Name: Aplicações para painéis de iluminação compatíveis com microplate de código aberto (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-03T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: Aprenda a usar o sistema M.A.P.L.E. de código aberto para preparação de microplacas com iluminação assistida por computador. Este método reduz erros humanos durante a pipetagem manual e dobra a eficiência da transferência de reagentes em laboratórios.

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Os autores gostariam de reconhecer Lina DeLuca, Fakhar Singhera, Hannah Williams, Lynn Deng, Osinachi Nwosu e Sarah WACHTMAN por sua assistência no teste da plataforma M.A.P.L.E..

1. preparação semiautomatizada da transferência da amostra da "placa à placa"
<ol><li>Gere um arquivo CSV como mostrado na Figura 1 contendo placas de origem e de destino usando um aplicativo de edição de planilha. O arquivo CSV que é gerado deve ter as seguintes colunas de cabeçalho na ordem listada: Source_barcode; Destination_barcode; Source_well; Dest_well; Transfer_volume.</li>
	<li>as colunas de cabeçalho, certifique-se de incluir uma linha no arquivo CSV para cada operação de pipetagem desejada (ou seja, transferência de amostra) com as seguintes informações:<ol>
<li>Source_barcode: código de barras alfanumérico da microplaca de origem, por exemplo, S1007372; Deixe em branco se nenhum código de barras está associado.</li>
		<li>Destination_barcode: código de barras alfanumérico da microplaca de destino, por exemplo, D0573282; Deixe em branco se nenhum código de barras está associado.</li>
		<li>Source_well: identificador de linha e coluna alfanumérico para bem ser pipetado da placa de origem, por exemplo, H10 para a linha H (8ª linha), coluna 10 (designações de poços padrão ANSI/SLAs, por exemplo, a1, C10...).</li>
		<li>Dest_well: identificador de linha e coluna alfanumérico para bem ser pipetado da placa de destino, por exemplo, a3 para A linha A (1 linhaSt ), coluna 3 (designações de poços padrão ANSI/SLAs, por exemplo, a1, C10...).</li>
		<li>Transfer_volume: volume a ser transferido de source_well em source_barcode para dest_well em destination_barcode (numérico e Unitless: tipicamente em μL).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Abra a placa de emissor de luz de pipetagem de microplacas para placa GUI, mostrada na Figura 2, abrindo o programa guia de luz (Maple-LightGuide. exe).</li>
	<li>Clique no botão Selecionar arquivo de cherrypick no canto superior esquerdo da GUI.</li>
	<li>Use a janela do navegador de arquivos, mostrada na Figura 3, para navegar até o arquivo CSV gerado nas etapas 1,1 e 1,2 acima e clique no botão abrir . O aplicativo irá analisar a primeira linha do arquivo CSV e iluminar os poços correspondentes nas placas de origem e de destino.</li>
	<li>Use os botões bem e próximo poço anteriores , no canto superior direito da GUI, mostrado na Figura 4, para percorrer o arquivo CSV conforme desejado. O GUI destacará em cinzento todas as linhas que foram iluminadas previamente e realce no marrom a fileira atualmente ativa.</li>
	<li>Realize operações de pipetagem conforme necessário para transferir amostras entre a fonte bem da chapa de origem para o destino bem da placa de destino. Um exemplo de uma operação de pipetagem manual M.A.P.L.E. não assistida pode ser visto na Figura 5, com uma comparação da visualização de pipetagem do usuário atual observada na Figura 4 e na Figura 6. Além do que o usuário GUI, os códigos de barras da placa podem ser verificados através das exposições do LCD anexadas aos painéis da iluminação.</li>
	<li>Continue até que o final do arquivo CSV seja atingido através do botão próximo bem . Para carregar um novo arquivo CSV, o arquivo Select cherrypick pode ser clicado a qualquer momento. Para sair do programa o X vermelho no canto superior direito da GUI pode ser clicado.</li>
</ol>2. multi-bem iluminações para transferências paralelas e diluições seriais
<ol><li>Abra a aplicação "diluição serial" do emissor de luz de pipetagem microplate, abrindo o programa de diluição serial (Maple-SerialDilution. exe).</li>
	<li>Use a GUI, mostrada na Figura 7 e na Figura 8, para especificar o modo de titulação desejado (coluna ou linha), a densidade da placa e as linhas de início ou coluna (s). A GUI também permite que os usuários especifiquem uma coluna ou uma máscara de linha para controlar quais LEDs em uma determinada linha ou coluna são iluminados. Isso permite que um subconjunto de LEDs em uma linha ou coluna seja iluminado em vez de iluminar toda a linha ou coluna.</li>
	<li>Use os botões próximo e anterior para percorrer as linhas ou colunas em sequência a partir da linha inicial ou da coluna para a última linha ou coluna na placa. Cada vez que o botão seguinte ou anterior for clicado, o painel luminoso iluminará os LEDs correspondentes da microplaca.</li>
	<li>Continue até que o final da sequência de titulação seja atingido. Para sair do programa, clique no X vermelho no canto superior direito da GUI.</li>
</ol>3. treinamento laboratorial: desenvolvimento de ensaios e técnicas de triagem de formato
<ol><li>Coloque uma microplaca 96-ou 384-well na guia de luz portátil. O guia de luz portátil contém uma bateria e todos os eletrônicos necessários para ser usado independentemente de um computador. Isto permite que o LightGuide portátil seja usado em um modo handheld que possa ser controlado com os botões incorporados para comutar entre modalidades da demonstração.</li>
	<li>Use o interruptor de alternância de energia no compartimento de guia de luz portátil para ligar o sistema.</li>
	<li>Determine o modo para o guia de luz portátil para estar em. Por padrão, o guia de luz portátil será carregado no modo de demonstração padrão do HTS , que fornece aos usuários uma representação visual de uma placa de ensaio típica, como visto na Figura 9. Neste modo, pode-se usar o interruptor de botão direito na parte superior da guia de luz portátil para alternar através dos seguintes padrões de iluminação de amostra.<ol>
<li>Todos os poços iluminados com cor vermelha para simular o reagente dispensar de um ensaio, por exemplo, (células suspensas na mídia).</li>
		<li>Todos os poços iluminados com uma cor amarela para simular adição de reagente de corante.</li>
		<li>Primeira coluna e última coluna de poços iluminado verde, permanecendo meio ' campo de amostra ' colunas iluminado azul para indicar a placa que está sendo lida no leitor de microplaca. Os poços aleatórios no campo de amostra também terão a cor verde de intensidade variável para representar hits.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Para alternar a guia de luz entre o modo de demonstração do HTS e o modo de demonstração de titulação , empurre o botão de pressão esquerdo. Isso irá mudar a guia de luz portátil para o modo de demonstração de titulação que fornece um guia visual para os usuários para entender como as titulações podem ser executadas em placas compostas. Quando a guia de luz entrar no modo de demonstração de titulação , ocorrerá o seguinte.<ol>
<li>Todos os poços na coluna 3 e 13 são iluminados com cor amarela.</li>
		<li>As prensas subsequentes do botão de pressão mais à direita iluminam as colunas em sequência, por exemplo, (4 e 14, 5 e 15, etc.).</li>
		<li>Quando o botão é pressionado depois que as colunas 12 e 22 são alcançadas, os poços nas colunas 4-12 e 13-22 são iluminados na intensidade de diminuição do amarelo para representar a titulação.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Para modificar o comportamento padrão da guia de luz, conecte a guia de luz portátil a um computador através de um cabo USB e siga as instruções detalhadas para atualizar o firmware padrão através do IDE do Arduino, que pode ser encontrado no projeto GitHub página8. Ao atualizar o firmware, você pode modificar esses modos para exibir outras sequências ou conjuntos de LEDs.</li>
</ol>4. iluminação de artefatos em microplacas
<ol><li>Coloque uma microplaca 96-ou 384-well na guia de luz portátil.</li>
	<li>Mude a guia de luz para o modo de iluminação pressionando o botão de pressão mais à esquerda duas vezes. Nota: um exemplo do uso prático deste modo pode ser visto na Figura 10 e na Figura 11, onde os compostos precipitaram fora da solução e podem ser observados na parte inferior das microplacas. Sem iluminação retroiluminada, a maior parte do precipitado é invisível a olho nu, mas a retroiluminação M.A.P.L.E. revela precipitado para inspeção de usuários e documentação fotográfica.</li>
	<li>Use o botão direito para alternar entre um conjunto de cores predefinidas, conforme necessário para o aplicativo. O painel de luz irá transformar todos os LEDs para as seguintes cores em seqüência com cada impulso do botão direito: vermelho, azul, verde, laranja, branco, violeta, amarelo e Indigo.</li>
	<li>Como uma etapa opcional, use uma câmera ou um smartphone para fotografar a placa iluminada para gravação ou documentar o trabalho.</li>
</ol>

<ol><li>Baillargeon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+of+Microplate-Compatible+Illumination+Panels+for+a+Semiautomated+Benchtop+Pipetting+System%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+TECHNOLOGY%3A+Translating+Life+Sciences+Innovation%22%5BJournal%5D)">Design of Microplate-Compatible Illumination Panels for a Semiautomated Benchtop Pipetting System.</a> SLAS TECHNOLOGY: Translating Life Sciences Innovation. , (2019).</li>
<li>Baillargeon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Scripps+Molecular+Screening+Center+and+Translational+Research+Institute%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+DISCOVERY%3A+Advancing+Life+Sciences+R%26D%22%5BJournal%5D)">The Scripps Molecular Screening Center and Translational Research Institute.</a> SLAS DISCOVERY: Advancing Life Sciences R&D. 24 (3), 386-397 (2019).</li>
<li>BioSistemika. Pipetting Aid PlatR. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://biosistemika.com/products/pipetting-platr/">https://biosistemika.com/products/pipetting-platr/</a> (2019).</li>
<li>Gilson Trackman Pipetting Tracker. Daigger Scientific. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.daigger.com/gilson-trackma-pipetting-tracker-i-gsnf70301">https://www.daigger.com/gilson-trackma-pipetting-tracker-i-gsnf70301</a> (2019).</li>
<li>TRACKMAN Connected US. Gilson. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.gilson.com/default/systemm-trackman-connected-us.html">https://www.gilson.com/default/systemm-trackman-connected-us.html</a> (2019).</li>
<li>LI-2100LightOne™ Pro. Embi Tec. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://embitec.com/li2100-lightone-pro-384-and-96-well.html">http://embitec.com/li2100-lightone-pro-384-and-96-well.html</a> (2019).</li>
<li>96 well plate pipette light guide. qit vision. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.qitvision.com/projects/#Plate">https://www.qitvision.com/projects/#Plate</a> (2019).</li>
<li>Microplate Assistive Pipetting Light Emitter GitHub repository. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://github.com/pierrebaillargeon/Microplate-Assistive-Pipetting-Light-Emitter">https://github.com/pierrebaillargeon/Microplate-Assistive-Pipetting-Light-Emitter</a> (2019).</li>
<li>Maplebear Electronics Tindie store. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://maplebearelectronics.com">http://maplebearelectronics.com</a> (2019).</li>
<li>Hawker, C. D., Schlank, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+Standards+for+Laboratory+Automation%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Development of Standards for Laboratory Automation.</a> Clinical Chemistry. 46, 746-750 (2000).</li>
<li>General Laboratory Techniques. An Introduction to the Micropipettor. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22JoVE+Science+Education+Database%22">JoVE Science Education Database</a>. , JoVE. Cambridge, MA. (2019).</li>
<li>General Laboratory Techniques. Introduction to the Spectrophotometer. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22JoVE+Science+Education+Database%22">JoVE Science Education Database</a>. , JoVE. Cambridge, MA. (2019).</li>
<li>General Laboratory Techniques. Introduction to the Microplate Reader. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22JoVE+Science+Education+Database%22">JoVE Science Education Database</a>. , JoVE. Cambridge, MA. (2019).</li>
</ol>

Os autores não têm interesses financeiros ou conflito de interesse com qualquer um dos componentes fabricados sugeridos na construção do dispositivo M.A.P.L.E.. As fontes apresentadas são estritamente para a conveniência do usuário e quaisquer componentes compatíveis de fontes alternativas podem ser usados conforme necessário.

Ao liberar M.A.P.L.E. como uma plataforma de código aberto, introduzimos uma ferramenta de laboratório que fornece utilidade, mas também pode ser facilmente estendida para atender às necessidades em evolução do usuário final. A preparação da amostra da microplaca de benchtop é uma tarefa comum que seja executada em uma grande variedade de ambientes do laboratório e esta tarefa pode comprovadamente ser melhorada com uma tecnologia tal como M.A.P.L.E.
A plataforma M.A.P.L.E. foi projetada especi...

Como recentemente publicado1, o laboratório de identificação de chumbo na Scripps Research2 desenvolveu e lançou um painel de iluminação de código aberto para preparação de microplacas referido como o emissor de luz de pipetagem de microplate Assistive (M.A. P.L.E.). A preparação manual de microplacas, se são feitas para a gerência composta ou as necessidades do bio-ensaio, podem ser propensas aos erros humanos que aumentam dràstica assim que a densidade do microplate aumenta. Além disso, a gravação adequada e o registro de dados de conteúdo/formato de microplacas também são propensos a erros de entrada manual. Em instalações de automação de alta taxa de transferência (HTS), esses problemas são atenuados por meio do uso de estações de trabalho robóticas controladas por computador que são integradas com a manutenção de registros automatizada de banco de dados; minimizando manipulações manuais e reduzindo o potencial de erros de formatação e gravação de dados. No entanto, permanecem muitos casos em que a instrumentação baseada em automação simplesmente não é viável ou compatível com as necessidades de formatação de microplacas, exigindo intervenção manual. Além disso, há também a necessidade de apoiar as operações de laboratório de pequena escala que necessitam de dispositivos semiautomatizados compactos e rentáveis para melhorar a sua produção, precisão e automatizar a gravação de dados de preparação de microplacas.
Quando outros sistemas da iluminação do microplate existirem, são soluções comerciais proprietárias3,4,5,6,7 limitadas para selecionar formatos do microplate e seu proprietário natureza de código-fonte fechado impede modificações orientadas pelo usuário que permitiria a adaptação desses dispositivos para operações especializadas.  M.A.P.L.E. foi projetado para ser um dispositivo de fonte aberta barato, com código fonte e todos os arquivos de design disponíveis gratuitamente on-line8. Os usuários com conhecimento de técnicas de solda de montagem de superfície podem montar seus próprios dispositivos M.A.P.L.E. com os arquivos de código e design disponíveis no GitHub, ou podem modificar os designs de placas de circuito impresso (PCBs) fornecidos, gabinete de impressão 3D auxiliado por computador modelos de design (CAD) e código para atender às suas necessidades específicas. Uma lista completa de peças necessárias para fabricar o guia de luz PCBs pode ser encontrada em tabelas complementares 1 e 2 e mais detalhes sobre o projeto e implementação dos painéis de luz pode ser encontrado em recentemente publicado documentação1. Os usuários que desejam comprar PCBs guia de luz pré-montados com base nos arquivos de código aberto podem encontrá-los listados on-line9.
M.A.P.L.E. fornece o usuário com um painel facilmente verificável da iluminação que tenha uma pegada microplate-baseada e um afastamento LED-à-conduzido combinaram às especificações da sociedade para a seleção biomolecular (SBS) para microplates10. M.A.P.L.E. foi desenvolvido para apoiar 96-e 384-bem densidade microplates e permitir que os usuários para iluminar poços em qualquer configuração desejada, cor e intensidade. Estes painéis leves podem ser usados para iluminar microplates para operações de pipetagem11, para simularoperações de formatação de laboratório ou instrumentos como umleitor demicroplacas12,13para educação e demonstração Fins. A natureza de código aberto do projeto permite que os usuários modifiquem facilmente os painéis, o firmware ou o software da interface gráfica do usuário (GUI) para suportar toda a funcionalidade desejada nova. A orientação e a manutenção de registros de dados são controladas por computador e podem ser integradas com planilhas ou portadas para um sistema de banco de dados. Porque M.A.P.L.E. é projetado para trabalhar com arquivos separados por vírgulas de texto sem formatação, qualquer planilha ou software de banco de dados que é capaz de importar ou exportar arquivos formatados CSV pode ser facilmente estendido para trabalhar com M.A.P.L.E. Além disso, o gabinete do projeto que foi projetado para este sistema inclina a microplaca para o usuário durante as operações de pipetagem, aumentando a ergonomia, proporcionando uma postura mais natural para o usuário, enquanto no banco de laboratório. As características operacionais específicas do sistema M.A.P.L.E. incluem: (i) facilitar os esforços de manejo composto na preparação de chapas personalizadas, iluminando bem a fonte única e destino bem através de microplacas para orientação manual de pipetagem; assistida através de um script de computador que pode ser salvo como um registro eletrônico após a conclusão. (II) M.A.P.L.E. pode iluminar todo o número de poços através das fileiras ou das colunas do microplate; que é serido idealmente para a orientação ou a colocação rápida da diluição de série de controles seleto da repetição. (III) M.A.P.L.E. pode ser usado em um modo de demonstração para facilitar as necessidades de treinamento de laboratório ou destacar requisitos de formatação em relação aos posicionamentos de amostra e controle ou uso de poço dedicado (por exemplo, Gap-efeito barreira lacuna). (IV) M.A.P.L.E. pode backlight transparente/translúcido poços para permitir a visualização de artefatos como a precipitação/cristalização, bolhas, bem heterogeneidade, poços vazios; que também permite que o usuário final fotografe facilmente imagens de placas para necessidades de documentação

<table><tbody><tr>Microplaca <td></td><td></td><td>de 96 ou 384 poços</td><td>https://en.wikipedia.org/wiki/Microplate</td></tr><tr><td>Microplaca Auxiliar Pipetagem Emissor de Luz</td><td></td><td></td>Espectrômetro de https://www.jove.com/science-education/5033/an-introduction-to-the-micropipettor de https://github.com/pierrebaillargeon/Microplate-Assistive-Pipetting-Light-Emitter de código <td></td> aberto</tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Ocean Optics</td><td>USB-650 Maré</td><td></td> Vermelha</tr></tbody></table>

aplicações para painéis de iluminação compatíveis com microplate de código aberto

Applications for Open Source Microplate-Compatible Illumination Panels

As microplacas são comumente usadas no ambiente de laboratório moderno para uma ampla variedade de tarefas, tanto em operações de bancada de laboratório em pequena escala como em campanhas de triagem de alta produtividade (HTS) de grande escala. Embora a automação laboratorial tenha aumentado consideravelmente a utilidade das microplacas, permanecem instâncias em que a instrumentação baseada em automação não é viável, rentável ou compatível com as necessidades de formatação de microplaca. Nestes casos, as microplacas devem ser preparadas manualmente. Problemático às manipulações manuais do microplate é que um número de dificuldades pode surgir a respeito do seguimento exato das operações da amostra, da manutenção do registro dos dados e da inspeção do controle de qualidade (QC) para artefatos do poço ou erros de formatação. Como as densidades do microplate aumentam (isto é, 96-well, 384-bem, 1536-well) o potencial para introduzir erros igualmente aumenta dràstica.  Além disso, para as operações de laboratório de bancada de pequeno porte existe a necessidade de melhorar a facilidade e precisão de manipulação de amostras de forma rentável. Nisto, nós descrevemos um sistema que actue como um guia de pipetagem semiautomatizado referido como o emissor de luz de pipetagem de microplate Assistive (M.A.P.L.E.).  M.A.P.L.E. tem usos múltiplos para o apoio composto da batida-colheita e a preparação do microplate para o desenvolvimento do ensaio na seleção da elevado-produção ou nas operações do de bancada do laboratório, assim como a avaliação diagnóstica do QC/garantia de qualidade (QA) do microplate qualidade ou visualizando erros de formatação bem.

A plataforma M.A.P.L.E. é capaz de iluminar poços em microplacas 96-e 384-well em uma variedade de maneiras configuráveis do usuário, permitindo o controle direto e independente da cor e da intensidade de luz em cada poço. Ao ajudar a reduzir as oportunidades de erro nas operações de pipetagem manual, o M.A.P.L.E. ajuda os usuários a preparar microplacas com maior confiança de que cada poço contém o conteúdo desejado. A transferência de amostras entre as placas e a preparação de placas seriadas de diluição, como os exemp...

O emissor de luz de pipetagem de microplacas (M.A.P.L.E.) é um dispositivo orientado por computador que ilumina sistematicamente os poços de microtitula para fornecer orientação para a preparação manual de microchapas.  M.A.P.L.E. melhora a exatidão da preparação do microplate ao automatizar o Recordkeeping dos dados.  Além disso, ele pode ajudar com a análise de qualidade microplate ou ajuda na detecção de erros.

Aplicações para painéis de iluminação compatíveis com microplate de código aberto

Microplates are commonly used in the modern laboratory environment for a wide variety of tasks both in small-scale laboratory benchtop operations as well ...

Os métodos tradicionais de transferência manual de reagentes a granel em placas de microtítiter são lentos e propensos a erros humanos. Essa tecnologia mais do que dobra a eficiência do processo e ajuda a eliminar esse erro. Essa técnica pode ajudar os usuários a entender operações realizadas em microplacões, reduzir oportunidades de erros e aumentar a eficiência do usuário durante operações manuais de tubulação.Essa técnica impactará positivamente os resultados em ambientes pré-clínicos e clínicos, removendo e reduzindo erros que podem ser caros e até mesmo fatais se não forem corrigidos. Este sistema de código aberto pode ser facilmente adaptado para outras aplicações, como inspeções de cópia de microplacas, para eliminar inconsistências na colocação de compostos ou bioensadores, para necessidades químicas e biológicas. Demonstrando o procedimento de transferência de amostras estará Lina Deluca, gerente composta do laboratório de identificação de chumbo.Para configurar uma transferência semi-automatizada de amostras de placa a placa, use um aplicativo de edição de planilha para gerar um arquivo CSV contendo placas de origem e destino, rotulando o código de barras de origem das colunas, código de barras de destino, poço de origem, bem de destino e volume de transferência. Sob as colunas, inclua uma linha no arquivo para cada operação de pipetação desejada indicando o código de barras alfa-numérico da mircopla de origem, se houver um, o código de barras alfa-numérico da microplaca de destino, se houver um, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser tubos da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser tubos da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado na placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado da placa de origem, a linha alfa-numérica e o identificador da coluna para o poço a ser pipetado da placa de origem, a linha alfa-num , e o volume a ser transferido do poço de origem na coluna de código de barras de origem, para o destino bem no código de barras de destino. Abra o Programa guia de luz para abrir o aplicativo de interface de usuário gráfico de tubulação de luz de tubulação de microplaca e clique em Selecionar arquivo cherrypick.Na janela do navegador de arquivos, abra o arquivo CSV. O aplicativo analisará a primeira linha do arquivo CSV e iluminará os poços correspondentes nas placas de origem e destino. Use os botões "e o poço Anterior" e o próximo para atravessar o arquivo CSV conforme desejado.A interface gráfica do usuário destacará em cinza todas as linhas que tenham sido previamente iluminadas e destaque, em marrom, as linhas atualmente ativas. Realize as operações de tubulação conforme necessário para transferir amostras entre o poço de origem da placa de origem, para o bem de destino da placa de destino. Além da interface do usuário, os códigos de barras da placa podem ser verificados através dos displays LCD ligados aos painéis de iluminação.Em seguida, clique em "Next well" para continuar até que o final do arquivo CSV seja alcançado. Para carregar um novo arquivo CSV, clique em Selecionar arquivo cherrypick"a qualquer momento. Para sair do programa, clique no X vermelho no canto superior direito da interface.Para iluminação multi-bem, abra o aplicativo de diluição serial do emissor de luz de tubulação de tubulação de microplacar e especifique o modo de titulação desejado, a densidade da placa e as linhas ou colunas de partida. Use os botões Next"and Previous' para navegar pelas linhas ou colunas em sequência desde a linha inicial inicial ou coluna, até a última linha ou coluna na placa. Cada vez que o botão Next"ou Previous"é clicado, o painel de luz iluminará os LEDs correspondentes sobre a microplaca.Continue até o final da sequência de titulação antes de sair do programa. Para simular visualmente um ensaio, coloque uma microplacão no guia de luz portátil. O guia de luz contém uma bateria e todos os eletrônicos necessários para serem usados independentemente de um computador para permitir que o guia seja usado em um modo portátil que pode ser controlado com botões embutidos para alternar entre os modos de demonstração.Use o interruptor de interruptor de energia no compartimento de guia de luz portátil para ligar o sistema e selecione o modo de guia de luz portátil apropriado para o experimento. No modo de demonstração de triagem de alto rendimento, use o interruptor de botão direito na parte superior do guia de luz portátil para alternar os padrões de iluminação da amostra. Os poços iluminados com cor vermelha simulam a dispensa do reagente de um ensaio, por exemplo, células suspensas na mídia.Os poços iluminados com a cor amarela simulam a adição de reagente de detecção. Em seguida, uma fonte de luz de excitação é simulada com todos os poços ficando azuis, seguidos pela simulação de luz emitida. A primeira e última coluna de poços são iluminadas em verde, e as colunas de campo de amostra média são iluminadas em azul para indicar a placa sendo lida em um leitor de microplatos.Poços aleatórios no campo de amostra também terão cor verde de intensidade variada para representar hits. Para alternar o guia de luz entre o modo de demonstração de exibição de alto throughput e o modo de demonstração de titulação, pressione o interruptor de botão esquerdo. Quando o guia de luz entrar no modo de demonstração de titulação, todos os poços das colunas três e 13 serão iluminados com a cor amarela.Pressionar o interruptor de botão mais à direita iluminará as colunas subsequentes em sequência. Quando o botão é pressionado após as colunas 12 e 22 serem atingidas, os poços nas colunas quatro a 12 e 13 a 22 serão iluminados em uma intensidade decrescente de amarelo para representar a titulação. Para a iluminação do artefato, coloque a microplacão no guia de luz portátil e pressione o interruptor de botão mais à esquerda duas vezes para mudar o guia de luz para o modo de iluminação.Use o botão direito para alternar entre um conjunto de cores predefinidas conforme necessário para o aplicativo. O painel de luz ligará todos os LEDs em vermelho, azul, verde, laranja, branco, violeta, amarelo e índigo em sequência com cada apertar do botão direito. Opcionalmente, uma câmera ou telefone inteligente pode ser usado para fotografar a placa iluminada para registro ou documentação do trabalho.A transferência de amostras entre as placas e a preparação de uma diluição serial pode ser realizada sem a preocupação de distração ou perda de noção de quais operações de tubulação permanecem. A plataforma MAPLE pode ser usada para ajudar a iluminar a microplaca para identificar artefatos potenciais, como precipitar, poços vazios, poços parcialmente cheios ou bolhas de ar. Os usuários podem, então, tomar medidas para amenizar amostras antes de fornecer-as a processos laboratoriais a jusante.Neste experimento representativo, a lista de trabalho consistia em 49 operações de pipetação de duas micropla placas de 384 poços contendo uma variedade aleatória de corantes coloridos que soletram Jove em uma única microplata de destino de 384 poços. O layout dos poços na placa de destino confirma que o usuário invadiu os poços corretos. O padrão de cor dos poços na placa de destino pode ser usado para identificar erros para os quais o usuário não pipet do poço correto das placas de origem.Os resultados deste teste cabeça-a-cabeça mostram uma economia média de tempo de 50% quando os usuários realizaram este teste usando MAPLE versus uma lista de trabalho impressa offline. Além disso, a taxa de erro das placas criadas usando MAPLE foi de 0% para todos os usuários, enquanto uma taxa de erro de 6% foi observada para um usuário iniciante usando uma lista de trabalho para a tarefa de preparação da amostra. Formulações de sinergia de drogas requerem uma preparação matricial 2D baseada em uma diluição serial por coluna para a primeira droga e uma diluição serial por linha para a segunda droga.Estamos investigando o uso de painéis de luz LED para iluminar a distribuição de microdroplet. Ao acariciar a luz LED, podemos capturar imagens de amostras líquidas para controle e análise de qualidade. Este instrumento pode reduzir a exposição do usuário a materiais e agentes perigosos limitando seu tempo de interação e facilitando o uso adequado do reagente.

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Fonte: Zhao, K., et al. Um modelo In Vitro para Estudar o Efeito da Terapia Fotodinâmica Mediada por Ácido 5-Aminolevulínico no Biofilme de Staphylococcus aureus . J. Vis. Exp. (2018)O vídeo demonstra um protocolo de terapia fotodinâmica para avaliar os efeitos antibacterianos em biofilmes bacterianos Gram-positivos. Os biofilmes são divididos em quatro grupos: dois recebem um precursor fotosensimizador e dois recebem um tampão. Todos são incubados no escuro, seguidos por exposição à luz...

Tratamento ativado pela luz de biofilmes bacterianos usando um precursor fotosensimizador

Um módulo para microscopia de iluminação plano único (SPIM) está descrito que é facilmente adaptado a um microscópio de campo amplo invertido e optimizado para culturas de células de 3-dimensionais. A amostra está localizado dentro de um capilar rectangular, e através de um sistema de microfluidos corantes fluorescentes, agentes farmacêuticos ou de drogas pode ser aplicada em pequenas quantidades.

Único plano Iluminação Módulo e Abordagem Micro-capilar por um microscópio Wide-campo

Este protocolo descreve um método para a fabricação de nanopartículas poliméricas condutoras misturadas com fulereno. Essas nanopartículas foram investigadas quanto ao seu potencial uso como fotossensibilizadores de próxima geração para Terapia Fotodinâmica (PDT).

Terapia Fotodinâmica com Blended polímero condutor / Fullerene Nanoparticle Fotossensibilizadores

Um método para imagens de alterações no potencial de membrana usando indicadores de tensão geneticamente codificados é descrito.

Membrana de imagem Potencial com dois tipos de sensores de tensão fluorescentes geneticamente codificados

A quantificação precisa dos eventos de tráfego vesicular geralmente fornece informações importantes sobre os papéis de proteínas específicas e os efeitos das mutações. Este artigo apresenta métodos para o uso da pHluorina supereclíptica, uma variante de GFP sensível ao pH, como ferramenta para quantificação de eventos endocíticos em células vivas usando microscopia de fluorescência quantitativa e citometria de fluxo.

Aplicações de pHluorin para Quantitative, Kinetic e de alta capacidade: Análise de endocitose em brotamento Yeast

Descrevemos o uso de uma nova câmera vitalícia de luminescência de domínio de frequência para mapear distribuições 2D O2 com folhas de sensor óptico. Os procedimentos de análise do sistema de câmera e de imagem são descritos juntamente com a preparação, calibração e aplicação de folhas de sensor para visualizar o microambiente O2 na rizosfera das plantas aquáticas.

Imagens vitalícias de Luminescence de O2 com um sistema de câmera baseado em domínio de frequência

Instruções detalhadas são fornecidas para construir um fluorímetro modular de código aberto compatível com muitos aquecedores de baixo custo para realizar a amplificação de ácido nucleico isotérmico quantitativo em tempo real.

Fluorímetro em miniatura de código aberto para monitorar reações de amplificação de ácido nucleico isotérmico em tempo real em configurações limitadas de recursos

Este artigo descreve o uso de um novo imageador óptico rápido para a imagem macroscópica da vida útil da fotoluminescência de amostras emissoras de decaimento longo. Os procedimentos de integração, aquisição e análise das imagens são descritos, juntamente com a preparação e caracterização dos materiais sensores para a aquisição de imagens e a aplicação do imageador no estudo de amostras biológicas.

Fluorescence Lifetime Macro Imager para aplicações biomédicas

Este protocolo envolve a transfecção de sensores cAMP e bPAC-nLuc, uma proteína optogenética, para rastrear com precisão sua distribuição celular e resposta à estimulação luminosa. A abordagem inovadora de criar um mapa de resposta cAMP usando um sistema de varredura de pontos tem o potencial de avançar na pesquisa com proteínas optogenéticas em diferentes campos.

Mapeando a distribuição celular de uma proteína optogenética usando uma grade de estimulação luminosa

Este protocolo descreve um método simples e econômico para avaliar a eficácia de potenciais fotossensibilizadores na inativação fotodinâmica antibacteriana (aPDI), usando um formato de placa de 96 poços combinado com uma fonte de luz de painel de LED. Essa abordagem permite o teste simultâneo de várias condições experimentais, incluindo diferentes concentrações, compostos e cepas bacterianas.

Triagem in vitro baseada em LED para avaliação de moléculas fotoativáveis na inativação fotodinâmica bacteriana

Este manuscrito apresenta um novo e inovador dispositivo de iluminação impresso em 3D para estudar a terapia fotodinâmica mediada por Rosa Bengala in vitro.

Desenvolvimento de um Dispositivo Inovador de Iluminação Baseado em LED para Aplicação In Vitro de Terapia Fotodinâmica com Rosa Bengala

Aprenda a usar o sistema M.A.P.L.E. de código aberto para preparação de microplacas com iluminação assistida por computador. Este método reduz erros humanos durante a pipetagem manual e dobra a eficiência da transferência de reagentes em laboratórios.

Aplicações para painéis de iluminação compatíveis com microplate de código aberto

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