Name: Modelo robusto induzido por ligadura de periodontite de murine para a avaliação de neutrófilos orais (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-21T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: Aprenda a estababelecer um modelo de periodontite induzida por ligadura em camundongos para avaliar neutrófilos orais de forma análoga aos humanos. Esta técnica aumenta o tecido gengival inflamado disponível e reduz o uso de animais.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

J. W. C. é apoiado pelos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde (CIHR). Os autores gostariam de agradecer ao Dr. Chunxiang Sun por sua ajuda na realização da coloração azul trypan.

Todos os estudos de urina cumpriram os regulamentos éticos relevantes e foram aprovados pelo Comitê de Cuidados Com Animais da Universidade de Toronto e pelo Research Ethics Board (Protocol 20011930).
1. Instalação da ligadura
NOTA: Este é um procedimento cirúrgico não-estéril que pode ser realizado em uma sala de cirurgia padrão. O uso de animais livres de germes (não cobertos aqui) exige o manuseio dentro de um armário de biossegurança, o uso de instrumentos estéreis e a inoculação da cavidade oral com patógenos periodontais para causar as manifestações clínicas de periodontite.
<ol><li>Administrar anestesia intraperitoneal a camundongos C57BL/6 machos de 8 a 12 semanas de idade, que devem ser aclimatados em suas instalações habitacionais, usando uma agulha hipodérmica estéril de 0,5" 26 G e 1 mL seringa de acordo com as diretrizes do comitê de cuidados e uso de animais institucionais aprovados (IACUC). NOTA: Uma combinação de cetamina (100 mg/kg) e xilamina (10 mg/kg) anestésicos de forma rápida e confiável induz o nível adequado de anestesia para a duração do procedimento.</li>
	<li>Avalie a profundidade anestésica antes e a cada 15 min durante o procedimento, como evidenciado pela perda do reflexo do pedal.</li>
	<li>Posicione o mouse em uma plataforma cirúrgica aquecida(Figura 1A). Estabilizar a maxilo e mandíbula na posição aberta usando faixas elásticas e sustentar o pescoço com um rolo de algodão para ajudar a manter a maxilo em uma orientação mais horizontal (Figura 1B). Cubra o corpo e a cauda do animal para mitigar a perda de calor durante o procedimento.</li>
	<li>Posicione o microscópio cirúrgico na ampliação e iluminação desejadas (se não montadadiretamente ao microscópio) sobre a cavidade oral para visualização da dentição. Enquanto a ampliação desejada é dependente do operador, a visualização ideal da cavidade oral é obtida a 16x.</li>
	<li>Instale uma sutura de seda trançada 5-0 estéril em torno do primeiro (M1) e segundo (M2) molars maxiares dentro do sulco gingival usando fórceps dissidentes. NOTA: As suturas trançadas da seda de um calibre menor podem ser usadas para esta finalidade facilitar uma instalação mais rápida e reduzir a possibilidade de dano macio iatrogenic do tecido.<ol>
<li>Posicione a cauda distal da sutura no lado palatal da dentição e insira o segmento proximal entre o contato de M2 e M3(Figura 2A).</li>
		<li>Envolva a sutura em torno da superfície bucal de M2 e insira-a entre o contato de M1 e m2. Certifique-se de que ambas as extremidades da sutura são puxadas firmemente para conduzir a sutura no sulco gingival e remover toda a folga(Figura 2B).</li>
		<li>Envolva o segmento de sutura proximal em torno da M1, abaixo de sua altura de contorno, e insira-o entre o contato de M1 e M2. Puxe a cauda proximal da sutura firmemente para conduzir a sutura no sulco de gingival e remova toda a folga(figura 2C). NOTA: Se a resistência é observada ao inserir a sutura entre M1 e M2 ou M2 e M3, o contato pode ser aberto ligeiramente usando um explorador dental padrão.</li>
		<li>Amarre as extremidades da sutura com o nó de um cirurgião e aparar as caudas o mais curto possível. Coloque o nó na embrasure gingival entre M1 e M2 no lado palatal da dentição maxiária (Figura 2D). NOTA: Os passos 1.4.1-1.4.4 podem ser repetidos no lado contralateral, se necessário.</li>
		<li>Esterilizar os instrumentos cirúrgicos em um esterilizador de contas de vidro quente entre cada sujeito animal. CUIDADO: As pontas dos fórceps são extremamente afiadas e podem facilmente causar trauma oral e sangramento significativo. Prepare pequenos segmentos de gaze para remover o sangue da cavidade oral e aplicar pressão sobre feridas sangrando ativamente.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Após a instalação da ligadura, retire o rato do aparelho cirúrgico, coloque em uma gaiola limpa uma lâmpada de calor e monitore até se recuperar completamente.</li>
	<li>Individualmente abrigar cada mouse com o enriquecimento ambiental adequado e permitir o acesso ad libitum à água filtrada e purê de comida padrão em um ambiente de temperatura e umidade controlada (12-h light/12-h ciclo escuro) por 7-11 dias. NOTA: Purê de sopa diminui as forças necessárias para a masticação, reduzindo assim a dor associada à alimentação, e ajuda na prevenção da perda prematura da ligadura instalada.</li>
</ol>2. Coleção de amostras
<ol><li>Eutanásia ratos de acordo com as diretrizes aprovadas IACUC. NOTA: A eutanásia individual usando uma câmara de CO2 seguida de deslocamento cervical é o método preferido para este protocolo. Isso pode ser alterado dependendo de experimentos que exigem a colheita de tecidos adicionais.</li>
	<li>Usando uma pipeta, lave imediatamente a cavidade oral com 100 μL de soro soro soro esnito esterilizado 4 °C 1x tampão de fosfato (PBS) sem cálcio e magnésio por 10 s.</li>
	<li>Repita o passo 2.2 2x e coloque cada enxaguar em um único tubo de ensaio estéril cônico de polipropileno mL.</li>
	<li>Transfira o conteúdo para um tubo de ensaio estéril de polipropileno cônico de 50 mL, executando-os através de um filtro de malha de nylon de 40 μm.</li>
	<li>Transfira esses conteúdos para um novo tubo de ensaio estéril de polipropileno cônico de 15 mL. NOTA: A transferência final da amostra para um tubo menor permite a melhor visualização da pelota celular nas próximas etapas.<ol>
<li>Se desejar, retire a ligadura molar (s) e coloque em 300 μL de 1x PBS esterilizado (4 °C, sem cálcio e magnésio) em um tubo de ensaio estéril de polipropileno cônico separado de 15 mL. Agita rasto suavemente e retire a sutura do tubo. Esta amostra é tratada de forma idêntica à amostra de lavagem oral a partir deste ponto em diante.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Adicione 33,3 μL de 16% de paraformaldeído (PFA) para facilitar a fixação da amostra.</li>
	<li>Vortex as amostras imediatamente e incubar no gelo por 15 min.</li>
	<li>Encha o tubo a 15 mL com 1x PBS para diluir PFA, a seguir centrífuga em 1000 x g e 4 °C para 5 min.</li>
	<li>Aspirar o supernatant e resuspender a pelota em 1 mL de triagem celular ativada por fluorescência (FACS) tampão em 4 °C. Conte as células em um hemocytometer ou contador de células automatizada.</li>
	<li>Centrífuga a amostra novamente em 1000 RCF e 4 °C por 5 min.</li>
	<li>Aspirar o supernatant e resuspender a pelota em um volume apropriado de buffer FACS para uma concentração final de 0,5-1,0 x 106 células/50 μL de buffer FACS.</li>
</ol>3. Mancha de anticorpos para análise citométrica de fluxo
NOTA: Rotular e refrigerar todos os tubos FACS necessários antes de usar.
<ol><li>Adicione 1 μL de soro de rato e 2 μL de anticorpo igg anti-mouse a 50 μL da amostra, vórtice imediatamente, e bloqueie o gelo por 20 min.</li>
	<li>Adicione os anticorpos apropriados a cada amostra, vórtice imediatamente, e incubar no gelo por 30 min no escuro. NOTA: A seleção e os volumes de anticorpos dependem de experimentos piloto de otimização prévia adaptados a esta técnica específica.</li>
	<li>Lave amostras com 1 mL de tampão FACS, vórtice brevemente e centrífuga por 5 min a 1000 x g e 4 °C. Repita este passo 2x.</li>
	<li>Resuspenda amostras em 250 μL de tampão FACS, cubra tubos com filme de parafina, envolva em folha de alumínio e segure em 4 °C até a análise. NOTA: É ideal analisar amostras dentro de horas de completar o protocolo devido à perda de sinal fluorescente durante longos períodos de armazenamento. No entanto, as amostras podem ser analisadas 2-3 dias depois, se absolutamente necessário.</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

O elemento mais crítico associado ao uso do modelo de periodontite induzido pela ligadura murine é centrado em torno da retenção da ligadura até o momento do sacrifício ou remoção intencional. A ligadura biofilme-retentive instalada é capaz de induzir uma perda significativa de altura alveolar do osso em tão poucos quanto 6 dias, platô entre o período de 11-16 dias39. A decisão de sacrificar indivíduos animais antes do período máximo de perda óssea, tornando este um modelo muito mais curto de peri...

A doença periodontal (DP) é uma condição osteolítica associada à morbidade hospedeira significativa e carga econômica, que se manifesta pela inflamação gingival e perda de apego de tecidos moles e suporte osseoso para a dentição afetada1,2,3,4. Este processo é regido por interações entre a microbiota oral e o sistema imunológico inato do hospedeiro. Também está associada à exacerbação de outras doenças inflamatórias sistêmicas, incluindo diabetes, doenças cardiovasculares e câncer5,6,7,8. Historicamente, foi a hipótese de que a patogênese pd é dependente de grandes quantidades de bactérias específicas, como Porphyromonas gingivalis9. No entanto, evidências recentes sugerem que o componente microbiano da DP é mediado pelo biofilme odontológico. O biofilme é uma comunidade organizada e complexa de inúmeros microrganismos que podem existir em estados disbióticos e disbióticos saudáveis10,11. O biofilme oral normalmente oferece resistência ao hospedeiro, impedindo o estabelecimento de focos de bactérias patogênicas e promove a estrutura e função ideal do tecido gingival através da regulação da resposta imune do hospedeiro12,13. Perturbações da relação equilibrious entre organismos comensal dentro da cavidade oral e do sistema imunológico hospedeiro podem levar a alterações na homeostase tecidual, resultando em disbacteriose e desenvolvimento das aparências clínicas e radiográficas de marca registrada de PD5,10,12,13,14.
Curiosamente, o estabelecimento de uma disbacteriose oral, embora necessária para o início da DP, não é suficiente para conduzir a DP em todos os indivíduos, iludindo-se para a capacidade da resposta imune do hospedeiro para subverter a transição da microbiota entre os estados simbióticos e disbióticos15. Isso coloca um foco particular sobre os meios através dos quais a DP influencia um dos personagens principais do sistema imunológico inato, ou seja, o granulocito polimorfóide (PMN), ou neutrófilo, a partir de perspectivas locais e sistêmicas16,17.
Em seres humanos, PMNs são recrutados a partir da circulação a uma taxa de ~ 2 x 106 células / h em tecidos conectivos periodontais saudáveis, onde são a população de leukócitos predomáveis. Aqui, eles são posteriormente expulsos do sulco gingival na cavidade oral como um componente do líquido crevicular gingival. Na presença de DP, a neufilia se manifesta dentro da circulação e da cavidade oral, onde essas células efetoras possuem um fenótipo hiperinflamatório que leva à destruição acima mencionada do periodontium17,18,19,20,21,22. Portanto, entender o papel das PMNs na DP e em outras condições inflamatórias sistêmicas é de extrema importância.
Embora seja amplamente aceito que as doenças crônicas estejam reciprocamente ligadas à DP, os mecanismos subjacentes ainda não foram elucidados, contribuindo para dificuldades na gestão dessas condições sistêmicas mórbidas e potencialmente fatais. Vários modelos animais experimentais, cada um com vantagens e desvantagens únicas, têm sido utilizados para estudar a fisiopatologia da DP23,24. Concentrando-se especificamente em modelos de urina, há uma variedade de protocolos através dos quais o estudo da DP é facilitado; no entanto, possuem várias deficiências técnicas e fisiométricas25,26,27,28,29,30,31.
Primeiro, o modelo oral do rato do gavage exige inoculations orais numerosos de micróbios patogénicos periodontais humanos para gerar a inflamação do gingival e a perda do osso. Além disso, é geralmente precedido por um período de tratamento antibiótico para subverter a flora oral murine commensal25. Este modelo muitas vezes requer treinamento especializado para realizar com segurança o gavage oral, usa apenas uma pequena fração de patógenos periodontais do microbioma oral humano mais complexo e requer vários meses para estabelecer a perda de ossos alveolares.
Em contraste, modelos de urina quimicamente induzida utilizam a entrega oral de ácido sulfonic trinitrobenzene (TNBS) ou sódio de sulfato dextran (DSS), agentes comumente usados no estabelecimento de modelos de colite murina durante um período de vários meses para induzir a perda de ossos periodontais26. Modelos à base de abscesso intraoral e extraoral estão disponíveis, que envolvem os incisivos e tecidos de urina do dorsum, bem como calvarium, respectivamente. No antigo modelo abscesso, várias injeções de bactérias são administradas, criando múltiplos abcessos gingival e uma escassez de perda óssea alveolar, limitando seu uso no estudo da DP. Os últimos modelos de abscesso são significativamente mais aptos a estudar a virulência bacteriana, inflamação e resorção óssea em locais fora da cavidade oral, o que elimina a avaliação do periodontium e microbioma oral27,28,29,30,31.
Usando o modelo de periodontite induzido por ligadura, uma sutura de seda trançada tem sido comumente instalada circunferentemente em torno do segundo molar. Como alternativa, um único segmento linear de material de sutura pode ser inserido entre o primeiro e o segundo molares32,33. O objetivo da colocação da ligadura é facilitar o acúmulo bacteriano e gerar disbiose dentro dos sulci de gingival, resultando na inflamação do tecido periodontal e na destruição dos tecidos que compõem o periodontium. Mais notavelmente, este modelo é capaz de produzir significativamente mais perda óssea alveolar em comparação com o modelo de gavage oral34mais comumente usado. Complicando ainda mais o uso do modelo de gavage oral é a resistência natural por várias cepas de camundongos (ou seja, C57BL/6) ao desenvolvimento de perda óssea alveolar. Isso também é problemático, pois esta cepa é a mais utilizada na pesquisa animal baseada em urina35.
Os procedimentos existentes descritos por Marchesan et al. e Abe e Hajishengallis foram concebidos para simplificar o ato técnico de colocar a ligadura33,36. Infelizmente, o protocolo anterior requer equipamentos especializados impressos em 3D e possuem o potencial de perda de ligadura prematura, aumentando assim o uso de animais e os custos associados ao tempo adicional gasto na sala de cirurgia. Além disso, ambos os protocolos geram apenas pequenas regiões do periodontium doente disponíveis para um estudo.
As vantagens que se encontram com esta técnica baseiam-se no estudo simultâneo da disbiose oral e imunologia que regem o periodontium, utilização de animais de baixo custo com diversas origens genéticas e práticas simples de habitação e pecuária. Como tal, os objetivos devem ser maximizar os volumes de tecidos doentes e, na tentativa de praticar os princípios de redução da pesquisa animal, reduzir o consumo animal a um nível tão baixo quanto possível. Isso requer garantir que todos os animais sejam capazes de serem incluídos nas análises experimentais37. No entanto, deve-se notar que não importa qual modelo animal de doença periodontal é utilizado, não há um único modelo que abrange todos os elementos da fisiopatologia da DP humana.
Este novo protocolo emprega a colocação de uma ligadura em torno de vários dentes molar maxiares usando instrumentação e materiais que são encontrados na maioria dos laboratórios. Permite uma quantidade de tempo suficiente instalar facilmente e confiàvelmente uma ligadura que seja pouco susceptível de avulse prematuramente. Finalmente, à medida que as PMNs coordenam a destruição do periodontium em PD, também é apresentada uma nova metodologia para recuperar neutrófilos orais de forma análoga aos seres humanos.

<table><tbody><tr><td>Anticorpo anti-rato F4 / 80</td><td>BioLegend</td><td>123131</td><td>BV421, Clone BM8</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-camundongo Ly6G</td><td>BD</td><td>560602</td><td>PerCP-Cy5.5, Clone 1A8</td></tr><tr><td>C57BL / 6 Camundongos machos</td><td>Charles River</td><td></td><td>8 a 12 semanas de idade</td></tr><tr><td>Tubo de centrífuga cônico</td><td>FroggaBio</td><td>TB15-500</td> Tubo de centrífuga cônico <td>de 15 mL</td></tr><tr><td></td><td>FroggaBio</td><td>TB50-500</td><td>50 mL</td></tr><tr><td>FACS Buffer</td><td>Múltiplo</td><td></td><td>1% BSA (BioShop), 2mM EDTA (Merck), 1x HBSS-/- (Gibco)</td></tr><tr><td>FACSDiva</td><td>BD</td><td></td><td>v8.0.1</td></tr><tr><td>Fibre-Lite</td><td>Dolan-Jenner</td><td></td><td>Modelo 180</td></tr><tr><td>FlowJo</td><td>Tree Star</td><td></td><td>v10.0.8r1</td></tr><tr><td>Bomba de Terapia de Calor</td><td>Hallowell</td><td></td><td>HTP-1500</td></tr><tr><td>Esterilizador de esferas de vidro quente</td><td>Microscópio Eletrônico Ciências</td><td>66118-10</td><td>Germinador 500</td></tr><tr><td>Tesoura de Íris</td><td>Almedic</td><td>7602-A8-684</td><td>Cetamina Reta</td></tr><tr><td></td><td>Vetoquinol</td><td></td><td>100mg/mL</td></tr><tr><td>LSRFortessa</td><td>BD</td><td></td><td>X-20</td></tr><tr><td>Soro de Camundongo</td><td>Filtro de</td> Malha de Nylon Sigma <td>M5905-5ML</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-547</td><td>40 & Micro; m</td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>Fisher Scientific</td><td>28908</td><td>16% (p/v), Livre de Metanol</td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato</td><td>Sigma</td><td>D1408-500ML</td><td>sem CaCl2 e MgCl2, 10x</td></tr><tr><td>Seringas descartáveis de plástico</td><td>BD</td><td>309659</td><td>1 mL</td></tr><tr><td>Soro de rato</td><td>Sigma</td><td>R9759-5ML</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de seda</td><td>Covidien</td><td>SS652</td><td>C13 USP 5-0</td></tr><tr><td>Pinça de Fragmentação</td><td>Almedic</td><td>7726-A10-700</td><td>#1</td></tr><tr><td>Pinça de Fragmentação</td><td>Almedic</td><td>7727-A10-704</td><td>#5</td></tr><tr><td>Microscópio de Dissecação Estéreo</td><td>Carl Zeiss</td><td>28865</td> Agulha Hipósica Estéril <td>Photo-Zusatz</td></tr><tr><td></td><td>BD</td><td>305111</td><td>26G X 1/2"</td></tr><tr><td>Seringa</td><td>BD</td><td>309659</td><td>1 mL</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Rompun</td><td></td><td>20mg/mL</td></tr></tbody></table>

modelo robusto induzido por ligadura de periodontite de murine para a avaliação de neutrófilos orais

Robust Ligature-Induced Model of Murine Periodontitis for the Evaluation of Oral Neutrophils

As principais vantagens do estudo da fisiopatologia da doença periodontal utilizando modelos de urina são o custo reduzido dos animais, a variedade de cepas geneticamente modificadas, o grande número de análises que podem ser realizadas em tecidos macios e duros colhidos. No entanto, muitos destes sistemas estão sujeitos a críticas processuais. Como alternativa, o modelo induzido pela ligadura da doença periodontal, impulsionado pelo desenvolvimento localizado e retenção de um microbioma oral disbiótico, pode ser empregado, o que é rapidamente induzido e relativamente confiável. Infelizmente, as variantes do protocolo de periodontite murine induzida por ligadura são isoladas para regiões focais do periodontium e sujeitas à avulsão prematura da ligadura instalada. Isso minimiza a quantidade de tecido disponível para análises subsequentes e aumenta o número de animais necessários para estudo. Este protocolo descreve as manipulações precisas necessárias para colocar ligaduras molar estendidas com melhor retenção e uso de uma nova técnica de lavagem para recuperar neutrófilos orais em camundongos com uma abordagem alternativa que atenua o referido desafios técnicos.

Dados representativos de citometria de fluxo de amostras de lavagem oral de uma ingênua(Figura 3A)e inflamado(Figura 3B) murine cavidade oral secundária à periodontite induzida pela ligadura são fornecidos. A recuperação de PMNs de uma ligadura instalada também é demonstrada(Figura 3C). As tensões do canal do cytometer do fluxo foram calibradas manualmente, e a compensação foi execu...

Este artigo apresenta um protocolo para estabelecer um modelo induzido por ligadura de periodontite murine envolvendo múltiplos molares maxilars, resultando em áreas maiores do tecido gingival envolvido e osso para análise posterior, bem como redução do uso animal. Uma técnica para avaliar neutrófilos orais de uma forma análoga aos seres humanos também é descrita.

Modelo robusto induzido por ligadura de periodontite de murine para a avaliação de neutrófilos orais

The main advantages of studying the pathophysiology of periodontal disease utilizing murine models are the reduced cost of animals, array of genetically ...

O protocolo descrito aqui fornece aos pesquisadores um método para estudar neutrófilos orais dentro de um modelo animal induzido por ligadura de doença periodontal de forma análoga aos participantes humanos. A principal vantagem dessa técnica é destacada pelo aumento do volume de tecidos gengival inflamados disponíveis para análise posterior, o que reduz o uso de animais. Nossa capacidade de recuperar as ligaduras revestidas de biofilme ao redor dos dentes permite a simulação de um tratamento eficaz de uma doença periodontal localizada.O uso desse modelo poderia ser aplicado no estudo dos efeitos sistêmicos da periodontite em um modelo animal, devido ao aumento das áreas de tecidos gengival inflamados. A familiarização com o uso de instrumentos microcirúrgicos e microscópios de dissecção, bem como amarrar nós do cirurgião antes de manusear os animais vivos, é altamente aconselhável. A demonstração visual desta técnica é fundamental para reduzir o comprimento da curva de aprendizagem necessária para alcançar a colocação de ligaduras proficientes.Demonstrando o procedimento será Jeff Chadwig, um estudante de pós-graduação do meu laboratório. Comece posicionando o mouse em uma platafo

robust-ligature-induced-model-murine-periodontitis-for-evaluation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Os modelos animais provaram ser ferramentas valiosas para a definição de acolhimento e de patógenos mecanismos específicos que contribuem para o desenvolvimento da inflamação crônica. Aqui nós descrevemos um modelo do rato de infecção oral com o patógeno humano Porphyromonas gingivalis e metodologias detalhe para avaliar a progressão da inflamação em sites locais e sistêmicos.

Um modelo de rato para induzida por patógeno inflamação crônica no local e sistêmica Sites

Neste estudo, um modelo de indução de periodontite em ratos é apresentado através de uma combinação de ligadura retentiva e injeções repetitivas de lipopolissacarídeo derivado de Porphyromonas gingivalis, durante 14 dias ao redor dos primeiros molares superiores. As técnicas de ligadura e injeção de LPS foram eficazes na indução de peridontite, resultando em perda óssea alveolar e inflamação.

Indução de periodontite através de uma combinação de ligadura e injeção de lipopolissacarídeo em um modelo de rato

Este é um relato de um modelo experimental de periimplantite induzida por ligadura em camundongos. Descrevemos todos os passos cirúrgicos, desde o manejo pré e pós-operatório dos animais, extrações, colocação de implantes e periimplantite induzida por ligadura.

Modelo Experimental de Periimplantite Induzida por Ligadura em Camundongos

Este estudo descreve um método de ligadura de nylon 6-0 modificado para indução de periodontite em camundongos, que é altamente reprodutível e representa uma alternativa para os pesquisadores estudarem a doença periodontal desde seu desenvolvimento até suas consequências patológicas.

Modelo murino de periodontite avançada induzida por ligadura de náilon no segundo molar superior

Neste vídeo, demonstramos o procedimento de ativação CD40-e expansão de células B murino de esplenócitos de camundongos C57BL / 6, que pode ser usado como um modelo de células apresentadoras de antígenos (APC) para estudar a indução de imunidade.

Modelo murino de CD40-ativação de células B

Biofilmes formados nas superfícies dos dentes são altamente complexos e expostos a constante inata e exógenos desafios ambientais, que modulam sua arquitetura, fisiologia e transcriptoma. Nós desenvolvemos uma caixa de ferramentas para examinar a composição, organização estrutural e expressão gênica de biofilmes orais, que pode ser adaptado para outras áreas de pesquisa biofilme.

Uma ferramenta analítica-box para avaliação bioquímica, estrutural e Transcriptoma abrangente de Biofilmes Oral Mediada por estreptococos do grupo mutans

Este protocolo descreve um ensaio qRT-PCR de alto rendimento para a análise de assinaturas de expressão de IFN tipo I e III. O ensaio discrimina diferenças de par de bases únicas entre os transcritos altamente semelhantes desses genes. Por meio da montagem em lote e pipetagem robótica, os ensaios são consistentes e reprodutíveis.

De alto rendimento quantitativo em tempo real de RT-PCR Ensaio para Determinar Perfis de Expressão do tipo I e III do interferão subtipos

O protocolo descreve intubação zebrafish adulto com um biológico; em seguida, dissecando e preparar o intestino para citometria, microscopia confocal e qPCR. Este método permite a administração de compostos bioativos para monitorar a absorção intestinal e o estímulo imune local evocado. É relevante para a dinâmica intestinal da profilaxia oral de teste.

Intubação oral de Zebrafish adulto: um modelo para avaliar a absorção Intestinal de compostos bioativos

Aqui nós fornecemos protocolos detalhados para a administração oral de antibióticos para ratos, coleta de amostras fecais, extração de DNA e quantificação de bactérias fecais por qPCR.

Polimerase quantitativos baseados na reação em cadeia análises de murino Microbiota Intestinal após o tratamento antibiótico Oral

Aqui, nós fornecemos um protocolo detalhado para um modelo de administração oral usando Galleria mellonella larvas e como caracterizar induzido inatas respostas imunes. Usando este protocolo, será capazes de usar a alimentação forçada método mellonella g. pesquisadores sem experiência prática.

Um modelo de administração Oral Galleria mellonella para respostas imunes Study Commensal-Induced inata

Aprenda a estababelecer um modelo de periodontite induzida por ligadura em camundongos para avaliar neutrófilos orais de forma análoga aos humanos. Esta técnica aumenta o tecido gengival inflamado disponível e reduz o uso de animais.

Modelo robusto induzido por ligadura de periodontite de murine para a avaliação de neutrófilos orais

Explorar mais vídeos