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DOI: 10.3791/59868-v
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Nós apresentamos um método para isolar e cultivar pilhas epithelial glândula-derivadas humanas preliminares do salivar. Estas pilhas exibem testes padrões da expressão de gene consistentes com eles que são da origem epithelial salivar e podem ser crescidos como salispheres em matrizes da membrana do porão derivadas das pilhas do tumor de engelbreth-Holm-enxame ou como monocamadas em pratos tratados da cultura.
Gerar modelos celulares primários ou estruturas organoides é a chave para responder a muitas questões contemporâneas na biologia. Por exemplo, estamos interessados há algum tempo nos mecanismos usados pelos vírus humanos para facilitar a replicação na glândula salivar, pois é um local importante para a transmissão horizontal. O desenvolvimento do sistema baseado em salisphere descrito neste protocolo é um avanço crucial em nossa busca para responder a esses tipos de perguntas.
Esta técnica nos permite gerar células primárias a partir de uma variedade de diferentes amostras de pacientes. Os modelos celulares lembram mais a situação do tipo in vivo, pois as células não são modeladas ou transformadas como muitos tipos de células comumente usados para experimentos in vitro. Usamos este protocolo para gerar células semelhantes da glândula submandibular primária do rato e o protocolo provavelmente seria útil para outros órgãos com estruturas celulares semelhantes.
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