Isolação do globo ocular intacto para obter o tecido integral da superfície da ocular para a examinação histológica e immunohistochemistry

Nosso laboratório se concentra no desenvolvimento ocular e nas doenças. Este protocolo descreve um método para remover o crânio e os ossos orbitais sequencialmente da cabeça do rato dissecado. Deixando pálpebras, superfície ocular, lente, e a retina juntas inteiras. O protocolo beneficiará oftalmologistas interessados em didática de superfície ocular. Eu sou Dianlel Guo, para dizer a técnica com uma luta provável ao tentar evitar o dano do globo ocular, enquanto disseca os ossos faciais. A principal vantagem desta questão de dissecção é que a integridade da folha epitelial da superfície ocular está bem preservada e as diferentes partes da superfície ocular podem ser examinadas por histologia ou imunosmuntaining em uma única seção. Certifique-se de cortar todos os pequenos ossos e detritos dos tecidos moles. Razão, causará marcas de cicatrizes na seção de tecido caso contrário. Depois de eutanásia do rato, use um par de tesouras retas para cortar a cabeça e bissectá-la ao longo da linha média sagital começando no osso intraparietal rostrally até o nasal. Coloque cada metade da cabeça bisseccionada em uma placa de petri limpa e use uma tesoura afiada para cortar a mandíbula e a língua. Liberte o nervo óptico cortando-o do cérebro antes da localização do quiasmo óptico. E remova todos os tecidos cerebrais, incluindo a lâmpada olfativa, que está presa à parede do crânio. Agora todos os tecidos restantes devem ter todo o crânio e ossos orbitais associados com o globo ocular. Lave as partes restantes com PBS para limpar qualquer sangue e detritos capilares. Pré-fixar os tecidos colocando-os em um tubo de 50 mililitros contendo 4% de paraformaldeído e girando-os à temperatura ambiente. Depois que a prefixação estiver completa, lave rapidamente a cabeça dissecada no PBS três vezes para eliminar ainda mais os cabelos e fixações quebrados. Coloque o tecido em uma placa de petri de 10 centímetros e corte o crânio em três partes ao longo dos planos indicadas na figura um do protocolo de texto. O globo ocular e a tomada estão escondidos na parte média do crânio sob ossos ethmóides, frontais e maxilais. Use dois pares de fórceps retos número quatro para descascar o osso ethmóide e expor totalmente os ossos frontal e maxilar. Então, divida geograficamente a superfície do crânio em quatro áreas. Insira a ponta das fórceps curvas horizontalmente em cada área para remover os ossos maxilares e frontais sequencialmente. Depois disso, os ossos lacrimais e jugais subjacentes serão expostos. Remova os dois ossos e os músculos subcutâneos associados e gorduras ao redor do globo ocular. Corte o globo ocular com pálpebras presas e pele em um pequeno bloco quadrado para reduzir o volume do tecido e facilitar a orientação do tecido ao incorporar. Coloque o globo ocular e os tecidos associados de volta em 4% de paraformaldeído e continue a fixar durante a noite às 4