Diferenciação Pan-Myeloid do sangue humano do cabo derivado CD34+ da haste hematopoietic e das pilhas do progenitor

Este protocolo pode ser usado para estudar as alterações moleculares e celulares que ocorrem durante a diferenciação mielóide normal das células-tronco hematopoiéticas e progenitoras humanas. A principal vantagem deste protocolo é que ele permite a diferenciação de células positivas CD34 ao longo de todas as quatro linhagens mieloides, incluindo megacaiócitos, eritrócitos, granuócitos e monócitos. Demonstrando o procedimento será Aditi Bapat, uma pós-doutora do meu laboratório.

Para o isolamento celular mononuclear de uma amostra de sangue do cordão umbilical humano, esterilize a superfície externa de um saco de sangue do cordão umbilical com 70% de etanol antes de transferir o conteúdo do saco para uma garrafa plástica estéril de 250 mililitros dentro de um armário de segurança biológica. Diluir o sangue com um volume igual de temperatura ambiente A solução salina tamponada de Hank, e adicionar 15 mililitros de fracionamento de células mononucleares médio para cada um dos cinco tubos cônicos estéreis de 50 mililitros. Após uma mistura suave, despeje cuidadosamente 30 mililitros do sangue diluído do cordão umbilical no meio de fracionamento mononuclear em cada tubo, segurando os tubos de 50 mililitros em um ângulo para ajudar a evitar a mistura das camadas.