Name: Formação de esferóides da célula do ligamento periodontal humano em filmes de quitosana (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 14 s
Description: Aprenda a cultivar esferóides de células do ligamento periodontal humano usando filmes de quitosana. Este método 3D melhora a autorrenovação e diferenciação osteogênica para pesquisa em medicina regenerativa.

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Este estudo foi patrocinado pela National natural Science Foundation of China (NSFC 81700978), fundos de pesquisa fundamental para as universidades centrais (1504219050), Fundação de ciência natural de Xangai (17ZR1432800), e Shanghai Medical Exploration Project ( 17411972600).

O protocolo do estudo foi aprovado pelo Comitê de ética da escola e hospital de Estomatologia da Universidade de Tongji. Todos os pacientes forneceram o consentimento informado escrito.
1. isolação da pilha de PDL
<ol><li>Faça meio de proliferação para cultura de células PDL: meio α-MEM suplementado com 10% FCS e 100 U/mL Pen/Strep.</li>
	<li>Prepare um recipiente com gelo para transferir terceiros molares isolados.</li>
	<li>Esterilizar instrumentos cirúrgicos usando uma autoclave.</li>
	<li>Extraia os terceiros molares afetados humanos normais dos adultos (18-28 anos de idade) na clínica dental da escola e do hospital da estomatologia, Universidade de Tongji.</li>
	<li>Coloque os terceiros molares no meio de proliferação e transfira para o laboratório a 4 ° c.</li>
	<li>Coloc o dente extraído em um prato de Petri estéril de 100 milímetros, trabalhando dentro de uma capa laminar do fluxo do Biohazard.</li>
	<li>Adicionar 10 mL de PBS para lavar o dente extraído. Repita o passo de lavagem duas vezes.</li>
	<li>Usando um bisturi estéril, separe suavemente o PDL da raiz. Nota: o PDL deve ser raspado da terceira parte média da raiz para evitar contaminações dos tecidos gengivais ou apicais.</li>
	<li>Mince PDL em fragmentos de 1-2 mm com a ajuda de uma lâmina de bisturi esterilizada.</li>
	<li>Coloque fragmentos de PDL em um balão de cultura T-25, preenchido com 3-4 mL de meio de proliferação.</li>
	<li>Cultura as amostras em uma incubadora em 37 ° c em 5% CO2 com ar humidificado.</li>
	<li>A mudança do meio de cultura após o crescimento das células PDL foi observada. Toma geralmente 1-2 semanas para o conseqüência de pilhas de PDL. Observe o crescimento das células PDL através de um microscópio de contraste de fase inversa.</li>
	<li>Mude o meio de cultura duas vezes por semana depois disso.</li>
	<li>Quando as células PDL atingiram confluência, as células de subcultura na proporção de 1:4 (passagem 1).</li>
	<li>Observe o crescimento celular diariamente e mude o meio de cultura duas vezes por semana.</li>
	<li>Execute cada passagem subseqüente na relação de 1:4 depois que as pilhas alcançam a confluência de 80%. Use a terceira-a quinta geração de células PDL para a propagação de células.</li>
</ol>2. preparação de filmes de quitosana
<ol><li>Para a preparação de uma solução de ácido acético a 1% (v/v), adicione 5 mL de ácido acético a 495 mL de água destilada dupla em uma taça de vidro limpo.</li>
	<li>Para a preparação de 1% w/v solução de quitosana, pesar 5 g de pó de quitosana (peso molecular médio 400 kDa, 85% grau de acetilação) e adicionar a 495 mL de 1% (v/v) solução de ácido acético.</li>
	<li>Mexa a solução preparada durante 24 horas com a barra de agitação e a placa de agitação magnética a 60 ° c.</li>
	<li>Autoclave a solução preparada para garantir a dissolução completa da quitosana. Observação: o experimento pode ser pausado neste estágio.</li>
	<li>Para formar filmes de quitosana, adicione 1% de solução de quitosana de p/v em pratos de poliestireno de cultura de tecidos (TCPS) a 0,25 mL/cm2. Por exemplo, adicionar 0,5 mL de 1% w/v solução de quitosana para um poço de 24-placa bem.</li>
	<li>Seque pratos TCPS em um forno a 60 ° c por 24 horas para formar filmes de quitosana.</li>
	<li>Preparar 0,5 hidróxido de sódio N (NaOH). Mexa 10 g de NaOH, um pouco de cada vez, em um grande volume de água destilada dupla usando a barra de agitação magnética e, em seguida, diluir a solução para fazer 0,5 L. Nota: Adicione NaOH à água--não adicione a água ao NaOH contínuo. Não toque NaOH! Pode causar queimaduras químicas.</li>
	<li>Neutralize filmes de quitosana com 0,5 N NaOH. Adicionar 0,5 mL de 0,5 N NaOH solução para um poço de 24-bem placa por 2 horas.</li>
	<li>Lave os filmes de quitosana três vezes com água destilada dupla. Observação: o experimento pode ser pausado neste estágio.</li>
	<li>Antes da semeadura de células, esterilizar as placas de 24 poços revestidas com quitosana em 70% de álcool durante a noite à temperatura ambiente.</li>
	<li>Enxague as placas revestidas com quitosana três vezes com PBS à temperatura ambiente.</li>
	<li>Esterilizar placas revestidas com quitosana por tratamento luz ultravioleta durante a noite à temperatura ambiente.</li>
</ol>3. semeadura celular
<ol><li>Solução de PBS de média de proliferação pré-quente e solução de Trypsin/EDTA para 37 ° c.</li>
	<li>Descarte o sobrenadante do balão de cultura celular T-75.</li>
	<li>Lave as células PDL confluentes com 10 mL de solução de PBS.</li>
	<li>Descarte a solução PBS.</li>
	<li>Adicione 1 mL de solução de Trypsin/EDTA ao balão de cultura de células T-75.</li>
	<li>Incubar células com solução de tripsina/EDTA por 3 min a 37 ° c.</li>
	<li>Encerre o processo de digestão da tripsina adicionando 3 mL de meio de proliferação ao balão de cultura de células T-75.</li>
	<li>Transfira a suspensão da célula preparada para um tubo de centrífuga cônico de 15 mL.</li>
	<li>Centrifugue a suspensão durante 5 min a 300 x g e a temperatura ambiente.</li>
	<li>Descarte o sobrenadante do tubo de centrífuga cônico de 15 mL e resuspenda o pellet celular em 500 μL de meio de proliferação.</li>
	<li>Contagem de células PDL com um Hemocytometer.</li>
	<li>Células de semente PDL nas densidades de 0,5 x 104, 1 x 104, 3 x 104e 6 x 104 células/cm2.</li>
	<li>Células de cultura PDL em filmes de quitosana em uma incubadora a 37 ° c em 5% CO2 com ar humidificado.</li>
	<li>Mude o meio de cultura duas vezes por semana depois disso.</li>
	<li>Nos dias 1, 2, 3, 4 e 5, observar a morfologia celular diariamente através de um microscópio de contraste de fase inversa.</li>
</ol>4. sobrevivência celular
<ol><li>Após 1, 3 e 6 dias de cultura, determinar a sobrevida das células usando um kit de viabilidade/citotoxicidade comercial.</li>
	<li>Em um tubo de 15 ml, prepare 2 ml de uma solução fresca de 2 milímetros calcein-am e homodímero do etídio de 4 milímetros no PBS por vortexing por 5 s. Nota: Mantenha o processo no escuro.</li>
	<li>Retire o meio de cultura e lave os esferóides em PBS.</li>
	<li>Incubar esferóides em PBS contendo 2 mm de calceina-am e 4 mm de etídio homodímero por 30 min à temperatura ambiente no escuro.</li>
	<li>Enxágüe esferoides duas vezes em PBS. Para esferoides de um poço da placa 24-well, use 2 ml de PBS para cada vez.</li>
	<li>Observe as amostras usando um microscópio de fluorescência usando ampliação de 10x ou 20x.</li>
</ol>

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<li>Cesarz, Z., Tamama, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spheroid+Culture+of+Mesenchymal+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Spheroid Culture of Mesenchymal Stem Cells.</a> Stem Cells International. 2016, 9176357(2016).</li>
<li>Tong, J. Z., Sarrazin, S., Cassio, D., Gauthier, F., Alvarez, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+spheroid+culture+to+human+hepatocytes+and+maintenance+of+their+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Application of spheroid culture to human hepatocytes and maintenance of their differentiation.</a> Biology of the Cell. 81 (1), 77-81 (1994).</li>
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<li>Frith, J. E., Thomson, B., Genever, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+three-dimensional+culture+methods+enhance+mesenchymal+stem+cell+properties+and+increase+therapeutic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Dynamic three-dimensional culture methods enhance mesenchymal stem cell properties and increase therapeutic potential.</a> Tissue Engineering Part C Methods. 16 (4), 735-749 (2010).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+spheroid+culture+system+on+micropatterned+substrates+for+improved+differentiation+efficiency+of+multipotent+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">3D spheroid culture system on micropatterned substrates for improved differentiation efficiency of multipotent mesenchymal stem cells.</a> Biomaterials. 30 (14), 2705-2715 (2009).</li>
<li>Miyagawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microfabricated+scaffold+induces+the+spheroid+formation+of+human+bone+marrow-derived+mesenchymal+progenitor+cells+and+promotes+efficient+adipogenic+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">A microfabricated scaffold induces the spheroid formation of human bone marrow-derived mesenchymal progenitor cells and promotes efficient adipogenic differentiation.</a> Tissue Engineering Part A. 17 (3-4), 513-521 (2011).</li>
<li>Bartosh, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggregation+of+human+mesenchymal+stromal+cells+%28MSCs%29+into+3D+spheroids+enhances+their+antiinflammatory+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Aggregation of human mesenchymal stromal cells (MSCs) into 3D spheroids enhances their antiinflammatory properties.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (31), 13724-13729 (2010).</li>
<li>Baraniak, P. R., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffold-free+culture+of+mesenchymal+stem+cell+spheroids+in+suspension+preserves+multilineage+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Scaffold-free culture of mesenchymal stem cell spheroids in suspension preserves multilineage potential.</a> Cell and Tissue Research. 347 (3), 701-711 (2012).</li>
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</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

O presente estudo introduziu um sistema de cultura de células 3D para superar algumas limitações relacionadas à cultura de células monocamada 2D convencional. De acordo com o protocolo, os esferoides celulares de PDL foram formados com sucesso cultivando pilhas em películas do quitosana. Nosso estudo prévio relatou que a formação de esferóides aumentou a autorenovação e as capacidades de diferenciação osteogênica das células PDL14. Em vez de usar uma enzima para colher células de TCPs, esferoides ...

A periodontite, inicializada principalmente pela placa dentária1, caracteriza-se pelo dano dos tecidos periodontais, incluindo o ligamento periodontal (PDL), o osso alveolar e o cementum. Os tratamentos atuais para o periodontite são geralmente bem sucedidos em impedir o progresso da doença ativa, mas a regeneração de tecidos peridentais perdidos permanece um desafio clínico. Recentemente, avanços importantes foram feitos em abordagens baseadas em células para a regeneração tecidual periodontal para superar as desvantagens dos tratamentos atuais2,3,4.
Nossa revisão sistemática prévia revelou que as pilhas de PDL mostraram o grande potencial para a regeneração peridental5. Convencionalmente, as células PDL são cultivadas em substratos bidimensionais (2D), como poliestireno de cultura tecidual (TCPS). No entanto, alterações características das células PDL foram observadas durante a cultura in vitro6. Este fenômeno é provavelmente porque o 2D TCPS difere do in vivo tridimensional (3D) microambiente7. Comparado às células cultivadas em substratos 2D, as células cultivadas em um microambiente 3D exibem mais semelhanças com as células in vivo8. Portanto, os modelos de cultura de células 3D fornecem uma alternativa promissora para a cultura de células monocamada 2D convencional.
O método convencional da cultura 3D está encapsulando pilhas em biomateriais 3D. Comparado com as células encapsuladas em biomateriais 3D, os esferoides celulares imitam a situação in vivo mais de perto porque os esferóides são agregados de células que crescem livres de materiais estranhos9,10,11, 12. é relatado que os esferóides celulares promoveram BIOATIVIDADES do MSC através da preservação dos componentes da matriz extracelular (ECM), incluindo fibronectina e laminina13. Para melhorar os modelos convencionais da cultura de pilha de PDL, nós desenvolvemos recentemente um método da cultura de pilha de 3D PDL, que seja baseado na formação esferóide de pilhas de PDL em películas14do quitosana. A formação de esferóides aumentou a autorenovação e a capacidade de diferenciação osteogênica das células de PDL14. Aqui, nós apresentamos protocolos detalhados da cultura do esferóide da pilha de PDL baseados em películas do quitosana. O sistema da cultura 3D de esferoides celulares de PDL supera algumas das deficiências relativas à cultura de pilha convencional de TCPs, e pode assim ser apropriada para produzir pilhas de PDL com uma eficácia terapêutica realçada para a regeneração peridental futura do tecido.

<table><tbody><tr><td>&alfa;-MEM</td><td>Gibco</td><td>11900-073</td><td></td></tr><tr><td>ácido acético&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>64197</td><td></td></tr><tr><td>Frasco de cultura de células 25 cm2</td><td>Corning</td><td>430639</td><td></td></tr><tr><td>Frasco de cultura de células 75 cm2</td><td>Corning</td><td>430641</td><td></td></tr><tr><td>Chitosan</td><td>Heppe Medical&nbsp; Chitosan GmbH</td><td>/</td><td>peso molecular 500 kDa, grau de desacetilação 85%</td></tr><tr><td>FCS</td><td>Gibco</td><td>26140-079</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Viabilidade/Citotoxicidade Vivo/Morto</td><td>Molecular&nbsp; Sondas</td><td>L3224</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1310732</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>KeyGen Biotech&nbsp;</td><td></td><td></td>KGB5001</tr><tr><td>caneta/estreptococo</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina/EDTA&nbsp;</td><td>KeyGen Biotech&nbsp;</td><td></td><td></td>KGM25200</tr><tr><td>tubo de centrífuga cônico de 15 mL</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>placa de 24 poços</td><td>Corning</td><td>3524</td><td></td></tr></tbody></table>

formação de esferóides da célula do ligamento periodontal humano em filmes de quitosana

Formation of Human Periodontal Ligament Cell Spheroids on Chitosan Films

As pilhas do ligamento peridental (PDL) prendem a grande promessa para a regeneração peridental do tecido. Convencionalmente, as células PDL são cultivadas em substratos bidimensionais (2D), como poliestireno de cultura tecidual (TCPS). Entretanto, as mudanças características de pilhas de PDL foram observadas durante a cultura in vitro. Este fenômeno é provavelmente porque o 2D TCPS difere do in vivo tridimensional (3D) microambiente. Comparado às células cultivadas em substratos 2D, as células cultivadas em um microambiente 3D exibem mais semelhanças com as células in vivo. Portanto, os modelos de cultura de células 3D fornecem uma alternativa promissora para a cultura de células monocamada 2D convencional. Para melhorar os modelos convencionais da cultura de pilha de PDL, nós desenvolvemos recentemente um método da cultura da pilha 3D, que seja baseado na formação esferóide de pilhas de PDL em películas do quitosana. Aqui, nós apresentamos protocolos detalhados da cultura do esferóide da pilha baseados em películas do quitosana. O sistema da cultura 3D de esferoides celulares de PDL supera algumas das limitações relativas à cultura convencional da pilha da monocamada 2D, e pode assim ser apropriada produzindo pilhas de PDL com uma eficácia terapêutica realçada para a regeneração peridental futura do tecido.

Usando o protocolo atual, os esferoides viáveis da pilha de PDL foram dados forma com sucesso. A Figura 1 mostrou que células suspensas ou esferóides em vez de células anexadas foram observadas principalmente em filmes de quitosana. Para a densidade de semeadura de 0,5 x 104 Cells/cm2, as pilhas PDL anexadas foram encontradas ocasionalmente no dia 1 e 3, e os esferoides da pilha de PDL foram observados raramente. Pelo contrário, para as ...

Aqui, nós apresentamos protocolos de cultivo de esferoides da pilha do ligamento periodontal humano (PDL) por películas do quitosana. A cultura de esferoides celulares tridimensionais (3D) fornece uma alternativa ao sistema convencional da cultura do poliestireno da cultura do tecido (TCPs).

Formação de esferóides da célula do ligamento periodontal humano em filmes de quitosana

Periodontal ligament (PDL) cells hold great promise for periodontal tissue regeneration. Conventionally, PDL cells are cultured on two-dimensional (2D) ...

Este é um protocolo detalhado de cultivo de esferoides de células ligamentares periodontais por filmes quitosanos. Comparado com o sistema de cultura convencional, o sistema de cultura esferoide produz células do ligamento periodontal com maior autoconexão e capacidades de diferenciação osteogênica. Para começar, prepare a solução chitosana de peso para volume de 1%, conforme indicado no manuscrito.Adicione 0,5 mililitros de solução de chitosan em cada poço de uma placa de poliestireno de cultura tecidual de 24 poços. Seque a placa em um forno a 60 graus Celsius durante 24 horas para formar filmes de chitosan. Para neutralizar os filmes de chitosan, adicione 0,5 mililitros de hidróxido de sódio normal de 0,5 a cada poço da placa de 24 poços e incubar à temperatura ambiente por duas horas.Em seguida, lave os filmes de chitosan três vezes com água duplamente destilada. Esterilize a placa de 24 poços revestida de quitosan em 70% de álcool durante a noite à temperatura ambiente. Enxágüe a placa três vezes com PBS e deixe-a sob luz ultravioleta durante a noite.Antes da semeadura celular, meio de proliferação pré-quente, solução PBS e solução EDTA de trippsina a 37 graus Celsius. Descarte o supernascedor do frasco de cultura celular e lave o ligamento periodontal confluente, ou células PDL, com 10 mililitros de PBS. Descarte o PBS e adicione um mililitro de solução EDTA de trippsina ao frasco.Incubar o frasco a 37 graus Celsius por três minutos e, em seguida, adicionar três mililitros de meio de proliferação para terminar a digestão de trippsina. Transfira a suspensão celular para um tubo cônico de 15 mililitros e depois centrífuga por cinco minutos a 300 vezes g. Descarte o supernascer e suspenda as células em 500 microliters de meio de proliferação.Conte as células com um hemócito e semee-as na placa a cinco, 10, 30 e 60 mil células por centímetro quadrado. Cultura as células PDL em uma incubadora a 37 graus Celsius em 5% de dióxido de carbono e ar umidificado, mudando o meio cultural duas vezes por semana. Observe a morfologia celular diariamente por cinco dias através de um microscópio de contraste de fase inversa.Esferoides viáveis de células PDL são formados com sucesso usando este protocolo. Esferoides raramente são observados para a densidade de menor semeadura nos dias um e três. Mas nas duas densidades mais altas, vários tamanhos de esferoides estão presentes desde o primeiro dia.A densidade ideal de semeadura é de 30 mil células por centímetro quadrado porque resulta em esferoides homogêneos. Após cinco dias de cultura, spheróides maiores são observados para todas as densidades de semeadura. Um ensaio de viabilidade demonstra que a maioria das células PDL estão vivas nos dias um, três e seis, mas o número de células mortas aumenta no sexto dia.Uma limitação deste protocolo é a diminuição da proliferação de células após a formação de esferoides. Assim, são necessários mais estudos para promover a proliferação de células após a formação de esferoides.

formation-human-periodontal-ligament-cell-spheroids-on-chitosan

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

A fabricação de uma novela, filme flexível fino adesivo cirúrgico a partir de ingredientes aprovados pela FDA, a quitosana e indocianina verde é descrito. Bonding deste adesivo para tecido colagenoso através de um processo de activação com um simples de baixa potência de laser infra-vermelho é demonstrada.

A base de quitosana, Laser Activated adesiva Thin Film cirúrgica &quot;, SurgiLux &#39;: Preparação e demonstração

Um grande obstáculo em terapias com células-tronco atuais é determinar o método mais eficaz para entregar essas células para tecidos do hospedeiro. Aqui, nós descrevemos um método de entrega de quitosana-base que é eficiente e simples na abordagem, ao mesmo tempo permitindo que as células-tronco adiposas para manter a sua multipotency.

Construindo um hidrogel de colágeno para a entrega de células-tronco carregado microesferas

Apresentamos um modelo de tecido ligamentar em que as construções tridimensionais são tratadas com o soro humano exercido pelo exercício e analisadas quanto ao teor de colágeno, função e bioquímica celular.

Tratamento de estruturas ligamentares com soro condicionado por exercício: um modelo de engenharia de tecido translacional

Aqui nós descrevemos uma preparação superficial de hidrogel injetável à base de quitosana usando química imina dinâmico. São apresentados métodos para ajustar a força mecânica do hidrogel e sua aplicação em cultura de células 3D.

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Aqui, apresentamos um protocolo para obter sistemas 3D-cultura na auto montagem de andaimes de peptídeo para promover a diferenciação de condrócitos articulares humanas condrossarcoma em tecido de cartilagem, como.

Cultivo de células de mamíferos em andaimes tridimensionais do Peptide

Desenvolvemos um modelo de câncer de mama heterogênea consistindo de células de tumor e fibroblasto imortalizadas incorporadas em um bioink de alginato/gelatina de bioprintable. O modelo recapitula o microambiente do tumor na vivo e facilita a formação de esferoides tumor multicelulares, produzindo insights sobre os mecanismos de condução tumorigênese.

Hidrogel Bioprintable alginato/gelatina 3D em Vitro sistemas modelo induzem a formação de esferoide de célula

Este protocolo apresenta um método para a cultura e crescimento 3D de células semelhantes a ameloblastos em microgravidade para manter sua forma alongada e polarizada, bem como a expressão de proteínas específicas do esmalte. Condições de cultura para a cultura de construções de engenharia periodontal e órgãos pulmonares em microgravidade também são descritas.

Propagação de Células e Órgãos Dentários e Respiratórios em Microgravidade

O presente protocolo descreve um método não baseado emulsão para a fabricação de microgéis de genipin quitosano. O tamanho desses microgésis pode ser precisamente controlado, e eles podem exibir inchaço dependente de pH, degradar in vivo, e ser carregados com moléculas terapêuticas que liberam ao longo do tempo de forma sustentada, tornando-os altamente relevantes para aplicações de engenharia de tecidos.

Fabricação de microgéis chitosan-genipin controlados por tamanho e sem emulsão para aplicações de engenharia de tecidos

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Indução de periodontite através de uma combinação de ligadura e injeção de lipopolissacarídeo em um modelo de rato

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Geração de esferoides a partir de vários condrócitos usando condições de baixa aderência sob gravidade e mini-biorreatores caseiros

Este estudo descreve um método de ligadura de nylon 6-0 modificado para indução de periodontite em camundongos, que é altamente reprodutível e representa uma alternativa para os pesquisadores estudarem a doença periodontal desde seu desenvolvimento até suas consequências patológicas.

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Aprenda a cultivar esferóides de células do ligamento periodontal humano usando filmes de quitosana. Este método 3D melhora a autorrenovação e diferenciação osteogênica para pesquisa em medicina regenerativa.

Formação de esferóides da célula do ligamento periodontal humano em filmes de quitosana

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