Edição do genoma mediado por Lentivirus CRISPR/Cas9 para o estudo de células hematopoiéticas em modelos de doenças

Desenvolvemos um método eficiente e econômico para estabelecer camundongos com manipulação genética especificamente em células-tronco hematopoiéticas, usando tecnologia de edição de genomas e sistemas de entrega de transgene mediados por lentivírus. A vantagem deste protocolo é que podemos criar modelos animais que abrigam mutações específicas em células hematopoiéticas de forma rápida e econômica em comparação com abordagens transgênicas convencionais do rato. Demonstrando o procedimento estará Ying Wang, um pesquisador do meu laboratório.

Para gerar partículas de lentivírus, comece codificando uma placa de seis poços com solução de colágeno e incubando-a a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono por 30 minutos. Em seguida, sementes células 293T na placa e incuba-la por mais duas horas. Enquanto isso, prepare a mistura de três plasmídeos de transfecção combinando 0,9 microgramas de vetor de lentivírus, 0,6 microgramas de psPAX2 e 0,3 microgramas de pMD2.