar 500 μL de meio de cultura (RPMI1640 + 15% de soro bovino fetal (FBS) + 100 U/mL de penicilina e 100 μg/mL de estreptomicina) a cada poço de uma placa de 24 poços. Transfira o thymi limpo nos poços com um timo por bem. A Figura 1 exibe o Timo isolado em meios de cultura.</li>
	<li>Para cada Thymus-contendo bem adicionar 2 '-deoxygranosine a uma concentração final de 1,25 mM.</li>
	<li>Cultura o Timo isolado por oito dias, refrescando ambos os meios de cultura e 2 '-deoxygranosine cada dois dias.</li>
</ol>3. estabeleça o espaço subcapsular na cápsula renal
<ol><li>Para preparar a agulha e o tubo de infusão cortada (Figura 2), corte a agulha da veia do couro cabeludo na parte do tubo em um ângulo de 45 ° usando uma tesoura.</li>
	<li>Pesar o rato nu e, em seguida, anestesiá-lo com um pentobarbital (1,5%) injetável (75 μg/g de peso corporal).</li>
	<li>Quando não for observado nenhum reflexo após a pinça do dedo do pé, coloque o mouse sobre a mesa de operação em uma posição lateral direita.</li>
	<li>Com um cotonete do iodo do povidona de 0,5%, desinfete a pele duas vezes na área cirúrgica do interior à parte externa do corpo.</li>
	<li>Usando a tesoura, faça uma incisão da pele de 5 – 9 milímetros paralela à espinha na área renal esquerda (entre a última costela e a crista ilíaca). Em seguida, abra a cavidade abdominal cortando através do tecido e do músculo subcutaneous e exponha o rim.</li>
	<li>Com o rim exposto, use um par de pinças em uma mão para levantar o músculo e tecido adiposo fora da borda da incisão do lado da espinha. Com a outra mão, aperte suavemente o rim para fora (Alternativamente, o rim pode ser espremido usando os dedos de ambas as mãos).</li>
	<li>Para garantir que a cápsula renal é úmida durante a cirurgia, molhe a superfície do rim com soro fisiológico (0,9% NaCl).</li>
	<li>Crie um entalhe na cápsula do rim, e risque delicadamente a cápsula renal no lado direito mais baixo usando a ponta da agulha preparada na etapa 3,1. O tamanho do entalhe deve ser 1/2 – 2/3 larguras do rim; não arranhar no rim.</li>
	<li>Deslize o tubo de perfusão preparado no passo 3,1 para o entalhe na cápsula renal. Dissociar suavemente a cápsula renal com o rim ao longo do lado longo do rim até atingir 3 – 4mm dentro da cápsula renal. Desenhe de volta o tubo de infusão; o espaço subcapsular do rim é estabelecido.</li>
</ol>4. transplante do Timo murino embrionário
<ol><li>Lave o Timo cultivado na etapa 2,3 duas vezes em soro fisiológico para esgotar os meios de cultura.</li>
	<li>Conecte o tubo de infusão cortado preparado na etapa 3,1 a uma seringa em sua interface de conexão da seringa. Aspirar o Timo preparado para o tubo de infusão lentamente.</li>
	<li>Introduza suavemente o tubo de perfusão cortado na cápsula renal e chegue ao pólo superior. Entregar o timo na cápsula renal; Retraia o tubo lentamente ao simultaneamente empurrar o êmbolo da seringa suavemente.</li>
	<li>Usando uma lâmpada de álcool, aqueça levemente a agulha preparada na etapa 3,1. Depois de garantir que todo o Timo está dentro do espaço subcapsular, use a agulha aquecida para cauterizar o Nick.</li>
	<li>Após a cauterização, restaure o rim na cavidade abdominal. Sutura do peritônio e músculo.</li>
	<li>Usando uma sutura de colchão vertical interrompida modificada, feche a incisão da pele (amarre pelo menos três nós e corte afastado toda a linha adicional).</li>
	<li>Usando um cotonete do iodo do povidona, desinfete a incisão. Para aliviar a dor, a injeção subcutaneous do flunixin meglumine (2 μg/g do peso corporal) foi executada durante a cirurgia e então por 3 dias após a cirurgia.</li>
	<li>Até que completamente recuperado da anestesia, mantenha o rato morno a lâmpada infravermelha.</li>
	<li>Mantenha o timo na cápsula renal do receptor por 8 semanas antes de dissecação do Timo transplantado e realizando análise fenotípica como descrito anteriormente5,8,9.</li>
</ol>

<ol><li>Klein, L., Kyewski, B., Allen, P. M., Hogquist, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+and+negative+selection+of+the+T+cell+repertoire%3A+what+thymocytes+see+%28and+don%27t+see%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Positive and negative selection of the T cell repertoire: what thymocytes see (and don't see).</a> Nature Reviews Immunology. 14, 377-391 (2014).</li>
<li>Hogquist, K. A., Baldwin, T. A., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+tolerance%3A+learning+self-control+in+the+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Central tolerance: learning self-control in the thymus.</a> Nature Reviews Immunology. 5, 772-782 (2005).</li>
<li>Spits, H., Touraine, J. L., Yssel, H., de Vries, J. E., Roncarolo, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+host-reactive+and+MHC-restricted+T+cells+in+a+transplanted+severe+combined+immunodeficient+%28SCID%29+patient+suggest+positive+selection+and+absence+of+clonal+deletion%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Presence of host-reactive and MHC-restricted T cells in a transplanted severe combined immunodeficient (SCID) patient suggest positive selection and absence of clonal deletion.</a> Immunological Reviews. 116, 101-116 (1990).</li>
<li>Nagamine, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+cloning+of+the+APECED+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Positional cloning of the APECED gene.</a> Nature Genetics. 17, 393-398 (1997).</li>
<li>Yanagihara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intronic+regulation+of+Aire+expression+by+Jmjd6+for+self-tolerance+induction+in+the+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Intronic regulation of Aire expression by Jmjd6 for self-tolerance induction in the thymus.</a> Nature Communications. 6 (8820), (2015).</li>
<li>Jenkinson, W., Jenkinson, E., Anderson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+2-dGuo-Treated+Thymus+Organ+Cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures.</a> Journal of Visualized Experiments. (18), (2008).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22T-Cell+Development%3A+Methods+and+Protocols%22">T-Cell Development: Methods and Protocols</a>. Bosselut, R., Vacchio, M. S. , Methods in Molecular Biology, vol. 1323 (2016).</li>
<li>Anderson, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Projection+of+an+immunological+self+shadow+within+the+thymus+by+the+aire+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Projection of an immunological self shadow within the thymus by the aire protein.</a> Science. 298 (5597), 1395-1401 (2002).</li>
<li>Takaba, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fezf2+Orchestrates+a+Thymic+Program+of+Self-Antigen+Expression+for+Immune+Tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Fezf2 Orchestrates a Thymic Program of Self-Antigen Expression for Immune Tolerance.</a> Cell. 163 (4), 975-987 (2015).</li>
<li>Morillon, Y. M. 2nd, Manzoor, F., Wang, B., Tisch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+transplantation+of+different+aged+murine+thymic+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and transplantation of different aged murine thymic grafts.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), e52709(2015).</li>
<li>Caetano, S. S., Teixeira, T., Tadokoro, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+the+mouse+thymus+using+2-photon+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of the mouse thymus using 2-photon Microscopy.</a> Journal of Visualized Experiments. (59), e3504(2012).</li>
<li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+Withdrawal+I%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal+Research%22%5BJournal%5D)">Blood Withdrawal I.</a> Lab Animal Research. , JoVE. Cambridge, MA. (2019).</li>
<li>Gierl, M. S., Karoulias, N., Wende, H., Strehle, M., Birchmeier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zinc-finger+factor+Insm1+%28IA-1%29+is+essential+for+the+development+of+pancreatic+beta+cells+and+intestinal+endocrine+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">The zinc-finger factor Insm1 (IA-1) is essential for the development of pancreatic beta cells and intestinal endocrine cells.</a> Genes & Development. 20 (17), 2465-2478 (2006).</li>
<li>Tao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haploinsufficiency+of+Insm1+Impairs+Postnatal+Baseline+%CE%B2-Cell+Mass%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Haploinsufficiency of Insm1 Impairs Postnatal Baseline β-Cell Mass.</a> Diabetes. 67 (12), 2615-2625 (2018).</li>
</ol>

Nenhum conflito de interesses declarado.

A transplantação subcapsular renal do Timo embrionário é um método importante para estudar a função epithelial Thymic das pilhas e o processo da maturação das pilhas de T in vivo. Embora existam vários estudos experimentais sobre cultura e transplante de órgãos do Timo embrionário6,7, nosso protocolo fornece um procedimento alternativo simples na cultura do Timo embrionário murino e subcapsular renal transplantação para o tecido mais velho do timo.
<p class="...

O timo é o órgão imunológico central, dentro dos timócitos Timo passam por seleção positiva e negativa, e tornam-se células T maduras1,2. A seleção anormal positiva ou negativa resulta em imunodeficiência ou patologias auto-imunes,respectivamente3,4. Conseqüentemente, a transplantação do órgão do timo é uma aproximação importante para estudar o processo da seleção das pilhas de T no timo do doador. Este método é particular crucial ao analisar a função epithelial Thymic negociada por mutações genéticas que causam o phenotype letal embrionário quando mutado5.
A fim estudar a maturação de pilhas de T de um receptor no timo transplantado, a prostração de linfócitos do doador dentro do timo é necessária. Para este fim, o Timo embrionário de 14, 15 ou 16 dias (E14, E15, E16) é usualmente selecionado6,7. Thymus de estágios mais maduros pode igualmente com sucesso ser esgotado dos linfócitos do doador tratando com 2 '-deoxyguanosine. Entretanto, um protocolo detalhado para esgotando linfócitos e o uso da cultura mais velha do Timo não tem sido descrito previamente8,9. Embora os protocolos de transplante tenham sido introduzidos por vários estudos10,11, é necessária uma maior modificação e melhoria desses protocolos.
Nosso protocolo é separado em duas partes: (i) depleção de linfócitos T do estágio de desenvolvimento tardio e 18,5 Timo pela cultura em 2 '-deoxyguanosine-contendo meios. (II) transplante do Timo cultivado em receptores. Neste procedimento, nós desenvolvemos uma maneira simples de entregar o grande tecido (E 18.5 Thymus) na cápsula renal com possibilidade reduzida de ferimento de rim. Ao centrar-se no timo mais atrasado da fase, nosso protocolo pode igualmente ser usado diretamente ou com as modificações para a transplantação do timo em vários estágios desenvolventes ou em outros tecidos feitos medida similares.

<table><tbody><tr><td>0,5% de iodopovidona</td><td>Shanghai Likang Desinfetante Hi-Tech Co.Ltd</td><td>20171113</td><td></td></tr><tr><td>0,9% Injeção de cloreto de sódio</td><td>Shandong Qilu Pharmaceuyical Co.Ltd</td><td>2C17112101</td><td></td></tr><tr><td>Seringa estéril de 1 mL</td><td>Solarbio</td><td>YA1090</td><td></td></tr><tr><td>2'-Desoxiguanosina</td><td>MEC</td><td>HY-17563</td><td>1M em DMSO, 1:800 usando (final 1,25mM)</td></tr> <tr><td>Placa de 24 poços</td><td>Corning Incorporated</td><td>Costar 3524</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Agulhas de sutura cirúrgica com rosca</td><td>NingBo Cheng-He Microsurgical Instruments Factory China</td><td>YY0166-2002</td><td></td></tr><tr><td>60mm Placa de cultura de células</td><td>Corning Incorporated</td><td>430166</td><td></td></tr><tr><td>70% ETOH</td><td>LIRCON</td><td>20181221</td><td></td></tr><tr><td>APC anticorpos anti-camundongo CD8a</td><td>Biolegend</td><td>100711</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Pinça fina de ponta dobrada, JZ 10 cm</td><td>Shanghai Medical Devices Group Co., Ltd.</td><td>JD1060</td><td>Para esterilizar antes do uso</td></tr><tr><td>Cefmetazol Sódio para Injeção</td><td>Sichuan Hexin Pharmaceutical co, Ltd</td><td>17062111 079</td><td>6mg em solução de NaCl de 0,5 ml a 0,9%, tesoura de dissecação de peso corporal de 7,5 ul / g</td></tr><tr><td>, JZ 10 cm</td><td>Shanghai Medical Devices Group Co., Ltd.</td><td>JC2303</td><td>Para esterilizar antes do uso Soro</td></tr><tr><td>fetal bovino (FBS?</td><td>Pinça fina de GIBCO</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr>, grupo <td>Co. dos dispositivos médicos de Shanghai de</td> <td>10 cm,</td> Ltd.<td>JD1050</td><td>Para esterilizar antes do uso</td></tr><tr><td>Citometria de fluxo</td><td>BD</td><td>FACSCanto II</td><td></td></tr><tr><td>Flunixin meglumina</td><td>MACLIN</td><td>F810147</td><td>1mg em solução de NaCl a 0,9% de 1ml, 2ul/g de peso corporal</td></tr><tr><td>Fórceps, Dumont#5</td><td>World Precision Instruments</td><td>14098</td><td>Para esterilizar antes do uso</td></tr><tr><td>Lâmpada infravermelha</td><td>OTLAN</td><td>MT-810</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulhas, JZ 14 cm</td><td>Xangai Medical Devices Group Co., Ltd.</td><td>J32010</td><td>Para esterilizar antes</td></tr><tr><td>do uso PE anti-rato CD4</td><td>Biolegend</td><td>100511</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Mistura de penicilina-estreptomicina</td><td>GIBCO</td><td>15140122</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Sal de sódio de pentobarbital</td><td>Sigma</td><td>P3761</td><td>Solução de 1,5% em PBS, 75ug/g de peso corporal</td></tr><tr><td>RPMI1640 Médio</td><td>GIBCO</td><td>C14-11875-093</td><td></td></tr><tr><td>Agulha</td> <td>de veia do couro cabeludoShanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd</td><td>XC001</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de mola</td><td>VANNAS</td><td>S11014-12</td><td>Para esterilizar antes do uso</td></tr><tr><td>estereomicroscópio</td><td>OLYMPUS</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>Cotonete estéril de 15 cm</td><td>Guangzhou Haozheng</td><td>20150014</td><td></td></tr><tr><td>Gaze estéril 5 cm x 7 cm-8P</td><td>Guangzhou Haozheng</td><td>20172640868</td><td></td></tr><tr><td>Estéril PBS (1x)</td><td>Pinça de tecido GENOM</td><td>GNM20012</td><td></td></tr><tr><td>, JZ 12,5 cm</td><td>Shanghai Medical Devices Group Co., Ltd.</td><td>J41010</td><td>Para esterilizar antes de usar</td></tr></tbody></table>

transplantação subcapsular renal do thymus embryonic murine 2 '-deoxyguanosine-tratado em ratos nus

Renal Subcapsular Transplantation of 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Nude Mice

O timo é um importante órgão imunológico central, que desempenha um papel essencial no desenvolvimento e diferenciação de células T. O transplante de timo é um método importante para investigar a função da célula epitelial tímica e a maturação das células T in vivo. Aqui nós descreveremos os métodos experimentais usados dentro de nosso laboratório para transplantar 2 '-deoxyguanosine (para esgotar os linfócitos do doador) timo embrionário tratado na cápsula renal de um rato nu camundongos. Este método é simples e eficiente e não requer habilidades especiais ou dispositivos. Os resultados obtidos através deste método simples mostraram que o Timo transplantado pode eficazmente suportar a produção das pilhas de T do receptor. Adicionalmente, vários pontos-chave no que diz respeito ao protocolo serão ainda mais elucidados.

Aqui nós mostramos o e 18.5 Timo isolado que contem dois lóbulos completos (Figura 1). Além disso, mostramos a agulha da veia do couro cabeludo que foi cortada para formar um chanfro no tubo de infusão (Figura 2). Em seguida, também mostramos uma imagem representativa da posição do Timo que foi transplantado na cápsula renal (Figura 3a) e o Timo após 8 semanas de crescimento dentro dos camundongos receptores (Fi...

Nós fornecemos um método simples e eficiente para transplantar 2 '-deoxyguanosine tratou e 18.5 timo na cápsula renal de um rato nu. Este método deve auxiliar no estudo da função de células epiteliais tímicas e da maturação das células T.

Transplantação subcapsular renal do Thymus Embryonic murine 2 '-Deoxyguanosine-Tratado em ratos nus

The thymus is an important central immune organ, which plays an essential role in the development and differentiation of T cells. Thymus transplantation ...

O transplante de timo é um método importante para investigar a função das células epiteliais de timo e a maturação de células T in vivo. Este protocolo simples e eficiente pode ser usado para isolar e cultivar o camundongo 18.5 timo para posterior transplante em uma cápsula renal. O protocolo para o transplante de timo 18,5 pode ser modificado para transplante timiático em outros estágios de desenvolvimento ou para outros tecidos de tamanho semelhante.Além disso, este procedimento é muito simples. Os detalhes de alguns dos carimbos do caso devem ser revisados cuidadosamente ao executar esta técnica pela primeira vez. Este procedimento contém manipulações detalhadas que podem ser melhor ilustradas com visualização.Após o sacrifício, limpe o camundongo embrionário 18,5 gestante com 70% de etanol e use instrumentos esterilizados autoclavados para fazer um corte em forma de V no abdômen da bexiga até cada chifre do útero. Use uma tesoura para cortar o mesometrium e áreas cervicais e vaginais e colher o útero em uma placa de Petri contendo PBS frio no gelo. Corte a parede uterina anterior de um chifre uterino para o outro para expor os embriões dentro do envelopio para decidir e usar pi

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Immunology and Infection

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Nós desenvolvemos novas ferramentas de laboratório e protocolos para aquisição de imagens intravital do timo. Nossa técnica deve ajudar na identificação de "nichos" dentro do timo, onde o desenvolvimento de células T ocorre.

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Este artigo descreve a metodologia in vivo e in vitro para caracterizar os progenitores de decantação tímica pela análise da cinética de geração, fenótipo e número de suas progênies de células T.

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transplante de pele de espessura total murino é um modelo bem estabelecido para estudar a rejeição em um ambiente alloimmune. Aqui, nós fornecemos um tutorial de cada etapa envolvida na realização de um / c BALB -&gt; C57BL / 6 transplante de pele de espessura total.

Murino Transplante de pele de espessura total

Descrevemos um protocolo para a realização de hepatectomy parcial (PHx) e transplante de células através do baço em NOD. SCID (ASSENTIMENTO. CB17-Prkdcscid/J) ratos. Neste protocolo, uma incisão é feita para expor e fazer a ressecção do lobo esquerdo do fígado seguido por outra incisão para o transplante intrasplenic de células.

Intrasplenic transplante de hepatócitos após Hepatectomy parcial na NOD. Ratos SCID

Aqui, apresentamos um protocolo utilizar injeção guiada por ultra-som de neuroblastoma (NB) e células (ES) de sarcoma de Ewing (estabeleceu linhas celulares e células tumorais do paciente-derivado) biologicamente relevantes locais para criar modelos pré-clínicos confiáveis para câncer pesquisa.

Utilização do ultra-som guiado implantação celular tecido-dirigido para o estabelecimento de Xenografts biologicamente relevantes Tumor metastático

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Intravenosa e Intra-amniótica no Utero transplante no modelo murino

O objetivo do protocolo é mostrar longitudinal intravital acompanhamento em tempo real de timócitos por laser, microscopia em implantes do timo na câmara anterior do olho do rato. A transparência da córnea e vascularização do enxerto permitem gravar continuamente recrutamento de células progenitoras e egresso de células T maduro.

No Vivo controle de timócitos na Câmara Anterior do olho a Laser, microscopia eletrônica de varredura em tempo real

Este protocolo apresenta uma abordagem trans-escleral guiada por visão transpupilar para entregar com segurança e precisão enxertos celulares sub-retinianos, com baixa taxa de complicações cirúrgicas, em receptores de camundongos com ou sem degeneração retiniana.

Transplante transpupilar-guiado trans-escleral de enxertos sub-retinianos em modelo de camundongo com degeneração retiniana

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