Um modelo Crioferimento para estudar infarto do miocárdio no mouse

Este método é confiável para estudar a geração de infarto do miocárdio e uma excelente plataforma para usar para investigar a recuperação cardíaca após, por exemplo, o transplante de células-tronco. A principal vantagem deste procedimento é que ele pode ser usado para gerar tamanhos de infarto uniformes de forma rápida, fácil e reprodutível. Novas intervenções experimentais, como a farmacológica, ou as estratégias baseadas em tecidos, podem ser testadas neste modelo.

E testar com sucesso que as opções podem ser confirmadas em grandes modelos animais. Depois de confirmar a falta de resposta ao reflexo da dor em um rato anestesiado de 27 gramas, 14 semanas de idade, use um aparador de cabelo para remover a pele do peito e pescoço do animal e coloque o rato em uma posição supina em uma almofada aquecida. Tape o traseiro e os membros dianteiros em posição de águia espalhada e use esfregões sequenciais de povidone-iodo e 80% de etanol para desinfetar a pele exposta.

Faça uma incisão de pele média do terço inferior do esterno até o queixo, e use fórceps curvos para separar cuidadosamente os músculos ao redor do pescoço para expor a traqueia. Use micro tesoura para realizar uma traqueotomia entre a segunda e a terceira cartilagem. E ajuste o ventilador para uma frequência de ventilação de 110 por minuto com um volume de maré de 0,5 mililitros.

Em seguida, insira uma cânula de calibre 20 conectada ao ventilador na traqueia. Em seguida, use cautery para separar o músculo peitoral direito de sua origem severa entre a terceira e a sétima costela. E use uma tesoura de mola angular lateral para cortar a quarta a seis costelas o mais perto possível do esterno.

Dissecar o tecido conjuntivo subjacente para obter uma visão clara na cavidade torácica, cauterizando a artéria mamária para conter o sangramento conforme necessário. Insira um mini retrátil de mancha de ouro para espalhar as costelas e mantenha a cavidade torácica aberta. E usar fórceps contundentes para abrir o pericárdio para expor o coração.

Use uma haste cega para levantar o coração da cavidade torácica e diminuir a tensão do retrátil para reduzir a abertura do peito e evitar que o coração volte para a cavidade abdominal. Pré-esfrie uma crioprobe de três milímetros de diâmetro por 10 segundos, e aplique o crioprobe na parede do ventrículo esquerdo interior por 10 segundos para gerar um ventricular esquerdo, infarto de crio lesão. Retire o crioprobe da parede ventricular esquerda com irrigação salina de temperatura ambiente e recora a abertura do peito com o retrátil.

Use a haste para retornar suavemente o coração à cavidade torácica e remover o retrátil. Use uma sutura 6-0 para conectar a esternotomia com um único nó. E use uma sutura 6-0 para fechar a cavidade torácica.

Use uma seringa de 10 mililitros para evacuar qualquer ar restante do peito antes de amarrar o nó e adaptar a pele na borda caudal antes de usar uma sutura de 5-0 para fechar o tecido ao ponto da abertura traqueal. Depois de reduzir o isoflurane e o animal ganha respiração espontânea remova o cateter traqueal e feche a incisão traqueal com um 8-0 Sutura. Substitua os músculos do pescoço ventral de volta à sua posição anatômica sobre a traqueia e complete a sutura da pele.

Em seguida, adicione metamizole à água potável para analgésicos por três dias com monitoramento diário de animais por oito semanas. Na ecocardiografia de corações crioinados revela uma fração de ejeção significativamente reduzida e mudança de área fracionada, com comprometimento funcional observado desde o sétimo dia pós-cirurgia até o ponto final experimental aos 56 dias. Conforme avaliado pela análise do loop de volume de pressão, a infração crioinfração leva a uma função ventrículo esquerda prejudicada que se reflete como uma diminuição no volume de derrame, trabalho de derrame, saída cardíaca e energia máxima ajustada pré-carga.

O mapeamento óptico ex-vivo de corações tingidos sensíveis à tensão fluorescente demonstra um bloqueio da condução elétrica na borda da lesão, indicando um desacoplamento elétrico local. A coloração histológica com o tricromo de Masson revela a formação de tecido fibroso transmural no local da lesão. O tamanho do infarto pode ser calculado medindo a área da cicatriz infarto ou o comprimento da cicatriz média.

Além disso, a coloração imunofluorescente contra um marcador de cardiomiócito e colágeno-I confirmam a presença de remodelação fibrosa e a perda de cardiomiócitos no local da lesão. É importante manter a mesma duração de contato do crioproblema de cada animal, pois uma duração diferente pode levar a tamanhos infartos incongruentes. Uma vez dominada, essa técnica pode ser realizada em 20 minutos se for realizada corretamente.

Depois de assistir a este vídeo você deve ter um bom entendimento de como executar o modelo de crio lesão. Boa sorte com suas experiências.