Name: Isolação de pilhas epithelial salivares das glândulas salivares humanas para o crescimento in vitro como Salispheres ou monolayers (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Aprenda a isolar células epiteliais de glândulas salivares humanas para cultivo in vitro como salisferas ou monocamadas. Este método avança a modelagem celular primária para estudos de virologia e biologia celular.

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Gostaríamos de agradecer a James P. Bridges por fornecer orientações significativas sobre as metodologias envolvidas na cultura das células primárias. Matthew J. Beucler foi apoiado pelos institutos nacionais de formação em saúde Grant T32-ES007250. Este trabalho também foi apoiado pelos institutos nacionais de saúde concede R01-AI121028 e R21-DE026267 concedidos a William E. Miller.

Estes protocolos e estudos foram revistos e aprovados pelo Conselho de revisão institucional da Universidade de Cincinnati (Federal-Wide Assurance #00003152, protocolo IRB 2016-4183). O tecido salivar é geralmente resected em muitos procedimentos cirúrgicos da cabeça e da garganta e é geralmente não involvido pelo processo maligno. Tipicamente, o tecido da glândula salivar recentemente resected é usado dentro de 2-4 h após a remoção do paciente (Figura 1a).
1. preparação do reagente
<ol><li>
Meio de crescimento de células epiteliais brônquicas (BEGM)
	<ol>
<li>Adicione componentes do kit fornecido pelo fabricante (consulte a tabela de materiais).</li>
		<li>Lave cada tubo uma vez com a mídia de base para garantir a transferência completa de componentes. Em seguida, adicione o carvão vegetal despojado soro bovino fetal para fazer uma concentração final de 4% soro.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Tampão de lise do glóbulo vermelho (RBC)
	<ol>
<li>Para fazer o estoque 10x, adicione 40,15 g de NH4Cl, 5,0 g de NaHCO3, e 0,186 g de ácido etilenodiaminotraacético (EDTA) e trazer até um volume final de 200 ml usando DH2o. Em seguida, filtrar esterilizar e armazenar a 4 ° c.</li>
		<li>Diluir para uma concentração de trabalho de 1x em estéril dH2o antes de usar.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Solução de dissociação
	<ol>
<li>Para um frasco de 100 ml de solução de Dispase (ver a tabela de materiais) adicionar 0,15 g de colagenase tipo III. Após a colagenase ter sido totalmente dissolvida, o filtro esteriliza a nova solução e a alíquota. Conservar a-20 ° c.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. digestão do tecido
<ol><li>Usando uma placa da cultura do tecido de 100 milímetros, mechanicallymince o tecido em partes finas ~ 1-2 milímetros no tamanho usando autoclave-esterilizou tesouras dissecando e fórceps cirúrgico (Figura 1b,C). O tecido conjuntivo entre as peças deve ser cortado para garantir a separação adequada e facilidade em etapas adicionais.</li>
	<li>Adicionar 6 mL da solução Dispase/Collagenase ao tecido picado. Em seguida, incubar a 37 ° c por aproximadamente 30 min a 1 h.</li>
	<li>Interrompa o tecido introduzindo pipetagem com uma pipeta serológica de 5 mL 15-20 vezes.</li>
	<li>Incubar a 37 ° c por mais 30 min a 1 h.</li>
	<li>Repita as etapas 2,3 e 2,4 duas-três vezes mais ou até que o tecido se assemelha a uma pasta e pode facilmente passar através da abertura da pipeta (Figura 1D). Nota: O tamanho de partida do espécime do tecido e como a finura do tecido que picar determinará quantas vezes uma precisa de repetir etapas 2,3 e 2,4. Tipicamente, nós recebemos o tecido aproximadamente 1 cm x 1 cm no tamanho. Adicionalmente, um pode monitorar a dissociação do tecido usando um microscópio invertido padrão da cultura do tecido para seguir o progresso da dissociação da pilha do tecido. Os conjuntos pequenos das pilhas são ideais para o conseqüência inicial de pilhas salivares como salispheres.</li>
</ol>3. poços de revestimento com matriz da membrana do porão
Nota: a matriz de membrana basal (BMM) deve ser descongelada durante a noite a 4 ° c no dia anterior ao seu uso. Uma vez descongelado, o BMM deve ser constantemente mantido no gelo ou a 4 ° c, pois irá solidificar rapidamente (ou seja, formar um gel) a temperaturas mais quentes. Adicionalmente, o cuidado deve ser tomado se as amostras foram refrigeradas no gelo antes do chapeamento em BMM porque as amostras frias "derreterão" o BMM e expõem pilhas ao prato plástico.
<ol><li>Pipeta lentamente BMM (veja a tabela dos materiais) em cada poço para ser revestido. Uniformemente e lentamente distribuir o BMM sobre o poço. Nota: geralmente, nós usamos 500 μL por cada poço de uma placa de seis poços, mas este volume pode ser ajustado para o uso em outras variações das placas tais como 12-well ou 24-well, ou como desejado para uns hydrogels mais grossos ou mais finos.</li>
	<li>Incubar as chapas revestidas a 37 ° c durante, pelo menos, 15 minutos antes da utilização para permitir a solidificação do tempo de BMM.</li>
</ol>4. filtragem de tecido não digerido, lise de RBC, e chapeamento de pilha
<ol><li>Transfira o homogeneato de tecido da etapa 2,5 para um tubo cônico de 15 mL. Lave a placa uma vez com 6 mL de soro fisiológico tamponado com fosfato de Dulbecco (DPBS) para transferir as células restantes.</li>
	<li>Filtre o homogeneate em um tubo cônico de 50 mL através de um filtro de célula de malha de nylon de 70 μm para remover o tecido não digerido. Centrifugar as células tensas por 5 min a 500 x g.</li>
	<li>Diluir 10x tampão de Lise RBC em dH estéril2o para fazer uma solução de trabalho 1x.</li>
	<li>Aspirar o sobrenadante. Em seguida, Ressuspender o pellet celular em 10 mL de 1x RBC lise tampão. Incubar por 5 min a 37 ° c.</li>
	<li>Adicionar 20-25 mL de DPBS para neutralizar o tampão de lise de RBC e minimizar a lise de células salivares. Centrifugador por 5 min a 500 x g. Nota: após o tratamento com tampão de lise de RBC, a pelota da pilha deve ser branca. A cor vermelha na pelota indica que nem todos os RBC foram totalmente lisados. Repita os passos 4,4 a 4,5 se necessário para a Lise completa de todos os RBC.</li>
	<li>Aspirar o sobrenadante. Resuspend o pellet em 1-2 mL de BEGM por poço, em seguida, colocar as células resrepended em Poços revestidos de BMM. Incubar a 37 ° c.</li>
	<li>Uma vez chapeado em BMM, as células se formam em estruturas esféricas ou "salispheres" durante um período de 2-3 dias. As pilhas podem ser mantidas como salispheres por aproximadamente 5-7 dias antes que o BMM comece a degradar permitindo que as pilhas acessem e aderem ao plástico e cresçam como um monocamada.</li>
</ol>5. subculturando os salispheres e manutenção em BMM
<ol><li>Aspirar meios dos poços, a seguir adicione 1 mL da solução do Dispase/Collagenase a cada poço e incubar em 37 ° c para ~ 15 minutos ou até que o BMM dissolveu na maior parte.</li>
	<li>Transfira as células para um tubo cônico de 15 mL e lave os poços uma vez com o DPBS para obter as células restantes. Centrifugador por 5 min a 500 x g.</li>
	<li>Aspirar o sobrenadante. Suspender a pelota em 2 mL de tripsina, em seguida, incubar a 37 ° c por 15 min.</li>
	<li>Neutralize a tripsina usando qualquer mídia completa contendo 10% de soro. Centrifugador por 5 min a 500 x g.</li>
	<li>Aspirar o sobrenadante. Ressuscite as células no DPBS para remover meios residuais, tripsina e soro. Centrifugador por 5 min a 500 x g.</li>
	<li>Aspirar o sobrenadante. Resuspend no begm e na placa as pilhas ressuscipended em pratos de cultura BMM-revestidos solidificado. As células ressuscipended também podem ser chapeadas diretamente na cultura celular pratos tratados para a proliferação como uma monocamada. Para mais informações sobre o crescimento de células salivares como monocamada, ver secção 6. As células cultivadas em BMM ou em plástico devem ser alimentadas com BEGM fresco a cada 2 – 3 dias.</li>
	<li>Cultura as pilhas em uma incubadora humidificada mantida em 37 ° c com 5% CO2.</li>
</ol>6. subculturando os salispheres em pratos plásticos tratados da cultura do tecido
Nota: se a manutenção de células como monocamada em plástico, comece nesta etapa. O seguinte protocolo aplica-se às células que crescem em um prato de 100 mm.
<ol><li>Aspirar a mídia. Lave uma vez com o DPBS para remover a mídia residual.</li>
	<li>Adicione 2 mL de tripsina e, em seguida, incubar a 37 ° c durante 15 min, ou até as células terem sido totalmente destacadas.</li>
	<li>Neutralize a tripsina usando 4 mL de qualquer mídia completa contendo 10% de soro. Transfira as células para um tubo cônico de 15 mL.</li>
	<li>Lave a placa uma vez com aproximadamente 5 mL de DPBS para recolher as células restantes. Centrifugador por 5 min a 500 x g.</li>
	<li>Aspirar o sobrenadante. Ressuscite as células em 6-10 mL de DPBS para remover os meios residuais.</li>
	<li>Centrifugador por 5 min a 500 x g.</li>
	<li>Aspirar o sobrenadante e ressuscito em BEGM. Pilhas de placa em pratos plásticos tratados da cultura do tecido. Alimente com BEGM fresco cada 2-3 dias.</li>
	<li>Cultura as pilhas em uma incubadora humidificada mantida em 37 ° c com 5% CO2.</li>
</ol>7. criopreservação das células
Nota: a criopreservação das células pode ser realizada a partir de uma única célula de suspensão originada a partir de qualquer salisphere ou monocamada células cultivadas.
<ol><li>Conte as células em um hematociômetro para calcular a quantidade total de células presentes.</li>
	<li>Centrifugador por 5 min a 500 x g.</li>
	<li>Aspirar o sobrenadante. Ressuscitem o pellet em BEGM com 10% dimetil sulfóxido (DMSO). A concentração de células deve ser de 2 x 106 células/ml para 10 x 106 células/ml.</li>
	<li>Células alíquotas em tubos de armazenamento criogênicos estéreis. Coloc os tubos em uma cremalheira isolada da espuma e incubar em-80 ° c durante a noite para congelar lentamente as pilhas.</li>
	<li>No dia seguinte, coloque os tubos em nitrogênio líquido para armazenamento a longo prazo. Nota: as células devem ser descongelados rapidamente a 37 ° c. Ao descongelar, as células devem ser peletizadas em 500 x g e a mídia contendo DMSO removida antes do chapeamento.</li>
</ol>

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</ol>

Os autores relatam nada para divulgar.

A disfunção salivar representa uma preocupação com a qualidade de vida para aqueles que sofrem de síndrome de Sjögren, bem como aqueles submetidos a radioterapia para cânceres adjacentes às glândulas salivares3,4,5, a 16. Uma terapia propor para tratar estes pacientes é crescer pilhas de haste salivares funcionais ou organóides in vitro, que podem então ser introduzidos na glândula salivar dani...

Em mamíferos, as glândulas salivares são organizadas em 3 pares de glândulas salivares principais: as glândulas parótida, submandibular e sublingual. Existe também uma série de glândulas menores localizadas na língua e espalhadas por toda a cavidade oral1. As glândulas principais são responsáveis para o volume de maioria de saliva produziu2. Além de fornecer proteção antimicrobiana por meio de fatores secretados, a saliva é importante no processo de mastigação e lubrificação de alimentos à medida que passa pelo esôfago2. Como tal, a disfunção da glândula salivar representa um problema médico em que os doentes que são incapazes de produzir saliva suficiente são mais propensos a desenvolver doenças, como cavidades dentárias ou candidíase oral3. Adicionalmente, a redução da saliva resulta em maior dificuldade em comer e digerir os alimentos com um impacto significativo na qualidade de vida.
A disfunção da glândula salivar é encontrada principalmente em pacientes que sofrem de síndrome de Sjögren, uma desordem auto-imune, ou em pacientes com câncer de cabeça e pescoço que passaram por terapia de irradiação3,4,5, a 6. O ácinos secretora danificado dentro das glândulas em conseqüência da autoimunidade ou da terapia de radiação não se submete à autorenovação, que conduz a um paciente que vive com dano irreversível6. O estudo das glândulas salivares também tem ganhou a atenção ou pesquisadores interessados em mecanismos de patogênese viral. Alguns patógenos, como o citomegalovírus humano (HCMV), persistentemente replicam dentro das glândulas salivares, o que permite a transmissão do vírus nascente para um novo hospedeiro via saliva7,8. Assim, há uma necessidade não satisfeita de desenvolver modelos in vitro robustos e reprodutíveis do tecido da glândula salivar para abordar e compreender uma disposição diversa de problemas médicos.
Vários modelos do sistema de glândula salivar Murina têm sido utilizados como ponto de partida para compreender e caracterizar as diferentes células epiteliais que formam as glândulas salivares9,10. Existem diferenças óbvias e importantes entre as glândulas salivares humanas e murinas11. Mais notavelmente, a glândula parótida humana é maior em relação à glândula submandibular, enquanto o camundongo submandibular e a parótida são muito semelhantes no tamanho1,2,11. Quando as linhas de pilha submandibular humanas imortalizado existirem, há umas preocupações principais que as pilhas imortalized não mantêm exatamente o phenotype do tecido preliminar e das preocupações secundárias que as pilhas imortalized não são derivadas realmente do epitélio salivar próprio12. Por estas razões há um interesse e uma necessidade de estudar o tecido salivar preliminar dos seres humanos.
Aqui nós descrevemos um protocolo para isolar pilhas epithelial preliminares das glândulas salivares humanas para a cultura do tecido. Nosso protocolo é baseado nas obras de Pringle et al. e Tran et al. com modificações feitas para simplificar geralmente seus procedimentos13,14. Primeiro, enquanto o protocolo de Tran et al. exige uma longa incubação de cinco horas para digerir enzimaticamente o tecido salivar, nosso protocolo modificado tem sido bem-sucedido com pouco tempo de incubação de uma hora, semelhante ao de Pringle et al. Em segundo lugar, nós usamos enzimas diferentes para a digestão do tecido, o mais notàvelmente nós não usamos o tripsina como é usado no protocolo original de Tran et al., mas usamos uma mistura do Dispase e do Collagenase. Nós preferimos evitar o tripsina nas etapas iniciais da digestão como um estudo recente sugeriu que a digestão inicial do tecido salivar pela tripsina resulte na viabilidade reduzida da pilha, possivelmente pela perda de uma população rara da pilha de haste15. Por fim, nós cultive os salispheres na superfície da matriz da membrana do porão (BMM) usando meios comercialmente disponíveis originalmente formulados para a propagação de pilhas epithelial brônquicas. Nosso protocolo pode ser usado para isolar as células salivares das glândulas parótidas, submandibulares e sublinguais. Estas pilhas expressam a amilase salivar e outros genes específicos salivares que indicam que mantêm um phenotype similar àquele de pilhas epithelial acinar salivares7. Nós geramos com sucesso culturas salivares de > 50 amostras preliminares do tecido humano usando esta metodologia. Além disso, as pilhas salivares preliminares podem facilmente ser cryopreservado para o uso em uma data mais atrasada.

<table><tbody><tr><td>Placas de cultura de 100 mm</td><td>Thermo Scientific</td><td>172931</td><td></td></tr><tr><td>tubos cônicos de 15 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>339651</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cônicos de 50 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>339653</td><td></td></tr><tr><td>Meios de crescimento de células epiteliais brônquicas</td><td>Lonza</td><td>CC-3171</td><td>Adicione o kit de balas de acordo com as instruções do fabricante. Suplemento com 20 mL de soro descascado de carvão.</td></tr><tr><td>Filtro de células 70 &micro; m malha de nylon</td><td>Fisher</td><td>22-363-548</td><td></td></tr><tr><td>Carvão despojado soro fetal bovino</td><td>Gibco</td><td>12676-029</td><td></td></tr><tr><td>Colagenase tipo III</td><td>Worthington</td><td>LS004182</td><td>Loja a 4 °C.</td></tr><tr><td>Tubo criogênico</td><td>Fisher</td><td>5000-0020</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Cell Applications</td><td>07923</td><td>Dissolva a colagenase para fazer um estoque de 0,15% (p/v). Filtre esterilize e armazene a -20 ° C.</td></tr><tr><td>Tesoura de dissecação</td><td>Fisher</td><td>08-940</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco fosfato tampolado com solução salina</td><td>Corning</td><td>55-031-PC</td><td></td></tr><tr><td>General Chemicals</td><td>Sigma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PathClear Extrato de membrana do porão</td><td>Cultrex</td><td>3432-005-01</td><td>Descongelar a 4 &deg; C pelo menos 24 horas antes do uso. Sempre manuseie no gelo.</td></tr><tr><td>Placas de cultura de seis poços</td><td>Falcon</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Pinça cirúrgica</td><td>Fisher</td><td>22-079-742</td><td></td></tr><tr><td>Solução de tripsina-EDTA</td><td>Corning</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr></tbody></table>

isolação de pilhas epithelial salivares das glândulas salivares humanas para o crescimento in vitro como salispheres ou monolayers

Isolation of Salivary Epithelial Cells from Human Salivary Glands for In Vitro Growth as Salispheres or Monolayers

As glândulas salivares são um local de interesse significativo para os pesquisadores interessados em múltiplos aspectos da doença humana. Um objetivo dos investigadores é restaurar a função das glândulas danificadas por terapias de radiação ou devido às patologias associadas com Sjögren ' síndrome de s. Um segundo objetivo dos pesquisadores é definir os mecanismos pelos quais os vírus se replicam dentro do tecido glandular, onde eles podem então obter acesso aos fluidos salivares importantes para a transmissão horizontal. Esses objetivos destacam a necessidade de um modelo de glândula salivar robusta e acessível in vitro que possa ser utilizado por pesquisadores interessados nas áreas de pesquisa acima mencionadas, bem como relacionadas. Aqui nós discutimos um protocolo simples para isolar pilhas epithelial das glândulas salivares humanas e para propagá-las in vitro. Nosso protocolo pode ser otimizado para atender às necessidades de estudos individuais. Resumidamente, o tecido salivar é mecanicamente e enzimaticamente separado para isolar células individuais ou pequenos aglomerados de células. A seleção para pilhas epithelial ocorre chapeando em uma matriz da membrana do porão na presença dos meios aperfeiçoados para promover o crescimento epithelial da pilha. Estas culturas resultantes podem ser mantidas como aglomerados tridimensionais, denominados "salispheres", ou cultivados como monocamada em pratos de cultura de tecidos plásticos tratados. Este protocolo resulta no crescimento de uma população heterogénea de células principalmente epiteliais que podem ser propagadas para 5-8 passagens (15-20 duagações populacionais) antes de se submeterem à senescência celular.

Dois-três dias após o chapeamento de células de tecido digerido para BMM, as células prontamente formam pequenos clusters que continuarão a expandir em tamanho até 15-20 células por cluster (Figura 2a). Os restos celulares e as pilhas inoperantes destacadas são vistos tipicamente e devem ser removidos aspirando e reabastecendo com meios frescos. As células continuarão a proliferar como salispheres por cerca de 3-10 dias, ou contanto que a camada de BMM perman...

Nós apresentamos um método para isolar e cultivar pilhas epithelial glândula-derivadas humanas preliminares do salivar. Estas pilhas exibem testes padrões da expressão de gene consistentes com eles que são da origem epithelial salivar e podem ser crescidos como salispheres em matrizes da membrana do porão derivadas das pilhas do tumor de engelbreth-Holm-enxame ou como monocamadas em pratos tratados da cultura.

Isolação de pilhas epithelial salivares das glândulas salivares humanas para o crescimento in vitro como Salispheres ou monolayers

The salivary glands are a site of significant interest for researchers interested in multiple aspects of human disease. One goal of researchers is to ...

Gerar modelos celulares primários ou estruturas organoides é a chave para responder a muitas questões contemporâneas na biologia. Por exemplo, estamos interessados há algum tempo nos mecanismos usados pelos vírus humanos para facilitar a replicação na glândula salivar, pois é um local importante para a transmissão horizontal. O desenvolvimento do sistema baseado em salisphere descrito neste protocolo é um avanço crucial em nossa busca para responder a esses tipos de perguntas.Esta técnica nos permite gerar células primárias a partir de uma variedade de diferentes amostras de pacientes. Os modelos celulares lembram mais a situação do tipo in vivo, pois as células não são modeladas ou transformadas como muitos tipos de células comumente usados para experimentos in vitro. Usamos este protocolo para gerar células semelhantes da glândula submandibular primária do rato e o protocolo provavelmente seria útil para outros órgãos com estruturas celulares semelhantes.Dentro de duas a quatro horas após a remoção do paciente, em uma placa de cultura, use tesouras de dissecação esterilizada autoclaved e fórceps cirúrgicos para picar o tecido da glândula salivar em pedaços finos do tamanho de um

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Um protocolo otimizado para o isolamento de células-tronco a partir da glândula salivar do mouse é descrito. O método emprega digestão enzimática e mecânica, e permite o isolamento de salispheres contendo células com características de células-tronco.

Isolamento de Células-Tronco do rato das Glândulas Salivares

Uma maneira rápida e robusta de isolar células-tronco adultas viável epiteliais da pele humana é descrito. O método utiliza a digestão enzimática da matriz de colágeno da pele, seguido por arrancar dos folículos pilosos e isolamento de células em suspensão simples ou fragmentos de tecido para cultura de células.

Isolamento e Cultura de Células-Tronco Adultas epitelial da pele humana

Um método simples é descrita para analisar os efeitos da fibroblastos de tecido em associadas células epiteliais. A combinação deste método eo tridimensional de cultura de tecido pode facilitar a análise das células após o isolamento a partir de 3D. A técnica é aplicável a células de diferentes potencial maligno, permitindo estudo sistemático dos efeitos de estroma associado ao tumor em células tumorais.

Isolamento de células epiteliais mamárias de tridimensional Mixed-célula esferoidal co-cultura

Este vídeo apresenta o protocolo de cultivo de salispheres, os esferoides tridimensionais derivados das glândulas salivares. Os salisferas podem ser usados para avaliar o impacto do câncer de cabeça e pescoço na produção de saliva das glândulas salivares de pacientes humanos afetados.

Cultura de salispheres a partir de tecido de glândulas salivares: um método para desenvolver salispheres a partir de células epiteliais derivadas de glândulas salivares humanas

Uma técnica para manipular geneticamente as células epiteliais no quadro da...

Modificação genética e recombinação de culturas de órgãos de glândula salivar

Usar culturas queratinócitos tridimensionais para visualizar a morfologia e os marcadores funcionais de glândulas salivares pode fornecer introspecções novas nos mecanismos de dano de tecido depois da radiação. Descrito aqui é um protocolo para secção, cultura, irradiar, mancha, e imagem 50 – 90 μm de espessura secções salivares antes e após a exposição à radiação ionizante.

Tratamento de radiação de culturas organotypic de glândulas salivares submandibulares e parótidas modelos chave in vivo características

A glândula lacrimal (LG) tem dois tipos de células expressando α-actínio do músculo liso (αSMA): células mioepiteliais (MECs) e pericytes. Os MECS são de origem ectodérmica, encontrados em muitos tecidos glandulares, enquanto os pericitos são células musculares lisas vasculares de origem endodérmica. Este protocolo isola MECS e pericitos de LGS murino.

Isolamento de células mioepiteliais das glândulas lacrimal e submandibular de Murina adulta

Aqui apresentamos um método modificado para o isolamento e cultura das células epiteliais gengival humanas adicionando o inibidor de Rocha, Y-27632, ao método tradicional. Este método é mais fácil, menos demorado, melhora as propriedades das células-tronco e produz um número maior de células epiteliais de alto potencial, tanto para o laboratório quanto para aplicações clínicas.

Isolamento e Cultura das Células Epiteliais Gengivais Humanas Primárias usando Y-27632

O folículo dentário contém uma população epitelial e células mesenquimais. A população epitelial foi selecionada da população heterogênea de folículos dentário, proporcionando um meio de cultura distinto. As células epiteliais sobreviveram e formaram colônias em um meio livre de soro.

Isolamento de Células Epiteliais do Folículo Dental Humano

O presente estudo relata um protocolo mais fácil, que economiza tempo e é econômico para isolar e cultivar com eficiência células epiteliais mamárias humanas primárias (HMECs) a partir de pequenas quantidades de tecido mamário. Este protocolo é adequado para produzir rapidamente HMECs primários, tanto para aplicações laboratoriais quanto clínicas.

Isolamento e Cultura de Células Epiteliais Mamárias Humanas Primárias

Aprenda a isolar células epiteliais de glândulas salivares humanas para cultivo in vitro como salisferas ou monocamadas. Este método avança a modelagem celular primária para estudos de virologia e biologia celular.

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Isolação de pilhas epithelial salivares das glândulas salivares humanas para o crescimento in vitro como Salispheres ou monolayers

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