Name: Avaliando os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo em ratos usando movimento vertical do elevador e rotação de roda-gigante (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 18 s
Description: Aprenda a avaliar os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo em ratos usando movimento vertical de elevador e rotação de roda-gigante. Estes protocolos ajudam a revelar a integridade do sistema nervoso autônomo.

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Este trabalho foi apoiado em parte pelo Conselho de Bolsas de Pesquisa de Hong Kong, Programa de Carreira Inicial, Projeto #21201217 para C. L. O dispositivo FWR tem uma patente na China: ZL201120231912.1.

O presente estudo e os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética para Experimentação Animal da Segunda Universidade Médica Militar (Xangai, China), de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais De Laboratório (Conselho Nacional de Pesquisa dos EUA, 1996).
1. Animais
<ol><li>Use ratos Sprague-Dawley (SD) de dois meses (200-250 g). Para cada ensaio comportamental, use um grupo separado de ratos. Use sempre o controle separado e grupos experimentais. NOTA: Houve dois testes autônomos: EVM e FWR. O EVM tinha três condições além de um grupo controle (= 4) com três ensaios comportamentais (feixe de equilíbrio, contagem de defecação e campo aberto = 3) com 8 ratos em cada um para um total de 96 ratos (4 x 3 x 8). A FWR tinha uma condição além de um grupo controle (= 2) com três ensaios comportamentais (feixe de equilíbrio, contagem de defecações e campo aberto = 3) com 8 ratos em cada um para um total de 48 ratos (2 x 3 x 8). No total, reportamos 144 ratos.</li>
	<li>Roedores de gaiola uma temperatura constante de 25 °C e 60%-70% de umidade.</li>
	<li>Casa roedores em 12 h/12 h ciclos claro/escuro com acesso a alimentos e água potável ad libitum. NOTA: Uma vez que os seguintes protocolos são experimentos comportamentais, os ratos devem ser tratados suavemente. O manuseio dos animais deve estar com as duas mãos com suporte corporal e traseiro, para não induzir ansiedade.</li>
	<li>Realizar experimentos (EVM e FWR) e ensaios de avaliação (feixe de equilíbrio e avaliação de campo aberto) na escuridão para minimizar as pistas visuais.</li>
</ol>2. Dispositivo de movimento vertical do elevador
<ol><li>Realize os procedimentos de movimento vertical do elevador em completa escuridão para minimizar as pistas visuais.</li>
	<li>Coloque os roedores na caixa plexiglas (22,5 cm x 26 cm x 20 cm). Aqui a caixa Plexiglas pode acomodar quatro roedores (dispositivo feito medida).</li>
	<li>Certifique-se de que a caixa está fechada e fechada com segurança para evitar que roedores caiam. Coloque a caixa plexiglass na almofada do elevador do dispositivo de movimento vertical do elevador (dispositivo personalizado).</li>
	<li>Ligue o dispositivo de movimento vertical do elevador para a configuração mais baixa para aclimatação.</li>
	<li>Defina a amplitude como 22 cm para cima e 22 cm abaixo do neutro. Alterar gradualmente o movimento vertical do elevador da seguinte forma:<ol>
<li>Definir os períodos iniciais como 2.500 ms para 5 min, 2.000 ms para 5 min e 1.500 ms por 5 min.</li>
		<li>Use um período de teste de 1000 ms por 2 h.</li>
		<li>Desacelere o dispositivo ao contrário usando períodos de 1500 ms por 5 min, 2000 ms por 5 min e 2500 ms por 5 min.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Dispositivo de rotação de roda gigante
<ol><li>
Configuração do dispositivo de rotação de roda gigante
	<ol>
<li>Coloque o recipiente de plexiglass (22,5 cm x 26 cm x 20 cm) em um banco de madeira (dispositivo personalizado).</li>
		<li>Coloque os roedores no recipiente de plexiglass com o longo eixo do corpo perpendicular à haste de rotação horizontal da roda gigante (dispositivo feito medida). NOTA: A colocação com o corpo perpendicular à haste horizontal garante a estimulação dos órgãos de otolito (direção anterior-posterior e vertical) durante a rotação.</li>
		<li>Feche a caixa de plexiglass com segurança.</li>
		<li>Coloque o segundo conjunto de roedores no recipiente de plexiglass com o longo eixo do corpo perpendicular à haste de rotação horizontal no segundo braço do dispositivo de rotação da roda gigante. Use um segundo conjunto de roedores com massa semelhante para equilibrar a roda gigante.</li>
		<li>Feche com segurança a caixa de plexiglass e coloque no dispositivo de rotação da roda gigante.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Procedimento de rotação da roda gigante
	<ol>
<li>Realize os procedimentos de rotação da roda gigante em completa escuridão para minimizar as pistas visuais.</li>
		<li>Inicie a roda gigante girando em sentido horário a 16°/s2 para atingir uma velocidade angular de 120°/s, e depois comece a desacelerar a 48°/s2 para atingir 0°/s. Após uma pausa de 1 s, faça com que o recipiente continue girando em direção anti-horário da mesma forma que acima (aceleração a 16°/s2 para atingir uma velocidade angular de 120°/s e, em seguida, desaceleração a 48°/s2 para chegar a 0°/s). O ciclo no sentido horário-counter-clock requer aproximadamente 10 s para atingir sua posição inicial.</li>
		<li>Continue a rotação no sentido horário para 2 h por sessão para aproximadamente 720 rotações.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Avaliação de EVM e FWR
NOTA: A avaliação do dispositivo de rotação de roda gigante e o movimento vertical do elevador é feita por três procedimentos: testes de feixe de equilíbrio, contagem de defecações e exame em campo aberto. Procedimentos idênticos são usados para avaliar o movimento vertical do elevador. Esses procedimentos de avaliação devem ser feitos o mais rápido possível após a rotação da roda gigante ou o movimento vertical do elevador.
<ol><li>
Trave
	<ol>
<li>
Configuração de feixe de equilíbrio
		<ol>
<li>Configure o balanço10,11,12 colocando dois banquinhos de madeira (aproximadamente 0,75 m de altura) no campo experimental, aproximadamente 110 cm de distância.</li>
			<li>Coloque uma caixa de plástico preta (15 cm x 15 cm x 8 cm) no banco de acabamento.</li>
			<li>Coloque um feixe de madeira estreito (2,5 cm x 130 cm) entre os dois bancos, deixando uma distância de 100 cm entre as bordas do banco, do banco de partida até o banco de acabamento. NOTA: A entrada da caixa de plástico preta deve estar na linha de chegada dos 100 cm.</li>
			<li>Coloque uma lâmpada no banco de partida. Ligue a lâmpada.</li>
			<li>Desligue as luzes da sala e certifique-se de que o quarto esteja o mais escuro possível. Isso garante que o roedor siga a direção do feixe de equilíbrio da região iluminada até a região obscurecida.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Equilibrar procedimentos de feixe NOTA: O ensaio de coordenação motora do feixe de equilíbrio é avaliado medindo o tempo levado para atravessar o feixe de madeira elevado.<ol>
<li>Treine cada roedor diariamente por 3 dias consecutivos, antes do período de exame, a fim de alcançar um desempenho estável na viga de equilíbrio10. Treine introduzindo o rato no feixe no canto iluminado e levando-o a atravessar a viga. Eventualmente, o rato atravessará por sua própria vontade. Ratos no protocolo atual levaram 3,6 ± 0,9 segundos. NOTA: Alguns roedores não conseguem um desempenho estável durante o treinamento e devem ser excluídos. Alguns roedores não realizam a tarefa, enquanto outros não têm motivação para atravessar a viga. O desempenho estável foi de dois períodos consecutivos de teste de tempos de travessia inferiores a 4 segundos. Se um rato cair durante o treinamento ou avaliação, ele deve ser categorizado como um rato 'cair' e não avaliado mais adiante.</li>
			<li>Para o procedimento real, coloque o roedor treinado no banco de partida perto da luz e pressione simultaneamente comece em um cronômetro. O roedor deve cruzar o feixe de equilíbrio rapidamente e entrar na caixa preta no banco de acabamento.</li>
			<li>Pressione comece no cronômetro assim que o roedor estiver no lugar e pressione para quando o nariz entrar na caixa escura no banco de acabamento. O tempo para atravessar o feixe é do banco de partida até o fim do banco. NOTA: Uma vez treinado o roedor, você pode realizar uma intervenção ou manipulação, como induzir doença de movimento, antes da avaliação. Você também pode obter uma medição de linha de base, antes da intervenção, usando o tempo para atravessar a última sessão de treinamento.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Contagem de defecações
	<ol>
<li>Coloque o recipiente de plexiglass contendo os quatro roedores em um banco após o período de teste da roda gigante.</li>
		<li>Remova os roedores e coloque em caixas individuais de campo aberto (abaixo).</li>
		<li>Conte o número de pelotas de fezes na caixa de plexiglass atribuída a cada roedor. NOTA: Uma medição de linha de base pode ser obtida, para comparação com a avaliação após o movimento do elevador, contando pelotas de fezes antes de passar pelo movimento vertical do elevador.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Exame de campo aberto
	<ol>
<li>Coloque os roedores na caixa de campo aberto (40 cm x 40 cm x 45 cm).</li>
		<li>Registre o comportamento de campo aberto usando uma câmera de vídeo IR por 3 min28,29,30.</li>
		<li>Determine a distância total percorrida. NOTA: É muito importante NÃO colocar o roedor na caixa de campo aberto antes do movimento vertical do elevador. O ambiente deve ser novo para o roedor. Portanto, as medidas de linha de base NÃO devem ser tomadas para exame em campo aberto.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Balaban, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vestibular+autonomic+regulation+%28including+motion+sickness+and+the+mechanism+of+vomiting%29%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Neurology%22%5BJournal%5D)">Vestibular autonomic regulation (including motion sickness and the mechanism of vomiting).</a> Current Opinion in Neurology. 12, 29-33 (1999).</li>
<li>Reason, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motion+sickness+adaptation%3A+a+neural+mismatch+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Motion sickness adaptation: a neural mismatch model.</a> Journal of the Royal Society of Medicine. 71, 819-829 (1978).</li>
<li>Keshavarz, B., Hettinger, L. J., Kennedy, R. S., Campos, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstrating+the+potential+for+dynamic+auditory+stimulation+to+contribute+to+motion+sickness%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+One%22%5BJournal%5D)">Demonstrating the potential for dynamic auditory stimulation to contribute to motion sickness.</a> PLOS One. 9, 101016(2014).</li>
<li>Stoffregen, T. A., Chen, F. C., Varlet, M., Alcantara, C., Bardy, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Getting+your+sea+legs%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Getting your sea legs.</a> PLoS One. 8, 66949(2013).</li>
<li>Smart, L. J. Jr, Pagulayan, R. J., Stoffregen, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-induced+motion+sickness+in+unperturbed+stance%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Self-induced motion sickness in unperturbed stance.</a> Brain Research Bulletin. 47, 449-457 (1998).</li>
<li>Wang, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+change+in+NMDA+receptor+signaling+and+GABAA+receptor+expression+in+rat+caudal+vestibular+nucleus+during+motion+sickness+habituation%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Temporal change in NMDA receptor signaling and GABAA receptor expression in rat caudal vestibular nucleus during motion sickness habituation.</a> Brain Research. 1461, 30-40 (2012).</li>
<li>Cai, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamatergic+vestibular+neurons+express+FOS+after+vestibular+stimulation+and+project+to+the+NTS+and+the+PBN+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Glutamatergic vestibular neurons express FOS after vestibular stimulation and project to the NTS and the PBN in rats.</a> Neuroscience Letters. 417, 132-137 (2007).</li>
<li>Cai, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+Fos+protein+expression+in+rat+caudal+vestibular+nucleus+is+associated+with+motion+sickness+habituation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Decreased Fos protein expression in rat caudal vestibular nucleus is associated with motion sickness habituation.</a> Neuroscience Letters. 480, 87-91 (2010).</li>
<li>Wang, J. Q., Qi, R. R., Zhou, W., Tang, Y. F., Pan, L. L., Cai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+Gene+Expression+profile+in+the+rat+caudal+vestibular+nucleus+is+associated+with+individual+differences+in+motion+sickness+susceptibility%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Differential Gene Expression profile in the rat caudal vestibular nucleus is associated with individual differences in motion sickness susceptibility.</a> PLoS One. 10, 0124203(2015).</li>
<li>Zhou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+and+age+differences+in+motion+sickness+in+rats%3A+The+correlation+with+blood+hormone+responses+and+neuronal+activation+in+the+vestibular+and+autonomic+nuclei%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Aging+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Sex and age differences in motion sickness in rats: The correlation with blood hormone responses and neuronal activation in the vestibular and autonomic nuclei.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 9, 29(2017).</li>
<li>Wang, J., Liu, J., Pan, L., Qi, R., Liu, P., Zhou, W., Cai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Storage+of+passive+motion+pattern+in+hippocampal+CA1+region+depends+on+CaMKII%2FCREB+signaling+pathway+in+a+motion+sickness+rodent+model%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Storage of passive motion pattern in hippocampal CA1 region depends on CaMKII/CREB signaling pathway in a motion sickness rodent model.</a> Scientific Reports. 7, 43385(2017).</li>
<li>Qi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-cholinergics+mecamylamine+and+scopolamine+alleviate+motion+sickness-induced+gastrointestinal+symptoms+through+both+peripheral+and+central+actions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Anti-cholinergics mecamylamine and scopolamine alleviate motion sickness-induced gastrointestinal symptoms through both peripheral and central actions.</a> Neuropharmacology. 146, 252-263 (2019).</li>
<li>Luong, T. N., Carlisle, H. J., Southwell, A., Patterson, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+motor+balance+and+coordination+in+mice+using+the+balance+beam%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Assessment of motor balance and coordination in mice using the balance beam.</a> Journal of Visualized Experiments. (49), e2376(2011).</li>
<li>Kalueff, A. V., Minasyan, A., Tuohimaa, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+characterization+in+rats+using+the+elevated+alley+Suok+test%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Behavioural characterization in rats using the elevated alley Suok test.</a> Behavioural Brain Research. 30 (1), 52-57 (2005).</li>
<li>Piot-Grosjean, O., Wahl, F., Gobbo, O., Stutzmann, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+sensorimotor+and+cognitive+deficits+induced+by+a+moderate+traumatic+injury+in+the+right+parietal+cortex+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Assessment of sensorimotor and cognitive deficits induced by a moderate traumatic injury in the right parietal cortex of the rat.</a> Neurobiology of Disease. 8 (6), 1082-1093 (2001).</li>
<li>Goldstein, L. B., Davis, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beam-walking+in+rats%3A+Studies+towards+developing+an+animal+model+of+functional+recovery+after+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Beam-walking in rats: Studies towards developing an animal model of functional recovery after brain injury.</a> Journal of Neuroscience Methods. 31 (2), 101-107 (1990).</li>
<li>Sweis, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((modified+beam-walking+apparatus+for+assessment+of+anxiety+in+a+rodent+model+of+blast+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">modified beam-walking apparatus for assessment of anxiety in a rodent model of blast traumatic brain injury.</a> Behavioural Brain Research. 296, 149-156 (2016).</li>
<li>Hess, B. J., Dieringer, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+organization+of+the+maculo-ocular+reflex+of+the+rat%3A+Responses+during+off-vertical+axis+rotation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Spatial organization of the maculo-ocular reflex of the rat: Responses during off-vertical axis rotation.</a> European Journal of Neuroscience. 2, 909-919 (1990).</li>
<li>Armstrong, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preserved+otolith+organ+function+in+caspase-3-deficient+mice+with+impaired+horizontal+semicircular+canal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Preserved otolith organ function in caspase-3-deficient mice with impaired horizontal semicircular canal function.</a> Experimental Brain Research. 233 (6), 1825-1835 (2015).</li>
<li>Riccio, D. C., Thach, J. S. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+suppression+produced+by+vestibular+stimulation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Experimental+Analysis+of+Behavior%22%5BJournal%5D)">Response suppression produced by vestibular stimulation in the rat.</a> Journal of the Experimental Analysis of Behavior. 11 (4), 479-488 (1968).</li>
<li>Rabbath, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abnormal+vestibular+control+of+gaze+and+posture+in+a+strain+of+a+waltzing+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Abnormal vestibular control of gaze and posture in a strain of a waltzing rat.</a> Experimental Brain Research. 136, 211-223 (2001).</li>
<li>Brettler, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+gravity+on+the+horizontal+and+vertical+vestibulo-ocular+reflex+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">The effect of gravity on the horizontal and vertical vestibulo-ocular reflex in the rat.</a> Experimental Brain Research. 132, 434-444 (2000).</li>
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</ol>

Os autores não declaram conflitos financeiros ou não financeiros de interesses. O dispositivo FWR tem uma patente na China: ZL201120231912.1.

O presente estudo descreve a avaliação de respostas autônomas ao movimento passivo em roedores usando movimento vertical do elevador e rotação de roda-gigante. Esses equipamentos e procedimentos podem ser facilmente adotados para outros roedores e existem várias modificações dos ensaios para confirmar o funcionamento vestibular em diferentes circunstâncias, como durante o desafio farmacológico ou intervenções cirúrgicas. Pesquisas em MS provocadas pela estimulação vestibular levaram à teoria de que conflitos sensoriais o...

A doença de movimento (Esms) devido à estimulação visuo-vestibular anormal leva à reação autônoma, provocando sintomas como desconforto epigárrico, náusea e/ou vômito1. De acordo com as teorias atuais, a doença do movimento pode ser causada por um conflito sensorial ou incompatibilidade neuronal de receber informações de movimento integradas que diferem do modelo interno previsto do ambiente2,3 ou instabilidade postural como ocorreria em um navio de reboque4,5. Apesar dos avanços significativos no campo da doença do movimento e do funcionamento da autonomia vestibular6,7,8,9,10,11,12,futuras pesquisas podem ser auxiliadas por protocolos de avaliação padronizados. Avaliar os efeitos autônomos das moções passivas padrão beneficiará muito as investigações sobre as causas e a prevenção do enjoo. O objetivo geral deste estudo é avaliar os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo nos roedores. Modelos animais, como roedores, permitem fácil manipulação experimental (por exemplo, movimento passivo e farmacêutico) e avaliação comportamental, que pode ser usada para estudar a etiologia da doença do movimento. Aqui, apresentamos uma bateria detalhada para testar os efeitos do movimento passivo e a integridade do funcionamento vestibular.
O presente estudo detalha dois ensaios, movimento vertical do elevador (EVM) e rotação de roda gigante (FWR), que induzem reações autônomas ao movimento passivo. Os ensaios são acoplados a três medidas comportamentais quantitativas, o feixe de equilíbrio (em camundongos13 e ratos14,15,16,17), exame de campo aberto e contagem de defecações. O EVM (semelhante ao arremesso e rolo de um navio encontrando uma onda) avalia o funcionamento vestibular estimulando os órgãos sensoriais otolitos que codificam acelerações lineares (ou seja, o saccule que responde aos movimentos no plano vertical)18. O dispositivo FWR (rotação centrífuga ou movimento sinusoidal) estimula os órgãos otolitos por aceleração linear e pelos canais semicirculares por aceleração angular19,20. O dispositivo de rotação roda gigante/centrífuga é único em sua avaliação autônoma. Até o momento, o único dispositivo semelhante na literatura é o toca-eixo off-vertical (OVAR), que é usado para examinar o reflexo vestibulo-ocular (VOR)18,21,22, evitar condicionado23,24, e os efeitos da hipergravidade25,26,27. O ensaio EVM e o ensaio do dispositivo FWR induzem estimulação vestibular levando a reações autônomas. Acopladomos o EVM e a FWR a medidas quantitativas como feixe de equilíbrio, contagem de defecações e análise de campo aberto28,29,30,para garantir resultados robustos e reprodutíveis. Semelhante ao descrito anteriormente em camundongos13 e ratos14,15,16,17, o ensaio de feixe de equilíbrio é um feixe de 1,0 m de comprimento suspenso 0,75 m do chão entre dois bancos de madeira usando uma simples modificação de caixa preta na extremidade do gol (acabamento). O feixe de equilíbrio tem sido usado para avaliar a ansiedade (caixa preta obscura)14,17, lesão traumática15,16,17, e aqui, reações autônomas que afetam o equilíbrio. Realizamos a contagem de defecações para avaliar a resposta autônoma no modelo de enjoo de movimento anteriormente, e é uma medida quantitativa confiável que é facilmente realizada e avaliada inequivocamente6,8,9,11. A análise de campo aberto emprega uma simples avaliação de comportamento em campo aberto da caixa preta usando Ethovision28, Bonsai30, ou uma simples análise de vídeo no Matlab29 para quantificar comportamentos como movimento. No protocolo atual, usamos a distância total percorrida, mas notamos que existem vários paradigmas diferentes (por exemplo, alongamento, zona de movimento, velocidade, etc.) 28,29,30. Coletivamente, esses procedimentos formam uma pequena bateria de avaliações para o exame e avaliação de reações autônomas ao movimento passivo, por exemplo, em doença social6,7,8,9,10,11. Os ensaios atuais podem ser adaptados para uma variedade de modelos animais.

<table><tbody><tr><td>Dispositivo de movimento vertical do elevador</td><td>Dispositivo de movimento vertical do elevador feito sob medida sob medida</td><td></td><td></td> para as especificações desejadas</tr><tr><td>Ethovision</td><td>Noldus Information Technology</td><td></td><td>Software de rastreamento de vídeo</td></tr><tr><td>Dispositivo de rotação da roda gigante</td><td>Dispositivo de rotação da</td><td>roda gigante feito</td>sob <td></td> medida personalizado para as especificações desejadas</tr><tr><td>Luvas de látex, polivinil ou nitrilo</td><td>AMMEX</td><td></td><td>Use luvas sem pó Caixa de</td></tr><tr><td>campo aberto</td> de 8 mil Caixa de <td>plexiglass escurecida</td><td>personalizada</td><td></td> com câmera IR</tr><tr><td>Rato ou rato</td><td>JAX labs</td><td></td><td>Qualquer pequeno roedor</td></tr><tr><td>Gaiola pequena para roedores</td><td>Tecniplast</td><td>1284L</td><td></td></tr><tr><td>Viga e bancos de madeira</td><td>Viga</td> e bancos de madeira personalizados <td></td> feitos <td>sob medida para as especificações indicadas</td></tr></tbody></table>

avaliando os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo em ratos usando movimento vertical do elevador e rotação de roda-gigante

Assessing the Autonomic and Behavioral Effects of Passive Motion in Rats using Elevator Vertical Motion and Ferris-Wheel Rotation

O objetivo geral deste estudo é avaliar os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo em roedores usando o movimento vertical do elevador e dispositivos de rotação de rodas gigantes. Esses ensaios podem ajudar a confirmar a integridade e o funcionamento normal do sistema nervoso autônomo. Eles são associados a medidas quantitativas baseadas na contagem de defecações, exame de campo aberto e cruzamento de feixes de equilíbrio. As vantagens desses ensaios são sua simplicidade, reprodutibilidade e medidas comportamentais quantitativas. As limitações desses ensaios são de que as reações autônomas podem ser epifenômenos de transtornos não vestibulares e que é necessário um sistema vestibular funcional. O exame de transtornos como o enjoo será muito auxiliado pelos procedimentos detalhados desses ensaios.

Figura 2 demonstra resultados representativos do feixe de equilíbrio do tempo levado sem transversal. Os ratos foram treinados por 3 dias consecutivos para alcançar um desempenho estável na viga de equilíbrio10. No dia seguinte, os ratos foram avaliados para o desempenho do feixe de equilíbrio. No eixo y da figura, temos o número de segundos levados para os roedores cruzarem o feixe de equilíbrio para rodas gigantes, movimento vertical do elevador e grupos de controle...

Protocolos são apresentados para avaliar os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo em roedores usando movimento vertical do elevador e rotação de roda gigante.

Avaliando os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo em ratos usando movimento vertical do elevador e rotação de roda-gigante

The overall goal of this study is to assess the autonomic and behavioral effects of passive motion in rodents using the elevator vertical motion and ...

Esses protocolos são importantes para estabelecer a integridade e o funcionamento normal do sistema autônomo para avaliar a funcionalidade autônoma do sistema nervoso e revelar distúrbios do sistema vestibular. Um déficit de funcionamento vestibular ou coordenação motora pode sinalizar danos ao sistema autônomo. Essas técnicas podem revelar a integridade do funcionamento autônomo.As técnicas comportamentais podem ser suscetíveis a variabilidades introduzidas pelo experimentador. Recomendamos que o mesmo pesquisador conduza as técnicas durante todo o experimento e trate cada roedor de forma idêntica. Para análise de movimento vertical do elevador, coloque até quatro ratos de 200 a 250 gramas de dois meses de idade em uma caixa de plexiglass de 22,5 por 26 por 20 centímetros e forro a caixa com segurança.Coloque a caixa na almofada do elevador de um dispositivo de movimento vertical do elevador e ligue o dispositivo na configuração mais baixa para aclimatação. Em seguida, defina a amplitude para 22 centímetros para cima e 22 centímetros para baixo do neutro e inicie o dispositivo com um período inicial de ciclo em 2.500 milissegundos por cinco minutos, 2.000 milissegundos por cinco minutos, e 1.500 milissegundos por cinco minutos. Em seguida, defina o dispositivo para 1.000 milissegundos por duas horas antes de desacelerar o dispositivo ao contrário usando períodos de 1.500 milissegundos por cinco minutos, 2.000 milissegundos por cinco minutos, e 2.500 milissegundos por cinco minutos.Para um procedimento de rotação da roda gigante, coloque o recipiente de plexiglass em um banco de madeira e coloque os ratos no recipiente com o longo eixo de seus corpos perpendicular à haste de rotação horizontal da roda gigante. Depois de fechar a caixa com segurança, coloque um segundo conjunto de ratos com uma massa semelhante em um segundo recipiente de plexiglass com o longo eixo da carroceria perpendicular à haste de rotação horizontal no segundo braço do dispositivo de rotação da roda gigante. Depois de fechar a caixa com segurança, inicie a rotação da roda gigante em sentido horário a 16 graus por segundo ao quadrado para atingir uma velocidade angular de 120 graus por segundo.Quando a roda gigante atingir a velocidade máxima, comece a desacelerar a 48 graus por segundo ao quadrado para atingir zero graus por segundo. Após uma pausa de um segundo, faça com que o recipiente continue a girar na direção anti-horário a 16 graus por segundo ao quadrado para atingir uma velocidade angular de 120 graus por segundo antes de desacelerar a 48 graus em segundo ao quadrado para atingir zero graus por segundo. Em seguida, continue a rotação no sentido horário-anti-horário por duas horas por sessão para aproximadamente 720 rotações.Para o treinamento do feixe de equilíbrio, primeiro lugar dois bancos de madeira de 0,75 metros de altura no campo experimental aproximadamente 110 centímetros de distância. Coloque uma caixa de madeira de plástico 15 por 15 por oito centímetros na ferramenta de acabamento e coloque um feixe de madeira estreito de 2,5 por 130 centímetros entre os dois bancos deixando uma distância de 100 centímetros entre as bordas do banco do banco de partida até o banco de acabamento. Coloque uma lâmpada no banco de partida e ligue a lâmpada.Em seguida, desligue a luz do quarto para que a sala fique o mais escura possível e introduza o primeiro rato ao feixe no canto iluminado. Se o rato não cruzar sua vontade, levemente solicitar que o animal cruze a viga. Após três dias consecutivos de treinamento, coloque o rato treinado no banco de partida perto da luz e inicie imediatamente um cronômetro.O rato deve cruzar o feixe de equilíbrio rapidamente e entrar na caixa preta no banco de acabamento. Pare o cronômetro assim que o nariz do animal entrar na caixa escura no banco de acabamento. Para contar a defecação após o tratamento de movimento, transfira os ratos do recipiente de plexiglass para caixas de campo abertas individuais de 40 por 40 centímetros e conte o número de fezes de pelotas na caixa de plexiglass atribuídas a cada roedor.Para um teste de comportamento de campo aberto, use uma câmera de vídeo infravermelha para gravar os animais por três minutos e use as imagens de vídeo resultantes para determinar a distância total percorrida para cada animal. Aqui, os resultados representativos do feixe de equilíbrio do tempo levado para atravessar a trave de equilíbrio após três dias consecutivos de treinamento são mostrados. Movimento vertical do elevador, mudanças no movimento vertical hertz, e rotação de rodas gigantes aumentaram significativamente a defecação.Além disso, o movimento vertical do elevador, as mudanças no movimento vertical de Hertz e a rotação da roda gigante diminuíram significativamente a distância do campo aberto percorrida. O treinamento da viga de equilíbrio é fundamental, pois os ratos devem estar motivados e confiantes ao cruzar a trave. Caso contrário, seu saldo não será medido durante o período de avaliação.Seguindo os procedimentos comportamentais, os efeitos de diferentes medicamentos de interesse no funcionamento autônomo e na sinalização celular podem ser avaliados utilizando-se esses ensaios de estimulação vestibular.

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Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

O teste rotorod é usado para avaliar o estado do motor no movimento de caminhar de ratos hemi-Parkinson analógica.

Uso de Rotorod como um método de análise qualitativa de Walking in Rat

Locomoção geralmente é analisado como um resultado de comportamento em vários modelos de doença em áreas como neurociência e ortopedia. Este artigo tem a intenção de vídeo para descrever um método para coletar as forças de reação do solo e cinemática de ratos durante a locomoção irrestrita.

Cinemática e terra Determinação Força de Reacção: Uma demonstração Habilidades Locomotor Quantificação da Jovem Adulto, de meia-idade, e Rats Geriátrica

Este vídeo demonstra o teste da escada para avaliar a função motora em um rato hemiparkinsoniano com lesão cerebral direita. A lesão interrompe a sinalização da dopamina, prejudicando o controle da pata esquerda, o que resulta em mais pellets remanescentes nas escadas esquerdas, indicando disfunção motora.

Teste de escada para avaliação da função motora em um rato hemiparkinsoniano

Controlo do motor e desempenho da balança são conhecidos por se deteriorar com a idade. Este artigo apresenta uma série de testes comportamentais não invasivos padrão com a adição de um estímulo rotativo simples de desafiar o sistema e mostrar vestibulares mudanças no desempenho do equilíbrio em um modelo murino de envelhecimento.

Avaliação Comportamental do Envelhecimento Rato Sistema Vestibular

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Um mecanismo baseado em roda de corrida inovadora para melhorar o desempenho Rat Formação

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Avaliações comportamentais de locomoção espontânea em um modelo murino induzida por MPTP a doença de Parkinson

O hemisection espinal torácico do rato é um modelo valioso e reprodutível de ferimento unilateral da medula espinal para investigar os mecanismos neural da recuperação locomotora e da eficácia do tratamento. Este artigo inclui um guia detalhado passo a passo para realizar o procedimento de hemisection e avaliar o desempenho locomotor em uma arena de campo aberto.

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Fornecemos um protocolo para a avaliação do comportamento motor através de uma bateria de teste comportamental em ratos após lesão de esmagamento do nervo ciático.

Avaliação multifatorial do comportamento motor em ratos após lesão unilateral do esmagamento do nervo ciático

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O presente protocolo descreve o rastreamento/avaliação de movimento tridimensional para descrever a alteração do movimento da marcha de ratos após a exposição a um ambiente simulado de desuso.

Compreensão abrangente da alteração da marcha induzida pela inatividade em roedores

Aprenda a avaliar os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo em ratos usando movimento vertical de elevador e rotação de roda-gigante. Estes protocolos ajudam a revelar a integridade do sistema nervoso autônomo.

Avaliando os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo em ratos usando movimento vertical do elevador e rotação de roda-gigante (Vídeo) | JoVE Journal

Avaliando os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo em ratos usando movimento vertical do elevador e rotação de roda-gigante

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