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DOI: 10.3791/60113-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study presents a protocol for evaluating the balance between glutamate release and clearance at single corticostriatal glutamatergic synapses using acute slices from adult mice. By employing the fluorescent sensor iGlu u for glutamate detection, researchers can identify local mismatches in transmitter dynamics, aiding in the investigation of dysfunctional synapses in disease contexts.
Apresentamos um protocolo para avaliar o equilíbrio entre liberação de glutamato e liberação em sinapses glutamatergicas corticostriatais únicas em fatias agudas de camundongos adultos. Este protocolo usa o sensor fluorescente iGluu para detecção de glutamato, uma câmera sCMOS para aquisição de sinal e um dispositivo para iluminação a laser focal.
Imagens de alta resolução de sinapses únicas expressando um sensor de glutamato rápido permitem uma detecção de incompatibilidade local entre a liberação do transmissor e a absorção. No caso da doença, este método pode ser usado para identificar sinapses disfuncionais. Para correção de autofluorescência, primeiro, coloque uma fatia cerebral do rato de interesse na câmara de gravação de um microscópio de um fóton.
Submergir a fatia em fluido cerebrospinal oxigenado e artificial e usar o objetivo de imersão de água de 20x para localizar o estriado dorsal. Fixar as fatias com uma grade de nylon em uma harpa de platina para minimizar o movimento do tecido e mudar para o objetivo de imersão em água de 63x. Usando um filtro de passagem alta a 510 nanômetros, adquira uma imagem das estruturas positivas do sensor autofluorescente e glutamato.
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