Angiografia por fluorescência para avaliação da perfusão de aneurisma e patência da artéria parental em modelos de aneurisma de ratos e coelhos
24 de julho de 2019
Nós apresentamos um protocolo para avaliar eficientemente a perfusão do aneurysm e a permeabilidade da embarcação do aneurysm do Sidewall nos ratos e nos coelhos, usando a angiografia Video Fluorescein-baseada da fluorescência (FVA). Com um valor preditivo positivo de 92,6%, é um método simples, mas muito eficaz e econômico, sem necessidade de equipamentos especiais.
Este método é uma técnica confiável e fácil para visualizar o fluxo sanguíneo em tempo real em aneurismas e vasos e pode ser usado em diferentes modelos animais. A principal vantagem dessa técnica é que ela facilita a visualização do fluxo sanguíneo durante a cirurgia sem exigir dispositivos caros ou cirurgia extensiva. Antes de iniciar o procedimento use fita preta para fixar um filtro de bandpass verde para atuar como um filtro de excitação em uma lanterna.
E verifique se a lanterna só emite luz azul. Equipar a câmera com um filtro de bandpass verde para funcionar como um filtro de luz de emissão. Apenas a luz verde deve agora ser capaz de passar.
Em seguida, desinfete o espaço de trabalho com uma solução desinfetante e cubra a mesa com cortinas estéreis para evitar contaminação. Para realizar a angiografia de vídeo fluoresceína ou FVA em um coelho confirmar que o animal anestesiado não responde ao estímulo da dor antes de posicionar o coelho na posição supina. Raspe o pescoço ao redor do músculo estenicleidomastóico.
Concentre a câmera na artéria dissecada e use papel alumínio para cobrir uma seringa de cinco mililitros contendo 100 miligramas/mililitro de sódio fluoresceína. Desligue as luzes o máximo possível e injete 0,3 mililitros/quilograma de sódio fluoresceína intravenosamente na porta de injeção do cateter. Em seguida, lave a seringa com 0,5 mililitros de solução salina para garantir que todo o corante tenha sido injetado.
E ilumine imediatamente o campo cirúrgico com a lanterna modificada. Assim que a luz é ligada começar a filmar com a câmera modificada. O fluxo sanguíneo deve ser visível dentro de alguns segundos da injeção.
Para análise macroscópica do vaso após a angiografia ressecção dos aneurismas e do complexo da artéria dos pais em animais de acompanhamento, ou realizar confirmação visual do fluxo observando o preenchimento do aneurisma e/ou bypass após a remoção dos clipes temporários. Neste estudo representativo, a FVA pôde ser realizada em oito em cada 10 coelhos. Dos 16 aneurismas identificados nos oito coelhos, dois aneurismas demonstraram perfusão persistente da artéria parental, enquanto a AVV identificou cinco casos com perfusão residual.
14 aneurismas de coelho não apresentaram perfusão residual macroscopicamente, enquanto 11 foram posteriormente detectados usando FVA. A perfusão residual foi observada macroscopicamente em 23 dos 48 ratos, e os outros 25 ratos não apresentaram sinais macroscópicos de perfusão residual. 22 dos 23 aneurismas sem perfusão macroscópica foram então confirmados usando FVA.
No geral, 25 dos 27 casos combinados de coelhos e ratos poderiam ser confirmados, resultando em um valor preditivo positivo de 92,6% uma taxa de sensibilidade de 100% e uma especificidade de 94,1%As coisas mais importantes ao tentar este procedimento são dissecar os vasos corretamente e trabalhar em uma sala escura ao administrar e visualizar a fluoresceína. Este procedimento pode ser usado em qualquer modelo animal para avaliar o fluxo sanguíneo em qualquer vaso visível.
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Visão Geral
Este artigo apresenta um protocolo para avaliar a perfusão de aneurismas e a patência vascular utilizando angiografia por vídeo com fluoresceína (FVA) em modelos animais (ratos e coelhos). O método é notável por seu alto valor preditivo positivo de 92,6%, e destacam-se sua simplicidade e custo-efetividade, não exigindo equipamentos especiais.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Biologia vascular
- Imagem de fluorescência
Antecedentes
- Os aneurismas representam desafios clínicos significativos em termos de avaliação da perfusão.
- Os métodos existentes podem exigir equipamentos caros e procedimentos cirúrgicos extensos.
- A angiografia por vídeo com fluoresceína oferece uma solução para visualização em tempo real.
- A versatilidade da técnica em diferentes modelos animais é notável.
Objetivo do Estudo
- Desenvolver um método confiável para visualizar o fluxo sanguíneo em aneurismas.
- Avaliar a perviedade vascular sem a necessidade de equipamentos caros.
- Fornecer um protocolo simples que possa ser amplamente implementado na pesquisa.
Métodos Utilizados
- A angiografia por vídeo com fluorescência (FVA) foi a plataforma principal utilizada.
- Os animais utilizados incluíram ratos e coelhos, com avaliação específica do fluxo sanguíneo durante e após a cirurgia.
- Nenhum fluxo de trabalho de multiômica foi mencionado.
- O procedimento envolveu anestesiar os animais, preparar o local cirúrgico, injetar fluoresceína sódica e utilizar uma configuração modificada de câmera.
- Os passos principais incluíram garantir iluminação mínima durante a visualização e um tempo preciso na captura de imagens após a injeção.
Resultados Principais
- O método visualizou com sucesso o fluxo sanguíneo em 8 dos 10 coelhos e identificou casos de perfusão residual significativa.
- De 16 aneurismas avaliados, 11 foram detectáveis pela FVA e não tinham sido observados macroscopicamente.
- Em ratos, a perfusão residual foi confirmada em 22 dos 23 aneurismas sem sinais macroscópicos visíveis.
- No geral, uma combinação de 25 dos 27 casos totais mostrou confirmação de perfusão utilizando FVA.
Conclusões
- Este procedimento demonstra uma grande capacidade para avaliar eficazmente o fluxo sanguíneo em aneurismas.
- A aplicação da FVA facilita a visualização cirúrgica em tempo real e a avaliação do status de perfusão.
- As implicações se estendem para uma melhor compreensão e técnicas de avaliação de condições vasculares em ambientes de pesquisa.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
A angiografia por fluorescência em vídeo (AFV) fornece um método de baixo custo e sem necessidade de equipamentos para avaliação em tempo real da perfusão do aneurisma e da patência da artéria progenitora em modelos pré-clínicos. Sua alta sensibilidade e especificidade permitem a detecção confiável de perfusão residual, possibilitando a identificação precoce de oclusão incompleta em modelos de aneurisma. Essa capacidade auxilia na desmistificação mecanicista de intervenções vasculares, oferecendo uma leitura quantitativa e reprodutível para avaliação pré-clínica da eficácia de dispositivos e técnicas cirúrgicas.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia Farmacêutica
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Valor Científico: Permite a investigação de hipóteses terapêuticas por meio da visualização da dinâmica do fluxo sanguíneo em modelos de aneurisma.
- Valor Operacional: Apoia a validação funcional de alvos por meio da avaliação direta e em tempo real da perfusão, sem necessidade de equipamentos de imagem caros.
Desenvolvimento de Triagem e Ensaio
- Valor Científico: Fornece resultados quantitativos e binários de perfusão (presente/ausente) que podem ser padronizados entre estudos.
- Valor Operacional: Facilita a preparação do ensaio por meio de injeção simples de fluoresceína e configuração modificada de lanterna/câmera, promovendo a reprodutibilidade.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Valor Científico: Conecta a descoberta à validação pré-clínica ao confirmar a oclusão de aneurismas e a integridade da artéria principal em ratos e coelhos.
- Valor Operacional: Fornece uma métrica de perfusão transponível que se alinha com os pontos finais clínicos para avaliação do tratamento de aneurismas.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
A AVF se insere no continuum de descoberta, desde a validação inicial do modelo até a avaliação pré-clínica, oferecendo uma leitura baseada em perfusão que orienta decisões de avançar/não avançar antes da otimização do composto líder.
- Biologia da Descoberta: Apoia a verificação de hipóteses ao revelar perfusão residual que pode indicar falha no tratamento em modelos de aneurisma.
- Triagem: Permite avaliação padronizada e reprodutível da patência vascular em múltiplos animais e pontos temporais.
- Análises: Gera resultados claros de perfusão (macroscópicos e confirmados por AVF) que permitem comparação entre grupos controle e de intervenção.
- Pesquisa Translacional: Conecta dados pré-clínicos de perfusão à relevância clínica ao validar a oclusão em modelos de aneurisma anatomicamente relevantes.
- Reutilização Empresarial: Representa uma técnica independente de plataforma e de baixa barreira, aplicável em diversos programas de pesquisa vascular.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva em modelos de aneurisma ao detectar perfusão não identificada pela inspeção macroscópica.
- Valor Operacional: Requer apenas fluoresceína sódica, uma lanterna e filtros para câmera, permitindo uso de baixo custo e alto rendimento.
- Valor Estratégico: Reduz o risco biológico em programas pré-clínicos ao melhorar a precisão da avaliação de oclusão.
- Impacto no Portfólio: Apoia a priorização ajustada ao risco de intervenções em aneurismas com base em desfechos de perfusão validados.
Considerações sobre a Implementação
- Requer especialização em dissecação microcirúrgica de vasos e manuseio de modelos de aneurisma.
- Necessita de um ambiente escurecido e uma lanterna modificada com filtros de excitação azul e emissão verde.
- Exige padronização da dose de fluoresceína (0,3 mL/kg) e lavagem com solução salina para obter um sinal consistente.
- Envolve considerações de adaptação para diferentes tamanhos de vasos e anatomia específica por espécie.
- Limita-se a vasos superficiais ou acessíveis devido à dependência da penetração de luz externa.
